一種甲苯胺藍(lán)-dna酶瓊脂培養(yǎng)基及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明為微生物領(lǐng)域，特別涉及一種甲苯胺藍(lán)-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的組分包括15.5g/L7.5％氯化鈉肉湯、0.5g/LDNA、1.5g/L氯化鈣、6.3g/L三羥甲基氨基甲烷、0.088g/L甲苯胺藍(lán)，pH值為8.9-9.1。所述的甲苯胺藍(lán)-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基，所述7.5％氯化鈉肉湯為每升7.5％氯化鈉肉湯中含有胰蛋白胨10.0g、牛肉粉5.0g、氯化鈉75.0g、磷酸氫二鉀2.0g。本發(fā)明培養(yǎng)基組方簡單，制備操作方便，成本低，利于推廣應(yīng)用；菌生長迅速，變異率低；便于觀察，分析。
【專利說明】-種甲苯胺藍(lán)-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明為微生物領(lǐng)域，特別涉及一種甲苯胺藍(lán)-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基及其應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 金黃色葡萄球菌，也稱"金葡菌"，細(xì)胞壁含90%的肽聚糖和10%的磷壁酸。其肽 聚糖的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)比革蘭氏陰性菌致密，染色時結(jié)晶紫附著后不被酒精脫色故而呈現(xiàn)紫色， 相反，陰性菌的細(xì)胞壁肽聚糖層薄、交聯(lián)度差，脂類含量高，所以紫色復(fù)合物被酒精沖掉然 后附著了沙黃的紅色。金黃色葡萄球菌與青霉素的發(fā)現(xiàn)有很大的淵源。當(dāng)年弗萊明就是在 他的金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)皿中發(fā)現(xiàn)有些球菌被殺死了，于是發(fā)現(xiàn)了青霉素。而研究也表 明青霉素只對以金黃色葡萄球菌為代表的革蘭氏陽性菌作用明顯。這也是由肽聚糖層的厚 度和結(jié)構(gòu)造成的。新出現(xiàn)的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌，被稱作超級細(xì)菌，幾乎能抵抗人類 所有的藥物，但是萬古霉素可以對付它。典型的金黃色葡萄球菌為球型，直徑0.8 μ m左右， 顯微鏡下排列成葡萄串狀。
[0003] 金黃色葡萄球菌無芽胞、鞭毛，大多數(shù)無莢膜，革蘭氏染色陽性。金黃色葡萄球菌 營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好，需氧或兼性厭氧，最適生長溫度37°c，最適生長 pH7. 4,干燥環(huán)境下可存活數(shù)周。平板上菌落厚、有光澤、圓形凸起，直徑0. 5?I. 0mm。血平 板菌落周圍形成透明的溶血環(huán)。金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性，可在10?15% NaCl肉 湯中生長?？煞纸馄咸烟?、麥芽糖、乳糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。甲基紅反應(yīng)陽性，VP反應(yīng)弱陽 性。許多菌株可分解精氨酸，水解尿素，還原硝酸鹽，液化明膠。金黃色葡萄球菌具有較強(qiáng) 的抵抗力，對磺胺類藥物、青霉素、紅霉素、土霉素、新霉素等抗生素敏感，但易產(chǎn)生耐藥性， 原因是由于這些菌株產(chǎn)生青霉素酶等。對堿性染料敏感，十萬分之一的龍膽紫液即可抑制 生長。
[0004] 培養(yǎng)基（Medium)是供微生物、植物組織和動物組織生長和維持用的人工配制的 養(yǎng)料，一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機(jī)鹽（包括微量元素）以及維生素和水等。有 的培養(yǎng)基還含有抗菌素和色素，用于單種微生物培養(yǎng)和鑒定。
[0005] 培養(yǎng)基（Medium)是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料， 一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機(jī)鹽（包括微量元素）以及生長素和水等。有的培養(yǎng) 基還含有抗菌素、色素、激素和血清。
[0006] 培養(yǎng)基由于配制的原料不同，使用要求不同，而貯存保管方面也稍有不同。一般培 養(yǎng)基在受熱、吸潮后，易被細(xì)菌污染或分解變質(zhì)，因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保 存。對一些需嚴(yán)格滅菌的培養(yǎng)基（如組織培養(yǎng)基），較長時間的貯存，必須放在3?6°C的 冰箱內(nèi)。由于液體培養(yǎng)基不易長期保管，均改制成粉末。
[0007] 目前還不能完全從生化反應(yīng)的基本原理來推斷和計算出適合某一菌種的培養(yǎng)基 配方，只能用生物化學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、微生物學(xué)等的基本理論，參照前人所使用的較適合某 一類菌種的經(jīng)驗配方，再結(jié)合所用菌種和產(chǎn)品的特性，采用搖瓶、玻璃罐等小型發(fā)酵設(shè)備， 按照一定的實(shí)驗設(shè)計和實(shí)驗方法選擇出較為適合的培養(yǎng)基。
[0008] 培養(yǎng)基設(shè)計的基本步驟是：
[0009] 根據(jù)前人的經(jīng)驗和培養(yǎng)基成分確定時一些必須考慮的問題，初步確定可能的培養(yǎng) 基成分通過單因子實(shí)驗最終確定出最為適宜的培養(yǎng)基成分當(dāng)培養(yǎng)基成分確定后，剩下的問 題就是各成分最適的濃度，由于培養(yǎng)基成分很多，為減少實(shí)驗次數(shù)常采用一些合理的實(shí)驗 設(shè)計方法。這些實(shí)驗往往基于多因子實(shí)驗，包含均勻設(shè)計、正交實(shí)驗設(shè)計、響應(yīng)面分析等。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種甲苯胺藍(lán)-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基及其應(yīng)用。
[0011] 本發(fā)明運(yùn)用生物化學(xué)，微生物學(xué)及無機(jī)、有機(jī)、分析化學(xué)和熒光技術(shù)的原理，對不 同的碳源、氮源、無機(jī)鹽類、維生素、生長促進(jìn)劑等諸類營養(yǎng)組分的組合進(jìn)行篩選，對培養(yǎng)基 的PH值、離子強(qiáng)度、氧化-還原電勢、表面張力、氣體環(huán)境等物化因子進(jìn)行了比較，研究出了 本發(fā)明的培養(yǎng)基。
[0012] 本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：
[0013] 一種甲苯胺藍(lán)-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的組分包括15. 5g/L7. 5 %氯化鈉 肉湯、0· 5g/LDNA、l. 5g/L氯化鈣、6. 3g/L三羥甲基氨基甲燒、0.088g/L甲苯胺藍(lán)，pH值為 8. 9-9. 1 〇
[0014] 在以上方案的基礎(chǔ)上，所述的甲苯胺藍(lán)-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基，所述7. 5%氯化鈉肉 湯為每升7. 5%氯化鈉肉湯中含有胰蛋白胨10. 0g、牛肉粉5. 0g、氯化鈉75. 0g、磷酸氫二鉀 2. Og0
[0015] 本發(fā)明還公開了所述的甲苯胺藍(lán)-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基的應(yīng)用，用于核糖核酸酶檢 測。
[0016] 具有脫氧核糖核酸酶的細(xì)菌分解培養(yǎng)基中的脫氧核糖核酸（DNA)，使DNA長鏈水 解成數(shù)個單核苷酸的寡核苷酸短鏈，使指示劑甲苯胺藍(lán)作用變成粉紅色；氯化鈣提供陽離 子作為激活劑；氯化鈉維持均衡的滲透壓；三羥甲基氨基甲烷為緩沖劑；瓊脂為培養(yǎng)基的 凝固劑。
[0017] 稱取本品27. 58g，加熱溶解于IOOOml蒸餾水中，分裝三角瓶。
[0018] 如立即使用可不需滅菌。如不立即使用，121°C高壓滅菌15分鐘。
[0019] 已滅菌的培養(yǎng)基在室溫可存放4個月無變化，并經(jīng)數(shù)次熔化后仍可用。
[0020] 本發(fā)明的有益效果：
[0021] 1、培養(yǎng)基組方簡單，制備操作方便，成本低，利于推廣應(yīng)用；
[0022] 2、菌生長迅速，變異率低；
[0023] 3、便于觀察，分析。

【具體實(shí)施方式】
[0024] 實(shí)施例1 :
[0025] -種甲苯胺藍(lán)-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的組分包括15. 5g/L7. 5 %氯化鈉 肉湯、0· 5g/LDNA、l. 5g/L氯化鈣、6. 3g/L三羥甲基氨基甲燒、0.088g/L甲苯胺藍(lán)，pH值為 8. 9-9. 1 〇
[0026] 所述的甲苯胺藍(lán)-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基，所述7. 5%氯化鈉肉湯為每升7. 5%氯化鈉 肉湯中含有胰蛋白胨10. 〇g、牛肉粉5. Og、氯化鈉75. Og、磷酸氫二鉀2. Og。
[0027] 具有脫氧核糖核酸酶的細(xì)菌分解培養(yǎng)基中的脫氧核糖核酸（DNA)，使DNA長鏈水 解成數(shù)個單核苷酸的寡核苷酸短鏈，使指示劑甲苯胺藍(lán)作用變成粉紅色；氯化鈣提供陽離 子作為激活劑；氯化鈉維持均衡的滲透壓；三羥甲基氨基甲烷為緩沖劑；瓊脂為培養(yǎng)基的 凝固劑。
[0028] 稱取本品27. 58g，加熱溶解于IOOOml蒸餾水中，分裝三角瓶。
[0029] 如立即使用可不需滅菌。如不立即使用，121°C高壓滅菌15分鐘。
[0030] 已滅菌的培養(yǎng)基在室溫可存放4個月無變化，并經(jīng)數(shù)次熔化后仍可用。
[0031] 35°C培養(yǎng)4h結(jié)果如下：
[0032]

【權(quán)利要求】
1. 一種甲苯胺藍(lán)-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基，其特征在于所述培養(yǎng)基的組分包括15. 5g/ 17.5%氯化鈉肉湯、0.58/0)嫩、1.58/1氯化鈣、6.3 8/1三羥甲基氨基甲烷、0.0888/1甲苯 胺藍(lán)，pH值為8. 9-9. 1。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的甲苯胺藍(lán)-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基，其特征在于所述7. 5 %氯化鈉 肉湯為每升7. 5%氯化鈉肉湯中含有胰蛋白胨10. Og、牛肉粉5. Og、氯化鈉75. Og、磷酸氫二 鉀 2. 0g。
3. -種根據(jù)權(quán)利要求1所述的甲苯胺藍(lán)-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基的應(yīng)用，其特征在于用于核 糖核酸酶檢測。
【文檔編號】C12Q1/14GK104313122SQ201410505132
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2014年9月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月28日
【發(fā)明者】高玉成, 劉永祥 申請人:青島康合偉業(yè)商貿(mào)有限公司