一種屎腸球菌及其制備方法
【專利摘要】一種屎腸球菌及其制備方法，涉及微生物領(lǐng)域，具體涉及一種屎腸球菌及其應(yīng)用。從屠宰的山羊瘤胃中采集菌樣，外采用37±5℃、厭氧、避光的條件進(jìn)行定向培育，通過瓊脂平板分區(qū)反復(fù)劃線分離純化后取得屎腸球菌L-01。屎腸球菌L-01可作為動物微生物飼料添加劑應(yīng)用，能有效抑制動物消化道致病菌，改善消化道微生態(tài)環(huán)境；增強(qiáng)動物體的免疫功能，并可作為抗生素替代品，可有效解決當(dāng)前所面臨的嚴(yán)重局面。
【專利說明】一種屎腸球菌及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及微生物領(lǐng)域，具體涉及一種屎腸球菌及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]當(dāng)前由于抗生素濫用以及超級細(xì)菌的出現(xiàn)等等一系列問題，使人類不可回避的面臨由此所造成的嚴(yán)重局面，當(dāng)務(wù)之急，必須盡快研發(fā)抗生素替代品，為綠色、安全、高效的動物飼料和人類食品生產(chǎn)提供可靠的技術(shù)保障。益生素是近20年發(fā)展起來的一種新型飼料添加劑，它具有抗生素和酶的功能。益生素可以補(bǔ)充有益菌群，改善消化道菌群平衡，預(yù)防和治療菌群失調(diào)癥；可以刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)，提高動物機(jī)體免疫能力；能夠參與菌群生存競爭，協(xié)助機(jī)體消除毒素和代謝產(chǎn)物；可改善機(jī)體代謝，補(bǔ)充機(jī)體營養(yǎng)成分，促進(jìn)畜禽生長。
[0003]屎腸球菌{Enterococcus faecium)是目前農(nóng)業(yè)部令(2013年2045號)動物微生物飼料添加劑欄所允許使用的益生菌種類，研究表明該菌可作為動物微生物飼料添加劑應(yīng)用，能有效抑制動物消化道致病菌，改善消化道微生態(tài)環(huán)境；增強(qiáng)動物體的免疫功能。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明目的是為了解決當(dāng)前抗生素的濫用以及超級細(xì)菌的出現(xiàn)等等一系列問題，提出一種利于改善動物機(jī)體代謝、補(bǔ)充機(jī)體營養(yǎng)成分、促進(jìn)畜禽生長的屎腸球菌L-01。
[0005]本發(fā)明提出的屎腸球菌L-01 (Enterococcus faecium L-OI)于 2012 年 5 月 30保藏于位于中國武漢大學(xué) 的中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號是CCTCC NO:M 2012194。
[0006]本發(fā)明還提出以上屎腸球菌L-Ol的制備方法，即從屠宰的山羊瘤胃中采集菌樣，外采用37±5°C、厭氧、避光的條件進(jìn)行定向培育，通過瓊脂平板分區(qū)反復(fù)劃線分離純化后取得屎腸球菌L-OI。
[0007]本發(fā)明從健康山羊屠宰后的瘤胃分離、純化、培育、鑒定到I株屎腸球菌并保種，可作為動物微生物飼料添加劑應(yīng)用，能有效抑制動物消化道致病菌，改善消化道微生態(tài)環(huán)境；增強(qiáng)動物體的免疫功能，并可作為抗生素替代品，可有效解決當(dāng)前所面臨的嚴(yán)重局面。
[0008]本發(fā)明篩選得到的菌株，與中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心等國家保種機(jī)構(gòu)現(xiàn)存菌種來源及生物學(xué)特性不同。經(jīng)過中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心鑒定，該菌株為屎腸球菌，且在中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心進(jìn)行了遺傳穩(wěn)定性試驗，證明該菌株性狀可穩(wěn)定遺傳。在8_12h的酶活力動態(tài)變化過程中，α-淀粉酶活力與α-葡萄糖轉(zhuǎn)苷酶活力均達(dá)到峰值并維持在較高水平。
[0009]本菌株分離源自屠宰后的健康山羊瘤胃，其發(fā)酵產(chǎn)物作為動物微生物飼料添加劑應(yīng)用于養(yǎng)殖動物，尤其是對改善反芻動物，其相容性和功效最為理想，此外，對于仔豬消化道微生態(tài)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的建立也具有積極的調(diào)控作用。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0010]圖1為本發(fā)明屎腸球菌L-Ol的菌株菌落照片。[0011]圖2、圖3分別為本發(fā)明屎腸球菌L-Ol的菌株場發(fā)射掃描電鏡照片。
[0012]圖4為本發(fā)明屎腸球菌L-Ol菌株MRS培養(yǎng)基菌體形態(tài)照片。
[0013]圖5為本發(fā)明屎腸球菌L-Ol菌株MRS培養(yǎng)基菌落形態(tài)照片。
[0014]圖6為39°C淀粉酶(AMS)活力隨時間變化的關(guān)系圖。
[0015]圖7為對硝基苯酚的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
[0016]圖8為58°C α -葡萄糖轉(zhuǎn)苷酶活力隨時間變化的關(guān)系圖。
[0017]圖9為屎腸球菌L-Ol與相關(guān)種的16S rDNA序列系統(tǒng)發(fā)育樹。
[0018]圖10為屎腸球菌L-Ol與相關(guān)種的基因序列系統(tǒng)發(fā)育樹。
【具體實施方式】
[0019]一、菌株的篩選
1.篩選過程
從飼養(yǎng)的山羊屠宰的瘤胃中采集菌樣，體外采用37±5°C、厭氧、避光的特定條件進(jìn)行定向培育，通過瓊脂平板分區(qū)反復(fù)劃線分離純化至單菌株L-Ol并馴化，研究其形態(tài)學(xué)及生物學(xué)特性。通過瓊脂平板培養(yǎng)觀察菌落特征、電子顯微鏡觀察單菌株形態(tài)及相關(guān)關(guān)鍵酶活力測定。
[0020]1.1工作母液的配置:
先以下表比例配備營養(yǎng)底物:_
【權(quán)利要求】
1.屎腸球菌L-Ol {Enterococcus faecium L_01)，其保藏編號是 CCTCC M 2012194。
2.如權(quán)利要求1所述屎腸球菌L-Ol的制備方法，其特征在于從屠宰的山羊瘤胃中采集菌樣，體外采用37±5°C、厭氧、避光的條件進(jìn)行定向培育，通過瓊脂平板分區(qū)反復(fù)劃線分離純化后取得屎腸球 菌L-OI。
【文檔編號】C12N1/20GK103865846SQ201410067604
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2014年2月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月27日
【發(fā)明者】潘林福 申請人:揚(yáng)州綠保生物科技有限公司