專利名稱：一種復(fù)合菌漿液、其生產(chǎn)方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物應(yīng)用領(lǐng)域，具體地說是一種復(fù)合菌漿液、其生產(chǎn)方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
目前，我國從事氨基酸生產(chǎn)的企業(yè)近百家，年產(chǎn)量已超過300萬噸。氨基酸的生產(chǎn)原料主要為玉米、大米；年消耗量432. 6萬噸，每生產(chǎn)一噸氨基酸就產(chǎn)生7-10噸廢漿液。氨基酸廢漿液中含有大量的碳水化合物、有機雜酸和蛋白質(zhì)等有機污染物，直接排放會污染環(huán)境，而要處理達標(biāo)后再排放則需要高昂費用，已成為阻礙氨基酸生產(chǎn)行業(yè)發(fā)展的重要問題。如何使氨基酸廢漿液得到充分地回收利用，已成為本領(lǐng)域技術(shù)人員渴望解決的技術(shù)問題。類球紅細菌(Iihodobacter sphaeroides)屬于細菌域中紫色細菌群的α亞群，具有廣泛的代謝方式，可以在多種生長條件下生長。如它具有廣泛的能量代謝機制，包括光合作用、無機營養(yǎng)、好氧和厭氧呼吸等。它還可以固定氮分子，合成重要生物活性物質(zhì)四吡咯(tetrapyrroles)、葉綠素(chlorophylls)、血紅素(heme)、維生素B12等。大量研究文獻表明，類球紅細菌已經(jīng)成為一種非常有工業(yè)化開發(fā)潛力的微生物。屬于農(nóng)業(yè)部菌種分類中一級安全菌種。多粘芽孢桿菌(Paenikicillus polymyxa)原屬于芽孢桿菌屬，隨著研究的深入， 1993年Ash等將其從芽孢桿菌屬中獨立出來，定為類芽孢桿菌屬。它具有有機營養(yǎng)、無機營養(yǎng)、兼性厭氧生長的能量代謝機制，主要代謝產(chǎn)物如多粘抗菌素、吲哚乙酸、苯丙氨酸等有機化合物，對農(nóng)作物有極好的促進生長和土傳病害的防治作用，我國農(nóng)業(yè)部把其分類為一級安全菌種。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)任務(wù)是針對上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種類球紅細菌與多粘芽孢桿菌的復(fù)合菌漿液，該復(fù)合菌漿液以氨基酸廢漿液為發(fā)酵基發(fā)酵制得，可以使氨基酸廢漿液得到充分地回收利用。本發(fā)明第二個技術(shù)任務(wù)是提供上述復(fù)合菌漿液的生產(chǎn)方法；本發(fā)明第三個技術(shù)任務(wù)是提供上述復(fù)合菌漿液的應(yīng)用。本發(fā)明所使用的類球紅細菌(Rhodobacter sphaeroides)菌株已于2010年 4月20日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為=CGMCC No. 3757，保藏單位地址北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，郵編100101。該菌株的16S rDNA序列信息已遞交到GenBank數(shù)據(jù)庫，登錄號為E似63643。本發(fā)明所使用的多粘芽孢桿菌(Paenibacillus polymyxa)菌株已于2008年2月 26日保藏在中國微生物菌種保藏委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No. 2377，保藏單位地址北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，郵編100101。該菌株的16S rDNA序列信息已遞交到GenBank數(shù)據(jù)庫，登錄號為EFM5556。
本發(fā)明的復(fù)合菌漿液，是以氨基酸廢漿液為發(fā)酵基發(fā)酵制得的，多粘類芽孢桿菌按6%的接種量、類球紅細菌按4%的接種量接種，在PH6. 5 7. 0、30°C 34°C和需氧條件下發(fā)酵Mh，即可得到上述復(fù)合菌漿液，所述復(fù)合菌漿液中多粘類芽孢桿菌含量》5X109CFU/ml ；類球紅細菌含量彡 3X109CFU/ml。上述復(fù)合菌漿液具體的生產(chǎn)方法將氨基酸生產(chǎn)中所產(chǎn)生的廢漿液調(diào)整pH至 6. 5 7. 0，經(jīng)121°C滅菌30min后，降溫至30°C 進行菌種接種，多粘類芽孢桿菌按6%的接種量、類球紅細菌按4%的接種量接種，控制溫度30°C 34°C，以體積比每分鐘 0. 5 1. 0的通氣量通入凈化空氣，并以80-100r/min的轉(zhuǎn)速攪拌，發(fā)酵24h即得復(fù)合菌漿液，所得復(fù)合菌漿液中多粘類芽孢桿菌含量》5X109CFU/ml ；類球紅細菌含量彡 3X109CFU/ml。具體地說，上述復(fù)合菌漿液的生產(chǎn)方法包括(1)多粘類芽孢桿菌液體菌種制備所用液體培養(yǎng)基配制方法(以IOOOml為例)稱取土豆100g，切塊，并放入純凈水中沸煮30min，過濾，取濾液，加純凈水定容至1000ml，加入葡萄糖10g、磷酸氫二鉀2. 5g、磷酸二氫鉀1. 5g，用乙酸或氫氧化鈉調(diào)pH 6. 5 7. 0，121°C滅菌30min ；降溫至30°C
時，接菌種上搖床調(diào)溫30°C 32°C震蕩培養(yǎng)；搖床轉(zhuǎn)速100-120r/min，培養(yǎng)Mh，制成液體菌種，菌液中多粘類芽孢桿菌含量彡lX1010CFU/ml ；(2)類球紅細菌液體菌種制備所用液體培養(yǎng)基配制方法(以IOOOml為例)在蒸餾水中加入硫酸銨lg、硫酸鎂 200mg、硫酸亞鐵lOOmg、硫酸錳5mg、硫酸鋅60mg、硫酸銅％ig、磷酸二氫鉀600mg、磷酸氫二鉀900mg、氯化鈣75mg、硼酸:3mg、鉬酸鈉lmg、維生素B1、 煙酸各lmg、乙酸鈉3g，用乳酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至6. 5 7. 0,121°C滅菌30min ；降溫至30°C 接種上搖床，調(diào)溫 30°C 32°C震蕩培養(yǎng)；搖床轉(zhuǎn)速100-120r/min，培養(yǎng)Mh，制成液體菌種，菌液中類球紅細菌含量彡5X109CFU/ml。(3)復(fù)合菌漿液制備將氨基酸生產(chǎn)中產(chǎn)生的廢漿液裝入100L種子培養(yǎng)罐至70L，調(diào)pH至6. 5 7. 0， 121°C滅菌30min;降溫至30°C 34°C接種，多粘類芽孢桿菌按6%的接種量、類球紅細菌按 4%的接種量接種，以體積比每分鐘0. 5 1. 0的通氣量通入凈化空氣，并以80-100r/min 的轉(zhuǎn)速攪拌，發(fā)酵Mh，所得混合菌種中多粘類芽孢桿菌含量> 5X109CFU/ml ；類球紅細菌含量彡 3X109CFU/ml, pH 值 7. 5 8. 5。放大發(fā)酵將氨基酸生產(chǎn)中產(chǎn)生的廢漿液裝入1000L發(fā)酵罐至700L，調(diào)pH至 6. 0 6. 5，121 °C滅菌30min ；降溫至30°C 32°C，將100L種子培養(yǎng)罐中發(fā)酵好的混合菌種轉(zhuǎn)入1000L發(fā)酵罐中，以體積比每分鐘為0. 5 1. 0的通氣量通入無菌空氣，并以SO-IOOr/ min的轉(zhuǎn)速攪拌，發(fā)酵Mh，所得復(fù)合菌漿液中多粘類芽孢桿菌含量> 5X109CFU/ml ；類球紅細菌含量彡3X109CFU/ml ；pH值7. 5 8. 5。復(fù)合菌漿液中含有大量多粘類芽孢桿菌和類球紅細菌。多粘類芽孢桿菌具有抑制沙門氏菌、葡萄球菌、大腸桿菌等有害菌生長的特性；而類球紅細菌具有促進放線菌、光合細菌、酵母菌、乳酸菌等益生菌群增殖的特性，利用兩種菌的互不拮抗、互不抑制的共生特征和協(xié)同作用，特別適合在養(yǎng)殖水體的凈化領(lǐng)域中的應(yīng)用。在將上述復(fù)合菌漿液用于凈化養(yǎng)殖水體時，可以直接將其投入水池等養(yǎng)殖水體。 但為了更好的延長保存期菌活力和效能發(fā)揮，可以制成復(fù)合微生物顆粒劑，優(yōu)選以下方式以復(fù)合菌漿液為原料，生產(chǎn)用于養(yǎng)殖水體凈化的復(fù)合微生物顆粒劑，該顆粒劑含有多粘芽孢桿菌3X 108CFU/g以上，類球紅細菌2X 108CFU/g以上，所述顆粒劑的具體生產(chǎn)方法為(1)將權(quán)利要求1所述復(fù)合菌漿液與60-100目的沸石粉按重量比0. 1 0. 5 1 攪拌混合均勻，做成沸石粉與菌漿液混合的散狀混合物；將上述散狀混合物送入造粒機制成Φ2 Φ5πιπι顆粒，在50°C 60°C下干燥至水分含量小于20%時即得復(fù)合微生物顆粒劑成品。復(fù)合菌漿液中含有大量多粘類芽孢桿菌和類球紅細菌。多粘類芽孢桿菌具有抑制青枯病原菌和有害真菌的特性；而類球紅細菌具有促進土壤放線菌、光合細菌、酵母菌、乳酸菌等益生菌群增殖的特性，兩種菌的協(xié)同作用，特別適合在制備生物有機肥的領(lǐng)域中的應(yīng)用。上述復(fù)合菌漿液可以用于制備各種液態(tài)肥、粉狀沖施肥等，但為了更好的促進有效菌群的活力和效能發(fā)揮，優(yōu)選以下方式以復(fù)合菌漿液為原料，生產(chǎn)復(fù)合微生物有機肥顆粒，具體生產(chǎn)方法為(1)將有機肥料干粉與權(quán)利要求1所述復(fù)合菌漿液以重量比1 0. 1 0. 5比例混合均勻，做成散狀混合物；(2)將上述散狀混合物送入造粒機制成Φ2 Φ5πιπι顆粒，在50°C 60°C下干燥至水分含量小于20%時即得復(fù)合微生物有機肥顆粒成品。上述有機肥干粉由以下方式制得將腐植酸、沸石粉、肉骨粉、干牛糞以5 :2:1: 2的重量比混合，粉碎至50-100 目，即得所述有機肥料干粉；或者將腐植酸、沸石粉、肉骨粉或羽毛粉、干羊糞或干雞鴨糞以2 :4:1: 3的重量比混合，粉碎至50-100目，即得所述有機肥料干粉。本發(fā)明的復(fù)合菌漿液、其生產(chǎn)方法及其應(yīng)用與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下突出的有益效果(一 )以氨基酸生產(chǎn)中所產(chǎn)生的廢漿液為發(fā)酵基生產(chǎn)多粘類芽孢桿菌和類球紅細菌的復(fù)合菌漿液，變廢為寶，使氨基酸廢漿液得到充分地回收利用，節(jié)能環(huán)保，具有巨大的社會效益和經(jīng)濟效益。( 二)將本發(fā)明的復(fù)合菌漿液應(yīng)用于凈化養(yǎng)殖水體，能夠抑制水體病原菌滋生，降解水體氨氮、硫化氫、亞硝酸鹽等有害物質(zhì)，提高水產(chǎn)養(yǎng)殖物種的成活率，對水產(chǎn)健康養(yǎng)殖發(fā)展有著積極的推動作用，并對資源化利用促進生態(tài)環(huán)境建設(shè)有深遠的意義。適用于河蟹、 海參、對蝦、泥鰍、黑魚、黃顙魚等高密度養(yǎng)殖水體的凈化。
(三)將本發(fā)明的復(fù)合菌漿液應(yīng)用于生產(chǎn)有機肥料，能夠促進作物對養(yǎng)分的吸收和利用，減少化肥的使用量，從而改善農(nóng)田環(huán)境質(zhì)量，提高農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)。


附圖1是本發(fā)明方法所制備復(fù)合微生物顆粒劑所做對比實驗(實驗例一)的效果圖；附圖2是本發(fā)明方法所制備復(fù)合微生物顆粒劑所做對比實驗(實驗例二 )的效果圖；附圖3是本發(fā)明方法所制備復(fù)合微生物顆粒劑所做對比實驗(實驗例三)的效果圖；附圖4是本發(fā)明方法所制備有機肥顆粒所做對比實驗(實驗例四)的效果圖；附圖5是本發(fā)明方法所制備有機肥顆粒所做對比實驗(實驗例五)的統(tǒng)計結(jié)果圖。
具體實施例方式以具體制備實施例、實驗例對本發(fā)明的復(fù)合菌漿液、其生產(chǎn)方法及其應(yīng)用作以下詳細地說明。制備實施例一以取自江蘇漢光生物工程有限公司的氨基酸廢漿液為原料。廢漿液中主要含有碳水化合物、有機酸、蛋白質(zhì)、氨基酸、B族維生素、氮、磷、鉀等多種營養(yǎng)物質(zhì)，總固形物含量 6. 7%。生產(chǎn)步驟(1)多粘類芽孢桿菌液體菌種制備所用液體培養(yǎng)基配制方法(以IOOOml為例)稱取土豆100g，切成Icm方塊放入 IOOOml純凈水中沸煮30min，過濾，取濾液，加純凈水定容至1000ml，加入葡萄糖10g、磷酸氫二鉀2. 5g、磷酸二氫鉀1. 5g，用乙酸或氫氧化鈉調(diào)pH6. 5 7. 0，121°C滅菌30min ；降溫至31°C時，接菌種上搖床調(diào)溫30°C震蕩培養(yǎng)；搖床轉(zhuǎn)速llOr/min，培養(yǎng)Mh，制成液體菌種， 菌液中多粘類芽孢桿菌含量彡lX1010CFU/mL·(2)類球紅細菌液體菌種制備所用液體培養(yǎng)基配制方法(以IOOOml為例)在IOOOml蒸餾水中加入硫酸銨lg、 硫酸鎂200mg、硫酸亞鐵lOOmg、硫酸錳5mg、硫酸鋅60mg、硫酸銅％ig、磷酸二氫鉀600mg、 磷酸氫二鉀900mg、氯化鈣75mg、硼酸:3mg、鉬酸鈉lmg、維生素B1, B6煙酸各lmg、乙酸鈉 3g，用乳酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至6. 5 7. 0，121°C滅菌30min ；降溫至31°C接種上搖床， 調(diào)溫30°C震蕩培養(yǎng)；搖床轉(zhuǎn)速llOr/min，培養(yǎng)Mh，制成液體菌種，菌液中類球紅細菌含量彡 5X109CFU/ml。(3)復(fù)合菌漿液制備將氨基酸廢漿液裝入100L種子培養(yǎng)罐至70L，用氫氧化鈉調(diào)pH至6. 5 7. 0， 121°C滅菌30min;降溫至31°C接種，多粘類芽孢桿菌按6%的接種量、類球紅細菌按4%的接種量接種，以體積比每分鐘0. 7的通氣量通入凈化空氣，并以90r/min的轉(zhuǎn)速攪拌，發(fā)酵Mh，所得混合菌種中多粘類芽孢桿菌含量彡5X 109CFU/ml ；類球紅細菌含量彡3X IO9CFU/ ml, pH 值 7. 5 8. 5。放大發(fā)酵將氨基酸廢漿液裝入1000L發(fā)酵罐至700L，用氫氧化鈉調(diào)pH至 6. 0 6. 5，121°C滅菌30min ；降溫至30°C，將100L種子培養(yǎng)罐中發(fā)酵好的混合菌種轉(zhuǎn)入 1000L發(fā)酵罐中，以體積比每分鐘為0. 7的通氣量通入無菌空氣，并以90r/min的轉(zhuǎn)速攪拌，發(fā)酵Mh，所得復(fù)合菌漿液中多粘類芽孢桿菌含量> 5X109CFU/ml ；類球紅細菌含量彡 3 X 109CFU/ml ；pH 值 7. 5 8. 5。制備實施例二 生產(chǎn)步驟(1)多粘類芽孢桿菌液體菌種制備所用液體培養(yǎng)基配制方法(以IOOOml為例)稱取土豆100g，切成Icm方塊放入 IOOOml蒸餾水中沸煮30min，過濾，取濾液，加水定容至1000ml，加入葡萄糖10g、磷酸氫二鉀2. 5g、磷酸二氫鉀1. 5g，用氫氧化鈉調(diào)pH 6. 5 7. 0，121°C滅菌30min ；降溫至?xí)r， 接菌種上搖床調(diào)溫32°C震蕩培養(yǎng)；搖床轉(zhuǎn)速llOr/min，培養(yǎng)Mh，制成液體菌種，菌液中多粘類芽孢桿菌含量彡lX1010CFU/ml ；(2)類球紅細菌液體菌種制備所用液體培養(yǎng)基配制方法(以IOOOml為例)在IOOOml蒸餾水中加入硫酸銨lg、 硫酸鎂200mg、硫酸亞鐵lOOmg、硫酸錳5mg、硫酸鋅60mg、硫酸銅％ig、磷酸二氫鉀600mg、 磷酸氫二鉀900mg、氯化鈣75mg、硼酸:3mg、鉬酸鈉lmg、維生素B1, B6煙酸各lmg、乙酸鈉 3g，用乳酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至6. 5 7. 0，121°C滅菌30min ；降溫至:34°C接種上搖床， 調(diào)溫32°C震蕩培養(yǎng)；搖床轉(zhuǎn)速llOr/min，培養(yǎng)Mh，制成液體菌種，菌液中類球紅細菌含量彡 5X109CFU/ml。(3)復(fù)合菌漿液制備將氨基酸廢漿液裝入100L種子培養(yǎng)罐至70L，用氫氧化鈉調(diào)pH至6. 5 7. 0， 121°C滅菌30min;降溫至34°C接種，多粘類芽孢桿菌按6%的接種量、類球紅細菌按4%的接種量接種，以體積比每分鐘0. 9的通氣量通入凈化空氣，并以90r/min的轉(zhuǎn)速攪拌，發(fā)酵 Mh，所得混合菌種中多粘類芽孢桿菌含量彡5X 109CFU/ml ；類球紅細菌含量彡3X IO9CFU/ ml, pH 值 7. 5 8. 5。放大發(fā)酵將氨基酸廢漿液裝入1000L發(fā)酵罐至700L，用氫氧化鈉調(diào)pH至 6. 0 6. 5，121°C滅菌30min ；降溫至32°C，將100L種子培養(yǎng)罐中發(fā)酵好的混合菌種轉(zhuǎn)入 1000L種子罐中，以體積比每分鐘為0.8的通氣量通入無菌空氣，并以90r/min的轉(zhuǎn)速攪拌，發(fā)酵Mh，所得復(fù)合菌漿液中多粘類芽孢桿菌含量> 5X 109CFU/ml ；類球紅細菌含量彡 3 X 109CFU/ml ；pH 值 7. 5 8. 5。制備實施例三以復(fù)合菌漿液為原料，生產(chǎn)用于養(yǎng)殖水體凈化的復(fù)合微生物顆粒劑。配方復(fù)合菌漿液(制備實施例一制得) Ikg ；沸石粉(80目)7kg。制備步驟
(1)將上述配方量的復(fù)合菌漿液與沸石粉攪拌混合均勻，做成沸石粉與菌漿液混合的散狀混合物；(2)將上述散狀混合物送入造粒機制成Φ2 Φ5πιπι顆粒，在50°C下干燥至水分含量小于20%時即得復(fù)合微生物顆粒劑成品。所得顆粒劑含有多粘芽孢桿菌彡3X 108CFU/g，類球紅細菌彡2X 108CFU/g。制備實施例四以復(fù)合菌漿液為原料，生產(chǎn)有機肥顆粒。配方有機肥干粉IOkg ；復(fù)合菌漿液(制備實施例一制得)^g。有機肥干粉是以腐植酸、沸石粉、肉骨粉、干牛糞以5 :2:1: 2的重量比混合， 并粉碎至80目所得。生產(chǎn)步驟(1)將上述配方量的有機肥料干粉與復(fù)合菌漿液混合均勻，做成散狀混合物；(2)將上述散狀混合物送入造粒機制成Φ2 Φ5πιπι顆粒，在55°C下干燥至水分含量小于20%時即得復(fù)合微生物有機肥顆粒成品。所得有機肥顆粒中含有多粘芽孢桿菌彡3X 108CFU/g，類球紅細菌彡2X 108CFU/g。制備實施例五以復(fù)合菌漿液為原料，生產(chǎn)有機肥顆粒。配方有機肥干粉IOkg ；復(fù)合菌漿液(制備實施例一制得)4kg。有機肥干粉是將腐植酸、沸石粉、羽毛粉、干羊糞以2 :4:1: 3的重量比混合， 并粉碎至80目所得。生產(chǎn)步驟(1)將上述配方量的有機肥料干粉與復(fù)合菌漿液混合均勻，做成散狀混合物；(2)將上述散狀混合物送入造粒機制成Φ2 Φ5πιπι顆粒，在55°C下干燥至水分含量小于20%時即得復(fù)合微生物有機肥顆粒成品。所得有機肥顆粒中含有多粘芽孢桿菌彡3X 108CFU/g，類球紅細菌彡2X 108CFU/g。實驗例一；以制備實施例三所得復(fù)合微生物顆粒劑進行水體凈化實驗實驗時間2010年5月19日 6月20日實驗地點宜興市高塍鎮(zhèn)蟹塘實驗蟹塘水深90cm，5月19日投放復(fù)合微生物顆粒劑m2的用量為3g，6月5日又投放同等量的顆粒劑。試驗期共投放2次。實驗數(shù)據(jù)如表一所示。項目名稱_養(yǎng)殖水體水質(zhì)指標(biāo)的變化
_總體變化趨勢_平均變化幅度
COD 降低 41.8% 溶解氧升高 41.6% 硫化氫降低 53.5%-88.6% 氨氮降低 49%-71.2% 亞硝酸氮__72%-91.6%
0103] 表一實驗前后(30天)效果圖片見附圖一。實驗例二 ；以制備實施例三所得復(fù)合微生物顆粒劑進行水體凈化實驗實驗時間:2010.4. 20-8. 28實驗地點山東海陽行村對蝦養(yǎng)殖池塘實驗蟹塘水深100cm，復(fù)合微生物顆粒劑m2的用量為5g。4. 20日、5. 20日、6. 22 日、7. 19日共投放四次；用量相同。實驗前后(一周)效果圖片見附圖二。實驗例三；以制備實施例三所得復(fù)合微生物顆粒劑進行水體凈化實驗實驗時間:2010.6. 6-8. 10實驗地點江蘇贛榆的泥鰍養(yǎng)殖塘實驗塘水深100cm，復(fù)合微生物顆粒劑m2的用量為5g。6.6日、7. 10日同等量投放2次。實驗前后(10天)效果圖片見附圖三。實驗例四以制備實施例四所得有機肥顆粒及市售的周天牌生物有機肥進行對甜瓜種植比實驗。實驗地點宜興市徐舍鎮(zhèn)時間2010. 4. 17-7. 12壤質(zhì)黃棕壤保護地實驗方法共設(shè)3個實驗小區(qū)；3個對照小區(qū)，每小區(qū)20平方米。每個實驗小區(qū)施入制備實施例四所得有機肥顆粒20kg，對照組每個小區(qū)施入市售的周天牌生物有機肥20kg，施入后同時翻耕于4. 17日栽苗。于2010年7月12日大小甜瓜一次性摘完稱量計算產(chǎn)量，結(jié)果如下對照組平均每小區(qū)產(chǎn)量為39. 7kg ；實驗組平均每小區(qū)產(chǎn)量為53. ^ig,平均比對照提高產(chǎn)量35 %，達到極顯著增產(chǎn)水平。對比實驗效果如附圖四所示。
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實驗例五以制備實施例五所得有機肥顆粒及市售的天耕牌生物有機肥進行小麥種植對比實驗。實驗地點江蘇宜興時間種植時間是2010. 11. 25 ；收割時間2011. 6. 2。小麥品種“寧麥15”對照組CK，畝用50kg天耕牌生物有機肥；實驗組T1，畝用30kg制備實施例五所得有機肥顆粒；T2，畝用30kg制備實施例五所得有機肥顆粒；T3，畝用40kg制備實施例五所得有機肥顆粒；T4，畝用50kg制備實施例五所得有機肥顆粒；實驗統(tǒng)計結(jié)果如附圖五所示。如附圖五所示與對照組CK比，Tl增產(chǎn)12. 5%，T2增產(chǎn)14. 8%，Τ3增產(chǎn)16. 7%，. Τ4增產(chǎn)19.3%。平均比CK增產(chǎn)15. 8%。
權(quán)利要求
1.一種復(fù)合菌漿液，其特征在于，以氨基酸廢漿液為發(fā)酵基，多粘類芽孢桿菌按6 %的接種量、類球紅細菌按4%的接種量接種，在pH6. 5 7. 0、30°C 34°C和需氧條件下發(fā)酵 24h,即得復(fù)合菌漿液，所述復(fù)合菌漿液中多粘類芽孢桿菌含量> 5X109CFU/ml ；類球紅細菌含量彡 3X109CFU/ml。
2.權(quán)利要求1所述的復(fù)合菌漿液的生產(chǎn)方法，其特征在于以氨基酸廢漿液為發(fā)酵基， 多粘類芽孢桿菌按6%的接種量、類球紅細菌按4%的接種量接種，在pH6. 5 7. 0、30°C 34°C和需氧條件下發(fā)酵Mh，即得復(fù)合菌漿液，所述復(fù)合菌漿液中多粘類芽孢桿菌含量> 5X109CFU/ml ；類球紅細菌含量彡 3X109CFU/ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述復(fù)合菌漿液的生產(chǎn)方法，其特征在于將氨基酸生產(chǎn)中所產(chǎn)生的廢漿液調(diào)整pH至6. 5 7. 0，經(jīng)121 °C滅菌30min后，降溫至30°C :34°C進行菌種接種， 多粘類芽孢桿菌按6%的接種量、類球紅細菌4%的接種量接種，控制溫度30°C 34°C，以體積比每分鐘0. 5 1. 0的通氣量通入凈化空氣，并以80-100r/min的轉(zhuǎn)速攪拌，發(fā)酵24h 即得復(fù)合菌漿液，所得復(fù)合菌漿液中多粘類芽孢桿菌含量> 5X109CFU/ml ；類球紅細菌含量彡 3X109CFU/ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述復(fù)合菌漿液的生產(chǎn)方法，其特征在于該方法包括(1)多粘類芽孢桿菌液體菌種制備所用液體培養(yǎng)基配制方法稱取土豆100g，切塊，并放入純凈水中沸煮30min，過濾，取濾液，加純凈水定容至1000ml，加入葡萄糖10g、磷酸氫二鉀2. 5g、磷酸二氫鉀1. 5g，用乙酸或氫氧化鈉調(diào)PH 6. 5 7. 0，121°C滅菌30min ；降溫至30°C 時，接菌種上搖床調(diào)溫 30°C 32°C震蕩培養(yǎng)；搖床轉(zhuǎn)速100-120r/min，培養(yǎng)Mh，制成液體菌種，菌液中多粘類芽孢桿菌含量彡1 X 1010CFU/ml ；(2)類球紅細菌液體菌種制備所用液體培養(yǎng)基配制方法以IOOOml蒸餾水為例，在蒸餾水中加入硫酸銨lg、硫酸鎂 200mg、硫酸亞鐵lOOmg、硫酸錳5mg、硫酸鋅60mg、硫酸銅％ig、磷酸二氫鉀600mg、磷酸氫二鉀900mg、氯化鈣75mg、硼酸:3mg、鉬酸鈉lmg、維生素Bi、B6煙酸各lmg、乙酸鈉3g，用乳酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至6. 5 7. 0,121°C滅菌30min ；降溫至30°C 接種上搖床，調(diào)溫 30°C 32°C震蕩培養(yǎng)；搖床轉(zhuǎn)速100-120r/min，培養(yǎng)Mh，制成液體菌種，菌液中類球紅細菌含量彡5X109CFU/ml。(3)復(fù)合菌漿液制備將氨基酸生產(chǎn)中產(chǎn)生的廢漿液裝入100L種子培養(yǎng)罐至70L，調(diào)pH至6. 5 7. 0，121°C 滅菌30min ；降溫至30°C 34°C接種，多粘類芽孢桿菌按6%的接種量、類球紅細菌按4% 的接種量接種，以體積比每分鐘0. 5 1. 0的通氣量通入凈化空氣，并以80-100r/min的轉(zhuǎn)速攪拌，發(fā)酵Mh，所得混合菌種中多粘類芽孢桿菌含量> 5X109CFU/ml ；類球紅細菌含量彡 3X109CFU/ml, pH 值 7. 5 8. 5。放大發(fā)酵將氨基酸生產(chǎn)中產(chǎn)生的廢漿液裝入1000L發(fā)酵罐至700L，調(diào)pH至6. 0 6. 5，121°C滅菌30min ；降溫至30°C 32°C，將100L種子培養(yǎng)罐中發(fā)酵好的混合菌種轉(zhuǎn)入1000L發(fā)酵罐中，以體積比每分鐘為0. 5 1. 0的通氣量通入無菌空氣，并以80-100r/min 的轉(zhuǎn)速攪拌，發(fā)酵Mh，所得復(fù)合菌漿液中多粘類芽孢桿菌含量> 5X109CFU/ml ；類球紅細菌含量彡 3X109CFU/ml ；pH 值 7. 5 8. 5。
5.權(quán)利要求1所述的復(fù)合菌漿液在凈化養(yǎng)殖水體中的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述復(fù)合菌漿液在凈化養(yǎng)殖水體中的應(yīng)用，其特征在于，以復(fù)合菌漿液為原料，生產(chǎn)用于養(yǎng)殖水體凈化的復(fù)合微生物顆粒劑，該顆粒劑含有多粘芽孢桿菌 3X108CFU/g以上，類球紅細菌2Xl(fCFU/g以上，所述顆粒劑的生產(chǎn)方法為(1)將權(quán)利要求1所述復(fù)合菌漿液與60-100目的沸石粉按重量比0.1 0.5 1攪拌混合均勻，做成沸石粉與菌漿液混合的散狀混合物；(2)將上述散狀混合物送入造粒機制成Φ2 Φ5πιπι顆粒，在50°C 60°C下干燥至水分含量小于20%時即得復(fù)合微生物顆粒劑成品。
7.權(quán)利要求1所述的復(fù)合菌漿液在制備生物有機肥中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述復(fù)合菌漿液在制備生物有機肥中的應(yīng)用，其特征在于，以復(fù)合菌漿液為原料，生產(chǎn)復(fù)合微生物有機肥顆粒，所述有機肥顆粒的生產(chǎn)方法為(1)將有機肥料干粉與權(quán)利要求1所述復(fù)合菌漿液以重量比1 0. 1 0. 5比例混合均勻，做成散狀混合物；(2)將上述散狀混合物送入造粒機制成Φ2 Φ5πιπι顆粒，在50°C 60°C下干燥至水分含量小于20%時即得復(fù)合微生物有機肥顆粒成品。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的復(fù)合菌漿液在制備生物有機肥中的應(yīng)用，其特征在于，將腐植酸、沸石粉、肉骨粉、干牛糞以5 :2:1: 2的重量比混合，粉碎至50-100目， 即得所述有機肥料干粉。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的復(fù)合菌漿液在制備生物有機肥中的應(yīng)用，其特征在于， 將腐植酸、沸石粉、肉骨粉或羽毛粉、干羊糞或干雞鴨糞以2 :4:1: 3的重量比混合，粉碎至50-100目，即得所述有機肥料干粉。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種復(fù)合菌漿液、其生產(chǎn)方法及其應(yīng)用，屬于微生物應(yīng)用領(lǐng)域。所述復(fù)合菌漿液由以下方式制得以氨基酸廢漿液為發(fā)酵基，多粘類芽孢桿菌按6％的接種量、類球紅細菌按4％的接種量接種，在pH6.5～7.0、30℃～34℃和需氧條件下發(fā)酵24h，即得復(fù)合菌漿液。該復(fù)合菌漿液中多粘類芽孢桿菌含量≥5×109CFU/ml；類球紅細菌含量≥3×109CFU/ml，可應(yīng)用于凈化養(yǎng)殖水體或制備有機肥料。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的復(fù)合菌漿液以氨基酸廢漿液為發(fā)酵基，具有生產(chǎn)成本低、節(jié)能環(huán)保等特點，可廣泛應(yīng)用于養(yǎng)殖水體凈化及有機肥生產(chǎn)中。
文檔編號C12N1/20GK102352316SQ20111028137
公開日2012年2月15日 申請日期2011年9月13日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月13日
發(fā)明者關(guān)曉歡, 凌德霞, 吳美君, 張艷, 李磊, 王棟, 白志輝, 蔣杰, 陸震 申請人:無錫中科活力生物技術(shù)有限公司