專利名稱：：Coppock白內(nèi)障致病基因及其檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及的是一種人體變異的基因，具體地說是一種COPPOCK白內(nèi)障致病基因GJA3。本發(fā)明還涉及這種變異基因在檢測(cè)疾病中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：先天性白內(nèi)障(congenitalcataract,CC)是一種常見的眼部異常，可導(dǎo)致明顯的視力障礙或者兒童盲，約占世界兒童盲的1/10。先天性白內(nèi)障可以孤立發(fā)生，可以合并其它眼部發(fā)育異常，或者是遺傳性多系統(tǒng)綜合癥的一部分。大約1/3-1/4的先天性白內(nèi)障是遺傳性的，常染色體顯性、常染色體隱性和X-連鎖三種遺傳方式都有報(bào)道。遺傳性先天性白內(nèi)障大多是常染色體顯性，幾乎完全外顯但是表現(xiàn)度各不相同。盡管先天性白內(nèi)障是世界兒童盲的主要原因，其遺傳基礎(chǔ)和發(fā)病機(jī)制尚不十分清楚。對(duì)先天性白內(nèi)障致病基因的定位與克隆是了解其發(fā)病的分子機(jī)制的重要步驟。近年來，隨著分子生物學(xué)技術(shù)和生物信息學(xué)的迅猛發(fā)展，越來越多的先天性白內(nèi)障致病基因被定位和克隆。迄今為止，對(duì)常染色體顯性遺傳先天性白內(nèi)障，已明確定位的位點(diǎn)有30余個(gè)，已找到的致病基因有20余個(gè)。先天性白內(nèi)障的致病基因目前可以分成5類(1)晶體蛋白基因，包括CRYAA,CRYAB,CRYBB1,CRYBB2,CRYBB3,CRYBA1/A3,CRYBA4,CRYGC，CRYGD,和CRYGS。(2)膜蛋白基因，包括MIP,LIM2.(3)縫隙連接蛋白基因，包括GJA8,GJA3。(4)細(xì)胞骨架蛋白基因，包括BFSP1,BFSP2。(5)發(fā)育調(diào)節(jié)因子基因，包括PITX3,MAF,HSF4,FOXE3,EYA1,CHX10,和PAX6等。中國(guó)專利申請(qǐng)200710144506.X公開了CRYGC基因變異與先天性核性白內(nèi)障的關(guān)系，CRYGC基因第3外顯子第470堿基一個(gè)G->A的點(diǎn)突變，導(dǎo)致編碼第157位色氨酸的密碼子變成了終止密碼子(W157X)。并確定該點(diǎn)突變是先天性核性白內(nèi)障的致病基因突變。由于先天性白內(nèi)障的臨床癥狀及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指征具有許多類型，而且研究顯示，不同的臨床類型分別與不同的基因突變相關(guān)。即使是同一基因，點(diǎn)突變的位點(diǎn)不同，由此導(dǎo)致先天性白內(nèi)障的癥狀就有可能不同。因此有必要對(duì)白內(nèi)障的各種臨床類型，尤其是還沒有發(fā)現(xiàn)相關(guān)的分子遺傳學(xué)勤出的臨床類型進(jìn)行研究，以確定其精確的變異基因名稱和位點(diǎn)，并根據(jù)該變異建立起方便、快速和準(zhǔn)確的檢測(cè)方法，用于先天性白內(nèi)障的診斷。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供COPPOCK白內(nèi)障，也稱為核性顆粒狀白內(nèi)障的致病基因，定位出該疾病的基因突變位點(diǎn)，并利用該基因突變，提供檢測(cè)人體中是否存在該基因突變的方法。本發(fā)明針對(duì)一個(gè)COPPOCK白內(nèi)障家系，用基因掃描與連鎖分析的方法對(duì)致病基因進(jìn)行染色體定位和候選基因突變檢測(cè)。在排除了大部分先天性白內(nèi)障相關(guān)染色體區(qū)域后，將致病基因初步定位于第13號(hào)染色體。經(jīng)過精確定位，將致病基因定位于染色體13qll-12。通過對(duì)此定位區(qū)域內(nèi)先天性白內(nèi)障的候選基因GJA3基因雙向測(cè)序發(fā)現(xiàn)一個(gè)新的點(diǎn)突變。通過對(duì)家系正常成員和100名正常對(duì)照GJA3基因測(cè)序未發(fā)現(xiàn)此突變，排除了單個(gè)核苷酸多態(tài)性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)的可能性。從而確定GJA3基因突變是COPPOCK白內(nèi)障的致病基因突變。由此，本發(fā)明提供了一種如SEQIDNO:l所示的變異的人類GJA3基因，其特征在于，所述GJA3基因第l外顯子第427位堿基的G突變?yōu)锳。正常的人類GJA3基因如SEQIDNO:2所示。本發(fā)明還提供了一種含有上述述基因的點(diǎn)突變的核苷酸，其特征在于，所述核苷酸含有從點(diǎn)突變向兩側(cè)或一側(cè)延伸至少50個(gè)以上至1000個(gè)堿基之間長(zhǎng)度的核苷酸。本發(fā)明進(jìn)一步提供了所述的核苷酸，其特征在于，所述核苷酸含有從點(diǎn)突變向兩側(cè)或一側(cè)延伸至少300-600個(gè)個(gè)石威基之間長(zhǎng)度的核苦酸。本發(fā)明還提供了一種檢測(cè)來源于人體的生物樣本中是否存所述基因的點(diǎn)突變的方法，其包括步驟(1)從所述樣本中提取和純化基因材料；(2)對(duì)所述基因材料進(jìn)行聚合酶鏈擴(kuò)增反應(yīng)，獲取產(chǎn)物；(3)對(duì)所述產(chǎn)物進(jìn)行核普酸序列測(cè)定，以確定所述生物樣本中是否含有GJA3基因的點(diǎn)突變。優(yōu)選地，所述生物樣本為體液，所述體液包括但不限于血液、血清、羊水、淋巴液等。優(yōu)選地所述體液為血液。優(yōu)選地，在所述聚合酶鏈擴(kuò)增反應(yīng)使用的引物對(duì)為SEQIDNO:6和7;本領(lǐng)域技術(shù)人員還可以根據(jù)聚合酶鏈擴(kuò)增反應(yīng)的要求，設(shè)計(jì)更多種的引物，以擴(kuò)增出包含本發(fā)明所述變異位點(diǎn)的核苷酸序列。本發(fā)明還提供了上述核苦酸在制備先天性白內(nèi)障疾病基因診斷芯片中的應(yīng)用。本領(lǐng)域技術(shù)人員以該核苷酸為基因探針，根據(jù)基因雜交的原理，可以檢測(cè)生物樣本中是否存在與該探針序列互補(bǔ)的核苷酸序列。因此使用這種方法也可以檢測(cè)出樣本中是否存在著本發(fā)明的基因突變位點(diǎn)。本發(fā)明還提供了一種檢測(cè)來源于人體的生物樣本中是否存在上述述基因突變的方法，其包括步驟(1)從所述樣本中提取和純化基因材料；(2)使步驟(1)獲得的基因材料與權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的核苷酸進(jìn)行接觸。(3)觀察經(jīng)過步驟(2),所述基因材料與所述核苷酸是否存在基于序列特異性的雜交結(jié)合。優(yōu)選地，所述生物4羊本為血液。根據(jù)本發(fā)明提供的GJA3基因序列變異的位點(diǎn)，應(yīng)用本發(fā)明提供的檢測(cè)來源于人體的生物樣本中是否存所述基因的點(diǎn)突變的方法，對(duì)一個(gè)先天性COPPOCK白內(nèi)障(核性顆粒狀白內(nèi)障)家系正常漢族個(gè)體進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果顯示家系所有白內(nèi)障患者都具有相同的點(diǎn)突變，而家系內(nèi)其余正常個(gè)體和100名正常對(duì)照都沒有此突變。證明本發(fā)明提供的方法能夠精確地診斷先天性COPPOCK白內(nèi)障(核性顆粒狀白內(nèi)障)，并能與其他先天性白內(nèi)障相區(qū)別。圖1為突變序列SEQIDNO:1與正常序列SEQIDNO:2在突變位點(diǎn)的對(duì)比示意圖。具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更為詳細(xì)的描述，但是以下描述僅用于對(duì)本發(fā)明進(jìn)行解釋性說明，并不對(duì)本發(fā)明的保護(hù)范圍進(jìn)行任何的限制，本發(fā)明的保護(hù)范圍僅以權(quán)利要求書限定的范圍為準(zhǔn)。實(shí)施例l:GJA3基因變異的定位(一)基因組DNA的提取使用QIAGEN公司QIAampDNABloodMiniKit試劑盒抽提血液樣品基因組DNA。(二)基因掃描分初步掃描和精細(xì)掃描兩步進(jìn)行。首先對(duì)已報(bào)道的候選區(qū)域進(jìn)行初步掃描，之后在陽(yáng)性區(qū)域內(nèi)進(jìn)行精細(xì)掃描。1、孩i衛(wèi)星4示i己凈刀步才3描用遺傳才示i己凈勿來自Linkagemappingsetversion2.5(美國(guó)AppliedBiosystems公司)；精細(xì)掃描用熒光標(biāo)記物選自Marshfield網(wǎng)站，序列及相關(guān)信息來自NCBI網(wǎng)站，由美國(guó)Invitrogen公司合成，5'端FAM熒光標(biāo)記。2、多重PCR擴(kuò)增5nLPCR反應(yīng)體系包含模板DNAlpL,10xPCRbuffer0.5|iL,dNTP0.8^L,Mg2+0.3pL，引物(正反向10pmol/pL)0.05pL，HotStarTaqDNA聚合酶0.06iiL,余下體積由滅菌雙蒸水補(bǔ)足。PCR反應(yīng)條件采用"Touchdown"方式預(yù)變性94。C變性30sec,復(fù)性溫度從64。C開始，每進(jìn)行一個(gè)熱循環(huán)復(fù)性溫度降低0.5。C一直降至57。C,熱循環(huán)中復(fù)性的時(shí)間為lmin,延伸為恒定72。C下1.5min，這個(gè)過程一共14個(gè)熱循環(huán)。經(jīng)過這個(gè)條件后，反應(yīng)進(jìn)入第二輪，即恒定擴(kuò)增期。將復(fù)性溫度設(shè)定為56°C,其它條件不變，進(jìn)行30個(gè)熱循環(huán)。3、基因分型PCR產(chǎn)物lnl與MegaBACE1000TMET400-RSize(與去離子水以27:100稀釋)6pl混合，95。C變性5min,立即冰浴。在MegaBACE1000DNA分析儀(英國(guó)AmershamPharmaciaBiotech公司)上電泳lh,經(jīng)軟件掃描并收集圖像信息，并由GeneticProfiler2.1軟件分析，獲得基因分型數(shù)據(jù)。4、連鎖分析對(duì)基因分型結(jié)果進(jìn)行人工校對(duì)后，采用Linkagev5.1軟件包中的Mlink連鎖分析軟件進(jìn)行兩點(diǎn)間連鎖分析。分別在重組率(e)為O.OO,0.10,0.20,0.30,0.40和0.50時(shí)計(jì)算對(duì)數(shù)優(yōu)勢(shì)計(jì)分(logoddsscore,LOD)值。結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)LOD值>l為提示連鎖，〉2為支持連鎖，〉3為肯定連鎖，<-2為否定連鎖。(三)精細(xì)定位在得到的陽(yáng)性區(qū)域附近選擇了更為精細(xì)的微衛(wèi)星標(biāo)記。遺傳標(biāo)記選擇來自于marshfield和ncbi網(wǎng)站。每對(duì)引物合成時(shí)在其中一條的5'端用FAM(藍(lán)色)熒光染料標(biāo)記，PCR條件、標(biāo)記的基因分型與連鎖分析的方法均同上。(四)單體型分析利用Cyrillic軟件產(chǎn)生一個(gè)家系圖譜，圖譜中可以顯示每個(gè)成員的多個(gè)遺傳標(biāo)記的分型信息。對(duì)這些信息才艮據(jù)上下代遺傳關(guān)系進(jìn)行手動(dòng)調(diào)節(jié)即可排列出每個(gè)個(gè)體的單體型。4艮據(jù)單體型在患者個(gè)體中共享的情況，可以發(fā)現(xiàn)交換的發(fā)生進(jìn)而可得到最終由所有患者共享的一段最小的區(qū)域。這段所有患者共享的一段最小的區(qū)域即是該家系致病基因在染色體上的定位區(qū)域。基因的染色體定位技術(shù)在分子遺傳學(xué)領(lǐng)域?qū)τ诒绢I(lǐng)域技術(shù)人員而言是已知的技術(shù)，本發(fā)明是利用這些已知的技術(shù)去發(fā)現(xiàn)可能給人類帶來疾病的變異基因?qū)嵤├?:變異基因的測(cè)序(1)使用QIAGEN公司QIAampDNABloodMiniKit試劑盒抽提血液樣品基因組DNA;(2)對(duì)樣本DNA目標(biāo)片段進(jìn)行PCR體外擴(kuò)增，目的是擴(kuò)增出GJA3的第一個(gè)外顯子(SEQINNO:l所示)，共用了4對(duì)引物擴(kuò)增第一外顯子(表1),PCR反應(yīng)體系如表2所示，PCR反應(yīng)程序如表3所示。表1COPPOCK白內(nèi)障家系基因外顯子1測(cè)序引物<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表2PCR反應(yīng)體系試劑名稱試劑量(pi)ddH2010.05xQsolution5.025mMMgCl23.010xbuffer2.52mMdNTP2.520pM引物0.4Taq酶0.2DNA模板1.0總體積25.0PCR反應(yīng)在9700PCR儀上進(jìn)行。表3:PCR反應(yīng)程序溫度時(shí)間循環(huán)次數(shù)95°C2分鐘195°C40秒1463°C(-0.5°C/cycle)30秒72。Cl分鐘95°C40秒2557°C30秒72°Cl分鐘72°C10分鐘14°C保持1PCR產(chǎn)物電泳檢測(cè)PCR反應(yīng)結(jié)束后，取2pl反應(yīng)產(chǎn)物力口入2^1的2xLoadingBuffer,4000rpm離心30秒，上樣在1.5%的瓊脂糖凝膠中，100V電壓下電泳15min,凝膠才聶像儀拍4聶檢測(cè)；(3)對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化采用SAP(北極蚱堿性磷酸酶)降解殘余dNTP,Exo(核酸外切酶)降解殘余引物，將SAP和Exo兩種酶和lOx緩沖液預(yù)先混合后保存，每微升混合液中含SAP和EXO各0.5單位，對(duì)于每個(gè)純化反應(yīng)，取PCR產(chǎn)物1.5-2pi加入SAP酶1.5nl,反應(yīng)程序?yàn)镾AP/Exo在37。C處理PCR產(chǎn)物40分鐘，接著85。C持續(xù)20分鐘滅活SAP/Exo酶，然后4。C保溫；(4)對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序測(cè)序反應(yīng)體系為5pi,包含純化后的PCR產(chǎn)物，測(cè)序引物3.2pmol以及BDT(BigDyeTerminator3.1，AppliedBiosystems)。0.5^1,剩下體積用ddH20補(bǔ)齊，測(cè)序反應(yīng)程序如表4所示表4測(cè)序反應(yīng)程序溫度時(shí)間循環(huán)次數(shù)96°C2分鐘194°C30秒3550°C30秒60°Cl分鐘4°C保持1測(cè)序反應(yīng)結(jié)束后，需要對(duì)測(cè)序產(chǎn)物再次純化(測(cè)序后純化)，以除去測(cè)序反應(yīng)帶來的小分子物質(zhì)，避免其對(duì)測(cè)序的干擾。純化步驟如下1)測(cè)序反應(yīng)的96孔板中每孔加25pl醋酸鈉一乙醇溶液(3M醋酸鈉+100%乙醇，體積比為l:25);4。C，4000rpm離心45分鐘；倒置，600rpm離心l分鐘甩干。2)再加入50^170%乙醇溶液；4。C,4000rpm離心10分鐘；倒置600rpm離心l分鐘甩干；重復(fù)一次。3)室溫靜置約半小時(shí)讓其自然干燥。在測(cè)序以前先要使DNA樣品變性。變性的方法是在純化后的樣品中加入10plHiDi(去離子甲酰胺)，在PCR儀上95。C保持5分鐘使之完全變性。變性后即刻放入水中至少2分鐘防止其復(fù)性。接著上樣至ABIPRISM3100測(cè)序儀/分型儀(AppliedBiosystems)進(jìn)行測(cè)序。(5)測(cè)序結(jié)果分析應(yīng)用SEQUENCEANALYSIS軟件對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行分析。應(yīng)用NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)的BLAST程序(http:Vwww.ncbi.nlm.nih.gov/blast/bl2s叫/wblast2.cgi),將發(fā)現(xiàn)的突變序列與基因組序列進(jìn)行比較，對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行比對(duì)分析。排除SNP的可能性后，對(duì)家系所有成員和IOO名正常對(duì)照進(jìn)行測(cè)序，判斷突變是否與家系共分離。通過表l所示的4對(duì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，經(jīng)對(duì)產(chǎn)物的測(cè)序分析顯示，本發(fā)明所述的第1外顯子產(chǎn)生G-〉A(chǔ)點(diǎn)突變的第427堿基位于第2對(duì)引物(即SEQIDN0:6和7所示)的擴(kuò)增范圍內(nèi)，因此，該對(duì)引物可用于對(duì)先天性COPPOCK白內(nèi)障(核性顆粒狀白內(nèi)障)致病基因GJA3的基因突變的檢測(cè)。實(shí)施例3:對(duì)一個(gè)先天性COPPOCK白內(nèi)障家系進(jìn)行GJA3基因變異的檢測(cè)為了-驗(yàn)證本發(fā)明的效果，我們收集到黑龍江省的一個(gè)先天性COPPOCK白內(nèi)障家系。家系成員經(jīng)調(diào)查走訪或做全身檢查以排除其它目艮部疾病和系統(tǒng)異常。對(duì)家系成員進(jìn)行了詳細(xì)的眼科檢查，包括視力、裂隙燈顯微鏡、散瞳后的眼底檢查。所有患者經(jīng)眼科裂隙燈檢查以確認(rèn)白內(nèi)障類型，裂隙燈顯微鏡拍照，記錄患者的白內(nèi)障表型。所有參加調(diào)查和被采集血樣的家系成員都了解本研究的目的意義并簽署了知情同意書。該家系共4代，150個(gè)家系成員，其中男78人，女72人。抽取志愿者外周靜脈血5ml，用EDTA作抗凝處理后，-20°〇水箱保存。另外采集正常漢族個(gè)體100人，采集外周靜脈血5ml，EDTA抗凝，-20。C冰箱保存作為對(duì)照組。100名正常對(duì)照的測(cè)序結(jié)果與家系正常人的測(cè)序結(jié)果完全一致。雙向測(cè)序結(jié)果表明先天性COPPOCK白內(nèi)障家系的GJA3基因第l外顯子第427堿基，有一個(gè)G-〉A(chǔ)的點(diǎn)突變(如SEQIDNO:l所示，SEQIDNO:2為未發(fā)生變異的正常序列，見圖l矩形方框所示)，導(dǎo)致多肽編碼序列的第143位甘氨酸密碼GGG變?yōu)榫彼崦艽aAGG(G-〉R,或者Gly-〉A(chǔ)rg)(如SEQIDNO:3所示，見圖l兩條實(shí)線所示)。家系所有白內(nèi)障患者都具有相同的點(diǎn)突變，而家系內(nèi)其余正常個(gè)體和IOO名正常對(duì)照都沒有此突變。從而排除了它是罕見的SNP的可能性。確定GJA3基因突變是該家系的致病基因突變。序列表<110>哈爾濱醫(yī)科大學(xué)<120>C0PP0CK白內(nèi)障致病基因及其檢測(cè)方法<130><160>11<170>Patentlnversion3.3<210>1<211>1308<212>腿<213>Homosapiens〈40。>1atgggcgactggagctttctgggaagactccacaggagcactccacggtc60atcggc犯ggtttggctgaccgtgctgttcatcttccgcatcttggtgctgggggccgcg120gcggaggacgtgtggggcgatgagcagtcagacttcacctgc肌cacccagcagccgggc180tgcgagaacgtctgctacgacagggccttccccatctcccacatccgcttctgggcgctg240-cagatcatcttcgtgtccacgcccaccctcatctacctgggccacgtgctgcacatcgtg300cgcatggaagagaag犯g犯ag卿gggaggagg鄉(xiāng)agcagctgaagagagagagcccc360agccccaaggagccaccgcaggacaatccctcgtcgcgggacgaccgcggcagggtgcgc420atggccagggcgctgctgcggacctacgtcttcaacatcatcttcaagacgctgUcgag■gtgggcttcatcgccggccagtactttctgtacggcttcgagctgaagccgc卞ctaccgc540tgcgaccgctggccctgccccaacacggtggactgcttcatctccaggcccacggsg犯g600accatcttcatcatcttcatgctggcggtggcctgcgcgtccc;tgctgctcaacatgctg660gagstctaccacctgggctggaagaagctcaagcagggcgtgaccagccgcctcggcccg720gacgcctccgaggccccgctgggg織gccgatcccccgcccctgccccccagctcccgg780ccgcccgccgttgccatcgggttcccaccctactatgcgcacaccgctgcgcccctggga840caggcccgcgccgtgggctaccccggggccccgccaccagccgcggacttc犯actgcta900gccctgaccgaggcgcgcgg犯agggccagtccgcc犯gctctacaacggccaccaccac960ctgctgatgactgagcagaactgggccaaccaggcggccgagcggcagcccccggcgctc1020肌ggcttacccggcagcgtccacgcctgcagcccccagccccgtcggcagcagctccccg1080ccactcgcgcacgaggctgaggcgggcgcggcgcccctgctgctggatgggagcggcagc1140agtctggaggggagcgccctggcagggacccccgaggaggaggagcaggccgtgaccacc1200gcggccc卿tgC3CC3gCCgcccttgcccctcggagaccC3ggtCgggCcagcaaggcc1260gCElgCgggCgggccagaccggaggacttggccatctag1308〈210〉2<211〉1308<212〉DNA<213>Homosapiens〈400>2atgggcgactggagctttctgggaagactcttagaa犯tgcacaggagcactccacggtc60atcggcaaggtttggctgaccgtgctgttcatcttccgcatcttggtgctgggggccgcg120gcggaggacgtgtggggcgatgagcagtcagacttcacctgC^CElCCC3gcagccgggc180tgcg聊acgtctgctacgacagggccttccccatctcccacatccgcttctgggcgctg240<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>LeuAlalie435<210>4<211>19〈212〉艦〈213〉人工序列<220〉〈223〉引物<400〉4ccatcccagtaccatccag19<210〉5<211>20〈212〉DNA<213〉人工序列<220〉<223>引物<400〉5tctcttcagctgctcctcct20<210>6<211>20<212〉DNA<213>人工序列<220><223〉引物<400>6agaacgtctgctacgacagg20<210>7<211>20<212>DNA<213〉人工序列<220〉<223〉引物<400〉7cctgcttgagcttcttccag20<210〉8<211〉18<212>DNA<213>人工序列<220〉<223〉引物<400〉8cgagctgaagccgctcta18<210>9<211〉18<212>DNA<213〉人工序列<220><223>引物<400〉9ctgccgggtaagccttga18<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>權(quán)利要求1.一種如SEQIDNO1所示的變異的人類GJA3基因，其特征在于，所述GJA3基因第1外顯子第427位的堿基G突變?yōu)锳。2.—種含有權(quán)利要求1所述基因的點(diǎn)突變的核香酸，其特征在于，所述核苷酸含有從點(diǎn)突變向兩側(cè)或一側(cè)延伸至少50個(gè)以上至1000個(gè)堿基之間長(zhǎng)度的核苷酸。3.根據(jù)權(quán)利要求2所迷的核苷酸，其特征在于，所述核苷酸含有從點(diǎn)突變向兩側(cè)或一側(cè)延伸至少300-600個(gè)個(gè)石威基之間長(zhǎng)度的核苷酸。4.一種檢測(cè)來源于人體的生物樣本中是否存在權(quán)利要求1所述基因的點(diǎn)突變的方法，其包括步驟(1)從所述樣本中提取和純化基因材料；2)對(duì)所述基因材料進(jìn)行聚合酶鏈擴(kuò)增反應(yīng)，獲取產(chǎn)物；(3)對(duì)所述產(chǎn)物進(jìn)行核苷酸序列測(cè)定，以確定所述生物樣本中是否含有權(quán)利要求1所述基因的點(diǎn)突變。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述生物樣本為體液。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述體液為血液。7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，在所述聚合酶鏈擴(kuò)增反應(yīng)使用的引物對(duì)為SEQIDNO:6和7。8.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的核香酸在在制備先天性白內(nèi)障疾病基因診斷芯片中的應(yīng)用。9.一種檢測(cè)來源于人體的生物樣本中是否存在權(quán)利要求1所述基因的點(diǎn)突變的方法，其包括步驟(1)從所述樣本中提取和純化基因材料；(2)使步驟(1)獲得的基因材料與權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的核苷酸進(jìn)行接觸。(3)觀察經(jīng)過步驟(2),所述基因材料與所述核苷酸是否存在基于序列特異性的雜交結(jié)合。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述生物樣本為血液。全文摘要本發(fā)明涉及一種COPPOCK白內(nèi)障(核性顆粒狀白內(nèi)障)致病基因GJA3，在COPPOCK白內(nèi)障(核性顆粒狀白內(nèi)障)病人的GJA3基因第1外顯子第427堿基，有一個(gè)G-＞A的點(diǎn)突變。本發(fā)明還涉及這種變異基因在檢測(cè)疾病中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的方法能夠精確地診斷先天性COPPOCK白內(nèi)障(核性顆粒狀白內(nèi)障)，并能與其他先天性白內(nèi)障相區(qū)別。文檔編號(hào)C12N15/12GK101525620SQ20091013157公開日2009年9月9日申請(qǐng)日期2009年4月7日優(yōu)先權(quán)日2009年4月7日發(fā)明者平劉,璐張申請(qǐng)人:哈爾濱醫(yī)科大學(xué)