一種提高靈芝菌發(fā)酵物中β-葡聚糖產(chǎn)量的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種提高靈芝菌發(fā)酵物中β-葡聚糖產(chǎn)量的方法，采用中國普通微生物菌種保藏管理委員會保藏的靈芝菌種(Ganoderma lucidum)，菌株保藏號為CCGMC 5.0616，接種靈芝種子液后，在溫度為27-30℃、轉(zhuǎn)速為150-200r/min的回轉(zhuǎn)式搖瓶柜中深層發(fā)酵2-5天，補加地鱉蟲油50-80mg/L后，在溫度為26-28℃、轉(zhuǎn)速為150-200r/min條件下繼續(xù)發(fā)酵6-9天結束，本發(fā)明方法的β-葡聚糖產(chǎn)量高達193.6mg/L。
【專利說明】一種提高靈芝菌發(fā)酵物中β-葡聚糖產(chǎn)量的方法

【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于真菌發(fā)酵【技術領域】，具體涉及一種提高靈芝β-葡聚糖產(chǎn)量的發(fā)酵工藝。

【背景技術】
[0002]靈芝(Ganodemalucidum(W.Curtis.:Fr.)P.Karst.)是最為名貴的森林大型真菌之一，在古代被稱為“仙草”?，F(xiàn)代藥理學研究表明，靈芝具有很高的保健和藥用價值?！吨腥A人民共和國藥典》早已正式收載靈芝為藥品；衛(wèi)生部也批準靈芝為食品新資源；《美國草藥藥典與治療概要》也正式收載了靈芝。靈芝的研究已得到亞洲諸多國家，以及加拿大、美國和一些歐洲國家的重視。
[0003]靈芝的有效化學成分一直是人們關注的焦點?，F(xiàn)已證實靈芝多糖和三萜是靈芝的關鍵藥效成分。近十余年來，國內(nèi)外學者對靈芝多糖的結構和藥理作用進行了大量研究，揭示主鏈具有β - (I — 3) -D、β - (I — 6) -D、β - (I — 4) -D結構的靈芝β -多糖，特別是靈芝β -葡聚糖具有顯著的生物活性，如具有調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤、抗輻射、抗氧化、抗衰老等功能，是靈芝發(fā)揮藥效的重要物質(zhì)基礎之一。目前市場上僅有靈芝粗多糖(多糖提取物)或為靈芝總多糖相關產(chǎn)品，而靈芝β_葡聚糖及相關產(chǎn)品在國內(nèi)外市場上很少，具有廣闊的市場開發(fā)前景。
[0004]現(xiàn)階段，獲取靈芝相關產(chǎn)品有三種途徑，一是從野生靈芝中獲取，二是人工栽培靈芝子實體，三是通過現(xiàn)代生物發(fā)酵技術獲得靈芝菌體和培養(yǎng)液(兩者合稱發(fā)酵菌物)。由于野生靈芝稀少，而傳統(tǒng)的人工栽培方法周期長，產(chǎn)量低，β_葡聚糖含量低，β_葡聚糖生產(chǎn)成本極高，無法滿足市場需要。而液體深層發(fā)酵技術生產(chǎn)靈芝具有生產(chǎn)周期短、產(chǎn)品質(zhì)量和產(chǎn)量容易調(diào)控等特點，目前已成為獲取靈芝及其活性物質(zhì)的最有效方法。近年來，靈芝的液體發(fā)酵技術取得了很大進展，但都集中在靈芝總多糖的發(fā)酵技術研究方面，而靈芝葡聚糖發(fā)酵技術的研究十分薄弱，靈芝葡聚糖的產(chǎn)量很低。近二十年來，真菌葡聚糖作為高效的生物反應調(diào)節(jié)因子(BRM)，具有重要的研究價值和廣闊的開發(fā)前景。因此，如何進一步提高靈芝中β -葡聚糖的產(chǎn)量，同時降低生產(chǎn)成本、提高經(jīng)濟效益，已成為加快靈芝產(chǎn)品產(chǎn)業(yè)化進程亟待解決的問題。
[0005]已有通過發(fā)酵法生產(chǎn)靈芝中總多糖和靈芝酸(靈芝三萜)的技術，但缺乏液體發(fā)酵法生產(chǎn)靈芝β -葡聚糖的技術，如:
[0006]文獻:陳功明.靈芝多糖的液體發(fā)酵、提取純化及其硫酸化改性研究.碩士學位論文，浙江大學，2010.報道了通過液體發(fā)酵技術生產(chǎn)靈芝多糖，以及對產(chǎn)品進行提取和純化的方法，同時試驗了對多糖進行硫酸化改性的技術。但沒有針對β_葡聚糖進行液體發(fā)酵和提取純化研究。
[0007]文獻:王慧杰，李宇偉，連瑞麗，王志強，馬愛民.靈芝多糖液體發(fā)酵條件優(yōu)化(食用菌學報，2007)報道了從一系列靈芝菌種中篩選出多糖產(chǎn)量高、生長快的靈芝菌株，研究了不同氮源、碳源及金屬離子對靈芝產(chǎn)多糖的影響，以及多糖液體發(fā)酵條件的優(yōu)化技術，仍屬于靈芝總多糖的發(fā)酵技術，未涉及靈芝β -葡聚糖的發(fā)酵技術。
[0008]文獻:肖雷，姚菁華，呂兆啟，譚才鄧，廖延智，吳裕豪，龔燕媚，肖虹，吳曉燕，李平凡.靈芝液體發(fā)酵產(chǎn)胞內(nèi)多糖的培養(yǎng)基優(yōu)化(現(xiàn)代食品科技，2013)報道了靈芝在液體發(fā)酵過程中胞內(nèi)多糖的培養(yǎng)基優(yōu)化技術。也沒有β_葡聚糖的的發(fā)酵技術和相關提高產(chǎn)量的技術。
[0009]中國專利:偉張，湯亞杰，申請?zhí)?00810007833，提出了一種促進靈芝酸和靈芝多糖生物合成的發(fā)酵方法。該方法分別考察了 pH兩階段、溶氧兩階段控制策略或補料策略相互協(xié)同在一起后對靈芝酸和靈芝多糖生物合成的影響，提出一種促進靈芝酸和靈芝多糖生物合成的發(fā)酵方法。但研究對象仍是靈芝總多糖，未涉及靈芝β_葡聚糖。
[0010]中國專利:山東省農(nóng)業(yè)科學院土壤肥料研究所，申請?zhí)?010102306901，提出了一種提高靈芝多糖產(chǎn)量的液體發(fā)酵方法。它利用靈芝細胞的液體培養(yǎng)，通過在培養(yǎng)基中添加稀土元素鐠、釹或鑭，提高靈芝多糖的產(chǎn)量，但仍是針對總多糖的技術，沒有具體針對靈芝β-葡聚糖。
[0011]地鳘蟲是鳘蠊科昆蟲地鳘(Eupolyphaga sinensis Walker)的雌蟲干燥體，是我國傳統(tǒng)的藥用昆蟲。我們通過大量的實驗發(fā)現(xiàn)，靈芝總多糖含量高時，靈芝的β_葡聚糖的量不一定最高。同時通過大量的篩選實驗，找到了一種能針對性提高靈芝β_葡聚糖產(chǎn)量的蟲類外源添加物質(zhì)，即地鱉蟲油，并對發(fā)酵策略及液體培養(yǎng)基進行了優(yōu)化設計，形成了一種能顯著提高靈芝發(fā)酵菌物中β_葡聚糖產(chǎn)量、且生產(chǎn)工藝簡易的β_葡聚糖生產(chǎn)工藝，即發(fā)酵模式為發(fā)酵一段時間后補加β_葡聚糖產(chǎn)物促進因子(地鱉蟲油)的全新的靈芝β-葡聚糖發(fā)酵技術。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0012]本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有真菌β -葡聚糖發(fā)酵技術存在的種種不足，提供一種能顯著提高靈芝菌發(fā)酵物中β_葡聚糖產(chǎn)量、且生產(chǎn)工藝簡單、發(fā)酵時間相對較短的β_葡聚糖生產(chǎn)工藝。
[0013]為實現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的技術方案是:
[0014]—種提高靈芝菌發(fā)酵物中β -葡聚糖產(chǎn)量的方法:在靈芝(Ganoderma Iucidum)菌種液體發(fā)酵過程中添加地鱉蟲油。
[0015]地鱉蟲油的制備方法為，:蟲體風干后，粉碎成細粉，用乙醚回流提取，抽濾獲得乙醚提取液，用氮氣反復吹干乙醚溶劑后，獲得地鱉蟲液態(tài)油。
[0016]地鱉蟲油的更加具體的制備方法為:蟲體自然風干后，粉碎成40-80目的細粉，用料液比為1:30-1:50g/mL的無水乙醚溶液在溫度為20-33°C下回流提取2_3小時，抽濾獲得乙醚提取液，用氮氣反復吹干乙醚溶劑后，獲得地鱉蟲液態(tài)油。
[0017]上述方法中添加地鱉蟲油的量為50_80mg/L。而且是將靈芝種子液接種到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中深層發(fā)酵后，再添加地鱉蟲油繼續(xù)發(fā)酵。
[0018]具體是將靈芝種子液接種到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中深層發(fā)酵2-5天后添加地鱉蟲油，在溫度為26-28°C、轉(zhuǎn)速為150-190r/min繼續(xù)發(fā)酵6_9天結束。
[0019]將靈芝菌種接種到蔗糖為碳源，蛋白胨為氮源，KH2PO4和MgSO4為礦物元素的種子培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基組成為:蔗糖36-45g/L，蛋白胨6-9g/L，KH2PO4L 6g/L，MgSO40.76g/L ;然后在溫度為27-30°C、轉(zhuǎn)速為160-200r/min的搖瓶中發(fā)酵6_9天(裝液量為容器體積的50-70% )，獲得靈芝的種子液。
[0020]添加地鱉蟲油之前先將靈芝種子液制備成菌體濃度為1.5-2.0g/L(以菌體干重計)的接種液，按體積比10-15%的比例接種到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中深層發(fā)酵2-5天(裝液量為容器體積的50-70% )。具體是將靈芝種子液制備成的接種液接種到蔗糖為碳源，蛋白胨為氮源，KH2PO4和MgSO4為礦物元素的液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基組成為:蔗糖40-46g/L，蛋白胨 6-9g/L，KH2PO4L 6g/L,MgSO40.76g/L ;然后在溫度為 27_30°C、轉(zhuǎn)速為 160_200r/min的搖瓶中深層發(fā)酵2-5天。本發(fā)明采用的靈芝菌株保藏號為CCGMC 5.0616。
[0021]本發(fā)明靈芝菌發(fā)酵物中β -葡聚糖提取和檢測方法為:在發(fā)酵產(chǎn)物(菌體和發(fā)酵液)中加入4倍體積的飲用自來水,在85°C下回流提取3小時，5000r/min離心15min,除去菌體殘渣，上清液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中濃縮至原體積的1/4，再加入4倍體積的工業(yè)酒精，沉淀獲得總多糖。總多糖溶解于80°C熱水溶液后，在溶液中加入Sevage試劑[氯仿:正丁醇=5:1 (v/v)]，振蕩，離心棄去多糖中的蛋白等雜質(zhì)，然后用剛果紅比色法定量β -葡聚糖的含量。本發(fā)明采用中國普通微生物菌種保藏管理委員會保藏的靈芝(靈芝)菌種(Ganoderma Iucidum),菌株保藏號為CCGMC 5.0616。菌種的有關性質(zhì)可以參閱中國普通微生物菌種保藏管理委員會(CCGMC)菌種目錄，本發(fā)明不再詳述。
[0022]與現(xiàn)有靈芝發(fā)酵技術相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)勢:
[0023]I)本發(fā)明涉及的靈芝發(fā)酵技術針對性強，具體針對靈芝β_葡聚糖的現(xiàn)代發(fā)酵技術，不是傳統(tǒng)的靈芝總多糖的發(fā)酵技術。
[0024]2)通過在靈芝發(fā)酵一段時間后補加適量的地鱉蟲油，可顯著提高靈芝發(fā)酵菌物中β_葡聚糖的產(chǎn)量，其產(chǎn)量高達193.6mg/L，遠遠高于未添加地鱉蟲油的傳統(tǒng)發(fā)酵的產(chǎn)量。
[0025]3)本發(fā)明的發(fā)酵工藝簡單，且葡聚糖總的發(fā)酵時間較短，生產(chǎn)效率明顯提高，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
[0026]4)本發(fā)明添加的是可食用的地鱉蟲油，且添加量很少，無毒副作用。

【具體實施方式】
[0027]以下結合實施例旨在進一步說明本發(fā)明，而非限制本發(fā)明。
[0028]實施例1:
[0029]地鱉蟲油的制備:蟲體自然風干后，粉碎成60目的細粉，用料液比為1:30 (m/v)的無水乙醚溶液在溫度為25°C下回流提取2.3小時，抽濾獲得乙醚提取液，用氮氣反復吹干乙醚溶濟后，獲得地鱉蟲液態(tài)油。
[0030]靈芝β_葡聚糖發(fā)酵:采用中國普通微生物菌種保藏管理中心保藏的靈芝菌種(Ganoderma Iucidum),保藏號:CCGMC 5.0616。
[0031]靈芝種子培養(yǎng)基組成:蔗糖37g/L，蛋白胨8g/L，KH2PO4L 6g/L，MgSO40.76g/L ;液體發(fā)酵培養(yǎng)基組成:蔗糖40g/L，蛋白胨7g/L，KH2PO4L 6g/L，MgSO40.76g/L。將菌絲塊接種于含1.2L種子培養(yǎng)基的2L搖瓶中，在發(fā)酵溫度為29°C、轉(zhuǎn)速為180r/min的回轉(zhuǎn)式搖瓶柜中發(fā)酵8天，獲得種子液，以無菌水調(diào)成2.0g/L的濃度(以菌體干重計)，然后接種120mL種子液于含1.2L發(fā)酵培養(yǎng)基的2L搖瓶中。發(fā)酵溫度為29°C，轉(zhuǎn)速為190r/min，先發(fā)酵2天，然后一次性補加60mg/L地鱉蟲油，在發(fā)酵溫度為28°C，轉(zhuǎn)速為170r/min條件下繼續(xù)發(fā)酵7天，結束發(fā)酵，收獲發(fā)酵物。
[0032]在發(fā)酵產(chǎn)物(菌體和發(fā)酵液)中加入4倍體積的飲用自來水，在85°C下回流提取3小時，5000r/min離心15min,除去菌體殘洛,上清液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中濃縮至原體積的1/4,再加入4倍體積的工業(yè)酒精，沉淀獲得總多糖?？偠嗵侨芙庥?0°C熱水溶液后，在溶液中加入Sevage試劑[氯仿:正丁醇=5:1 (V/V)],振蕩,離心棄去多糖中的蛋白等雜質(zhì),然后用剛果紅比色法定量β_葡聚糖的含量。結果β_葡聚糖的產(chǎn)量為171.9mg/L。
[0033]實施例2:
[0034]地鱉蟲油的制備:蟲體自然風干后，粉碎成80目的細粉，用料液比為1:40 (m/v)的無水乙醚溶液在溫度為30°C下回流提取2.5小時，抽濾獲得乙醚提取液，用氮氣反復吹干乙醚溶濟后，獲得地鱉蟲液態(tài)油。
[0035]靈芝β_葡聚糖發(fā)酵:采用中國普通微生物菌種保藏管理中心保藏的靈芝菌種(Ganoderma Iucidum),保藏號:CCGMC 5.0616。
[0036]種子培養(yǎng)基組成:蔗糖40g/L，蛋白胨8g/L，KH2PO4L 6g/L，MgSO40.76g/L ;液體發(fā)酵培養(yǎng)基組成:蔗糖42g/L，蛋白胨7g/L，KH2PO4L 6g/L，MgSO40.76g/L。將菌絲塊接種于含1.2L種子培養(yǎng)基的2L搖瓶中，在發(fā)酵溫度為27°C、轉(zhuǎn)速為180r/min的回轉(zhuǎn)式搖瓶柜中發(fā)酵9天，獲得種子液，以無菌水調(diào)成2.0g/L的濃度(以菌體干重計)，然后接種120mL種子液于含1.2L發(fā)酵培養(yǎng)基的2L搖瓶中。發(fā)酵溫度為28°C，轉(zhuǎn)速為180r/min，先發(fā)酵5天，然后一次性補加70mg/L地鱉蟲油，在發(fā)酵溫度為27°C，轉(zhuǎn)速為160r/min條件下繼續(xù)發(fā)酵5天，結束發(fā)酵，收獲發(fā)酵物。
[0037]產(chǎn)品的提取和分析方法同實施例1，結果β -葡聚糖的產(chǎn)量為166.lmg/L。
[0038]實施例3:
[0039]地鱉蟲油的制備:蟲體自然風干后，粉碎成60目的細粉，用料液比為1:50 (m/v)的無水乙醚溶液在溫度為30°C下回流提取2小時，抽濾獲得乙醚提取液，用氮氣反復吹干乙醚溶濟后，獲得地鱉蟲液態(tài)油。
[0040]靈芝β_葡聚糖發(fā)酵:采用中國普通微生物菌種保藏管理中心保藏的靈芝菌種(Ganoderma Iucidum),保藏號:CCGMC 5.0616。
[0041]種子培養(yǎng)基組成:蔗糖39g/L，蛋白胨8g/L，KH2PO4L 6g/L，MgSO40.76g/L ;液體發(fā)酵培養(yǎng)基組成:蔗糖44g/L，蛋白胨7g/L，KH2PO4L 6g/L，MgSO40.76g/L。將菌絲塊接種于含1.2L種子培養(yǎng)基的2L搖瓶中，在發(fā)酵溫度為30°C、轉(zhuǎn)速為180r/min的回轉(zhuǎn)式搖瓶柜中發(fā)酵8天，獲得種子液，以無菌水調(diào)成1.8g/L的濃度(以菌體干重計)，然后接種150mL種子液于含1.2L發(fā)酵培養(yǎng)基的2L搖瓶中。發(fā)酵溫度為30°C，轉(zhuǎn)速為190r/min，先發(fā)酵3天，然后一次性補加50mg/L地鱉蟲油，在發(fā)酵溫度為28°C，轉(zhuǎn)速為180r/min條件下繼續(xù)發(fā)酵7天，結束發(fā)酵，收獲發(fā)酵物。
[0042]產(chǎn)品的提取和分析方法同實施例1，結果β -葡聚糖的產(chǎn)量為185.2mg/L。
[0043]實施例4:
[0044]地鱉蟲油的制備:蟲體自然風干后，粉碎成60目的細粉，用料液比為1:50 (m/v)的無水乙醚溶液在溫度為32°C下回流提取2.8小時，抽濾獲得乙醚提取液，用氮氣反復吹干乙醚溶濟后，獲得地鱉蟲液態(tài)油。
[0045]靈芝菌種、培養(yǎng)基組成、種子接種方法、接種量同實施例3。
[0046]接入種子液后，在發(fā)酵溫度為30°C，轉(zhuǎn)速為190r/min下，先發(fā)酵3天，然后一次性補加75mg/L地鱉蟲油，在發(fā)酵溫度為27°C，轉(zhuǎn)速為180r/min條件下繼續(xù)發(fā)酵7天，結束發(fā)酵，收獲發(fā)酵物。產(chǎn)品的提取和分析方法同實施例1，結果β_葡聚糖的產(chǎn)量為179.3mg/L。
[0047]實施例5:
[0048]地鱉蟲油的制備方法、靈芝菌種、培養(yǎng)基組成、種子接種方法、接種量同實施例3。
[0049]接入種子液后，在發(fā)酵溫度為30°C，轉(zhuǎn)速為190r/min下，先發(fā)酵4天，然后一次性補加80mg/L地鱉蟲油，在發(fā)酵溫度為28°C，轉(zhuǎn)速為180r/min條件下繼續(xù)發(fā)酵6天，結束發(fā)酵，收獲發(fā)酵物。產(chǎn)品的提取和分析方法同實施例1，結果β_葡聚糖的產(chǎn)量為182.7mg/L。
[0050]實施例6:
[0051]地鱉蟲油的制備方法、靈芝菌種、培養(yǎng)基組成、種子接種方法、接種量同實施例3。同時設立對照發(fā)酵組和補加地鱉蟲油發(fā)酵組。
[0052]對照發(fā)酵組在接入種子液后，在發(fā)酵溫度為30°C，轉(zhuǎn)速為190r/min下，先發(fā)酵3天；然后在發(fā)酵溫度為28°C，轉(zhuǎn)速為175r/min條件下繼續(xù)發(fā)酵7天后結束發(fā)酵。
[0053]地鱉蟲油發(fā)酵組在接入種子液后，在發(fā)酵溫度為30°C，轉(zhuǎn)速為190r/min下，先發(fā)酵3天，然后一次性補加68mg/L地鱉蟲油，繼續(xù)在發(fā)酵溫度為28°C，轉(zhuǎn)速為175r/min條件下繼續(xù)發(fā)酵7天，結束發(fā)酵，收獲發(fā)酵物。
[0054]產(chǎn)品的提取和分析方法同實施例1。結果對照組(未加地鱉蟲油)β_葡聚糖的產(chǎn)量為151.2mg/L，添加發(fā)酵組β -葡聚糖的產(chǎn)量為193.6mg/L。
【權利要求】
1.一種提高靈芝菌發(fā)酵物中β -葡聚糖產(chǎn)量的方法，其特征在于:在靈芝(GanodermaIucidum)菌種液體發(fā)酵過程中添加地鱉蟲油。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種提高靈芝菌發(fā)酵物中β_葡聚糖產(chǎn)量的方法，其特征在于:地鱉蟲油的制備方法為:蟲體風干后，粉碎成細粉，用乙醚回流提取，抽濾獲得乙醚提取液，用氮氣反復吹干乙醚溶劑后，獲得地鱉蟲液態(tài)油。
3.根據(jù)權利要求2所述的一種提高靈芝菌發(fā)酵物中β_葡聚糖產(chǎn)量的方法，其特征在于:地鱉蟲油的制備方法為:蟲體自然風干后，粉碎成40-80目的細粉，用料液比為1:30-1:50g/mL的無水乙醚溶液在溫度為20-33°C下回流提取2_3小時，抽濾獲得乙醚提取液，用氮氣反復吹干乙醚溶劑后，獲得地鱉蟲液態(tài)油。
4.根據(jù)權利要求1或2或3所述的一種提高靈芝菌發(fā)酵物中β-葡聚糖產(chǎn)量的方法，其特征在于:添加地鱉蟲油的量為50-80mg/L。
5.根據(jù)權利要求4所述的一種提高靈芝菌發(fā)酵物中β_葡聚糖產(chǎn)量的方法，其特征在于:將靈芝種子液接種到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中深層發(fā)酵后，再添加地鱉蟲油繼續(xù)發(fā)酵。
6.根據(jù)權利要求5所述的一種提高靈芝菌發(fā)酵物中β_葡聚糖產(chǎn)量的方法，其特征在于:將靈芝種子液接種到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中深層發(fā)酵2-5天后添加地鱉蟲油，在溫度為26-28°C、轉(zhuǎn)速為150-190r/min繼續(xù)發(fā)酵6-9天結束。
7.根據(jù)權利要求5所述的一種提高靈芝菌發(fā)酵物中β_葡聚糖產(chǎn)量的方法，其特征在于:將靈芝菌種接種到蔗糖為碳源，蛋白胨為氮源，KH2PO4和MgSO4為礦物元素的種子培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基組成為:蔗糖36-45g/L，蛋白胨6-9g/L，KH2PO4L 6g/L，MgSO40.76g/L ;然后在溫度為27-30°C、轉(zhuǎn)速為160-200r/min的搖瓶中發(fā)酵6_9天，獲得靈芝的種子液。
8.根據(jù)權利要求5所述的一種提高靈芝菌發(fā)酵物中β_葡聚糖產(chǎn)量的方法，其特征在于:將靈芝種子液制備成菌體濃度為1.5-2.0g/L的接種液，按體積比10-15%的比例接種到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中深層發(fā)酵2-5天。
9.根據(jù)權利要求8所述的一種提高靈芝菌發(fā)酵物中β_葡聚糖產(chǎn)量的方法，其特征在于:將靈芝種子液制備成接種液接種到蔗糖為碳源，蛋白胨為氮源，KH2PO4和MgSO4為礦物元素的液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基組成為:蔗糖40-46g/L，蛋白胨6-9g/L，KH2PO4L 6g/L，MgSO40.76g/L ;然后在溫度為27-30°C、轉(zhuǎn)速為160_200r/min的搖瓶中深層發(fā)酵2-5天。
10.根據(jù)權利要求1或2或3所述的一種提高靈芝菌發(fā)酵物中β_葡聚糖產(chǎn)量的方法，其特征在于:靈芝菌株保藏號為CCGMC 5.0616。
【文檔編號】C12P19/08GK104357510SQ201410562487
【公開日】2015年2月18日 申請日期:2014年10月21日 優(yōu)先權日:2014年10月21日
【發(fā)明者】王曉玲, 劉高強 申請人:中南林業(yè)科技大學