富硒的海洋微藻的養(yǎng)殖方法及其在飼料免疫增強劑中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種利用固態(tài)條件下兼養(yǎng)方式規(guī)模化生產(chǎn)富含免疫活性成分硒的微藻并應(yīng)用于畜禽飼料中形成一種新的免疫增強劑。本發(fā)明以農(nóng)副產(chǎn)品麩皮、豆粕為主的固態(tài)培養(yǎng)基培養(yǎng)富硒的海洋微藻，并將富硒微藻粉粉碎到200目的細度，在畜禽飼料中按0.1-0.6wt%量添加富硒藻粉，來喂養(yǎng)畜禽。本發(fā)明用立體方式、固體培養(yǎng)基來大規(guī)模的培養(yǎng)微藻，可以節(jié)省空間，提高微藻的收集率；添加富硒藻粉使畜禽增重提高6-8%，飼料轉(zhuǎn)化率提高10%，抗生素使用量減少20%。
【專利說明】富砸的海洋微藻的養(yǎng)殖方法及其在飼料免疫增強劑中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于海洋微藻與畜禽養(yǎng)殖業(yè)的交叉領(lǐng)域，涉及到一種利用固態(tài)條件下兼養(yǎng)方式規(guī)?；a(chǎn)富含免疫活性成分硒的微藻并應(yīng)用于畜禽飼料中形成一種新的免疫增強劑。
[0002]【背景技術(shù)】
畜禽免疫增強劑也稱免疫佐劑，是一類通過非特異性途徑提高機體對抗原或微生物特異性反應(yīng)的物質(zhì)，并可改善畜禽機體的免疫應(yīng)答。自1925年法國免疫學家兼獸醫(yī)Ramon發(fā)現(xiàn)在疫苗中加入某些與之無關(guān)的物質(zhì)可以特異地增強機體對白喉和破傷風毒素的抵抗反應(yīng)以來，免疫增強劑的研制已成為當今生物制品研究中的一個很重要的領(lǐng)域，其中微量、高效、無殘留性的生物活性因子最受關(guān)注。
[0003]目前常用免疫增強劑有硒、細菌脂多糖、胞壁酰二肽、云芝多糖以及香菇多糖等。
[0004]在畜禽動物養(yǎng)殖中，隨著集約化養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展,動物發(fā)病率越來越高,人們不得不大量使用抗生素和化學治療劑，使得病原菌抗藥性日益嚴重，且威脅到人類的健康。我國的畜禽飼料中添加多種抗菌藥、驅(qū)蟲藥、激素和促生長的藥物或制劑，這些藥物和制劑均可導致在畜禽產(chǎn)品中的殘留，這些殘留物大多對人體的健康造成危害。所以，畜牧產(chǎn)品的安全性必須提高到應(yīng)有的重視程度。尋找一種替代物，使之無藥物殘留和不污染環(huán)境，成了現(xiàn)代畜牧業(yè)的當務(wù)之急。它的應(yīng)用可以減少因各種藥物所造成的藥物殘留和環(huán)境污染，所以新型畜禽免疫增強劑的開發(fā)應(yīng)用，在解決畜禽疫病的防治、畜牧產(chǎn)品的安全性和環(huán)境污染問題等方面起到積極的作用，還能提高畜牧產(chǎn)品品質(zhì)，大幅度增加產(chǎn)品附加值。因此，研制一種具有自然性、無污染、無藥殘、無抗藥性、無毒副作用和利于環(huán)境保護等特征與優(yōu)勢的飼用免疫增強劑已成為最新趨勢。
[0005]在畜禽病臨床上，比較廣泛應(yīng)用的是特異性高免血清、干擾素、胸腺肽和轉(zhuǎn)移因子等增強免疫功能的制品，但由于這些藥品大部分具有嚴格的種屬特異性，加之目前動物藥品市場比較混亂，價格高，質(zhì)量難以保證，以及在臨床應(yīng)用中受到產(chǎn)品原料的來源和成本的限制。因此必須選用一種安全可靠，價廉高效，又具有廣泛性免疫增強作用的免疫增強劑。所以植物源和微生物免疫增強劑最具有發(fā)展?jié)摿Γ彩俏覈芯拷鉀Q抗生素殘留問題的關(guān)鍵課題，是沖破貿(mào)易壁壘的有效途徑。隨著我國肉類食品的衛(wèi)生標準的提高，飼料安全是保證動物類食品安全的基本條件，發(fā)展無公害綠色食品，也是畜禽養(yǎng)殖當務(wù)之急。為了開拓飼料添加劑的來源，確保畜禽產(chǎn)品的安全，許多學者也已經(jīng)把目光轉(zhuǎn)到天然植物源和微生物飼料添加劑上來，它們獨特的作用方式、良好的作用效果、以及無殘留、無抗藥性、無污染等特點受到越來越多的青睞。
[0006]微藻是地球上出現(xiàn)最早的生物，它們個體微小(幾微米至幾十微米)，一般要在顯微鏡下才能看到。微藻生態(tài)系統(tǒng)中的主要初級生產(chǎn)者，種類多，繁殖快，在生態(tài)系統(tǒng)的物質(zhì)循環(huán)和能量流動中起著極其重要的作用。近幾十年來，隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的應(yīng)用，分離鑒定手段的提高，遺傳工程、基因工程等的迅猛發(fā)展，人類對微藻的研究開發(fā)已進入一個嶄新的時期。由于微藻營養(yǎng)豐富，富含微量元素和各類生物活性物質(zhì)，而且易于人工繁殖，生長速度快，繁殖周期短，所以在醫(yī)藥、保健品、化妝品、水產(chǎn)養(yǎng)殖餌料、飼料添加劑、化工和環(huán)保等方面具有廣闊的應(yīng)用前景。
[0007]硒具有抗衰老、抗氧化、增強免疫力等如此多的生物活性功能，但無機硒卻具有毒性，其使用劑量和范圍都受到嚴格的限制。因此，只有轉(zhuǎn)化為有機硒，才具有食用、飼用和保健的價值。目前有機硒大多采用動植物或微生物的轉(zhuǎn)化方式來獲取。研究表明，硒可參與藻細胞的代謝過程，并通過藻類的生物富集作用及沿食物鏈傳遞，對海洋動物乃至人類產(chǎn)生重要的影響。硒在藻體中可與脂、多糖及蛋白結(jié)合，但形成硒蛋白是其轉(zhuǎn)化為有機硒的主要機制，海洋微藻大多含有豐富的營養(yǎng)及生物活性物質(zhì)，且對許多微量元素及化合物均具有較強的富集作用，是一類選擇性好、高效、成本低、操作簡便的生物富集體。
[0008]本發(fā)明解決了大規(guī)模固態(tài)培養(yǎng)微藻技術(shù)，可以提升微藻產(chǎn)業(yè)化水平，還可以引領(lǐng)畜禽養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)向綠色、健康、安全方向邁進，為我國畜禽產(chǎn)品出口提供安全保障，為將來我國發(fā)展綠色農(nóng)業(yè)、綠色畜牧業(yè)奠定強有力的基礎(chǔ)。

【發(fā)明內(nèi)容】
[0009]本發(fā)明有以下二個目的:
1.米用立體培養(yǎng)方式，以農(nóng)副產(chǎn)品麩皮、豆柏為主的固態(tài)培養(yǎng)基培養(yǎng)富硒的海洋微藻。
[0010]2.將富硒海洋微藻應(yīng)用于畜禽養(yǎng)殖。本發(fā)明目的I是這樣實現(xiàn)的:一種富硒的海洋微藻的養(yǎng)殖方法，包括以下步驟:
1、配置好固體培養(yǎng)基:麩皮65-88wt%、豆柏8-33wt%、石灰l_2wt%、KH2P04l-2wt%,加入富硒粉0.02-0.lwt%,上述比例的配方每100公斤，加入鹽度為30-35wt%。的地下海水50-83公斤攪拌均勻，置于滅菌鍋內(nèi)蒸煮120分鐘，維持溫度125°C、氣壓0.01-0.02MPa，將蒸煮好的上述培養(yǎng)基冷卻到23°C，待用；
2、接種:在無菌房間內(nèi)，將海洋微藻的藻種灑入上述培養(yǎng)基中,接種完成并攪拌
均勻；
3、立體培養(yǎng):將培養(yǎng)基放入塑鋼透明淺盤中，淺盤底布滿直徑3_的孔，置于無菌培養(yǎng)房中，通入潔凈空氣，通氣量為ImVmin，溫度21 °C-26 °C，光照度1000-3000 lx，培養(yǎng)42 -72小時；
4、干燥培養(yǎng)完成，將培養(yǎng)好的料，放入沸騰干燥機中干燥，控制干燥機進風口溫度在50-65°C，出風口 35°C _45°C，干燥后保持物料的水分控制在10%以內(nèi)。
[0011]步驟I中所述的地下海水用雙層200目棉布過濾。
[0012]步驟2中所述的海洋微藻的藻種制備通過以下步驟:將海水小球藻培養(yǎng)至對數(shù)期后由250mL三角瓶移至3L三角瓶進行擴大培養(yǎng)，接種密度為40mL/L，通氣量為2.0 L/min，溫度控制在23 °C ±2 °C，光照強度為30001x，光暗比12h: 12h，培養(yǎng)基為f/2，每日定時搖動培養(yǎng)瓶3次，培養(yǎng)2d。
步驟3中所述的所述塑鋼透明淺盤的規(guī)格為64CMX45CMX4.5CM。
[0013]步驟3中所述的潔凈空氣是指經(jīng)過0.01 μ m的孔徑過濾過的空氣。
[0014]本發(fā)明目的2是這樣實現(xiàn)的:一種富硒的海洋微藻在飼料免疫增強劑中的應(yīng)用，包括如下步驟:將上述富硒微藻粉粉碎到200目的細度，在畜禽飼料中按0.1-0.6wt%量添加富硒藻粉，來喂養(yǎng)畜禽。
[0015]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其顯著優(yōu)點:
1、以麩皮和豆柏為主要原料來培養(yǎng)海洋微藻，成本大大降低，且原料來源容易；
2、用立體方式、固體培養(yǎng)基來大規(guī)模的培養(yǎng)微藻，可以節(jié)省空間，提高微藻的收集率； 3、添加富硒藻粉使畜禽增重提高6-8%，飼料轉(zhuǎn)化率提高10%，抗生素使用量減少20%。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0016]圖1是本發(fā)明所述富硒微藻粉的制備流程示意圖。
【具體實施方式】
[0017]以下各實施例的制備流程見圖1。
[0018]實施例一
1、藻種準備:將海水小球藻培養(yǎng)至對數(shù)期后由250mL三角瓶移至3L三角瓶進行擴大培養(yǎng)，接種密度為40111171，通氣量為2.0 L/min，溫度控制在23 °C ±2 °C，光照強度為30001x，光暗比12h:12h，培養(yǎng)基為f/2，每日定時搖動培養(yǎng)瓶3次，培養(yǎng)2d。
[0019]2、配置好固體培養(yǎng)基:將麩皮65wt%、豆柏33 wt%、石灰I wt%和KH2P04lwt%混合，加入富硒粉0.02wt%，上述比例的配方每100公斤，加入用雙層200目棉布過濾過的鹽度為35wt%。的地下海水83公斤攪拌均勻，裝入蒸籠放入滅菌鍋內(nèi)蒸煮120分鐘，維持溫度125°C、氣壓0.01-0.02·MPa，將蒸煮好的上述培養(yǎng)基冷卻到23°C，待用；
3、接種:在無菌房間內(nèi)，將海洋微藻的藻種灑入上述培養(yǎng)基中,接種完成并攪拌
均勻；
4、立體培養(yǎng):將培養(yǎng)基放入塑鋼透明淺盤中，淺盤的規(guī)格為64CMX45CMX4.5CM，淺盤底布滿直徑3_的孔，置于無菌培養(yǎng)房中，通入經(jīng)過0.01 μ m的孔徑過濾過的潔凈空氣，通氣量為lm3/min，溫度26 °C，光照度2000 lx，培養(yǎng)42小時；
5、干燥培養(yǎng)完成，將培養(yǎng)好的料，放入沸騰干燥機中干燥，控制干燥機進風口溫度在50°C，出風口 35°C，干燥后保持物料的水分控制在10%以內(nèi)。
[0020]試驗動物用25日齡斷奶仔豬20頭，長茂飯莊養(yǎng)豬場提供，吮乳飲水正常，體表健康。將選自7窩體重相當?shù)臄嗄套胸i20頭，隨機分成A、B兩組，每組10頭，其中，A組和B組飼喂飼料配方相同:玉米63%、豆柏22%、麩皮7%、魚粉6%、沸石粉2%，在A組分別加A 0.1 wt%、0.3 wt% 和 0.6wt% 的富硒藻粉。
[0021]B組不添加，A、B兩組均注射大腸桿菌菌液(IX 108cfu/mL)，感染后分別于1、2、
3、4、5天規(guī)定時間用無菌注射器抽取豬靜脈血液lmL，置于1.5mL離心管中，加肝素抗凝劑混勻，4°C冰箱保存24h后，5000rpm、4°C離心10min，棄沉淀，取上層血清_20°C保存?zhèn)溆谩?br> [0022]試驗組與對照組的飼糧，除在預(yù)混中加了“富硒藻粉混合料”和不加有所不同之外，所用基礎(chǔ)料均相同。飼養(yǎng)喂養(yǎng)過程中，采用漏斗式飼糟自由采食，供應(yīng)充足飲水，日常管理與生產(chǎn)相同。
[0023]免疫指標的測定，AKP、ACP、SOD和CAT的活性測定均采用江蘇省南京建成生物研究所生產(chǎn)的試劑盒及其測定方法，實驗證實，A組AKP、ACP活性在注射后第三天達最高，SOD第四天最高，而CAT注射后第二天就達最高，最高組與B組比較均呈顯著性差異(p〈0.05)，ACP、CAT最高值是對照組B組的3倍之多，說明飼喂添加0.1-0.6wt%的富硒藻粉能有效激活豬的免疫活性，提高豬對微生物的抵抗能力。
[0024]仔細觀察記錄豬只的攝食、飲水以及精神狀態(tài)，并于40日齡70日齡逐頭稱重，實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)的統(tǒng)計分析A組比B組于40日齡平均體重高出0.64Kg，70日齡時平均高出近2Kg，說明富硒藻粉具有一定的促長效果。
[0025]實施例二
1、藻種準備:將海水小球藻培養(yǎng)至對數(shù)期后由250mL三角瓶移至3L三角瓶進行擴大培養(yǎng)，接種密度為40mL/L，通氣量為2.0 L/min，溫度控制在23 °C ±2 °C，光照強度為30001x，光暗比12h:12h，培養(yǎng)基為f/2，每日定時搖動培養(yǎng)瓶3次，培養(yǎng)2d。
[0026]2、配置好固體培養(yǎng)基:將麩皮88wt%、豆柏8wt%、石灰2wt%和KH2P042wt%混合，加入富硒粉0.05wt%、上述比例的配方每100公斤，加入用雙層200目棉布過濾過的鹽度為34wt%。的地下海水75公斤攪拌均勻，裝入蒸籠放入滅菌鍋內(nèi)蒸煮120分鐘，維持溫度125°C、氣壓0.01-0.02MPa，將蒸煮好的上述培養(yǎng)基冷卻到23°C，待用；
3、接種:在無菌房間內(nèi)，將海洋微藻的藻種灑入上述培養(yǎng)基中,接種完成并攪拌
均勻；
4、立體培養(yǎng):將培養(yǎng)基放入塑鋼透明淺盤中，淺盤的規(guī)格為64CMX45CMX4.5CM，淺盤底布滿直徑3mm的孔，置于無菌培養(yǎng)房中，通入經(jīng)過0.01ym的孔徑過濾過的潔凈空氣，通氣量為lm3/min，溫度25 °C，光照度2200 lx，培養(yǎng)60小時；
5、干燥 培養(yǎng)完成，將培養(yǎng)好的料，放入沸騰干燥機中干燥，控制干燥機進風口溫度在55°C，出風口 40°C，干燥后保持物料的水分控制在10%以內(nèi)。
[0027]試驗動物用25日齡斷奶仔豬20頭，長茂飯莊養(yǎng)豬場提供，吮乳飲水正常，體表健康。將選自7窩體重相當?shù)臄嗄套胸i20頭，隨機分成A、B兩組，每組10頭，其中，A組和B組飼喂飼料配方相同:玉米63%、豆柏22%、麩皮7%、魚粉6%、沸石粉2%，在A組分別加A 0.1 wt%、0.3 wt% 和 0.6wt% 的富硒藻粉。
[0028]B組不添加，A、B兩組均注射大腸桿菌菌液(I X 108cfu/mL)，感染后分別于1、2、
3、4、5天規(guī)定時間用無菌注射器抽取豬靜脈血液lmL，置于1.5mL離心管中，加肝素抗凝劑混勻，4°C冰箱保存24h后，5000rpm、4°C離心10min，棄沉淀，取上層血清_20°C保存?zhèn)溆谩?br> [0029]試驗組與對照組的飼糧，除在預(yù)混中加了“富硒藻粉混合料”和不加有所不同之外，所用基礎(chǔ)料均相同。飼養(yǎng)喂養(yǎng)過程中，采用漏斗式飼糟自由采食，供應(yīng)充足飲水，日常管理與生產(chǎn)相同。
[0030]免疫指標的測定，AKP、ACP、SOD和CAT的活性測定均采用江蘇省南京建成生物研究所生產(chǎn)的試劑盒及其測定方法，實驗證實，A組AKP、ACP活性在注射后第三天達最高，SOD第四天最高，而CAT注射后第二天就達最高，最高組與B組比較均呈顯著性差異(p〈0.05)，ACP、CAT最高值是對照組B組的3倍之多，說明飼喂添加0.1-0.6wt%的富硒藻粉能有效激活豬的免疫活性，提高豬對微生物的抵抗能力。
[0031]仔細觀察記錄豬只的攝食、飲水以及精神狀態(tài)，并于40日齡70日齡逐頭稱重，實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)的統(tǒng)計分析A組比B組于40日齡平均體重高出0.71Kg，70日齡時平均高出近2.5Kg，說明富硒藻粉具有一定的促長效果。[0032]實施例三
1、藻種準備:將海水小球藻培養(yǎng)至對數(shù)期后由250mL三角瓶移至3L三角瓶進行擴大培養(yǎng)，接種密度為40mL/L，通氣量為2.0 L/min，溫度控制在23 °C ±2 °C，光照強度為30001x，光暗比12h:12h，培養(yǎng)基為f/2，每日定時搖動培養(yǎng)瓶3次，培養(yǎng)2d。
[0033]2、配置好固體培養(yǎng)基:將麩皮82wt%、豆柏15wt%、石灰1.5wt%KH2P04l.5wt%混合、加入富硒粉0.lwt%，上述比例的配方每100公斤，加入用雙層200目棉布過濾過的鹽度為30wt%。的地下海水50公斤攪拌均勻，裝入蒸籠放入滅菌鍋內(nèi)蒸煮120分鐘，維持溫度125°C、氣壓0.01-0.02MPa，將蒸煮好的上述培養(yǎng)基冷卻到23°C，待用；
3、接種:在無菌房間內(nèi)，將海洋微藻的藻種灑入上述培養(yǎng)基中,接種完成并攪拌
均勻；
4、立體培養(yǎng):將培養(yǎng)基放入塑鋼透明淺盤中，淺盤的規(guī)格為64CMX45CMX4.5CM,淺盤底布滿直徑3mm的孔，置于無菌培養(yǎng)房中，通入經(jīng)過0.01 μ m的孔徑過濾過的潔凈空氣，通氣量為lm3/min，溫度21°C，光照度3000 lx，培養(yǎng)72小時；
5、干燥培養(yǎng)完成，將培養(yǎng)好的料，放入沸騰干燥機中干燥，控制干燥機進風口溫度在50°C，出風口 35°C，干燥后保持物料的水分控制在10%以內(nèi)。
試驗動物用25日齡斷奶仔豬20頭，長茂飯莊養(yǎng)豬場提供，吮乳飲水正常，體表健康。將選自7窩體重相當?shù)臄嗄套胸i20頭，隨機分成A、B兩組，每組10頭，其中，A組和B組飼喂飼料配方相同 :玉米63%、豆柏22%、麩皮7%、魚粉6%、沸石粉2%，在A組分別加入0.6wt%富硒藻粉。
[0034]B組不添加，A、B兩組均注射大腸桿菌菌液(I X 108cfu/mL)，感染后分別于1、2、
3、4、5天規(guī)定時間用無菌注射器抽取豬靜脈血液lmL，置于1.5mL離心管中，加肝素抗凝劑混勻，4°C冰箱保存24h后，5000rpm、4°C離心10min，棄沉淀，取上層血清_20°C保存?zhèn)溆谩?br> [0035]試驗組與對照組的飼糧，除在預(yù)混中加了“富硒藻粉混合料”和不加有所不同之外，所用基礎(chǔ)料均相同。飼養(yǎng)喂養(yǎng)過程中，采用漏斗式飼糟自由采食，供應(yīng)充足飲水，日常管理與生產(chǎn)相同。
[0036]免疫指標的測定，AKP、ACP、SOD和CAT的活性測定均采用江蘇省南京建成生物研究所生產(chǎn)的試劑盒及其測定方法，實驗證實，A組AKP、ACP活性在注射后第三天達最高，SOD第四天最高，而CAT注射后第二天就達最高，最高組與B組比較均呈顯著性差異(p〈0.05)，ACP、CAT最高值是對照組B組的3倍之多，說明飼喂添加0.1-0.6wt%富硒藻粉能有效激活豬的免疫活性，提高豬對微生物的抵抗能力。
[0037]仔細觀察記錄豬只的攝食、飲水以及精神狀態(tài)，并于40日齡70日齡逐頭稱重，實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)的統(tǒng)計分析A組比B組于40日齡平均體重高出0.78Kg，70日齡時平均高出近3Kg，說明富硒藻粉具有一定的促長效果。
[0038]本發(fā)明效益預(yù)測,飼料中添加0.1-0.6wt%富硒藻粉使畜禽增重提高6-8%，飼料轉(zhuǎn)化率提高10-12%，抗生素使用量減少20-23%。
【權(quán)利要求】
1.一種富硒的海洋微藻的養(yǎng)殖方法，其特征在于包括以下步驟:
1、配置好固體培養(yǎng)基:麩皮65-88wt%、豆柏8-33wt%、石灰l-2wt%、KH2P04l_2wt%，加入富硒粉0.02-0.lwt%，上述比例的配方每100公斤，加入鹽度為30-35wt%。的地下海水50-83公斤攪拌均勻，置于滅菌鍋內(nèi)蒸煮120分鐘，維持溫度125°C、氣壓0.01-0.02MPa，將蒸煮好的上述培養(yǎng)基冷卻到23°C，待用；
2、接種:在無菌房間內(nèi)，將海洋微藻的藻種灑入上述培養(yǎng)基中,接種完成并攪拌均勻；
3、立體培養(yǎng):將培養(yǎng)基放入塑鋼透明淺盤中，淺盤底布滿直徑3_的孔，置于無菌培養(yǎng)房中，通入潔凈空氣，通氣量為ImVmin，溫度21 °C-26 °C，光照度1000-3000 lx，培養(yǎng)42 -72小時；
4、干燥培養(yǎng)完成，將培養(yǎng)好的料，放入沸騰干燥機中干燥，控制干燥機進風口溫度在50-65°C，出風口 35°C _45°C，干燥后保持物料的水分控制在10%以內(nèi)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的富硒的海洋微藻的養(yǎng)殖方法，其特征在于步驟I中所述的地下海水用雙層200目棉布過濾。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的富硒的海洋微藻的養(yǎng)殖方法，其特征在于步驟2中所述的海洋微藻的藻種制備通過以下步驟:將海水小球藻培養(yǎng)至對數(shù)期后由250mL三角瓶移至3L三角瓶進行擴大培養(yǎng)，接種密度為40mL/L，通氣量為2.0 L/min，溫度控制在23 °C ±2 °C，光照強度為30001x，光暗比12h: 12h，培養(yǎng)基為f/2，每日定時搖動培養(yǎng)瓶3次，培養(yǎng)2d。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所·述的富硒的海洋微藻的養(yǎng)殖方法，其特征在于步驟3中所述的所述塑鋼透明淺盤的規(guī)格為64CMX45CMX4.5CM。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的富硒的海洋微藻的養(yǎng)殖方法，其特征在于步驟3中所述的潔凈空氣是指經(jīng)過0.01 μ m的孔徑過濾過的空氣。
6.一種將權(quán)利要求1制備的富硒海洋微藻在飼料免疫增強劑中的應(yīng)用，其特征在于將富硒微藻粉粉碎到200目的細度，在畜禽飼料中按0.1-0.6wt%的量添加，來喂養(yǎng)畜禽。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的富硒海洋微藻在飼料免疫增強劑中的應(yīng)用，其特征在于所述的富硒海洋微藻通過以下步驟制備: a、配置好固體培養(yǎng)基:麩皮65-88wt%、豆柏8_33wt%、石灰l_2wt%、KH2P04l_2wt%，加入富硒粉0.02-0.lwt%，上述比例的配方每100公斤，加入鹽度為30-35wt%。的地下海水50-83公斤攪拌均勻，置于滅菌鍋內(nèi)蒸煮120分鐘，維持溫度125°C、氣壓0.01-0.02MPa，將蒸煮好的上述培養(yǎng)基冷卻到23°C，待用；
b、接種:在無菌房間內(nèi)，將海洋微藻的藻種灑入上述培養(yǎng)基中,接種完成并攪拌均勻；
C、立體培養(yǎng):將培養(yǎng)基放入塑鋼透明淺盤中，淺盤底布滿直徑3_的孔，置于無菌培養(yǎng)房中，通入潔凈空氣，通氣量為ImVmin，溫度21 °C-26 °C，光照度1000-3000 lx，培養(yǎng)42 -72小時；
d、干燥培養(yǎng)完成，將培養(yǎng)好的料，放入沸騰干燥機中干燥，控制干燥機進風口溫度在50-65°C，出風口 35°C _45°C，干燥后保持物料的水分控制在10%以內(nèi)。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的富硒海洋微藻在飼料免疫增強劑中的應(yīng)用，其特征在于步驟a中所述的地下海水用雙層200目棉布過濾。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的富硒海洋微藻在飼料免疫增強劑中的應(yīng)用，其特征在于步驟b中所述的海洋微藻的藻種制備通過以下步驟:將海水小球藻培養(yǎng)至對數(shù)期后由250mL三角瓶移至3L三角瓶進行擴大培養(yǎng)，接種密度為40mL/L，通氣量為2.0 L/min，溫度控制在23V ±2 °C，光照強度為30001x，光暗比12h:12h，培養(yǎng)基為f/2，每日定時搖動培養(yǎng)瓶3次，培養(yǎng)2d。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的富硒海洋微藻在飼料免疫增強劑中的應(yīng)用，其特征在于步驟c中所述的所述塑鋼透明淺盤的規(guī)格為64CMX45CMX4.5CM ;所述的潔凈空氣是指經(jīng)過0.01ym的孔徑過濾過的空 氣。
【文檔編號】C12N1/12GK103849569SQ201210516990
【公開日】2014年6月11日 申請日期:2012年12月6日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月6日
【發(fā)明者】成明, 王洪斌, 朱新迎 申請人:連云港榮盛生物科技有限公司