篩選植物的在植物中誘導(dǎo)孤雌生殖的遺傳元件的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了用于產(chǎn)生缺少由有性方式獲得的胚的植物群體的組合物和方法。組合物包括編碼多核苷酸的抑制盒和導(dǎo)致孤雌生殖的啟動子。本發(fā)明還提供了用于抑制自繁殖植物中的有性繁殖的孤雌生殖遺傳元件。方法包括利用母本胚缺陷隱性突變，所述突變隨后作為不育自交保持系統(tǒng)得以保持，從而允許產(chǎn)生對于所述隱性突變等位基因而言是純合的、但在轉(zhuǎn)基因上是互補(bǔ)的群體。方法還包括利用通過卵細(xì)胞特異性啟動子表達(dá)的毒素基因，從而產(chǎn)生不能通過所述雌配子傳遞的顯性無胚表型。然后將用驅(qū)動用于鑒定轉(zhuǎn)基因種子的所述解毒劑、花粉消融PTU以及種子顏色標(biāo)記的卵細(xì)胞啟動子轉(zhuǎn)化所得的半合子植物。本發(fā)明涉及產(chǎn)生50％雌性可育的植物，所述植物的種子在下一代生長時將產(chǎn)生具有50％可存活且為轉(zhuǎn)基因的種子，和50％不能存活且為無胚種子的植物。
【專利說明】篩選植物的在植物中誘導(dǎo)孤雌生殖的遺傳元件的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本公開涉及植物分子生物學(xué)領(lǐng)域，更具體地講涉及植物雌性繁殖生物學(xué)、改變植物雌性繁殖生物學(xué)以及篩選改變的生殖機(jī)制性能的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]單性生殖是指無性繁殖，其在不受精的情況下導(dǎo)致種子的產(chǎn)生、得到在遺傳上與母株相同的后代(Koltunow, et al.， (1995) Plant Phys1l.108:1345-1352 (Koltunow 等人，1995 年，《植物生理學(xué)》，第 108 卷，第 1345-1352 頁)；Ravi, et al.，(2008)Nature451:1121-4 (Ravi等人，2008年，《自然》，第451卷，第1121-1124頁))。它是一個繞開雌性減數(shù)分裂和有性生殖來產(chǎn)生與母本相同的胚的繁殖過程。單性生殖增大了開發(fā)優(yōu)良基因組合的可能性，并有利于所需性狀的快速摻入。單性生殖不僅提供繁殖保證，而且避免了后代的雜合性丟失，因?yàn)槁鸭?xì)胞保持了親代的基因型。因此，單性生殖避免了由于近親交配造成的活力喪失效應(yīng)，并由于雜種優(yōu)勢的影響可能另外賦予一些優(yōu)點(diǎn)。
[0003]在物種水平上，單性生殖的發(fā)生率不足物種的1%。單性生殖出現(xiàn)在多個野生物種和少數(shù)農(nóng)藝上重要的物種(例如柑桔屬和芒果)中，但未出現(xiàn)在任何主要的谷類作物中(Eckhardt, (2003) The Plant Celll5:1449-01 (Eckhardt，2003 年，《植物細(xì)胞》，第 15 卷，第1449-01頁))。單性生殖的一種形式是不定胚生殖，其中胚由胚珠內(nèi)位于胚囊外部的體細(xì)胞組織直接形成。不定胚生殖通常與正常的有性繁殖平行出現(xiàn)。單性生殖的第二種形式是二倍體孢子生殖，其取代了有性繁殖。在二倍體孢子生殖中，形成了未減數(shù)分裂的卵細(xì)胞，其隨后經(jīng)歷稱為孤雌生殖(不經(jīng)過受精的胚發(fā)生過程)的過程而形成胚。單性生殖的第三種形式是無孢子生殖，其與不定胚生殖類似地在有性胚囊外部的組織中發(fā)生。無孢子生殖涉及形成無性的未減數(shù)分裂的胚囊，其與二倍體孢子生殖類似地經(jīng)歷孤雌生殖而形成單性生殖胚。單性生殖的所有三種形式都依賴于不經(jīng)過受精而生成胚(孤雌生殖)。因?yàn)槠涮峁┝藢λ杌蛐偷墓潭ê蜔o限增殖的保證，所以工程化該能力以將無性系種子培育成作物(尤其是谷物)引起了極大關(guān)注(Spillane, et al., (2001)Nat.B1technol.22:687-91 (Spillane等人，2001年，《自然生物技術(shù)》，第22卷，第687-691頁))。
[0004]在商業(yè)化植物品系中將單性生殖工程化的分子方法是非?？扇〉摹蜣D(zhuǎn)錄的調(diào)控在種子特異性發(fā)育程序的表達(dá)中具有至關(guān)重要的作用。因此，早期胚珠發(fā)育期間在有性繁殖途徑和單性生殖過程之間的趨異點(diǎn)處分子開關(guān)的調(diào)控，是在其處可對類單性生殖性狀加以控制的點(diǎn)。
[0005]本公開描述了一種維持缺乏由有性方式獲得的胚的植物/種子大群體的方式。這可以用于生成針對誘導(dǎo)孤雌生殖的遺傳元件的篩選群體。此外，一旦鑒定出孤雌生殖遺傳元件，便可使用該相同方法來預(yù)防自繁殖植物中的有性繁殖。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]存在兩種不同但類似的方法。第一種方法利用母本胚缺陷(胚致死)隱性突變，該包標(biāo)記，其用于允許將保持系群體從所產(chǎn)生言是純合的群體，但由于半合子狀態(tài)的構(gòu)建中應(yīng)當(dāng)分離成1: 1的存活的轉(zhuǎn)基因(八八/
戶的孤雌生殖的遺傳元件。此外，所述系統(tǒng)之解毒劑構(gòu)建體的自繁殖雜交體(不喪失雜能包括:隱性胚致死突變/卵細(xì)胞消融品分消融轉(zhuǎn)基因、種子顏色標(biāo)記和(自繁殖植
電雄性不育品系鑒定不依賴受精的種子形二胚發(fā)生的帶激活標(biāo)簽的體細(xì)胞組織(根)亭人，2002年，《植物雜志》，第30卷，第:224-235 0^叩等人，2009年，《細(xì)胞研究》，含鑒定產(chǎn)生種子中的體細(xì)胞胚發(fā)生的基因。7'法。這些方法描述了產(chǎn)生大量無胚種子的。這些方法的一個優(yōu) 點(diǎn)是將不阻止胚乳受[0013]圖3是受精的擬南芥胚囊的熒光圖像，顯示出位于正常發(fā)育的中央細(xì)胞中的7-8個胚乳核。沒有存在接合子或胚(紅色)的跡象，也沒有存在任何助細(xì)胞(綠色)的跡象?？蓪⑴呷槊枋鰹樵诓淮嬖谂叩那闆r下發(fā)育。
[0014]圖4是受精的擬南芥胚囊的熒光圖像，其具有接合子(紅色)和宿存助細(xì)胞(綠色)的殘跡，其中接合子和宿存助細(xì)胞均顯示出正在凝聚和解體。中央細(xì)胞顯示為不健全的并處于解體的早期階段(如通過中央細(xì)胞的空泡形成增多所指示)。
[0015]圖5是在受精將要開始前2個未受精的擬南芥胚囊的熒光圖像。左邊的胚囊具有中央細(xì)胞(青色)，該中央細(xì)胞具有2個胚乳核和2個助細(xì)胞(黃色)，但缺少卵(紅色)。右邊的胚囊具有中央細(xì)胞(青色)，該中央細(xì)胞具有單個初生胚乳核，但缺少助細(xì)胞(黃色)和卵(紅色)。
[0016]圖6是受精的擬南芥胚囊的熒光圖像和微分干涉相差(DIC)熒光重疊圖像。中央細(xì)胞(青色)具有單個胚乳核和I個助細(xì)胞(黃色)，但缺少卵(箭頭)。
[0017]圖7是受精的擬南芥胚囊的熒光圖像，其具有位于正常發(fā)育的中央細(xì)胞中的4個胚乳核。僅存在非常弱的紅色熒光信號(箭頭)，其指示胚或接合子的殘跡的存在。宿存助細(xì)胞(綠色)正在解體。胚乳正在不存在胚的情況下發(fā)育。
[0018]圖8是具有良好發(fā)育的胚乳的2個擬南芥胚囊的熒光圖像。左邊的胚囊在其中央細(xì)胞(青色)中具有多個胚乳核，并且在其珠孔端處(箭頭)是胚或接合子(紅色)的殘跡。在正常條件下，該胚在心形階段應(yīng)當(dāng)發(fā)育地完全得多。右邊的較小胚囊具有多個胚乳核(青色)，但缺少胚(箭頭)。到該最后階段為止，助細(xì)胞自然地降解。
[0019]圖9至11示出了來自種子的保持無胚群體的種子。
[0020]圖9是對無胚條件進(jìn)行分離的擬南芥種子的寬場顯微圖。在該取樣中，較亮的種子是飽滿的，并且包含胚。較暗的種子是皺縮的，并且缺少胚。無胚種子已明顯發(fā)育，與在不存在胚的情況下的明顯胚乳發(fā)育一致。
[0021]圖10是與圖A相同的樣品視場的寬場熒光顯微圖。從飽滿的含胚種子觀察到亮紅色熒光。從皺縮的無胚種子觀察到極少的熒光或未觀察到熒光。
[0022]圖11示出了被設(shè)計用于篩選孤雌生殖的庫構(gòu)建體的一個預(yù)想實(shí)施例的組分。在TDNA骨架內(nèi)，啟動子例如AT DDlPRO(反足細(xì)胞啟動子)將驅(qū)動來自邊界在3’端處(此處為終止子)的單性生殖遺傳來源的cDNA或gDNA片段。獨(dú)特于保持系構(gòu)建體的種子顏色標(biāo)記的種子顏色標(biāo)記也在TDNA邊界內(nèi)。
[0023]圖12和13示出了篩選孤雌生殖cDNA群體，以及在篩選群體中對孤雌生殖胚進(jìn)行預(yù)測性鑒定的方法。
[0024]圖12示出了由反足細(xì)胞發(fā)育的發(fā)綠色熒光的孤雌生殖胚。生成了預(yù)測性無紅色熒光的發(fā)綠色熒光的種子，隨后在高通量篩選系統(tǒng)例如得自Un1n B1metrica公司的復(fù)雜對象參數(shù)分析儀和分選機(jī)(Complex Object Parameter Analyzer and Sorter, COPAS)中進(jìn)行鑒定。
[0025]圖13示出了在COPAS上分析的約15，000個無胚/保持系群體種子。數(shù)據(jù)在對數(shù)標(biāo)度上朝向紅色熒光偏移。綠色多邊形和單個數(shù)據(jù)點(diǎn)預(yù)測性地展示了在限定的挑選標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)對發(fā)綠色熒光的包含孤雌生殖胚的種子的鑒定。
[0026]圖14圖示了用于PHP47029/PHP50940 (無胚品系)植物的超轉(zhuǎn)化的載體PHP57122。在農(nóng)桿菌(Agrobacterium)轉(zhuǎn)化之前，用來自異源來源的cDNA取代ATTR1//CAM/CCDB/ATTR2。所得的TDNA在反足細(xì)胞中驅(qū)動來自AT-DD1PR0的cDNA表達(dá)，并在胚中驅(qū)動來自KTI3PR0的AC-GFPl表達(dá)。
[0027]圖15示出了在使用旨在篩選反足細(xì)胞孤雌生殖的cDNA表達(dá)庫進(jìn)行轉(zhuǎn)化之后，在Un1n B1metrica的復(fù)雜對象參數(shù)分析儀和分選機(jī)(COPAS)上分選的PHP47029/PHP50940(無胚品系)成熟種子。X軸=綠色熒光；￥軸=紅色熒光；藍(lán)色=單個數(shù)據(jù)點(diǎn)，紅色=兩個數(shù)據(jù)點(diǎn)，綠色=多于兩個數(shù)據(jù)點(diǎn)?？梢钥吹綌?shù)據(jù)點(diǎn)尾部朝向右方偏移，其中數(shù)據(jù)點(diǎn)尾部代表由于使用cDNA表達(dá)庫進(jìn)行了轉(zhuǎn)化而具有紅色和綠色熒光的種子。多邊形是選擇用于分選命中點(diǎn)的區(qū)域；在COPAS上進(jìn)行篩選期間，在該屏幕截圖中選擇了六個推定的命中點(diǎn)。
[0028]圖16示出了在使用旨在篩選反足細(xì)胞孤雌生殖的cDNA表達(dá)庫進(jìn)行轉(zhuǎn)化之后，在Un1n B1metrica的復(fù)雜對象參數(shù)分析儀和分選機(jī)(COPAS)上分選的PHP47029/PHP50940(無胚品系)成熟種子的六個推定命中點(diǎn)的PCR結(jié)果。使用在反足細(xì)胞孤雌生殖篩選載體PHP57122中cDNA插入位點(diǎn)旁側(cè)的引物對粗略的種子分離物執(zhí)行巢式PCR。將PCR產(chǎn)物置于I %瓊脂糖凝膠上于TAE中運(yùn)行，并用溴化乙錠染色。從7個推定命中點(diǎn)中的3個點(diǎn)觀察到了常見的1.7-1.9kb條帶。
[0029]發(fā)明詳沭
[0030]下文將參照附圖更完整地描述本發(fā)明，其中附圖示出了本發(fā)明的一些但并非全部實(shí)施例。事實(shí)上，這些公開內(nèi)容可以多種不同形式呈現(xiàn)，不應(yīng)理解為受限于本文所述的實(shí)施例；更確切地說，提供這些實(shí)施例以使得本公開將滿足適用的法律要求。類似的編號在全文中是指類似的要素。
[0031]借助前面的描述和隨附的附圖中給出的教導(dǎo)，這些公開內(nèi)容所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員將會想到本文所述公開內(nèi)容的許多修改形式和其他實(shí)施例。因此，應(yīng)當(dāng)了解，這些公開內(nèi)容不限于所公開的特定實(shí)施例，并旨在將修改形式和其他實(shí)施例包括在本文末尾所附權(quán)利要求的范圍內(nèi)。雖然本文中采用特定術(shù)語，但所述術(shù)語僅在一般性和描述性意義上使用而并非用于限制目的。
[0032]1.概沭
[0033]提供了防止在植物胚珠中形成有性胚并使用該狀態(tài)以鑒定和促進(jìn)無性胚形成(孤雌生殖)的方法和組合物。
[0034] 可使用各種方法來測定向胚細(xì)胞樣狀態(tài)的這種轉(zhuǎn)化。例如，卵細(xì)胞優(yōu)選啟動子可以可操作地連接到標(biāo)記。此類報道基因構(gòu)建體在大多數(shù)胚珠植物細(xì)胞中將是無活性的，但報道基因構(gòu)建體在胚細(xì)胞樣狀態(tài)形成時將變得有活性。胚細(xì)胞優(yōu)選啟動子可用于檢測胚細(xì)胞樣轉(zhuǎn)錄狀態(tài)，所述胚細(xì)胞優(yōu)選啟動子包括例如difl (決定性不育基因1)45下調(diào)的擬南芥(Arabidopsis thaliana)啟動子(AT-DD45PR0 ；SEQ ID NO:10)和 EASE 啟動子(卵器優(yōu)選增強(qiáng)子啟動子；SEQ ID NO:19)、KTI3 啟動子(Perez-Grau and Goldberg, (1989)Plant Celll:1095-1109 (Perez-Grau 和 Goldberg, 1989 年，《植物細(xì)胞》，第 I 卷，第 1095-1109 頁))。另參見 Yang，et al.，(2005) Plant Phys1logyl39:1421-1432 (Yang 等人，2005 年，《植物生理學(xué)》，第139卷，第1421-1432頁)。另參見與本文同時提交且其全文以引用方式并入本文的名稱為 “Ovule Specific Promoters and Methods of Their Use” (胚珠特異性啟動子及其應(yīng)用方法）的美國臨時專利申請序列號_。當(dāng)利用此類可操作地連接到適當(dāng)標(biāo)記的
胚細(xì)胞優(yōu)選啟動子時，可通過測定標(biāo)記在胚珠細(xì)胞中的表達(dá)來測定胚樣轉(zhuǎn)錄狀態(tài)。以該方 式，可測定在植物胚珠的組織（包括適合于孤雌生殖的任何組織和子結(jié)構(gòu)）中的胚細(xì)胞樣 狀態(tài)。
[0035]可監(jiān)測另外的雌配子體特異性標(biāo)記基因，以測定卵/胚細(xì)胞樣狀態(tài)，所述基因包 括任何雌配子體優(yōu)選表達(dá)基因，例如AT1G18770(MYB98)、AT1G26795 (與自交不親和性蛋白 相關(guān)）、AT2G20070、at4g25530(同源盒蛋白，fwa)和at5g40260 (結(jié)瘤素mtN3家族蛋白）。 參見例如 Koszegi, et al.，(2011)Plant Journal67 :280_291 (Koszegi 等人，2011 年，《植物 雜志》，第67卷，第280-291頁），該文獻(xiàn)以引用方式并入本文。
[0036]在另一個實(shí)施例中，卵細(xì)胞樣狀態(tài)可通過類似于接合子細(xì)胞形態(tài)的細(xì)胞形態(tài)發(fā)育 指示，值得注意的是致密細(xì)胞質(zhì)的極性分布占據(jù)了細(xì)胞容積的一大部分，且細(xì)胞核位于細(xì) 胞的與大液泡相對的致密細(xì)胞質(zhì)頂端處，而大液泡占據(jù)細(xì)胞內(nèi)的中間至基部位置。一個實(shí) 施例將包括與尺寸為大約26 y m高X 15 y m寬的天然接合子細(xì)胞類似的擬南芥細(xì)胞。此類 形態(tài)學(xué)實(shí)施例是分子決定因素的補(bǔ)充，并且不是獨(dú)立于其他決定因素的胚細(xì)胞樣狀態(tài)的診 斷因素。
[0037]在另外的其他實(shí)施例中，可表征胚細(xì)胞樣狀態(tài)并測定其在胚囊外部的組織和子結(jié) 構(gòu)中的胚樣結(jié)構(gòu)的發(fā)育，包括在適合于孤雌生殖的任何組織和子結(jié)構(gòu)中此類結(jié)構(gòu)的形成。 胚樣狀態(tài)可通過顯示出胚的形態(tài)學(xué)發(fā)育狀態(tài)的細(xì)胞的鄰接分群來表征。胚樣狀態(tài)的形態(tài)學(xué) 特征可包括通常有液泡的細(xì)胞變?yōu)榧?xì)胞質(zhì)稠密的細(xì)胞，或等徑細(xì)胞變?yōu)樯扉L的以及卵形或 接合子形的。暗示胚/接合子樣狀態(tài)的其他細(xì)胞學(xué)特征可包括細(xì)胞極性的變化，“頂點(diǎn)”變 寬，而“基部”變細(xì)且逐漸變小。其他特征可包括大部分的細(xì)胞質(zhì)占據(jù)頂端位置，而大液泡占 據(jù)細(xì)胞內(nèi)的中間至基部位置。該接合子樣細(xì)胞的細(xì)胞核將占據(jù)細(xì)胞內(nèi)的頂端位置。在擬南 芥的例子中，形態(tài)學(xué)狀態(tài)將是卵、接合子、原胚、球形或心形胚、魚雷胚、手杖胚和卷曲子葉。 胚柄或子葉（一個或多個）的發(fā)育將是另一個形態(tài)學(xué)實(shí)施例。此類結(jié)構(gòu)也可以表達(dá)分子標(biāo) 記，諸如AT-DD45直到早期球形階段的表達(dá)。晚期球形階段直到成熟，胚樣結(jié)構(gòu)可表達(dá)KTI3 報道基因或其他胚特異性標(biāo)記表達(dá)。
[0038]在具體的實(shí)施例中，“卵/接合子/胚細(xì)胞樣狀態(tài)”可發(fā)展為產(chǎn)生孤雌生殖或引發(fā) 胚生殖。此類方法和組合物在本文的其他地方進(jìn)一步詳細(xì)討論。在不定胚生殖（孢子體單 性生殖）中，胚由胚珠內(nèi)位于胚囊外部的體細(xì)胞組織直接形成。換句話講，胚不由配子體， 而是例如由珠心和/或珠被組織形成。在不完全胚生殖中，胚發(fā)育是不完全的。在一些實(shí) 施例中，這可能表明缺少胚柄。在其他實(shí)施例中，這可能表明停留在成熟前的胚發(fā)育階段。 在另外的其他實(shí)施例中，這可能表明缺少球狀頭部、子葉或其他胚器官。
[0039]表1
[0040]
【權(quán)利要求】
1.一種用于生成缺少由具有繁殖能力的有性方式獲得的胚的大型種子群體的方法，包括: a)用包含三個部分的第一轉(zhuǎn)基因盒轉(zhuǎn)化第一植物，所述三個部分為:1)表達(dá)驅(qū)動同源解毒劑的啟動子的卵細(xì)胞， ?)花粉消融PTU iii)種子選擇標(biāo)記； b)用第二表達(dá)盒轉(zhuǎn)化所述植物，其中所述第二表達(dá)盒包含編碼通過卵細(xì)胞特異性啟動子表達(dá)的毒素基因的核酸分子，生成顯性半合子無胚表型，從而產(chǎn)生對于所述毒素而言是純合的但對于能育性而言是半合子的植物群體；以及 c)使來自用所述第二盒轉(zhuǎn)化的所述植物的所述種子生長，產(chǎn)生其種子的50%存活并且所述第一和第二表達(dá)盒為轉(zhuǎn)基因的植物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述第一表達(dá)盒包含編碼同源解毒劑的核酸分子，其中所述解毒劑選自:SEQ ID NO:49或其活性變體或片段。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述第一表達(dá)盒包含編碼含有熒光團(tuán)的種子顏色標(biāo)記的核酸分子，所述熒光團(tuán)選自:DS-RED、ZS-GREEN、ZS-YELLOW、AC-GFP, AM-CYAN和AM-CYANl、AC-GFP、eGFP、eCFP、eYFP、eBFP、“水果”熒光蛋白(UC 系統(tǒng));tagRFP、tagBFP、mKate、mKate2、 tagYFP、tagCFP、tagGFP、TurboGFP2> TurboYFP> TurboRFP> TurboFP602>TurboFP635> TurboFP650> NirFP 或 Cerulean。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述第一表達(dá)盒包含花粉消融植物轉(zhuǎn)錄單元(PTU)，其具有的啟動子選自包含下列的組:SEQ IDNO:53、54、55和56。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項所述的方法，其中所述第一表達(dá)盒還包含可操作地連接到編碼同源解毒劑多肽的所述核酸分子的組織特異性啟動子。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述組織特異性啟動子是卵細(xì)胞組織特異性啟動子。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中所述卵細(xì)胞組織特異性啟動子選自包含下列的組:SEQ ID NO:1-9、11、13、15、17、19-21、31 和 33。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項所述的方法，其中所述第二盒還包含可操作地連接到毒素基因的卵細(xì)胞組織特異性啟動子。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述第二盒啟動子選自:SEQID N0:53、54、55和56。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項所述的方法，其中所述植物用孤雌生殖PTU轉(zhuǎn)化，并且移除所述毒素和/或解毒劑互補(bǔ)構(gòu)建體，以允許產(chǎn)生自繁殖植物。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述植物是雙子葉植物。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述雙子葉植物為蕓苔屬物種(Brassicasp.)、向日葵、棉花、低芥酸油菜(canola)、紅花、煙草、擬南芥(Arabidopsis sp.)或苜猜。
13.根據(jù)權(quán)利要求1-12中任一項所述的方法，其中所述自繁殖植物是大豆。
14.根據(jù)權(quán)利要求1-10中任一項所述的方法，其中所述自繁殖植物是單子葉植物。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述單子葉植物是玉蜀黍、小麥、水稻、大麥、高粱或裸麥。
16.—種通過權(quán)利要求1-15中任一項所述的方法產(chǎn)生的自繁殖植物。
17.—種權(quán)利要求 16所述的自繁殖植物的種子。
【文檔編號】C12N15/82GK104039967SQ201280066347
【公開日】2014年9月10日 申請日期:2012年4月12日 優(yōu)先權(quán)日:2012年1月6日
【發(fā)明者】A.M.西甘, S.J.拉維特 申請人:先鋒高級育種國際公司