一種嗜血桿菌培養(yǎng)基及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種嗜血桿菌培養(yǎng)基及其制備方法，所述嗜血桿菌培養(yǎng)基由基礎(chǔ)培養(yǎng)基、哥倫比亞瓊脂、X因子、V因子、桿菌肽紙片抑菌劑組成，其中，在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，其他添加組分的重量百分比為哥倫比亞瓊脂0.3-3%、X因子0.001-0.003%、V因子0.001-0.003%、桿菌肽紙片抑菌劑0.0005-0.002%，加熱混合制備而成；所述培養(yǎng)基營養(yǎng)豐富，培養(yǎng)能力一致性高，細(xì)菌生長極易觀察，通過在特定條件下保持X因子和V因子正?；钚裕┦妊鞲袟U菌穩(wěn)定生長，抗雜菌能力強(qiáng)，可有效分出嗜血桿菌，大大降低了成本，直接成本只相當(dāng)于國外改良巧克力瓊脂的30%左右；其制備方法簡單，適合規(guī)?；I(yè)生產(chǎn)的需要。
【專利說明】一種嗜血桿菌培養(yǎng)基及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種培養(yǎng)基及其制備方法，尤其是一種嗜血桿菌培養(yǎng)基及其制備方 法。

【背景技術(shù)】
[0002] 當(dāng)代感染醫(yī)學(xué)認(rèn)為嗜血流感桿菌是上呼吸道、下呼吸道感染，肺炎、中耳炎、眼及 眼周感染的主要致病菌。但該菌為苛養(yǎng)菌常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)不宜檢出，需要含有X、V因子特殊 培養(yǎng)基方能檢出，常用的就是加入脫纖維羊血的巧克力培養(yǎng)基或國際上流行的改良巧克力 培養(yǎng)基，它們均以褐色背景為基礎(chǔ)，因此在觀察嗜血桿菌的生長時由于顏色發(fā)暗并不透明 不易觀察。
[0003] 國內(nèi)以往常用的用于嗜血桿菌的分離培養(yǎng)的培養(yǎng)基為巧克力瓊脂培養(yǎng)基，其配制 方法為：
[0004] 在基礎(chǔ)培養(yǎng)基基礎(chǔ)上于80_90°C左右無菌加入脫纖維羊血，使血球破裂釋放出X 因子(氯化血紅素）和V因子(輔酶I )，供嗜血桿菌的生長。此種培養(yǎng)基中嗜血桿菌生長良 好，但是，在其配制過程中存在著下列不足：
[0005] 1、無菌脫纖維羊血的采集費(fèi)時費(fèi)力；
[0006] 2、血球的破壞過程中不同羊血的破壞程度不一樣，很容易出現(xiàn)批間差；
[0007] 3、在配制過程中，血液稍有搖動不及時的地方，就會造成較大的顆粒，且搖動也容 易出現(xiàn)大量氣泡，給傾倒造成很大麻煩；
[0008] 4、培養(yǎng)基本身顏色較深，不易觀察形成的菌落。
[0009] 國外對巧克力培養(yǎng)基也進(jìn)行了改良，將脫纖羊血改加牛血紅蛋白以提供X因子和 含有V因子的添加劑，培養(yǎng)基加入抑菌劑抑制雜菌來改善培養(yǎng)基的質(zhì)量，這種方法改善了 培養(yǎng)基的質(zhì)量，嗜血桿菌檢出率明顯提高但這種培養(yǎng)基造價昂貴在國內(nèi)無法普遍推廣，另 外觀察標(biāo)本依然在褐色培養(yǎng)基上進(jìn)行，不宜觀察。
[0010] 經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，V因子本身性質(zhì)特殊，無法在高溫條件與低溫條件下進(jìn)行保存，一般 的條件下均會使V因子喪失活性，又因?yàn)榕R床標(biāo)本中含有大量的嗜血桿菌，而標(biāo)本中含有 一些快速生長的雜菌，標(biāo)本接種在巧克力培養(yǎng)基上由于沒有抑菌劑雜菌生長迅速，很快變 化成優(yōu)勢菌，抑制了嗜血桿菌的生長，將10倍于雜菌的嗜血桿菌混合接種在巧克力培養(yǎng)基 上，生長的結(jié)果基本上看不到嗜血桿菌的生長，為了解決雜菌污染的問題分別加入萬古霉 素、可林霉素(抑制革蘭氏陽性菌）和桿菌肽(抑制革蘭氏陰性菌）將雜菌全部抑制，達(dá)到了 很好分離嗜血桿菌的目的。但是桿菌肽用量極大，達(dá)到300mg/L，成本很高。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0011] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種嗜血桿菌培養(yǎng)基。
[0012] 本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問題在于提供上述嗜血桿菌培養(yǎng)基的制備方法。
[0013] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案是：
[0014] 一種嗜血桿菌培養(yǎng)基，由基礎(chǔ)培養(yǎng)基、哥倫比亞瓊脂、X因子(氯化血紅素)、V因 子(輔酶I )、桿菌肽紙片抑菌劑組成，其中，在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，其他添加組分的重量百分比 為哥倫比亞瓊脂0. 3-3%、X因子0. 001-0. 003%、V因子0. 001-0. 003%、桿菌肽紙片抑菌劑 0.0005-0. 002%。
[0015] 優(yōu)選的，上述嗜血桿菌培養(yǎng)基，在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，其他添加組分的重量百分比為哥 倫比亞瓊脂2%、X因子0. 002%、V因子0. 0025%、桿菌肽紙片抑菌劑0. 0017%。
[0016] 優(yōu)選的，上述嗜血桿菌培養(yǎng)基，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為營養(yǎng)肉湯、營養(yǎng)瓊脂或蛋白胨 水。
[0017] 優(yōu)選的，上述嗜血桿菌培養(yǎng)基，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為含有蛋白胨、氯化鈉和磷酸鹽的 牛肉浸液，PH7.2-7.6。
[0018] 上述嗜血桿菌培養(yǎng)基的制備方法，具體制備步驟如下：
[0019] (1)向基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入0. 3-3%哥倫比亞瓊脂，煮沸；
[0020] (2)冷卻至45°C，向基礎(chǔ)培養(yǎng)基中繼續(xù)加入0· 001-0. 003%X因子、0· 001-0. 003%V 因子和0. 0005-0. 002%桿菌肽紙片抑菌劑，搖勻；
[0021] (3)傾注平板。
[0022] 本發(fā)明的有益效果是：
[0023] 上述嗜血桿菌培養(yǎng)基，營養(yǎng)豐富，培養(yǎng)能力一致性高，細(xì)菌生長極易觀察，通過在 特定條件下保持X因子和V因子正?；钚?，供嗜血流感桿菌穩(wěn)定生長，抗雜菌能力強(qiáng)，可有 效分出嗜血桿菌，大大降低了成本，直接成本只相當(dāng)于國外改良巧克力瓊脂的30%左右；其 制備方法簡單，適合規(guī)?；I(yè)生產(chǎn)的需要。

【具體實(shí)施方式】
[0024] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明所述技術(shù)方案作進(jìn)一步的說明。
[0025] 實(shí)施例1
[0026] 一種嗜血桿菌培養(yǎng)基，由基礎(chǔ)培養(yǎng)基、哥倫比亞瓊脂、X因子(氯化血紅素)、V因子 (輔酶I )、桿菌肽紙片抑菌劑組成，其中，在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，其他添加組分的重量百分比為 哥倫比亞瓊脂2%、X因子0. 002%、V因子0. 0025%、桿菌肽紙片抑菌劑0. 0017%。
[0027] 上述嗜血桿菌培養(yǎng)基的制備方法，具體制備步驟如下：
[0028] ( 1)向基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入2%哥倫比亞瓊脂，煮沸；
[0029] (2 )冷卻至45 °C，向基礎(chǔ)培養(yǎng)基中繼續(xù)加入0. 002%X因子、0. 0025%V因子和 0.0017%桿菌肽紙片抑菌劑，搖勻；
[0030] (3)傾注平板。
[0031] 實(shí)施例2
[0032] 一種嗜血桿菌培養(yǎng)基，由基礎(chǔ)培養(yǎng)基、哥倫比亞瓊脂、X因子(氯化血紅素)、V因子 (輔酶I )、桿菌肽紙片抑菌劑組成，其中，在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，其他添加組分的重量百分比為 哥倫比亞瓊脂0. 3%、X因子0. 003%、V因子0. 001%、桿菌肽紙片抑菌劑0. 0005%。
[0033] 上述嗜血桿菌培養(yǎng)基的制備方法，具體制備步驟如下：
[0034] (1)向基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入0. 3%哥倫比亞瓊脂，煮沸；
[0035] (2)冷卻至45°C，向基礎(chǔ)培養(yǎng)基中繼續(xù)加入0· 003%X因子、0· 001%V因子和0· 0005%
【權(quán)利要求】
1. 一種嗜血桿菌培養(yǎng)基，其特征在于：由基礎(chǔ)培養(yǎng)基、哥倫比亞瓊脂、X因子、V因子、桿 菌肽紙片抑菌劑組成，其中，在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，其他添加組分的重量百分比為哥倫比亞瓊脂 0· 3-3%、X 因子 0· 001-0. 003%、V 因子 0· 001-0. 003%、桿菌肽紙片抑菌劑 0· 0005-0. 002%。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的嗜血桿菌培養(yǎng)基，其特征在于：在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，其他添加 組分的重量百分比為哥倫比亞瓊脂2%、X因子0. 002%、V因子0. 0025%、桿菌肽紙片抑菌劑 0·0017%。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的嗜血桿菌培養(yǎng)基，其特征在于：所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為營養(yǎng) 肉湯、營養(yǎng)瓊脂或蛋白胨水。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的嗜血桿菌培養(yǎng)基，其特征在于：所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為含有蛋白 胨、氯化鈉和磷酸鹽的牛肉浸液，PH7. 2-7. 6。
5. 權(quán)利要求1-4之一所述的嗜血桿菌培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于：具體制備步驟 如下： (1) 向基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入0. 3-3%哥倫比亞瓊脂，煮沸； (2) 冷卻至45°C，向基礎(chǔ)培養(yǎng)基中繼續(xù)加入0. 001-0. 003%X因子、0. 001-0. 003%V因子 和0. 0005-0. 002%桿菌肽紙片抑菌劑，搖勻； (3) 傾注平板。
【文檔編號】C12R1/21GK104120094SQ201310154136
【公開日】2014年10月29日 申請日期:2013年4月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年4月27日
【發(fā)明者】張愛霞 申請人:天津川禾醫(yī)療科技有限公司