專利名稱：一種高純度活性真菌多糖的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物工程領(lǐng)域， 一種高純度活性真菌多糖的生產(chǎn)方法。
二背景技術(shù)：
真菌多糖在國際上被稱為"生物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑"，簡稱BRM，作為 一種生物非特異性免疫促進(jìn)劑，它具有提高免疫力、抗腫瘤、抗病毒、 護(hù)肝排毒、抗?jié)?、降低血糖、延緩衰老、抗輻射等功效。高純度?性真菌多糖，作為原料可直接加工生產(chǎn)出劑型為軟、皿囊、片劑、 沖劑、注射針劑、水劑、口服液等產(chǎn)品.目前真菌多糖的提取常用水 提取、酸提取、M取、超聲波提取等工藝較煩瑣、成本高、純度含 量較低、抗癌活性不高、無效成分較多、沒有進(jìn)行無效成分提純，不 能直接用于注射針劑、水劑產(chǎn)品的生產(chǎn)。
三
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就在于提供一種工藝簡單、成本低、純度含量較高、 抗癌活性高、無效成分少、且能直接用于注射針劑、水劑產(chǎn)品的高純 度活性真菌多糖的生產(chǎn)方法.
本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的，以大型真菌子實(shí)體、固體菌絲體和
4/或深層次發(fā)酵液菌絲體的粉末狀干物質(zhì)為原料，與上述原料重量
2-6倍的純凈水混合，調(diào)整PH值至4后加溫，當(dāng)溫度上升至40-50 "時加入由木瓜蛋白酶、果膠酶、纖維素酶組成的復(fù)合酶， 一個小 時后升溫至60-70 "，此時用氫氧化鈉調(diào)PH值至7-8，每分鐘以1-10 轉(zhuǎn)攪拌，浸提2-4次，每次l-4小時，將2-4次浸提液合并過濾，減 壓濃縮至總體積30%時用乙醇沉淀、過濾得粗品。上清液用超過濾 分離裝置脫鹽，經(jīng)反復(fù)加水稀釋和超過濾操作即得真菌多糖濃縮液， 濃液經(jīng)冷凍干燥或噴霧干燥得高純度活性真菌多糖粉末. 上述生產(chǎn)方法中各^t的最佳值分別為 加入粉末狀原料的純凈水為粉末狀原料重量的4倍； 復(fù)合酶各組分的含量分別是木瓜蛋白酶為原料重量的1%-5 % 、果膠酶為原料重量的0. 5 %-1 % 、纖維素酶為原料重量的1 %-2 %。
每次浸提時間為2小時；
超濾膜分離裝置釆用截留分子量為30000-60000的膜分離裝置； 超過濾的操作壓力為0. 05-0. 08MPa; 超過濾操作室溫度為18-221C.
本發(fā)明復(fù)合酶配伍合理用量適當(dāng)，它能夠提高真菌多糖的浸出率 主要是因?yàn)樵搹?fù)合酶對菌類物質(zhì)中的游離蛋白質(zhì)具有分解作用，使得 菌類物質(zhì)結(jié)構(gòu)變松，它還會使糖蛋白和蛋白聚糖中游離的蛋白質(zhì)水解 掉，降低了它們與原料的結(jié)合力，它不但利于真菌多糖的浸出，還具 有除蛋白質(zhì)的作用，可減輕除蛋白質(zhì)操作的負(fù)擔(dān)，不會因除蛋白質(zhì)而使真菌多糖損失過多。因此，它和現(xiàn)有技術(shù)中常用的^方法相比提
取效率高；和酸M取法相比不易破壞多糖的立體結(jié)構(gòu)與活性；和超 聲波提取法相比不會造成將某些真菌多糖組分降解成了較小分子量 的片段，從而降低抗癌活性，因此，本發(fā)明具有工藝簡單、成本低、 純度及抗癌活性高、無效成分少的優(yōu)點(diǎn).具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明 實(shí)施例1
以大型真菌子實(shí)體的粉末狀干物質(zhì)為原料，與該原料重量2倍的 純凈水混合，調(diào)整PH值至4后加溫，當(dāng)溫度上升至50 1C時加入由 木瓜蛋白酶、果膠酶、纖維素酶組成的復(fù)合酶， 一個小時后升溫至 60匸，此時用氫氧化鈉調(diào)PH值至8，每分鐘以1轉(zhuǎn)攪拌，浸提4 次，每次1小時，將4次浸提液合并過濾，減壓濃縮至總體積30% 時用乙醇沉淀、過濾得粗品.上清液用超過濾分離裝置脫鹽，經(jīng)反復(fù) 加水稀釋和超過濾操作，即得真菌多糖濃縮液，濃縮液經(jīng)冷凍干燥或 噴霧干燥得多糖純度達(dá)到98%以上真菌多糖粉末.作為原料可加工 生產(chǎn)出劑型為軟、皿囊、片劑、沖劑、注射針劑、水劑、口服液產(chǎn) 品
實(shí)施例2
以固體菌絲體的粉末狀干物質(zhì)為原料，與上述原料重量6倍的純 凈水混合，調(diào)整PH值至4后加溫，當(dāng)溫度上升至40 1C時加入由木 瓜蛋白酶、果膠酶、纖維素酶組成的復(fù)合酶， 一個小時后升溫至70*C ，此時用氫氧化鈉調(diào)PH值至7，每分鐘以10轉(zhuǎn)攪拌，浸提2次， 每次4小時，將2次浸提液合并過濾，減壓濃縮至總體積30%時用 乙醇沉淀、過濾得粗品。上清液用超過濾分離裝置脫鹽，經(jīng)反復(fù)加水 稀釋和超過濾操作，即得真菌多糖濃縮液，濃縮液經(jīng)冷凍千燥或噴霧 干燥得多糖純度達(dá)到99.6%以上真菌多糖粉末。作為原料可加工生 產(chǎn)出劑型為軟、硬膠嚢、片劑、沖劑、注射針劑、水劑、口服液產(chǎn)品。 實(shí)施例3
以深層次發(fā)酵液菌絲體的粉末狀干物質(zhì)為原料，與上述原料重量 4倍的純凈水混合，調(diào)整PH值至4后加溫，當(dāng)溫度上升至45 K時加 入由木瓜蛋白酶、果膠酶、纖維素酶組成的復(fù)合酶， 一個小時后升溫 至65 1C ，此時用氫氧化鈉調(diào)PH值至7.5，每分鐘以5轉(zhuǎn)攪拌，浸 提3次，每次2. 5小時，將3次浸提液合并過濾，減壓濃縮至總體積 30%時用乙醇沉淀、過濾得粗品.上清液用超過濾分離裝置脫鹽，經(jīng) 反復(fù)加水稀釋和超過濾操作，即得真菌多糖濃縮液，濃縮液經(jīng)冷凍干 燥或噴霧干燥得多糖純度達(dá)到99.1%以上真菌多糖粉末.作為原料 可加工生產(chǎn)出劑型為軟、；^J&囊、片劑、沖劑、注射針劑、水劑、口 服液產(chǎn)品。
實(shí)施例4、
以大型真菌子實(shí)體、固體菌絲體和深層次發(fā)酵液菌絲體的粉末狀 干物質(zhì)為原料，與上述原料重量3倍的純凈水混合，調(diào)整PH值至4 后加溫，當(dāng)溫度上升至45 1C時加入由木瓜蛋白酶、果膠酶、纖維素 酶組成的復(fù)合酶， 一個小時后升溫至65 1C ,此時用氫氧化鈉調(diào)PH值至7，每分鐘以6轉(zhuǎn)攪拌，浸提4次，每次3小時，將4次浸提液 合并過濾，減壓濃縮至總體積30%時用乙醇沉淀、過濾得粗品。上 清液用超過濾分離裝置脫鹽，經(jīng)反復(fù)加水稀釋和超過濾操作，即得真 菌多糖濃縮液，濃縮液經(jīng)冷凍干燥或噴霧干燥得多糖純度達(dá)到98% 以上真菌多糖粉末。在真菌多糖粉末中按常規(guī)加入醫(yī)學(xué)上常用的不同 輔料，可加工生產(chǎn)出劑型為軟、皿嚢、片劑、沖劑、注射針劑、水 劑、口服液產(chǎn)品。
權(quán)利要求
1、一種高純度活性真菌多糖的生產(chǎn)方法，其特征在于以大型真菌子實(shí)體、固體菌絲體和/或深層次發(fā)酵液菌絲體的粉末狀干物質(zhì)為原料，與上述原料重量2-6倍的純凈水混合，調(diào)整PH值至4后加溫；當(dāng)溫度上升至40-50℃時加入由木瓜蛋白酶、果膠酶、纖維素酶組成的復(fù)合酶，一個小時后升溫至60-70℃，此時用氫氧化鈉調(diào)PH值至7-8，每分鐘以1-10轉(zhuǎn)攪拌，浸提2-4次，每次1-4小時；將2-4次浸提液合并過濾，減壓濃縮至總體積30％時用乙醇沉淀、過濾得粗品；上清液用超過濾分離裝置脫鹽，經(jīng)反復(fù)加水稀釋和超過濾操作，即得真菌多糖濃縮液；濃縮液經(jīng)冷凍干燥或噴霧干燥得高純度活性真菌多糖粉末。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高純度活性真菌多糖的生產(chǎn)方法， 其特征在于與原料混合的純凈水的重量為原料重量的4倍.
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高純度活性真菌多糖的生產(chǎn)方法， 其特征在于復(fù)合酶各組分的含量分別是木瓜蛋白酶為原料重量的 1 %-5 % 、果膠酶為原料重量的0. 5 %-1 % 、纖維素酶為原料重量的1 %-2%'
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高純度活性真菌多糖的生產(chǎn)方法， 其特征在于每次浸提時間為2小時.
5、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高純度活性真菌多糖的生產(chǎn)方法， 其特征在于超濾膜分離裝置采用截留分子量為30000-60000的膜分 離裝置.
6、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高純度活性真菌多糖的生產(chǎn)方法， 其特征在于超過濾的操作壓力為0. 05-0. 08MPa。
7、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高純度活性真菌多糖的生產(chǎn)方法， 其特征在于超過濾操作室溫為18-221C.
全文摘要
本發(fā)明公開了一種高純度活性真菌多糖的生產(chǎn)方法，它是以大型真菌子實(shí)體、固體菌絲體和/或深層次發(fā)酵液菌絲體的粉末狀干物質(zhì)為原料，與上述原料重量2-6倍的純凈水混合，調(diào)整pH值至4后加溫。當(dāng)溫度上升至40-50℃時加入由木瓜蛋白酶、果膠酶、纖維素酶組成的復(fù)合酶，一個小時后升溫至60-70℃，此時用氫氧化鈉調(diào)整pH值至7-8，每分鐘以1-10轉(zhuǎn)攪拌，浸提2-4次，每次1-4小時。將2-4次浸提液合并過濾，減壓濃縮至總體積30％時用乙醇沉淀、過濾得粗品。上清液用超過濾分離裝置脫鹽，經(jīng)反復(fù)加水稀釋和超過濾操作，即得真菌多糖濃縮液。濃縮液經(jīng)冷凍干燥或噴霧干燥得多糖純度達(dá)到98％以上真菌多糖粉末。具有工藝簡單、成本低、純度含量高等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號C12P19/00GK101457245SQ20081010971
公開日2009年6月17日 申請日期2008年6月7日 優(yōu)先權(quán)日2008年6月7日 公開號200810109717.發(fā)明者張紅偉 申請人:張紅偉