專利名稱：細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒、篩選方法和細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒的制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及培養(yǎng)活細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒、篩選方法和其制造方法。
背景技術(shù)：
將從組織分離出的細(xì)胞用于試驗(yàn)、檢驗(yàn)的方法，是生物技術(shù)相關(guān)領(lǐng)域中不可欠缺的方法。其廣泛用于疾病、病情的診斷、新藥的探索和藥效的判定、或者動(dòng)物檢驗(yàn)、植物檢驗(yàn)、環(huán)境污染物質(zhì)的試驗(yàn)等。因此，在生物技術(shù)領(lǐng)域中使用的細(xì)胞類別極其多樣化。分離得到的細(xì)胞也有直接用于試驗(yàn)的情況，但多數(shù)情況下是在培養(yǎng)皿或試管中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。使用該培養(yǎng)細(xì)胞，進(jìn)行各種檢驗(yàn)。對(duì)于用于細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)的細(xì)胞培養(yǎng)株，要求其表現(xiàn)與在生物體內(nèi)的試驗(yàn)即所謂體內(nèi)(in vivo)試驗(yàn)同樣的藥物感受性、毒性反應(yīng)。艮口， 需要在細(xì)胞培養(yǎng)容器的表面能夠構(gòu)筑有規(guī)則性地排列的細(xì)胞間的網(wǎng)絡(luò)。另外，由于在細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)中使用的細(xì)胞培養(yǎng)株極為昂貴，因此期望提高細(xì)胞的生存率和增殖速度。即，在細(xì)胞培養(yǎng)容器上需要生物體內(nèi)類似的細(xì)胞功能。另外，由于用于得到原代細(xì)胞的分離操作繁雜、在細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)中使用的細(xì)胞培養(yǎng)株昂貴，因此期望利用少的細(xì)胞數(shù)的試驗(yàn)方法。近年來，在創(chuàng)新藥物開發(fā)中，存在在臨床試驗(yàn)階段中的開發(fā)中斷的問題。其原因源于在藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)階段的動(dòng)物種屬差異。迄今為止，在臨床前階段的藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)中， 使用大鼠、狗、猴等的動(dòng)物來預(yù)測(cè)藥物的體內(nèi)動(dòng)力學(xué)。但是，在使用人的臨床試驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)該預(yù)測(cè)在事實(shí)上不成立。因此，對(duì)于人的藥物動(dòng)力學(xué)等的預(yù)測(cè)，使用人試樣是最為有效且簡(jiǎn)便的方法，其對(duì)于有效的藥物開發(fā)或安全的臨床試驗(yàn)的實(shí)施是重要的。例如，在研究藥物體內(nèi)動(dòng)力學(xué)的藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)中，主要是在肝臟的吸收、代謝、 排泄，使用的人試樣是肝臟切片、肝細(xì)胞、肝微粒體等。其中，肝臟切片難以獲得，肝微粒體僅能進(jìn)行僅在限定的代謝酶中的代謝試驗(yàn)。因此，認(rèn)為使用肝細(xì)胞是最有效的。在篩選中，使用的培養(yǎng)皿是樹脂制平皿、或6孔、12孔、48孔、96孔的各板。其一般與整個(gè)板的大小幾乎相同，孔數(shù)越多，1個(gè)孔的尺寸越小。該1個(gè)孔相當(dāng)于1個(gè)培養(yǎng)皿。另夕卜，由于最近的微量化的趨勢(shì)，因此也開始使用包含更小口徑且多量的培養(yǎng)皿的384孔板， 使用與目的篩選方法相適應(yīng)的板。這些培養(yǎng)皿的底部是平坦的平板狀，使用該底面作為培養(yǎng)面。但是，如果在組織細(xì)胞的培養(yǎng)中使用現(xiàn)有的培養(yǎng)容器，則有原本的功能消失、發(fā)生去分化的情況，或有未分化細(xì)胞不分化的情況，存在不能表現(xiàn)目的細(xì)胞功能的問題。例如， 人新鮮肝細(xì)胞如果在通常的平板板上培養(yǎng)，則被分離時(shí)的代謝酶的功能在1天左右即顯著降低，因此有時(shí)在向板接種細(xì)胞后4小時(shí)以內(nèi)進(jìn)行藥物的代謝試驗(yàn)。即，存在不能一邊進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間的培養(yǎng)一邊用于試驗(yàn)的問題，不能研究長(zhǎng)時(shí)間的代謝穩(wěn)定性的問題。為了解決上述問題，進(jìn)行了將來源于人或動(dòng)物的生物體物質(zhì)(糖蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)等)對(duì)培養(yǎng)容器表面涂布的嘗試(參考專利文獻(xiàn)1)、或在高分子凝膠中進(jìn)行培養(yǎng)的嘗試 (參考專利文獻(xiàn)2)。 但是，在專利文獻(xiàn)1公開的方法中，存在下述問題等由于涂布的生物體物質(zhì)特殊，因而成本高；難以在培養(yǎng)容器內(nèi)形成均勻的細(xì)胞集合體；不能長(zhǎng)時(shí)間維持生物體內(nèi)功能。對(duì)于專利文獻(xiàn)2公開的方法，也存在下述問題等不能控制細(xì)胞集合體的大??；不能容易地進(jìn)行顯微鏡觀察；作為篩選基板，操作性繁雜。進(jìn)一步地，任一種方法均使用市售的皿或板作為支持容器，因此難以以需要的最小細(xì)胞數(shù)進(jìn)行有效的篩選。 專利文獻(xiàn)1 日本特開平8-319317號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)2 日本特開平8-308562號(hào)公報(bào)。

發(fā)明內(nèi)容
如上所述，為了實(shí)施有效的藥品開發(fā)或安全的臨床試驗(yàn)，在藥物的毒性、代謝、藥效中，多數(shù)情況下實(shí)施使用了人肝細(xì)胞的試驗(yàn)、或使用神經(jīng)系統(tǒng)、腸管上皮系統(tǒng)等的細(xì)胞。 在這些試驗(yàn)中，多使用細(xì)胞株、或原代培養(yǎng)細(xì)胞。對(duì)于細(xì)胞株的情況，存在不能反映在生物體內(nèi)的功能的問題。另一方面，原代培養(yǎng)細(xì)胞雖然反映生物體內(nèi)的功能，但有個(gè)體差異的問題。為了解決個(gè)體差異的問題，例如對(duì)于肝細(xì)胞，研究了利用含有浮游細(xì)胞的活細(xì)胞來取得平均化的數(shù)據(jù)，所述浮游細(xì)胞含有多個(gè)供體的肝細(xì)胞。但是，浮游細(xì)胞的壽命短，有不能用于長(zhǎng)期的試驗(yàn)的問題。本發(fā)明是為了解決上述問題而作出的發(fā)明，其目的在于提供培養(yǎng)多個(gè)供體的活細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒、篩選方法和其制造方法。本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒的一種方式是具有細(xì)胞培養(yǎng)板和在其上培養(yǎng)的活細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒，上述細(xì)胞培養(yǎng)板具有多個(gè)微空間，在上述多個(gè)微空間中，源于多個(gè)不同供體的活細(xì)胞粘附于表面。由此，可以提供篩選用的試劑盒，其在一個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)板上粘附了源于多個(gè)不同供體的活細(xì)胞。另外，上述源于多個(gè)不同供體的活細(xì)胞也可以是2種以上的細(xì)胞。由此，包含多種活細(xì)胞的組織類似結(jié)構(gòu)在芯片上被再現(xiàn)。具體來說，各微空間粘附有源于不同供體的多個(gè)活細(xì)胞和源于一個(gè)供體的活細(xì)胞的任一者。例如至少兩個(gè)相鄰的微空間粘附有源于不同供體的活細(xì)胞?；蛘撸辽賰蓚€(gè)相鄰的微空間粘附有源于相同供體的活細(xì)胞。另外，上述多個(gè)微空間優(yōu)選具有將培養(yǎng)至期望的細(xì)胞數(shù)的三維結(jié)構(gòu)體的細(xì)胞群體進(jìn)行隔離的大小，上述多個(gè)微空間優(yōu)選其底部面積為0. 01 0. 1mm2，深度為25 150 μ m。上述多個(gè)微空間優(yōu)選以細(xì)胞接種密度為1 X IO2 1 X IO6細(xì)胞/cm2的接種活細(xì)胞， 更優(yōu)選細(xì)胞接種密度為IX IO4 IX IO6細(xì)胞/cm2。上述多個(gè)微空間優(yōu)選活細(xì)胞集聚、形成細(xì)胞團(tuán)，更具體地，上述細(xì)胞團(tuán)的直徑優(yōu)選為30 200 μ m。上述活細(xì)胞優(yōu)選是組織前體細(xì)胞、組織干細(xì)胞、由ES細(xì)胞分化的細(xì)胞或者由iPS 細(xì)胞分化的細(xì)胞。另外，優(yōu)選上述活細(xì)胞是含有肝細(xì)胞的活細(xì)胞，更優(yōu)選上述肝細(xì)胞是組織前體細(xì)胞、組織干細(xì)胞、由ES細(xì)胞分化的細(xì)胞或者由iPS細(xì)胞分化的細(xì)胞，或者上述含有肝細(xì)胞的活細(xì)胞是從多個(gè)供體的肝組織內(nèi)分離的細(xì)胞。另外，本發(fā)明涉及的篩選方法的一種方式是使用上述細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒進(jìn)行藥物的評(píng)價(jià)。進(jìn)一步地，本發(fā)明涉及的細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒的制造方法的一種方式是，具有細(xì)胞培養(yǎng)板和在其上培養(yǎng)的活細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒的制造方法，所述細(xì)胞培養(yǎng)板具有多個(gè)微空間，將來源于多個(gè)不同供體的活細(xì)胞向上述多個(gè)微空間接種，來培養(yǎng)接種的活細(xì)胞。根據(jù)本發(fā)明，可以提供培養(yǎng)多個(gè)供體的活細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒、篩選方法和細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒的制造方法。



圖1是表示實(shí)施方式的細(xì)胞培養(yǎng)容器的構(gòu)成的平面圖。圖2是表示實(shí)施方式的細(xì)胞培養(yǎng)容器的構(gòu)成的II-II截面圖。圖3是表示實(shí)施方式的細(xì)胞培養(yǎng)容器的其他構(gòu)成的平面圖。圖4是表示實(shí)施方式的細(xì)胞培養(yǎng)容器的其他構(gòu)成的IV-IV截面圖。圖5是表示實(shí)施方式的細(xì)胞培養(yǎng)容器的進(jìn)而其他構(gòu)成的平面圖。圖6是表示實(shí)施方式的細(xì)胞培養(yǎng)容器的進(jìn)而其他構(gòu)成的VI-VI截面圖。圖7是表示配置了多個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)容器的細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒的一個(gè)例子的圖。圖8是表示在多個(gè)微容器中培養(yǎng)了活細(xì)胞的狀態(tài)的一個(gè)例子的圖。圖9是表示在多個(gè)微容器中培養(yǎng)了活細(xì)胞的狀態(tài)的其他例子的圖。圖10是表示在多個(gè)微容器中培養(yǎng)了活細(xì)胞的狀態(tài)的進(jìn)而其他例子的圖。圖IlA是表示實(shí)施例培養(yǎng)第1天的形態(tài)觀察結(jié)果的照片。圖IlB是表示實(shí)施例培養(yǎng)第4天的形態(tài)觀察結(jié)果的照片。圖IlC是表示實(shí)施例培養(yǎng)第7天的形態(tài)觀察結(jié)果的照片。圖IlD是表示實(shí)施例培養(yǎng)第14天的形態(tài)觀察結(jié)果的照片。圖IlE是表示實(shí)施例培養(yǎng)第21天的形態(tài)觀察結(jié)果的照片。圖IlF是表示實(shí)施例培養(yǎng)第35天的形態(tài)觀察結(jié)果的照片。圖12是表示比較例培養(yǎng)第14天的形態(tài)觀察結(jié)果的照片。圖13是表示實(shí)施例的主要藥物代謝酶和白蛋白分泌能力的測(cè)定結(jié)果的照片。圖14是表示實(shí)施例的免疫染色結(jié)果(培養(yǎng)28天)的照片。圖15是表示比較例的免疫染色結(jié)果(培養(yǎng)30天)的照片。符號(hào)說明 10,20細(xì)胞培養(yǎng)容器 11微容器
12側(cè)壁 13開口部 23處所(7水° 7卜)
24處所的側(cè)壁 30細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒 31細(xì)胞培養(yǎng)容器 32細(xì)胞培養(yǎng)板 33微容器 34培養(yǎng)皿 D1、D2、D3 細(xì)胞。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒具有細(xì)胞培養(yǎng)板和在其上培養(yǎng)的活細(xì)胞，使用細(xì)胞培養(yǎng)板所具有的多個(gè)微容器。在多個(gè)微容器的表面粘附有源于多個(gè)不同供體的活細(xì)胞。為了培養(yǎng)活細(xì)胞以維持細(xì)胞功能，形成培養(yǎng)活細(xì)胞的單元的微容器需要使用適于細(xì)胞培養(yǎng)的容器。在本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒中使用的細(xì)胞培養(yǎng)容器例如使用以下的容器。在細(xì)胞培養(yǎng)容器中形成凹凸格局、即多個(gè)微容器。由此，可以進(jìn)行與生物體內(nèi)同樣的立體性的細(xì)胞生長(zhǎng)，而且在各微容器內(nèi)，可無差異地使細(xì)胞以凝聚的形態(tài)培養(yǎng)。另外，對(duì)于微容器，例如通過將使微容器分隔的側(cè)壁(凸部)的高度最優(yōu)化，可以將凝聚的活細(xì)胞 (例如肝細(xì)胞團(tuán))僅在微容器內(nèi)培養(yǎng)。其中，微空間是通過微容器形成的空間，更具體地，是指通過在平面上形成的凹凸格局而形成的空間。在以下的說明中，微容器和微空間沒有特別地區(qū)分。由側(cè)壁圍住的微容器的尺寸必須是用于培養(yǎng)細(xì)胞的最佳范圍。如果微容器的底部面積過大，則與在平板上的培養(yǎng)同樣，細(xì)胞薄薄地鋪展，不形成立體結(jié)構(gòu)。另一方面，如果微容器的底部面積過小，則不能收納細(xì)胞。因此，空間的尺寸根據(jù)培養(yǎng)的細(xì)胞種類，優(yōu)選是可收納一個(gè)或多個(gè)的范圍。例如，當(dāng)形成多個(gè)細(xì)胞集聚的肝細(xì)胞團(tuán)時(shí)，優(yōu)選為可收納該肝細(xì)胞團(tuán)的范圍。為了不使在微容器中培養(yǎng)的細(xì)胞向相鄰的微容器轉(zhuǎn)移，側(cè)壁的高度需要為最佳的范圍。如果側(cè)壁的高度過低，則細(xì)胞越過側(cè)壁，不適于培養(yǎng)。如果側(cè)壁的高度過高，則難以制作，而且物質(zhì)擴(kuò)散變難，培養(yǎng)環(huán)境惡化。因此，側(cè)壁的高度根據(jù)細(xì)胞種類，優(yōu)選是將配置在微容器內(nèi)的培養(yǎng)細(xì)胞在該微容器內(nèi)穩(wěn)定地持續(xù)培養(yǎng)的范圍。另外，通過形成在側(cè)壁設(shè)置開口部、將多個(gè)微容器連通的結(jié)構(gòu)，可以高效地向細(xì)胞供給氧或營養(yǎng)成分以及由細(xì)胞除去廢物。應(yīng)予說明，根據(jù)培養(yǎng)的細(xì)胞種類，適當(dāng)設(shè)定側(cè)壁的高度、微容器尺寸、開口部的寬度，由此可以適用于多種的培養(yǎng)體系。另外，本說明書中所說的活細(xì)胞含有由生物體組織分離出的細(xì)胞(原代培養(yǎng)細(xì)胞)的未經(jīng)傳代的細(xì)胞。另外，活細(xì)胞含有新鮮細(xì)胞和冷凍細(xì)胞。另外，含有所有的已建立的細(xì)胞株、其他的ES細(xì)胞(Enbryonic Stem Cells)等。活細(xì)胞優(yōu)選使用選自肝細(xì)胞(肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞)、肝星狀細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、骨格肌細(xì)胞、 心肌細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、骨細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、施萬細(xì)胞、胰β細(xì)胞、 上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、纖維芽細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞的、1種或2種以上的細(xì)胞。這些細(xì)胞種類可以是原代培養(yǎng)細(xì)胞，或者也可以是組織前體細(xì)胞、組織干細(xì)胞、由ES細(xì)胞分化的細(xì)胞和由iPS細(xì)胞分化的細(xì)胞。實(shí)施方式
以下，對(duì)于本發(fā)明的實(shí)施方式進(jìn)行說明。但是，本發(fā)明不應(yīng)限于以下的實(shí)施方式。另外， 為了清楚地說明，以下的記載和附圖適當(dāng)?shù)剡M(jìn)行簡(jiǎn)略化。首先對(duì)于實(shí)施方式的在細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒中使用的細(xì)胞培養(yǎng)容器進(jìn)行說明，接著對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒的構(gòu)成例進(jìn)行說明。首先使用圖1、2說明細(xì)胞培養(yǎng)容器的構(gòu)成例。圖1 是表示本實(shí)施方式的細(xì)胞培養(yǎng)容器的構(gòu)成的平面圖，圖2是圖1的II-II截面圖。如圖1 所示，細(xì)胞培養(yǎng)容器10具有微容器11、側(cè)壁12、開口部13。在細(xì)胞培養(yǎng)容器10的培養(yǎng)面，多個(gè)側(cè)壁12形成為網(wǎng)眼狀，被該側(cè)壁12包圍四周的空間形成微容器11。另外，在各微容器 11的四邊形成的側(cè)壁12的各邊的中央部，形成開口部13。圖1中，示出了微容器11的底部的寬度a、用于劃分微容器11的側(cè)壁12的寬度b、 高度c、用于使相鄰的微容器11相互連通的開口部13的寬度d。本發(fā)明的底部面積是指， 在與微容器開口水平面(與側(cè)壁12上面為同一面)垂直的方向上、從上方向容器底部照射平行光時(shí)的投影面積。例如，當(dāng)微容器的底部為U字形狀時(shí)，從與其開口面為垂直方向的上方射向底部的平行光所投影的形狀形成底部面積。對(duì)于投影底部的長(zhǎng)徑和短徑，當(dāng)為圓和橢圓時(shí)，將通過其重心的長(zhǎng)軸和短軸與圓周的交點(diǎn)在各軸上的距離稱為長(zhǎng)徑和短徑，當(dāng)為多角形時(shí)，是指與該多角形的面積之差最小且通過各頂點(diǎn)的外接圓或外接橢圓的長(zhǎng)徑和短徑，當(dāng)不能描繪通過各頂點(diǎn)的外接圓或外接橢圓時(shí)，是指通過最多的頂點(diǎn)的近似圓或橢圓的長(zhǎng)徑和短徑。微容器11的底部形狀沒有特別地限 定，除了正方形、圓、多角形以外還可以采用多種形狀。在再現(xiàn)在生物體內(nèi)的肝功能的細(xì)胞培養(yǎng)中，該底部面積優(yōu)選為0.01mm2 0. 1mm2。另外，優(yōu)選底部的長(zhǎng)徑為短徑的1 1. 5倍。進(jìn)一步地，優(yōu)選為等方(等方)的形狀， 如果是正方形，例如形成當(dāng)量直徑為ΙΟΟμπι的肝細(xì)胞團(tuán)時(shí)，優(yōu)選一邊的長(zhǎng)度為ΙΟΟμπι 300 μ m0微容器11的水平面與側(cè)壁12形成的角度必須是使細(xì)胞不越上(乗”上(f )的角度，因此優(yōu)選從側(cè)面的上部起50%以上的部分為80 90°，特別優(yōu)選85° 90°。側(cè)壁12的高度c只要不使在微容器11中培養(yǎng)的細(xì)胞越上并向相鄰的微容器11 轉(zhuǎn)移即可，例如當(dāng)形成當(dāng)量直徑為100 μ m的肝細(xì)胞團(tuán)時(shí)，優(yōu)選為50 μ m 150 μ m。用于使相鄰的微容器11相互連通的開口部13的寬度d，只要是使培養(yǎng)細(xì)胞不能從最初接種的微容器11向相鄰的微容器11轉(zhuǎn)移的程度即可。例如，如果培養(yǎng)細(xì)胞的當(dāng)量直徑為20 μ m,則優(yōu)選為5 15 μ m。應(yīng)予說明，開口部13不是必須的，如圖3和圖4所示，微容器11的四邊也可以被側(cè)壁12完全地圍住。其中，圖3是表示本實(shí)施方式的其他的細(xì)胞培養(yǎng)容器的構(gòu)成的平面圖，圖4是圖3的IV-IV截面圖。圖3中，示出了微容器11的底面的寬度a、用于劃分微容器11的側(cè)壁12的寬度 b、高度C。其中，需要3μπι彡b彡15μπι，且c/b彡2。如果側(cè)壁12的寬度b超過15 μ m， 則細(xì)胞粘附于側(cè)壁的上面，不適于培養(yǎng)。另一方面，如果側(cè)壁12的寬度b小于3 μ m，則難以制作。如果側(cè)壁的高度過于低，則細(xì)胞越過側(cè)壁，不適于培養(yǎng)。如果側(cè)壁12的高度c小于側(cè)壁12的寬度b的2倍，則有時(shí)在微容器11中培養(yǎng)的細(xì)胞越上并向相鄰的微容器11轉(zhuǎn)移。另外，具體來說，當(dāng)在一邊長(zhǎng)為IOOym的四邊形的微容器內(nèi)使人胎兒肝細(xì)胞多層化時(shí)， 側(cè)壁12的高度c優(yōu)選為15 μ m 300 μ m,進(jìn)一步優(yōu)選為50 μ m 150 μ m。其中，如果側(cè)壁的高度c過于高，則難以制作，而且物質(zhì)擴(kuò)散變難，培養(yǎng)環(huán)境惡化。側(cè)壁12也可以是多階梯形狀。另外，細(xì)胞培養(yǎng)部為了使需要的細(xì)胞數(shù)最小，也可以如圖5和圖6所示的那樣，具有包含僅對(duì)于1次篩選所必要的多個(gè)微容器的、被劃分的處所。例如使用分化效率高的邊長(zhǎng)為200 μ m的正方形且高度為50 μ m的微容器，當(dāng)篩選所必要的最小細(xì)胞數(shù)約為1000個(gè)時(shí)，需要9個(gè)微容器，因此設(shè)置劃分9個(gè)微容器的處所，進(jìn)而通過設(shè)置多個(gè)處所，能夠進(jìn)行可同時(shí)檢驗(yàn)多種試劑或藥品的高通量篩選。
這里，圖5是本實(shí)施方式的其他的細(xì)胞培養(yǎng)部的構(gòu)成的平面圖，圖6是圖5的 VI-VI截面圖。圖5中，表示劃分出多個(gè)微容器的側(cè)壁24和被劃分的處所23。側(cè)壁24的高度d只要是可保持培養(yǎng)液或反應(yīng)液等的上清液不干燥的容量即可，可以適當(dāng)設(shè)定。作為制作細(xì)胞培養(yǎng)容器上的凹凸格局的方法，沒有特別地限定，例如可以列舉使用了模子的轉(zhuǎn)印成型、3維光造形、精密機(jī)械切削、濕式蝕亥IJ、干式蝕亥IJ、激光加工、放電加工等的方法。優(yōu)選考慮細(xì)胞培養(yǎng)容器的用途、要求的加工精度、成本等來適當(dāng)選擇這些制造方法。

作為使用模子進(jìn)行轉(zhuǎn)印成型方法的具體例子，可以列舉以金屬結(jié)構(gòu)體作為模具通過樹脂成型形成凹凸格局的方法。該方法可以以高的轉(zhuǎn)印率將金屬結(jié)構(gòu)體的形狀對(duì)樹脂再現(xiàn)凹凸格局，另外通過使用通用的樹脂材料，可以降低材料成本，因此是優(yōu)選的。使用這種金屬結(jié)構(gòu)體的模具的方法是低成本的，在可滿足高的尺寸精度這方面是優(yōu)異的。上述金屬結(jié)構(gòu)體的制造方法例如可以列舉對(duì)利用光刻法制作的抗蝕圖案或利用3 維光造形制作的樹脂圖案的鍍敷處理、精密機(jī)械切削、濕式蝕刻、干式蝕刻、激光加工、放電加工等。只要考慮用途、要求的加工精度、成本等而適當(dāng)選擇即可。作為模具使用上述得到的金屬結(jié)構(gòu)體來對(duì)樹脂進(jìn)行凹凸格局成型的方法，例如可以列舉注射成型、加壓成型、單體澆鑄成型、溶劑澆鑄成型、熱壓印(* y卜工成型、 采用了擠出成型的輥轉(zhuǎn)印等的方法。從生產(chǎn)性和模具轉(zhuǎn)印性的角度考慮，優(yōu)選采用注射成型。作為構(gòu)成細(xì)胞培養(yǎng)容器的材料，只要是具有自身支持性的材料即可，沒有特別地限定，例如可以列舉合成樹脂、硅、玻璃等。從成本方面或利用顯微鏡觀察時(shí)的細(xì)胞可見性的角度考慮，優(yōu)選以透明的合成樹脂作為材料。作為透明的合成樹脂，例如可以列舉聚甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸甲酯-苯乙烯共聚物等的丙烯酸系樹脂、聚苯乙烯等的苯乙烯系樹脂、環(huán)烯烴等的烯烴系樹脂、聚對(duì)苯二甲酸乙二醇酯、聚乳酸等的酯系樹脂、聚二甲基硅氧烷等的有機(jī)硅系樹脂、聚碳酸酯樹脂等。在不損害透明性的范圍內(nèi)，也可以在這種樹脂中含有著色劑、擴(kuò)散劑、增稠劑等的各種添加劑。對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)容器，為了提高容器表面的親水性、生物體適應(yīng)性、細(xì)胞親和性等， 也可以在凹凸格局表面?zhèn)冗M(jìn)行表面處理，配置改性層和/或涂布層。作為設(shè)置上述改性層的方法，只要不是喪失自身支持性的方法或產(chǎn)生100 μ m以上的極端的表面粗糙的方法即可，沒有特別地限定，例如可以列舉藥物處理、溶劑處理、利用表面接枝聚合引入接枝聚合物等的化學(xué)性處理、電暈放電、臭氧處理、等離子體處理等的物理性處理等的方法。另外，作為設(shè)置涂布層的方法，沒有特別地限定，例如可以列舉濺射、蒸鍍等的干式涂布、無機(jī)材料涂布、聚合物涂布等的濕式涂布等的方法。為了不混入氣泡地注入培養(yǎng)液，期望在凹凸格局上賦予親水性，作為形成均勻的親水性膜的方法，優(yōu)選無機(jī)蒸鍍。另外，當(dāng)考慮到細(xì)胞親和性時(shí)，更優(yōu)選涂布例如膠原、纖維結(jié)合素等的細(xì)胞親和性蛋白質(zhì)。為了均勻地涂布膠原水溶液等，優(yōu)選在形成上述親水性膜后進(jìn)行涂布。通常，在肝細(xì)胞培養(yǎng)中，期望模擬生物體內(nèi)環(huán)境在細(xì)胞外基質(zhì)表面進(jìn)行培養(yǎng)，因此特別優(yōu)選如上所述， 在配置了均勻的親水性無機(jī)膜后，再配置包含適合于培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞外基質(zhì)的有機(jī)膜。另外，對(duì)于使用上述細(xì)胞培養(yǎng)容器的細(xì)胞培養(yǎng)方法，為了使細(xì)胞僅配置在培養(yǎng)細(xì)胞的微容器中，并在該空間內(nèi)表現(xiàn)類似于生物體內(nèi)的形態(tài)或功能，需要接種適當(dāng)?shù)募?xì)胞數(shù)，優(yōu)選細(xì)胞接種密度為1.0 X IO2 1.0 X IO6細(xì)胞/cm2，更優(yōu)選細(xì)胞接種密度為1.0X IO4 1.0X IO6細(xì)胞/cm2。例如當(dāng)微容器為正方形、且一邊長(zhǎng)為200 μ m時(shí)，優(yōu)選5. OX IO4 5. OX IO5細(xì)胞/cm2?；谶@種條件，可以得到直徑達(dá)到30 200 μ m的肝細(xì)胞團(tuán)。 接著，使用圖7 圖10對(duì)于本實(shí)施方式的細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒的構(gòu)成例進(jìn)行說明。圖 7是表示細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒的構(gòu)成例的圖。細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒30具有平板的細(xì)胞培養(yǎng)板32，細(xì)胞培養(yǎng)板32具備多個(gè)培養(yǎng)皿34。在各個(gè)培養(yǎng)皿34中配置細(xì)胞培養(yǎng)容器31。設(shè)置于一個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)板32的培養(yǎng)皿34的數(shù)目，根據(jù)篩選的方法、培養(yǎng)細(xì)胞的種類或試驗(yàn)中使用的細(xì)胞的數(shù)目來確定。細(xì)胞培養(yǎng)板32具有至少1個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)容器31。細(xì)胞培養(yǎng)容器31例如是圖 1 圖6所示的3種構(gòu)成的任一種。另外，當(dāng)滿足上述說明的凹凸格局的條件時(shí)，也可以具有其他的構(gòu)成。培養(yǎng)皿34的底部為平坦的平板狀，細(xì)胞培養(yǎng)容器31使用該底面作為培養(yǎng)面。圖8 圖10是在多個(gè)微容器中培養(yǎng)活細(xì)胞的狀態(tài)的一個(gè)例子，表現(xiàn)了接種的細(xì)胞的供體不同。在圖8 圖10中，一個(gè)一個(gè)的矩形為微容器33，圖8和圖9表示在細(xì)胞培養(yǎng)容器31中具有9個(gè)微容器33的情況。另外，圖10表示在細(xì)胞培養(yǎng)容器31中具有18個(gè)微容器33的情況。另外，Dl D3為培養(yǎng)的細(xì)胞，圖中的Dl、D2、D3分別表示不同的供體，因此改變了花紋來表示。圖8表示在各微容器33中粘附源于一個(gè)供體的細(xì)胞、在相鄰的微容器33中粘附不同供體的活細(xì)胞的情況。圖9表示在多個(gè)微容器33中，一部分是源于多個(gè)供體的活細(xì)胞以混合的狀態(tài)粘附，其他是源于一個(gè)供體的活細(xì)胞粘附的情況。其中，作為一個(gè)例子，表示了在一個(gè)微容器33中粘附了兩個(gè)供體的活細(xì)胞的情況。圖10是表示下述例子，S卩，將細(xì)胞培養(yǎng)容器31具有的多個(gè)微容器33分為兩方，一方粘附了第1種類的供體的細(xì)胞，另一方粘附了第2種類的供體的細(xì)胞。應(yīng)予說明，也可以將多個(gè)微容器33分割為3個(gè)以上的區(qū)域。 通過在各區(qū)域粘附期望的供體的細(xì)胞，可以容易地確認(rèn)不同供體間的試驗(yàn)結(jié)果的差異。應(yīng)予說明，圖8 圖10表示源于多個(gè)供體的活細(xì)胞的配置例，但并不限于這些配置。只要在細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒30所具有的多個(gè)微容器33中，將源于多個(gè)供體的活細(xì)胞粘附在表面并進(jìn)行培養(yǎng)即可，可以是這些配置以外的配置。具體來說，各微容器33可以是粘附了源于不同供體的多個(gè)活細(xì)胞的情況。在一個(gè)微容器33中粘附的不同供體的活細(xì)胞的種類也可以為3種以上?；蛘?，也可以是下述情況，即，微容器33粘附了源于一個(gè)供體的活細(xì)胞，作為整個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒30 (或者作為一個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)容器31)具有多個(gè)供體的活細(xì)胞。 或者也可以是下述情況，即，每一個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)容器31粘附有源于一個(gè)供體的活細(xì)胞，對(duì)于整個(gè)的多個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)容器31，粘附有源于不同供體的活細(xì)胞。即，作為細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒30， 只要粘附有源于多個(gè)不同供體的活細(xì)胞即可。源于多個(gè)供體的活細(xì)胞以粘附的狀態(tài)在細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒30的各微容器33的表面進(jìn)行培養(yǎng)。在微容器內(nèi)，活細(xì)胞集聚，形成細(xì)胞團(tuán)。培養(yǎng)細(xì)胞團(tuán)，直至形成期望的大小，例如細(xì)胞聚集團(tuán)的直徑培養(yǎng)至30 200 μ m。另外，也可以根據(jù)細(xì)胞團(tuán)的大小來確定微容器的大小。微容器內(nèi)培養(yǎng)的活細(xì)胞可以使用來源于不同供體的實(shí)質(zhì)細(xì)胞。上述實(shí)質(zhì)細(xì)胞可以使用組織前體細(xì)胞、組織干細(xì)胞、由ES細(xì)胞分化的細(xì)胞、或者由iPS細(xì)胞(induced pluripotent stem cells)分化的實(shí)質(zhì)細(xì)胞、或者從生物體分離出的實(shí)質(zhì)細(xì)胞。
當(dāng)使用多個(gè)種類的細(xì)胞種類時(shí)，可以將其他的細(xì)胞種類與1種實(shí)質(zhì)細(xì)胞混合并培養(yǎng)。此時(shí)的細(xì)胞來源例如可以是多個(gè)供體的實(shí)質(zhì)細(xì)胞和源于單一供體的其他細(xì)胞種類，或者也可以是源于1供體的實(shí)質(zhì)細(xì)胞和源于與實(shí)質(zhì)細(xì)胞的供體不同的供體的其他細(xì)胞種類。 其他細(xì)胞種類可以使用選自肝星狀細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、纖維芽細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞的1種以上的細(xì)胞種類。實(shí)質(zhì)細(xì)胞、肝星狀細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、纖維芽細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞，可以使用組織前體細(xì)胞、組織干細(xì)胞、由ES細(xì)胞分化的細(xì)胞，或者由iPS細(xì)胞(induced pluripotent stem cells)分化的細(xì)胞、或者從生物體內(nèi)分離的細(xì)胞。培養(yǎng)基可以使用含有營養(yǎng)因子、血清、來自于細(xì)胞的分泌溶液等營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基?；蛘?，對(duì)于來自細(xì)胞的分泌溶液，也可以采用設(shè)置在細(xì)胞培養(yǎng)玻片(七 > 力> f Y — 4 >寸一卜)等的膜上培養(yǎng)細(xì)胞的容器的方法等。如以上說明的那樣，根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方式的一種方式，可以提供使多個(gè)供體的活細(xì)胞以在1個(gè)容器內(nèi)(細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒內(nèi))粘附的狀態(tài)進(jìn)行培養(yǎng)的細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒。細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒具有多個(gè)微容器。如上所述，多個(gè)微容器具有可長(zhǎng)時(shí)間維持活細(xì)胞的生物體內(nèi)功能的結(jié)構(gòu)。因此，可以提供具有與生物體內(nèi)類似的細(xì)胞功能的活細(xì)胞。而且，多個(gè)供體的試驗(yàn)結(jié)果可以在一個(gè)芯片上取得。由此，可以長(zhǎng)期、高效地實(shí)施使用源于多個(gè)不同供體的細(xì)胞的試驗(yàn)。
實(shí)施例<將源于多個(gè)供體的多種細(xì)胞(例如實(shí)質(zhì)肝細(xì)胞和非實(shí)質(zhì)肝細(xì)胞)在微空間板上培 養(yǎng)的結(jié)果>
1.細(xì)胞的準(zhǔn)備
1-1.肝細(xì)胞的培養(yǎng)(細(xì)胞增殖)
將在人肝干細(xì)胞(委托編號(hào)FERM BP-11108、獨(dú)立行政法人產(chǎn)業(yè)技術(shù)綜合研究所專利生物寄存中心)中引入了 BMIl基因的轉(zhuǎn)化細(xì)胞(以下記作“轉(zhuǎn)化肝細(xì)胞”)，接種到IV型膠原涂層皿(《夕卜> f'” * >社制)中并進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)基使用添加了 10%胎牛血清(FBS)、人Y-胰島素(1.0yg/ml)、煙酰胺 (10mmol/L)、地塞米松(lxl(T7mol/L)、L_ 谷氨酰胺(2mmol/L)的 DMEM 營養(yǎng)混合 F_12Ham 培養(yǎng)基(DMEM/F12 1:1混合物)。培養(yǎng)在37°C、5%C02培養(yǎng)箱中進(jìn)行，每5天進(jìn)行一次培養(yǎng)基的交換。1-2.血管內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)(細(xì)胞增殖)
將源于與上述轉(zhuǎn)化肝細(xì)胞不同的供體的人血管內(nèi)皮細(xì)胞株接種到?jīng)]有進(jìn)行任何涂布的細(xì)胞培養(yǎng)皿(《々卜> 7 〃 * > V >社制)中，并進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)基使用添加了 10%胎牛血清(FBS)、人Y-胰島素(1.0yg/ml)、煙酰胺 (10mmol/L)、地塞米松(lxl(T7mol/L)、L_ 谷氨酰胺(2mmol/L)的 DMEM 營養(yǎng)混合 F_12Ham 培養(yǎng)基(DMEM/F12 1:1混合物)。培養(yǎng)在37°C、5%C02培養(yǎng)箱中進(jìn)行，每5天進(jìn)行一次培養(yǎng)基的交換。1-3.細(xì)胞混懸液的制作
對(duì)于上述1-1、1_2中培養(yǎng)的各細(xì)胞，使用0. 25%胰蛋白酶溶液進(jìn)行剝離并回收細(xì)胞， 然后使其分散于培養(yǎng)基。培養(yǎng)基使用添加了 10%胎牛血清(FBS)、人Y-胰島素(l.Oyg/ml)、煙酰胺(lOmmol/L)、地塞米松(Ixl0_7mol/L)、L-谷氨酰胺(2mmol/L)的DMEM營養(yǎng)混合F-12Ham培養(yǎng)基(DMEM/F12 1 1混合物)。各自用臺(tái)盼藍(lán)染色細(xì)胞，并對(duì)活細(xì)胞數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)。2.培養(yǎng)試驗(yàn)(實(shí)施例比較例) 2-1〈實(shí)施例01>
將在1-3中得到的轉(zhuǎn)化肝細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞混合，使其混合比為1:3，并接種于培養(yǎng)容器，以使細(xì)胞密度為3. 75X IO4細(xì)胞/cm2。培養(yǎng)容器使用具有如圖3和圖4所示的凹凸格局、且a=100 μ m、c=50 μ m的微空間的24孔型的培養(yǎng)容器。2-2 < 比較例 01>
將1-3中得到的轉(zhuǎn)化肝細(xì)胞接種于培養(yǎng)容器，以使細(xì)胞密度為3. 75 X IO4細(xì)胞/cm2。培養(yǎng)容器使用具有如圖3和圖4所示的凹凸格局、且a=100 μ m、c=50 μ m的微空間的24孔型的培養(yǎng)容器。2-3 < 比較例 02>
將1-3中得到的轉(zhuǎn)化肝細(xì)胞接種至24孔細(xì)胞培養(yǎng)板(《々卜> 7 〃 * >社制)，使細(xì)胞密度為3. 75X IO4細(xì)胞/cm2。2-4培養(yǎng)方法
如上述2-1 2-3中記載的那樣將細(xì)胞接種后，在37°C的5%C02培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)24小時(shí)后，以1次/1 2天的頻率進(jìn)行培養(yǎng)基交換。培養(yǎng)基使用在加入了 10%胎牛血清(FBS)、人 γ-胰島素(1. 0 μ g/ml)、煙酰胺(10mmol/L)、地塞米松(lxlO^mol/L)、L-谷氨酰胺(2mmol/L)的DMEM營養(yǎng)混合F-12Ham培養(yǎng)基(DMEM/F12 1:1混合物)中添加了人重組HGF(50ng/mL)和上皮增殖因子(EGF) (10ng/mL)而成的培養(yǎng)基。3.基因表達(dá)分析
作為肝臟的代表性的藥物代謝酶的細(xì)胞色素P450 (CYP)和白蛋白的基因表達(dá)，通過從培養(yǎng)預(yù)定天數(shù)的細(xì)胞回收RNA、并在cDNA合成后進(jìn)行實(shí)時(shí)PCR來進(jìn)行評(píng)價(jià)。4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果(基因表達(dá)分析結(jié)果)
表1中，表示了實(shí)施例01和比較例01、02的培養(yǎng)期為21天后的白蛋白、CYP3A4和 CYP2C9的基因表達(dá)量。表中，基因表達(dá)量表示為以比較例02的值為1時(shí)的相對(duì)值。另外， CYP3A4、CYP2C9是存在于肝臟中的代謝酶的一種，是細(xì)胞色素P450酶的分子種類的名稱。 CYP對(duì)于保護(hù)生物體免受各種化學(xué)物質(zhì)(包含藥品)、環(huán)境污染物質(zhì)、有機(jī)溶劑等的異質(zhì)、異物的侵害起到重要的作用。實(shí)施例01中，對(duì)于白蛋白、CYP3A4和CYP2C9的任意一者，與比較例01、02相比都
表現(xiàn)出顯著高的表達(dá)量。應(yīng)予說明，實(shí)驗(yàn)方法的條件，除了將不同的2種細(xì)胞混合進(jìn)行培養(yǎng)以外，細(xì)胞數(shù)、 細(xì)胞的混合比不限于上述情況。對(duì)于表面涂布，只要使細(xì)胞粘附即可，不限于上述情況。[表 1]
權(quán)利要求
1.細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒，其是具有細(xì)胞培養(yǎng)板和在其上培養(yǎng)的活細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒， 其中，上述細(xì)胞培養(yǎng)板具有多個(gè)微空間，在上述多個(gè)微空間中，源于多個(gè)不同供體的活細(xì)胞粘附于表面。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒，其特征在于，上述源于多個(gè)不同供體的活細(xì)胞是2種以上的細(xì)胞。
3 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒，其特征在于，各微空間粘附有源于多個(gè)不同供體的活細(xì)胞和源于一個(gè)供體的活細(xì)胞中的任一者。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒，其特征在于，至少兩個(gè)相鄰的微空間粘附有源于不同供體的活細(xì)胞。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒，其特征在于，至少兩個(gè)相鄰的微空間粘附有源于相同供體的活細(xì)胞。
6.根據(jù)權(quán)利要求1 5中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒，其特征在于，上述多個(gè)微空間具有將培養(yǎng)至期望的細(xì)胞數(shù)的三維結(jié)構(gòu)體的細(xì)胞群體進(jìn)行隔離的大小。
7.根據(jù)權(quán)利要求1 6中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒，其特征在于，上述多個(gè)微空間的底部面積為0. Ol 0. 1mm2，深度為25 150 μ m。
8.根據(jù)權(quán)利要求1 7中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒，其特征在于，上述多個(gè)微空間以細(xì)胞接種密度為1 X IO2 1 X IO6細(xì)胞/cm2接種活細(xì)胞。
9.根據(jù)權(quán)利要求1 8中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒，其特征在于，上述多個(gè)微空間使活細(xì)胞集聚，形成細(xì)胞團(tuán)。
10.根據(jù)權(quán)利要求1 9中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒，其特征在于，上述細(xì)胞團(tuán)的直徑為30 200 μ m。
11.根據(jù)權(quán)利要求1 10中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒，其特征在于，上述活細(xì)胞是組織前體細(xì)胞、組織干細(xì)胞、由ES細(xì)胞分化的細(xì)胞或者由iPS細(xì)胞分化的細(xì)胞。
12.根據(jù)權(quán)利要求1 10中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒，其特征在于，上述活細(xì)胞是含有肝細(xì)胞的活細(xì)胞。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒，其特征在于，上述肝細(xì)胞是組織前體細(xì)胞、組織干細(xì)胞、由ES細(xì)胞分化的細(xì)胞或者由iPS細(xì)胞分化的細(xì)胞。
14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒，其特征在于，上述含有肝細(xì)胞的活細(xì)胞是從多個(gè)供體的肝組織內(nèi)分離的細(xì)胞。
15.篩選方法，其使用如權(quán)利要求1 14中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒進(jìn)行藥物的評(píng)價(jià)。
16.細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒的制造方法，其是具有細(xì)胞培養(yǎng)板和在其上培養(yǎng)的活細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒的制造方法，所述細(xì)胞培養(yǎng)板具有多個(gè)微空間，其中，將來源于多個(gè)不同供體的活細(xì)胞向上述多個(gè)微空間接種，培養(yǎng)接種的活細(xì)胞。
全文摘要
本發(fā)明提供培養(yǎng)多個(gè)供體的活細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒和其制造方法。細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒具有細(xì)胞培養(yǎng)板和在其上培養(yǎng)的活細(xì)胞。細(xì)胞培養(yǎng)板具有多個(gè)微容器(33)，在多個(gè)微容器(33)中，源于多個(gè)不同供體的活細(xì)胞粘附于表面。具體來說，對(duì)于多個(gè)微容器(33)，源于多個(gè)不同供體的活細(xì)胞D1、D2、D3粘附于表面。各微容器(33)可以培養(yǎng)源于一個(gè)供體的活細(xì)胞，也可以培養(yǎng)源于不同的多個(gè)供體的活細(xì)胞。作為細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒整體，可以提供通過粘附、培養(yǎng)源于多個(gè)供體的活細(xì)胞，使用源于多個(gè)供體的細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)的細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒。
文檔編號(hào)C12M1/00GK102197129SQ200980142149
公開日2011年9月21日 申請(qǐng)日期2009年10月23日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月24日
發(fā)明者一丁田洋子, 田崎剛, 福田始弘, 谷口英樹, 鶴田仁志 申請(qǐng)人:公立大學(xué)法人橫浜市立大學(xué), 可樂麗股份有限公司