專利名稱：：多發(fā)性骨髓瘤的檢測(cè)方法及抑制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種以通過觀察多發(fā)性骨髓瘤的基因型來(lái)早期診斷多發(fā)性骨髓瘤為目的、通過檢測(cè)人11號(hào)染色體q23.1區(qū)域的基因組擴(kuò)增而檢測(cè)癌癥的方法。而且，本發(fā)明還涉及一種基于對(duì)POU結(jié)構(gòu)域第2類相關(guān)因子1(POUdomain,class2，associatingfactor1(POU2AF1))基因與多發(fā)性骨髓瘤的關(guān)系的認(rèn)識(shí)來(lái)抑制腫瘤增殖的方法。
背景技術(shù)：
：多發(fā)性骨髓瘤(multiplemyeloma,MM)起因于來(lái)源于B細(xì)胞的漿細(xì)胞的異常增殖，據(jù)報(bào)道，其開始治療以后的平均生存期約為3年，5年生存率為10%左右，10年以上的生存率為約3-5%左右，是一種長(zhǎng)期預(yù)后不良的疾病。關(guān)于多發(fā)性骨髓瘤的詳細(xì)情況記載于非專利文獻(xiàn)1中。關(guān)于癌基因與該疾病的關(guān)系，很早即已報(bào)道與c-myc、Bcl-1/2有關(guān)；而且也有報(bào)道認(rèn)為與N-ras、K-ras的點(diǎn)突變、IgH基因群的多個(gè)基因轉(zhuǎn)座異常等有關(guān)。但是，骨髓瘤特異的基因異常尚不清楚。根據(jù)在此之前的研究，一般認(rèn)為，在細(xì)胞分化、增殖的過程中，連鎖引發(fā)了基因的變化，并最終造成腫瘤化。從這點(diǎn)看來(lái)，到底是哪些基因的變化引發(fā)了多發(fā)性骨髓瘤目前還不清楚，所以關(guān)于多發(fā)性骨髓瘤的檢測(cè)方法以及其分型(typing)方法，目前還不存在一種利用基因進(jìn)行的檢測(cè)方法。非專利文獻(xiàn)1:BhawnaSirohi,etal.，Lancet,363,875-87,2004.
發(fā)明內(nèi)容發(fā)明所要解決的技術(shù)問題如果能在基因水平上闡明多發(fā)性骨髓瘤的機(jī)理，在基因水平上就可以做到多發(fā)性骨髓瘤的腫瘤化過程的早期發(fā)現(xiàn)并可以進(jìn)行其惡性程度的診斷，進(jìn)一步，根據(jù)該機(jī)理，也可以篩選、開發(fā)藥劑以及確立治療方法。具體來(lái)說(shuō)，通過鑒定出顯示多發(fā)性骨髓瘤的特征性表現(xiàn)的基因，并以該基因?yàn)橹行倪M(jìn)行技術(shù)上的研究，即可以解決該課題。艮口，本發(fā)明通過鑒定顯示多發(fā)性骨髓瘤等癌癥的特征性表現(xiàn)的基因，以提供一種癌癥檢測(cè)方法和細(xì)胞增殖抑制劑為本發(fā)明所要解決的課題。解決課題的技術(shù)手段以DNA微陣列(DNAmicroarray)為對(duì)象進(jìn)行的比較基因組雜交(ComparativeGenomicHybridization(CGH))、也即陣列CGH法是一種用于解析隨著基因組DNA中的多個(gè)基因的擴(kuò)增以及缺失所致的基因異常的一種簡(jiǎn)便、迅速、優(yōu)良的方法。因此，為了解析與腫瘤化以及腫瘤惡化有關(guān)的基因組上的基因異常，通過篩選CGH陣列上載有的800禾中BAC/PACDNA(TakadaH.,etal.,CancerSci.96,100-105，2005),成功鑒定了促進(jìn)多發(fā)性骨髓瘤的腫瘤化的癌癥基因，即P0U2AF1基因。然后，又成功地發(fā)現(xiàn)，P0U2AF1基因的擴(kuò)增，即P0U2AF1蛋白質(zhì)的增加能夠顯著促進(jìn)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的增殖，而且，當(dāng)抑制P0U2AF1基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物時(shí)，多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的增殖顯著降低，由此完成了本發(fā)明。艮P，根據(jù)本發(fā)明，提供一種癌檢測(cè)方法，其包括以檢體中第ll號(hào)染色體q23區(qū)域的基因的擴(kuò)增為指標(biāo)，對(duì)該檢體的腫瘤化進(jìn)行檢測(cè)和/或分類。優(yōu)選的是，所述基因是RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AFl基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中的任意一個(gè)。優(yōu)選的是，所述擴(kuò)增指標(biāo)是指同正常檢體相比，為1.32倍以上。優(yōu)選的是，所述檢體是多發(fā)性骨髓瘤的檢體。優(yōu)選的是，癌為多發(fā)性骨髓瘤。優(yōu)選的是，提供一種多發(fā)性骨髓的檢測(cè)方法，包括在多發(fā)性骨髓瘤的檢體中，以POU2AF1基因的擴(kuò)增為指標(biāo)，對(duì)該檢體的腫瘤化進(jìn)行檢測(cè)和/或分類。優(yōu)選的是，基因擴(kuò)增可以采用DNA芯片法、Southern印跡法、Northern印跡法、PCR法、實(shí)時(shí)RT-PCR法、FISH法、CGH法、基因擴(kuò)增法、RFLP檢測(cè)法、核苷酸測(cè)序法以及陣列CGH法中的任意一種方法來(lái)檢測(cè)。根據(jù)本發(fā)明的另外一個(gè)方面，提供一種癌檢測(cè)方法，其包括在檢體中，以RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AF1基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中的任意一個(gè)基因的表達(dá)增強(qiáng)為指標(biāo)，對(duì)該檢體的腫瘤化進(jìn)行檢測(cè)和/或分類。根據(jù)本發(fā)明的另外一個(gè)方面，提供一種抑制細(xì)胞增殖的方法，其包括將從RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中選擇的基因的siRNA、shRNA、反義寡核苷酸或功能缺失型基因從體外導(dǎo)入到腫瘤細(xì)胞中。根據(jù)本發(fā)明的另外一個(gè)方面，提供一種抑制細(xì)胞增殖的方法，其包括將從RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中選擇的基因的功能缺失型蛋白質(zhì)在體外導(dǎo)入到腫瘤細(xì)胞中。根據(jù)本發(fā)明的另外一個(gè)方面，提供一種細(xì)胞增殖抑制劑，其包含從RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中選擇的基因的siRNA、shRNA、反義寡核苷酸或功能缺失型基因。根據(jù)本發(fā)明的另外一個(gè)方面，提供一種細(xì)胞增殖抑制劑，其包含從RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中選擇的基因的功能缺失型蛋白質(zhì)。根據(jù)本發(fā)明的另外一個(gè)方面，提供一種激活細(xì)胞增殖的方法，其包括將從RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中選擇的基因在體外導(dǎo)入到該細(xì)胞中。根據(jù)本發(fā)明的另外一個(gè)方面，提供一種細(xì)胞增殖的激活劑，其包括從RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、P0U2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中所選擇的基因。發(fā)明效果根據(jù)本發(fā)明，可以切實(shí)地掌握多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞檢體中的腫瘤分類、腫瘤化的癥候以及腫瘤的恢復(fù)程度。而且，通過抑制多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中擴(kuò)增的POU2AF1基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，可以抑制該多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的增殖。S卩，根據(jù)本發(fā)明，新提供了一種抗腫瘤藥物，其對(duì)顯現(xiàn)出腫瘤化功能的POU2AF1基因的轉(zhuǎn)錄具有抑制作用或含有功能缺失型的由該基因編碼的POU2AF1蛋白質(zhì)。無(wú)論是從根據(jù)腫瘤性質(zhì)的不同而采取不同的治療方法、或者從腫瘤的預(yù)后改善等臨床角度考慮，還是從腫瘤的基礎(chǔ)研究角度考慮，這些藥物都是非常有用的。而且，通過測(cè)定POU2AF1基因的信使RNA的表達(dá)量、或者通過確認(rèn)基因組DNA中的該基因的量，或者通過測(cè)定POU2AF1蛋白質(zhì)的量，可以對(duì)多發(fā)性骨髓瘤患者的腫瘤進(jìn)行遺傳學(xué)的分類。圖1表示使用由28種多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞制備的基因組DNA、采用MGCCancerArray-800型CGH陣列進(jìn)行分析的CGH陣列分析結(jié)果。作為對(duì)照，使用的是來(lái)源于正常人淋巴細(xì)胞株的基因組DNA;在擴(kuò)增或缺失的染色體區(qū)域，相對(duì)于全部細(xì)胞種類(28種)的頻率以在縱軸上的擴(kuò)增(綠色)、缺失(紅色)、在橫軸上的UCSC作圖位置(http:〃genome.ucsc.edu/[versionMay,2004])作為參照的染色體位置的形式被示出。圖2表示在用CGH陣列法確定的11q23區(qū)域的染色體區(qū)域中，采用RPll-792p2的BAC克隆對(duì)AMOl和MOLP-2細(xì)胞進(jìn)行FISH分析的分析結(jié)果。箭頭表示在原本染色體位置上的FISH信號(hào)，楔形表示多拷貝的強(qiáng)擴(kuò)增信號(hào)，顯示發(fā)生了基因擴(kuò)增。圖3表示采用llq23區(qū)域的15種BAC克隆進(jìn)行AMOl和MOLP-2細(xì)胞的FISH分析，由其熒光信號(hào)強(qiáng)度計(jì)算對(duì)應(yīng)的基因組DNA區(qū)域的拷貝數(shù)并做圖(左圖)?？v軸表示在11q23區(qū)域的BAC克隆ID與它們的相對(duì)位置。兩種細(xì)胞的平均染色亮度最高的區(qū)域(均質(zhì)染色區(qū)，homogenouslystainingregions,HSRs)幾乎一致，這兩個(gè)區(qū)域均被定位于RP11-2519與708L7之間約3Mb(megabase)的位置上。右圖表示對(duì)存在于已定位的11q23區(qū)域的AMOl、RDX、ARHGAP20、POU2AFl、SNF1LK2、PPP2R1B、ALG9基因(mRNA)進(jìn)行以簡(jiǎn)易定量為目的的PCR反應(yīng)，然后進(jìn)行3%瓊脂糖凝膠電泳的結(jié)果。最下方表示作為表達(dá)量對(duì)照的GAPDH的結(jié)果。所采用的細(xì)胞株為在11q23區(qū)域有擴(kuò)增的AM01、MOLP-2，還有在該區(qū)域沒有觀察到擴(kuò)增的KMMl、KM-5以及作為對(duì)照的來(lái)源于正常人的LCL(淋巴細(xì)胞克隆)。圖4表示用Western印跡法對(duì)8種多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株的POU2AF1蛋白質(zhì)的表達(dá)量進(jìn)行定量。上部分表示作為蛋白質(zhì)量檢測(cè)對(duì)照的p-肌動(dòng)蛋白的Western印跡結(jié)果。圖中，在POU2AF1中觀察到的2條帶表示同功異構(gòu)體P34和p35。圖的下半部分示出了由FISH測(cè)定的POU2AF1基因在基因組DNA上的拷貝數(shù)。圖5中A表示將2種POU2AF1的siRNA—POU2AF1-A和POU2AF1-B導(dǎo)入到AMOl和KMS-21BM細(xì)胞后的Western印跡法分析結(jié)果。下半部分表示作為蛋白質(zhì)量檢測(cè)對(duì)照的(3-肌動(dòng)蛋白的Western印跡結(jié)果。B、C表示在lxl()4個(gè)AMOl和KMS-21BM細(xì)胞中導(dǎo)入POU2AF1的siRNA以后、將細(xì)胞接種于96孔板中、用WST分析按照一定時(shí)間測(cè)定活細(xì)胞數(shù)的結(jié)果。試驗(yàn)平行3份，重復(fù)進(jìn)行兩次，星號(hào)表示在非配對(duì)t檢驗(yàn)(UnpairedStudent'sttest)中有顯著性差異(p〈0.05)。圖6A表示將全長(zhǎng)POU2AF1基因(p34)的N末端結(jié)合Myc，構(gòu)建用于表達(dá)的表達(dá)載體(pCMV-Tag3-p34-POU2AFl)，將其導(dǎo)入原本內(nèi)源性POU2AF1基因表達(dá)很低的KMS-11細(xì)胞中，進(jìn)行藥劑篩選3周，用細(xì)胞裂解液、經(jīng)Western印跡法和抗Myc抗體檢測(cè)是否有POU2AF1蛋白質(zhì)表達(dá)的結(jié)果。陰性對(duì)照采用在KMS-11細(xì)胞中導(dǎo)入無(wú)外源基因的pCMV-3B的細(xì)胞，將其作為空白對(duì)照(Mock)。B表示將上述轉(zhuǎn)化細(xì)胞在玻璃板上培養(yǎng)、用抗Myc多克隆抗體、Alexa488標(biāo)記的羊抗兔抗體(MolecularProbes公司生產(chǎn))進(jìn)行染色、然后用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察的結(jié)果。同時(shí)，左邊表示用DAPI進(jìn)行核染色的結(jié)果。將兩者的色調(diào)重疊后表示為"疊加"。下方表示的是空白對(duì)照的結(jié)果。C表示的是用WST分析活細(xì)胞數(shù)的形式檢測(cè)了空白對(duì)照和表達(dá)P0U2AF1基因的兩種細(xì)胞的細(xì)胞增殖速度的結(jié)果。圖7表示對(duì)2xl()6個(gè)AMOl和KMS-21BM細(xì)胞株的細(xì)胞，將POU2AF1-A和POU2AF1-B的各個(gè)siRNA(對(duì)KMS-21BM細(xì)胞僅用POU2AF1-B)進(jìn)行基因?qū)搿?8小時(shí)以后，用實(shí)時(shí)RT-PCR分析TNFRSF17基因的表達(dá)的結(jié)果。將作為陰性對(duì)照的在隨機(jī)序列的siRNA存在下的TNFRSF17基因的表達(dá)設(shè)定為100，表達(dá)的相對(duì)量以數(shù)值來(lái)表示。B表示對(duì)由外部基因?qū)攵⒌谋磉_(dá)POU2AF1基因的KMS-ll細(xì)胞株與空白對(duì)照細(xì)胞同時(shí)采用實(shí)時(shí)RT-PCR對(duì)其進(jìn)行TNFRSF17基因表達(dá)的比較分析的結(jié)果。在空白對(duì)照細(xì)胞中TNFRSF17基因的表達(dá)設(shè)定為100，表示相對(duì)的表達(dá)量。C表示利用數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)基因組DNA上的人TNFRSF17基因的5'區(qū)域搜索轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合部位，從而發(fā)現(xiàn)從轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)(+1)上游3642位堿基開始存在有促進(jìn)POU2AF1轉(zhuǎn)錄的八核苷酸序列(下文稱為"octamer")位點(diǎn)。箭頭表示在以后的試驗(yàn)中使用的檢出上述octamer位點(diǎn)的PCR引物。D表示對(duì)AMOl和KMS-ll細(xì)胞(空白對(duì)照、表達(dá)POU2AF1基因的細(xì)胞)的染色質(zhì)來(lái)說(shuō)，對(duì)使用抗POU2AF1蛋白質(zhì)的抗體的免疫沉淀物進(jìn)行PCR驗(yàn)證以檢測(cè)其是否含有octamer位點(diǎn)。PCR引物如圖7C的箭頭所示使用了夾有octamer位點(diǎn)的引物，用抗POU2AF1抗體將各細(xì)胞裂解液免疫沉淀以后，將免疫沉淀物的1/100作為PCR反應(yīng)的模板。圖中"Input"為免疫沉淀前的染色質(zhì)材料，(-)表示沒有免疫沉淀抗體狀態(tài)下的陰性對(duì)照。箭頭表示檢測(cè)出的octamer位點(diǎn)。圖8表示將包含TNFRSF17基因上游的octamer位點(diǎn)的DNA區(qū)域的熒光素酶啟動(dòng)子-報(bào)告基因載體與POU2AF1的異構(gòu)型p34或p35表達(dá)載體同時(shí)導(dǎo)入KMS-ll細(xì)胞中、測(cè)定的發(fā)光結(jié)果，其中所述TNFRSF17基因上游的octamer位點(diǎn)的DNA區(qū)域含有野生型(wt)和突變型(Mut)的octamer位點(diǎn)。將TNFRSF17-wtoctamer設(shè)定為1，顯示相對(duì)的熒光素酶活性。圖9表示用定量PCR法測(cè)定多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞以及由多發(fā)性骨髓瘤臨床檢體建立的初級(jí)細(xì)胞中的POU2AFl、TNFRSF17的基因表達(dá)。用相對(duì)于p-肌動(dòng)蛋白以及p2-微球蛋白(P2M)的比值來(lái)表示(A為細(xì)胞株；B為初級(jí)細(xì)胞)。相關(guān)系數(shù)和P值如各圖右上所示。圖10中的A、B表示采用AMOl細(xì)胞與KMS-21BM細(xì)胞，首先以非特異性序列構(gòu)成的siRNA作為對(duì)照，將POU2AF1基因、TNFRSF17基因的siRNA進(jìn)行基因?qū)耄訮-肌動(dòng)蛋白為指標(biāo)，用定量PCR測(cè)定POU2AF1基因、TNFRSF17基因的表達(dá)，對(duì)照為100，顯示相對(duì)表達(dá)值(A為POU2AF1;B為TNFRSF17)。C表示用WST法檢測(cè)AMOl細(xì)胞與KMS-21BM細(xì)胞中由TNFRSF17基因的siRNA所導(dǎo)致的抑制后(0、2、4、6日后)的活細(xì)胞數(shù)。星號(hào)表示在非配對(duì)t檢驗(yàn)中與對(duì)照相比有顯著性差異(p〈0.05)。具體實(shí)施例方式下面，針對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。(1)癌癥檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明的癌癥檢測(cè)方法的特征是以檢體中第11號(hào)染色體q23區(qū)域的基因擴(kuò)增為指標(biāo)，對(duì)該檢體的腫瘤化進(jìn)行檢測(cè)和/或分類。根據(jù)在此之前的研究，人POU2AFl基因(別名也稱為OBF-l(OCT結(jié)合因子1，OCTbindingfactor1)、BOB-l(B細(xì)胞特異性共活化齊U-l,B-cell-specificcoactivatorOBF-1)、OCA隱B等)的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物己經(jīng)為人所知，是存在于染色體11q23.1上的基因(Junker,S.etal.,Genomics33:143-145,1996)。人POU2AF1基因的堿基序列在NCBI(NationalCenterforBiotechnologyInformation)的數(shù)據(jù)庫(kù)的編號(hào)是NM-006235號(hào)。且人POU2AF1蛋白質(zhì)的氨基酸序列在同一數(shù)據(jù)庫(kù)中被登記為NP-006226號(hào)。人POU2AF1基因的堿基序列如序列編號(hào)1(SEQIDNO:1)所示。POU2AF1蛋白質(zhì)由SEQIDNO:1的堿基序列的第524位至第1294位區(qū)域的堿基編碼構(gòu)成，其氨基酸序列如序列編號(hào)2(SEQIDNO:2)所示。在本說(shuō)明書中，所謂"P0U2AF1基因"是指由上述堿基序列所定義的來(lái)源于人的基因；所謂"POU2AFl蛋白質(zhì)"是指由該P(yáng)OU2AF1基因編碼構(gòu)成的、由上述氨基酸序列所定義的蛋白質(zhì)。人POU2AF1基因編碼構(gòu)成的蛋白質(zhì)具有POU結(jié)構(gòu)域(POU結(jié)構(gòu)域蛋白質(zhì)在其序列中具有被稱為POU特異性結(jié)構(gòu)域和POU同源結(jié)構(gòu)域的共同的DNA結(jié)合序列，用作轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子)，已知與轉(zhuǎn)錄因子OCT1或者OCT2結(jié)合后會(huì)增強(qiáng)其活性。但是，還不知道該人POU2AF1基因是一種與人多發(fā)性骨髓瘤的發(fā)病有關(guān)的重要的癌基因。同樣，存在于第11號(hào)染色體q23區(qū)的基因已知有RDX基因、FDXl基因、ARHGAP20基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因。在NCBI的數(shù)據(jù)庫(kù)中，各基因的RefSeqID分別被登記為RDX(radixin)為NM-002906;FDX1(ferredoxin1,核基因編碼的腺茅立體蛋白質(zhì)(nucleargeneencodingmitochondrialprotein))為雇-004109;ARHGAP20(RhoGTPase激活蛋白20)為NM-020809;LAYN(layilin)為NM-178834;SNF1LK2(SNFl-樣激酶2)為NM-015191;PPP2R1B存在2種剪切變型體(蛋白磷酸化酶2(proteinphosphatase2)(以前為2A)))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))、調(diào)節(jié)亞單元A(regulatorysubunitA)(PR65)、卩同功型(卩isoform)(PPP2R1B)、轉(zhuǎn)錄變體l，或者，蛋白磷酸化酶2(proteinphosphatase2)(以前為2A)))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))))、調(diào)節(jié)亞單元A(regulatorysubunitA)(PR65)、卩同功型(卩isoform)(PPP2R1B)、轉(zhuǎn)錄變體2)，分別為NM-002716或NM-181699;ALG9(天門冬氨酸連接的糖基化9同系物，asparagine-linkedglycosylation9homolog(a-l，2-甘露糖轉(zhuǎn)移酶，S.cerevisiae，alpha-1,2-mannosyltransferase))為NM-024740。如上所述，作為本發(fā)明的癌癥檢測(cè)方法的一個(gè)示例，可以列舉在多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中以檢測(cè)人POU2AFl基因擴(kuò)增為特征的一種方法。作為人P0U2AF1基因擴(kuò)增的檢測(cè)對(duì)象的多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞，最合適的是檢體提供者的活檢細(xì)胞。該檢體細(xì)胞不拘是正常人的骨髓細(xì)胞、血液細(xì)胞還是多發(fā)性骨髓瘤患者的腫瘤細(xì)胞，在實(shí)際中主要是以下述細(xì)胞為對(duì)象經(jīng)檢査結(jié)果懷疑認(rèn)為骨髓有腫瘤化征兆的該病變細(xì)胞，或者，己經(jīng)確定為多發(fā)性骨髓瘤而需要判定其進(jìn)展程度或恢復(fù)程度的多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞等。當(dāng)由本發(fā)明的檢測(cè)方法而認(rèn)為在"據(jù)檢査結(jié)果懷疑有骨髓腫瘤化病變部位時(shí)的病變細(xì)胞"中，發(fā)現(xiàn)人POU2AFl擴(kuò)增時(shí)，其表示該病變細(xì)胞正在向腫瘤化發(fā)展或已經(jīng)處于腫瘤化狀態(tài)、而且惡性程度在持續(xù)增高，需要立即進(jìn)行實(shí)質(zhì)治療(實(shí)質(zhì)的化學(xué)療法等)。而認(rèn)為在"雖然已經(jīng)確定為多發(fā)性骨髓瘤，但是需要判定其類型的多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞"中，發(fā)現(xiàn)人POU2AF1擴(kuò)增時(shí)，其表示需要進(jìn)行該腫瘤細(xì)胞的分類、進(jìn)行適當(dāng)?shù)膶?shí)質(zhì)治療(實(shí)質(zhì)的化學(xué)療法等)。可對(duì)作為檢體而采集的多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行必要的處理，例如對(duì)采集的細(xì)胞進(jìn)行調(diào)節(jié)其DNA或RNA，作為進(jìn)行本檢測(cè)方法的對(duì)象。本發(fā)明中，如上所述，可以通過檢測(cè)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中的人POU2AF1基因的擴(kuò)增，對(duì)該細(xì)胞的腫瘤化進(jìn)行檢測(cè)和/或分類。本發(fā)明中，以檢體中第11號(hào)染色體q23區(qū)域的基因的擴(kuò)增為指標(biāo)來(lái)對(duì)檢體的腫瘤化進(jìn)行檢測(cè)和/或分類。對(duì)需進(jìn)行所述檢測(cè)和/或分類的癌的種類不做特別限定，只要其第11號(hào)染色體q23區(qū)域的基因顯示擴(kuò)增即可。例如為惡性黑色素瘤、惡性淋巴瘤、肺癌、食道癌、胃癌、大腸癌、直腸癌、結(jié)腸癌、輸尿管腫瘤、膽囊癌、膽管癌、膽道癌、乳癌、肝癌、胰腺癌、睪丸腫瘤、上頜癌、舌癌、唇癌、口腔癌、咽癌、喉癌、卵巢癌、子宮癌、前列腺癌、甲狀腺癌、腦腫瘤、皮膚多發(fā)性出血性肉瘤、血管瘤、白血病、真性多血癥、神經(jīng)胚細(xì)胞瘤、視網(wǎng)膜胚細(xì)胞瘤、骨髓瘤、膀胱瘤、肉瘤、骨肉瘤、肌肉瘤、皮膚癌、基底細(xì)胞癌、皮膚附件癌、皮膚轉(zhuǎn)移癌、皮膚黑色素瘤等等，但并不僅僅限于這些。上述中特別優(yōu)選的作為適用對(duì)象的癌是骨髓癌。本發(fā)明方法中，作為擴(kuò)增的指標(biāo)而使用的11號(hào)染色體q23區(qū)域的基因，例如可以列舉為RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、P0U2AF1基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因和ALG9基因。在本發(fā)明的方法中，同正常檢體比較，上述基因的擴(kuò)增量為大于等于1.32倍、優(yōu)選為大于等于1.5倍、更優(yōu)選為大于等于2倍、更優(yōu)選為大于等于3倍、再進(jìn)一步優(yōu)選為大于等于4倍、特別優(yōu)選為大于等于5倍時(shí)，可以判斷為其顯示腫瘤化?？梢灾苯舆M(jìn)行所述人POU2AFl基因等的11號(hào)染色體q23區(qū)域的基因的擴(kuò)增檢測(cè)的代表性的方法可以列舉CGH(comparativegenomichybridization，比較基因組雜交)法、FISH(FluorescenceInSituHybridization,熒光原位雜交)法。這些形式的本發(fā)明的檢測(cè)方法可以對(duì)具有人POU2AF1基因的BAC(BacterialArtificialChromosome,細(xì)菌人工染色體)DNA、YAC(YeastArtificialChromosome,酵母人工染色體)DNA或PAC(PhageArtificialChromosome,噬菌體人工染色體)DNA(下面也稱為BACDNA等)進(jìn)行標(biāo)記后，進(jìn)行FISH時(shí)，即可以檢測(cè)到人POU2AF1基因的擴(kuò)增部分。具體來(lái)說(shuō)，含有人POU2AF1基因的BACDNA可以列舉RP11-262A12、RP11-686G14、RP11-792P2等。采用基因組DNA被固定在其上的基質(zhì)來(lái)進(jìn)行上述方法是合適的，而且是現(xiàn)實(shí)的。對(duì)于批量制造其中基因組DNA被固定于其上的基質(zhì)并將該基質(zhì)投入實(shí)際應(yīng)用來(lái)說(shuō)，由于通常所得到的BACDNA的量很少，所以就需要將該DNA作為基因擴(kuò)增產(chǎn)物而獲得(該基因擴(kuò)增過程也稱為"無(wú)窮化")。在該無(wú)窮化過程中，首先將BACDNA等用識(shí)別4堿基的酶例如Rsal、Dpnl、Hae111等消化以后，加入接頭進(jìn)行連接。接頭為10-30個(gè)堿基、特別合適的是15-25個(gè)堿基組成的寡核苷酸，具有2條互補(bǔ)序列的鏈，經(jīng)退火以后，形成平末端的3'-末端的寡核苷酸需要磷酸化。接下來(lái)，采用與所述接頭的寡核苷酸具有相同序列的引物，通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PolymeraseChainReaction)法進(jìn)行擴(kuò)增，即可以實(shí)現(xiàn)無(wú)窮化。另一方面，可以將各BACDNA等中的特征性的50-70個(gè)堿基的氨基化寡核苷酸作為檢測(cè)用探針。這樣，通過將無(wú)窮化的BACDNA等固定于基質(zhì)上、特別合適的是固定于固體基質(zhì)上，即可以制備出所希望的DNA固定化基質(zhì)。所述固體基質(zhì)優(yōu)選為玻璃板。玻璃等固體基質(zhì)更優(yōu)選通過聚-L-賴氨酸、氨基硅垸、金*鋁等的沉積將該基質(zhì)進(jìn)行包被。點(diǎn)接于基質(zhì)上的上述無(wú)窮化的DNA的濃度優(yōu)選為10pg15pg1。更優(yōu)選為lng/|il200ng/^il。點(diǎn)接量?jī)?yōu)選為lnllpl，更優(yōu)選為10nl100nl。對(duì)固定于基質(zhì)上的各個(gè)樣點(diǎn)的大小和形狀不作特別限定，例如，大小可以為直徑0.01lmm，從上面看的形狀可以為圓形橢圓形。對(duì)干燥樣點(diǎn)的厚度也不作特別限定，為1100pm。進(jìn)一步，對(duì)樣點(diǎn)的個(gè)數(shù)不作特別限定，一般每個(gè)基質(zhì)具有1050,000個(gè)樣點(diǎn)，更優(yōu)選為1005,000個(gè)樣點(diǎn)。雖然各個(gè)DNA的點(diǎn)接次數(shù)在一次至四次的范圍內(nèi)，但優(yōu)選兩次重復(fù)或三次重復(fù)點(diǎn)接。干燥點(diǎn)的制備可以通過采用點(diǎn)樣儀將無(wú)窮化的BACDNA等滴接于基質(zhì)上，形成多個(gè)點(diǎn)以后，將點(diǎn)干燥而制得。點(diǎn)樣儀可以使用噴墨式打印機(jī)、針式陣列打印機(jī)、雙噴射式(注冊(cè)商標(biāo))打印機(jī)，優(yōu)選使用噴墨式打印機(jī)。例如，可以使用Geneshot(日本名古屋市的力'<>株式會(huì)社生產(chǎn))等。這樣，通過將無(wú)窮化的BACDNA等固定于基質(zhì)上，特別合適的是固定于固體基質(zhì)上，即可以制備出所希望的DNA固定化基質(zhì)。另外，作為直接檢測(cè)人P0U2AF1基因擴(kuò)增的手段之一，可以列舉Sorthern印跡法。Sorthern印跡法是將從試樣得到的基因組DNA分離、固定，通過檢測(cè)該基因組DNA與人P0U2AF1基因的雜交來(lái)檢測(cè)試樣中該基因存在的方法。而且，作為直接檢測(cè)人P0U2AF1基因擴(kuò)增的手段之一，也可以使用PCR法。由被檢檢體中分離基因組DNA，用可以全部或局部擴(kuò)增該基因的引物進(jìn)行擴(kuò)增以后，通過定量手段即可以進(jìn)行檢測(cè)。而且，還可以通過Northern印跡法、實(shí)時(shí)RT-PCR法進(jìn)行人P0U2AF1基因的擴(kuò)增檢測(cè)。Northern印跡是一種將由檢體中獲得的mRNA分離、固定，通過檢測(cè)該mRNA與人P0U2AF1基因的雜交、從而檢測(cè)該檢體中該基因的mRNA存在的一種方法。實(shí)時(shí)RT-PCR法是通過逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)進(jìn)行目標(biāo)基因擴(kuò)增、并實(shí)時(shí)測(cè)定的一種方法，根據(jù)擴(kuò)增倍率即可以對(duì)作為模板的mRNA進(jìn)行定量。該定量可以采用熒光色素來(lái)進(jìn)行，有兩種方法。SP:采用在雙鏈DNA中特異性插入(intercalate)發(fā)出熒光的色素(例如，SYBR綠)的方法和采用在擴(kuò)增的DNA序列中的特異性寡核苷酸上結(jié)合有熒光色素的探針的方法。在本發(fā)明方法中，還可以在檢體中以RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、P0U2AF1基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因的任意一個(gè)基因的表達(dá)增強(qiáng)為指標(biāo)，對(duì)該檢體的腫瘤化進(jìn)行檢測(cè)和/或分類，從而檢測(cè)癌癥。例如，在本發(fā)明中，采用針對(duì)POU2AF1蛋白質(zhì)的抗體或抗體片斷來(lái)分析檢測(cè)檢體中的P0U2AF1蛋白質(zhì)的量，以P0U2AF1基因的表達(dá)增強(qiáng)為指標(biāo)，對(duì)該檢體的腫瘤化進(jìn)行檢測(cè)和/或分類，從而檢測(cè)癌癥。對(duì)于POU2AF1基因以外的其它基因表達(dá)，也可以采用針對(duì)該基因編碼的蛋白質(zhì)的抗體或抗體片斷來(lái)進(jìn)行同樣的分析。下面，以P0U2AF1基因的表達(dá)增強(qiáng)為指標(biāo)時(shí)的情況為例進(jìn)行說(shuō)明。本方法中所使用的針對(duì)P0U2AF1蛋白質(zhì)的抗體(下面稱為P0U2AF1抗體)可以以P0U2AF1蛋白質(zhì)的全部或一部分作為抗原、按通常的方法制備而成。所謂"POU2AFl蛋白質(zhì)的一部分"是指由序列編號(hào)2(SEQIDNO:2)中所示POU2AF1蛋白質(zhì)的氨基酸序列中的例如至少6個(gè)連續(xù)氨基酸、優(yōu)選至少約810個(gè)氨基酸、進(jìn)一步更優(yōu)選至少約1120個(gè)氨基酸所組成的多肽。作為抗原的POU2AF1蛋白質(zhì)的全部或一部分的制備方法可以是生物學(xué)方法或化學(xué)合成方法中任意一種。例如，可以通過將上述抗原多次接種于小鼠、豚鼠、兔等動(dòng)物的皮下、肌肉內(nèi)、腹腔內(nèi)、靜脈內(nèi)等，充分免疫以后，從該動(dòng)物采血、分離血清，制備多克隆抗體。例如，可以通過將采用上述抗原免疫后的小鼠脾細(xì)胞與市售的小鼠骨髓瘤細(xì)胞通過細(xì)胞融合制得雜交瘤以后，從該雜交瘤的培養(yǎng)液上清液中或給予該雜交瘤的小鼠的腹水中制得單克隆抗體。通過采用按上述方法制得的POU2AF1蛋白質(zhì)抗體或其片斷，可以分析受試檢體中P0U2AF1蛋白質(zhì)的表達(dá)量。測(cè)定時(shí)，可以使用免疫印跡法、酶免疫測(cè)定法(EIA)、放射免疫測(cè)定法(RIA)、熒光抗體法、免疫細(xì)胞染色等等免疫學(xué)方法、或者Western印跡法等等。這里，所謂"POU2AFl蛋白質(zhì)抗體的片段"是指該抗體的單鏈抗體片段(scFV)等。受試檢體可以采用疑似腫瘤的骨髓檢體、組織切片、血液、淋巴液、咳痰、肺清洗液、尿液、糞便、組織培養(yǎng)上清液等等。(2)抑制細(xì)胞增殖的方法以及細(xì)胞增殖抑制劑根據(jù)本發(fā)明，提供一種抑制細(xì)胞增殖的方法，其包括將從RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AFl基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中選擇的基因的siRNA、shRNA、反義寡核苷酸或功能缺失型基因在體外導(dǎo)入到腫瘤細(xì)胞中。并且，本發(fā)明提供一種細(xì)胞增殖抑制劑，其包括上述siRNA、shRNA、反義寡核苷酸或功能缺失型基因。進(jìn)一步，根據(jù)本發(fā)明，提供一種抑制細(xì)胞增殖的方法，其包括將從RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中選擇的基因的功能缺失型蛋白質(zhì)在體外導(dǎo)入到腫瘤細(xì)胞中；而且，提供一種包含上述功能缺失型蛋白質(zhì)的細(xì)胞增殖抑制劑。siRNA為約20個(gè)堿基(例如為約2123個(gè)堿基)或者不足20個(gè)堿基長(zhǎng)度的雙鏈RNA。通過在細(xì)胞中表達(dá)這種siRNA，即可以抑制作為該siRNA的靶標(biāo)的基因(在本發(fā)明中是RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因)的表達(dá)。只要能夠引發(fā)RNAi，本發(fā)明中所使用的siRNA可以是任何形式。這里，所謂"siRNA"是"短干擾RNA(shortinterferingRNA)"的簡(jiǎn)稱，或者是人工化學(xué)合成的，或者是生物化學(xué)方法合成的，或者是在生物體內(nèi)合成的，或者是40個(gè)堿基以上的雙鏈RNA在體內(nèi)分解為10個(gè)堿基對(duì)以上的短雙鏈RNA。通常，其具有5'-磷酸、3'-OH的結(jié)構(gòu)，3'末端有約2個(gè)突出的堿基。該siRNA與特異性蛋白質(zhì)結(jié)合，形成RISC(RNA-induced-silencing-complex,RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物)。該復(fù)合物能夠識(shí)別與該siRNA具有相同序列的mRNA并與之結(jié)合，發(fā)揮RNaseIII樣的酶活性，在siRNA的中央部將mRNA切斷。優(yōu)選的是，siRNA的序列與作為被切割靶標(biāo)的mRNA的序列100%—致，但是，在siRNA的中央位置以外的堿基不一致的情形下，多數(shù)情況下RNAi的切斷活性還會(huì)部分殘留，所以也可不必100%—致。優(yōu)選的是，siRNA的堿基序列與表達(dá)應(yīng)該被抑制的RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因的堿基序列之間具有相同性的區(qū)域不包含該基因的翻譯起始區(qū)。原因在于由于預(yù)想到在翻譯起始區(qū)中siRNA會(huì)與各種轉(zhuǎn)錄因子、翻譯因子結(jié)合，從而在效果上就會(huì)不能與mRNA結(jié)合，可以預(yù)測(cè)其效果會(huì)降低。因此，具有相同性的序列，優(yōu)選為距離該基因翻譯起始區(qū)20個(gè)堿基，更優(yōu)選為距離該基因翻譯起始區(qū)70個(gè)堿基。具有相同性的序列例如可以是該基因3'末端附近的序列。根據(jù)本發(fā)明的另外一種實(shí)施形式，作為通過RNAi抑制目標(biāo)基因表達(dá)的因子，其還可以使用3'末端具有一個(gè)突出部的短的發(fā)卡式結(jié)構(gòu)的shRNA(shorthairpinRNA)。所謂"shRNA"是指通過在單鏈RNA中包含部分回文結(jié)構(gòu)的堿基序列、從而在分子內(nèi)形成雙鏈結(jié)構(gòu)、形成類似于發(fā)卡一樣的結(jié)構(gòu)的約20個(gè)堿基對(duì)以上的分子。這樣的shRNA被導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)以后，在細(xì)胞內(nèi)被分解為約20個(gè)堿基(代表性地為例如21個(gè)堿基、22個(gè)堿基、23個(gè)堿基)的長(zhǎng)度，與siRNA—樣可以引發(fā)RNAi。如上所述，shRNA由于可以與siRNA—樣引發(fā)RNAi，在本發(fā)明中也可以有效地加以應(yīng)用。shRNA優(yōu)選具有3'突出末端。雖然對(duì)雙鏈部分的長(zhǎng)度并不做特別限定，但優(yōu)選為約10個(gè)核苷酸以上，更優(yōu)選為約20個(gè)核苷酸以上。這里，3'突出末端優(yōu)選為DNA，更優(yōu)選為至少2個(gè)核苷酸以上的DNA，進(jìn)一步更優(yōu)選為24個(gè)核苷酸的DNA。如上所述，在本發(fā)明中，作為可以通過RNAi來(lái)抑制RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因的表達(dá)的因子，可以使用siRNA或者shRNA。siRNA的優(yōu)點(diǎn)在于(1)即便是導(dǎo)入到細(xì)胞內(nèi)部，RNA本身也不會(huì)重組入正常細(xì)胞的染色體中，所以其不是一種能夠引起遺傳給后代的變異的治療方法，安全性較高；和，(2)短雙鏈RNA的化學(xué)合成比較容易，形成雙鏈形式比較穩(wěn)定，等等。而shRNA的優(yōu)點(diǎn)是通過長(zhǎng)期抑制基因表達(dá)進(jìn)行治療時(shí)，可以在細(xì)胞內(nèi)形成轉(zhuǎn)錄有shRNA的載體，然后將其導(dǎo)入到細(xì)胞內(nèi)部。通過本發(fā)明中所使用的RNAi來(lái)抑制RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、P0U2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因表達(dá)的siRNA或者shRNA可以是人工化學(xué)合成，也可以將由正義鏈和反義鏈的DNA序列反向連接形成的發(fā)卡結(jié)構(gòu)的DNA通過T7RNA聚合酶在體外合成RNA而制備。體外合成時(shí)，使用T7RNA聚合酶和T7啟動(dòng)子，由模板DNA可以合成反義和正義的RNA。將它們?cè)隗w外退火以后導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)，即可以引發(fā)RNAi，抑制目標(biāo)基因的表達(dá)。這里，可以采用例如磷酸f5法、或者各種轉(zhuǎn)染試劑(例如oligofectamine、lipofectamine和lipofection)將那些RNA導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)。上述siRNA或者shRNA可以作為細(xì)胞增殖抑制劑使用。本發(fā)明的細(xì)胞增殖抑制劑的給藥方法可以是經(jīng)口給藥或非經(jīng)口給藥(例如靜脈給藥、肌肉給藥、皮下給藥、皮內(nèi)給藥、粘膜給藥、直腸給藥、陰道給藥、患病部位的局部給藥、皮膚給藥等等)、患部直接給藥等。本發(fā)明的制劑作為藥物組合物使用時(shí)，必要時(shí)可以添加藥學(xué)上許可的添加劑。藥學(xué)上許可的添加劑的具體例子可以列舉抗氧化劑、保存劑、著色劑、調(diào)味劑、以及稀釋劑、乳化劑、懸濁劑、溶劑、填料、增量劑、緩沖劑、傳輸介質(zhì)、稀釋劑、載體、賦形劑和/或藥學(xué)佐劑等。但并不僅限于這些。對(duì)本發(fā)明的藥劑的制劑形式不作特別限定。例如可以列舉口服液劑、注射劑、緩釋劑等等。將本發(fā)明的藥劑作為上述制劑而用于處方時(shí)的溶劑可以是水性溶劑也可以是非水性溶劑。進(jìn)一步，本發(fā)明的細(xì)胞增殖抑制劑的有效成分siRNA或者shRNA可以以非病毒載體或病毒載體的形式給藥。當(dāng)為非病毒載體的形式時(shí)，可以使用脂質(zhì)體導(dǎo)入核酸分子的方法(脂質(zhì)體法、HVJ-脂質(zhì)體法、陽(yáng)離子脂質(zhì)體法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法、Lipofectamine法等)、顯微注射法、用基因槍與載體(金屬顆粒)一起將核酸分子轉(zhuǎn)入細(xì)胞內(nèi)的方法等。而當(dāng)將siRNA或者shRNA以病毒載體形式對(duì)生物體給藥時(shí)，可以使用重組腺病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒等病毒載體。在無(wú)毒化的逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒、腺病毒伴隨病毒、皰疹病毒、牛痘病毒、痘病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、辛德比斯病毒(Sindbisvirus)、仙臺(tái)病毒、SV40等DNA病毒或RNA病毒中導(dǎo)入能夠表達(dá)siRNA或者shRNA的DNA，使細(xì)胞或組織被該重組病毒感染，即可以將基因?qū)爰?xì)胞或組織中。根據(jù)使用目的、疾病的嚴(yán)重程度、患者年齡、體重、性別、既往史、或者有效成分siRNA或者shRNA的種類，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以決定本發(fā)明的細(xì)胞增殖抑制劑的給藥量。雖然siRNA或者shRNA的給藥量不作特別限定，例如可為約0.1ng/kg/日約100mg/kg/日，優(yōu)選為約lng/kg/日約10mg/kg/日。一般是給藥后13日可見RNAi的效果。因此，優(yōu)選以1日一次3日一次的頻率給藥。使用表達(dá)載體時(shí)，可以按一周左右給藥一次。本發(fā)明中，也可以將反義寡核苷酸作為細(xì)胞增殖抑制劑使用。本發(fā)明中所使用的反義寡核苷酸為與RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、P0U2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因的DNA序列中的連續(xù)5100個(gè)堿基序列互補(bǔ)的、或雜交的核苷酸，也可以是DNA或RNA任意一個(gè)，或者，只要在功能上沒有損害，也可以是它們的修飾物。在本說(shuō)明書中，所謂"反義寡核苷酸"，不僅指與構(gòu)成DNA或mRNA的預(yù)定區(qū)域的核苷酸相對(duì)應(yīng)的核苷酸完全互補(bǔ)的核苷酸，只要DNA或mRNA與寡核苷酸能夠穩(wěn)定雜交，也可以存在一些錯(cuò)配。也可以對(duì)反義寡核苷酸進(jìn)行修飾。通過適當(dāng)?shù)男揎棧摲戳x寡核苷酸在生物體內(nèi)很難分解，更加穩(wěn)定，從而可以阻礙ITIIa。這種修飾后的寡核苷酸可以列舉為S-oligo型(硫代磷酸酯型)、C-5噻唑型、D-oligo型(磷酸二酯型)、M-oligo型(甲基磷酸酯型)、肽核酸型、磷酸二酯鍵型、C-5丙烯基嘧啶型、2-0-丙基核糖、2'-甲氧基乙氧基核糖型等修飾型的反義寡核苷酸。而且，反義寡核苷酸也可以是通過將構(gòu)成磷酸基團(tuán)的氧原子的至少一部分為硫原子取代而被修飾。這種反義寡核苷酸的核酸酶耐受性、水溶性、對(duì)RNA的親和性特別優(yōu)異。將構(gòu)成磷酸基團(tuán)的氧原子的至少一部分為硫原子取代而被修飾的反義寡核苷酸例如可以是S-01igO型等的寡核苷酸。反義寡核苷酸的堿基數(shù)優(yōu)選為小于等于50個(gè)，更優(yōu)選為小于等于25個(gè)。堿基數(shù)過多會(huì)導(dǎo)致寡核苷酸的合成的工夫與成本大大增加，收率也會(huì)降低。而反義寡核苷酸的堿基數(shù)為大于等于5個(gè)，優(yōu)選為大于等于9個(gè)。堿基數(shù)小于等于4個(gè)時(shí)，對(duì)目標(biāo)基因的特異性降低，所以是不優(yōu)選的。反義寡核苷酸(或其衍生物)可以通過通常的方法合成，例如，通過市售的DNA合成裝置(例如AppliedBiosystems公司制造的等等)即可以很容易地合成。作為合成法，采用Phosphoroamidite的固相合成法、采用氫膦酸酯的固相合成法等等均可以獲得。在本發(fā)明中，當(dāng)反義寡核苷酸用作細(xì)胞增殖抑制劑時(shí)，一般是以包含反義寡核苷酸和制劑用添加物(載體、賦形劑等)的藥物組合物的形式提供的?？梢詫?duì)包括人在內(nèi)的哺乳動(dòng)物以藥物形式給予反義寡核苷酸。對(duì)反義寡核苷酸的給藥途徑不作特別限定，經(jīng)口給藥或非經(jīng)口給藥(例如肌肉給藥、靜脈給藥、皮下給藥、腹腔給藥、鼻腔等粘膜給藥、或者吸入給藥等)中的任意一種均可。對(duì)反義寡核苷酸的制劑形式不作特別限定。經(jīng)口給藥的制劑例如可以列舉片劑、膠囊劑、細(xì)粒劑、粉末劑、顆粒劑、口服液劑、糖漿劑等；非經(jīng)口給藥的制劑例如可以列舉注射劑、滴劑、栓劑、吸入劑、黏膜吸收劑、皮膚吸收劑、滴鼻劑、滴耳劑等等。包含反義寡核苷酸的藥劑的形式、可使用的制劑用添加物、制劑的制造方法等本領(lǐng)域技術(shù)人員均可適當(dāng)?shù)剡x擇。反義寡核苷酸的給藥量可以綜合考慮患者的性別、年齡、體重、疾病的嚴(yán)重程度、給藥目的為預(yù)防還是治療、或者其它合并癥狀的有無(wú)等等而適當(dāng)?shù)剡x擇，但一般給藥量為約0.1嗎/kg體重/日100mg/kg體重/日，優(yōu)選為約0.1嗎/kg體重/日10mg/kg體重/日。本發(fā)明中，也可以將RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、P0U2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因的功能缺失型基因作為細(xì)胞增殖抑制劑使用。所謂"功能缺失型基因"是指在該基因中導(dǎo)入變異以使其功能缺失的基因。具體來(lái)說(shuō)，與此相對(duì)應(yīng)的基因是翻譯成一般被稱為突變蛋白質(zhì)的基因，突變蛋白質(zhì)是指由該基因形成的氨基酸序列中至少一個(gè)組成氨基酸缺失、至少一個(gè)組成氨基酸被別的氨基酸取代、至少一個(gè)氨基酸被附加等原本固有的功能喪失了的蛋白質(zhì)。當(dāng)功能缺失型基因作為細(xì)胞增殖抑制劑使用時(shí)，可以通過將作為有效成分的上述基因與基因治療劑中通常使用的基劑共同配合而制備。而且，當(dāng)將上述基因重組入病毒載體時(shí)，制備含有該重組載體的病毒粒子，將其與基因治療劑中通常使用的基劑共同配合。上述基劑可以使用通常注射液中使用的基劑，例如，蒸餾水、氯化鈉或氯化鉀與無(wú)機(jī)鹽的混合物等的鹽溶液、甘露醇、乳糖、葡聚糖、葡萄糖等的溶液、甘氨酸、精氨酸等的氨基酸溶液、有機(jī)酸溶液或鹽溶液與葡萄糖溶液的混合溶液等?；蛘?，根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的常用方法，也可以在這些基劑中使用滲透壓調(diào)節(jié)劑、pH調(diào)節(jié)劑、植物油、表面活性劑等佐劑，以溶液、懸濁液、分散液的形式配制成注射劑。這些注射劑可以通過粉末化、凍干等操作制備成用時(shí)溶解的制劑。功能缺失型基因的給藥形式可以是通常的靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)等全身給藥，或者也可以是局部注射或經(jīng)口給藥等局部給藥方式。給藥時(shí)，也可以采用與插管技術(shù)、基因?qū)爰夹g(shù)、或者外科手術(shù)等的組合給藥形式。功能缺失型基因的給藥量因患者年齡、性別、癥狀、給藥途徑、給藥次數(shù)、劑型等等而異，但一般成年人每日攝入的重組基因的重量在l嗎/kg體重至1000mg/kg體重左右的范圍內(nèi)。優(yōu)選為從10]ug/kg體重至100mg/kg體重左右的范圍內(nèi)。對(duì)給藥次數(shù)不作特別限定。上述本發(fā)明的各種基因治療劑也可以在按常法制備的脂質(zhì)體懸濁液中添加基因、通過冷凍后融解而制得。制備脂質(zhì)體的方法有薄膜震蕩法、超聲波法、逆相蒸發(fā)法、表面活性劑去除法等。優(yōu)選的是，在超聲波處理脂質(zhì)體懸浮液以后，添加基因可以提高基因的包封率。包封有基因的脂質(zhì)體可以直接或與水、生理鹽水等混懸后靜脈給藥。進(jìn)一步，本發(fā)明還可以將從RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、P0U2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中選擇的基因的功能缺失型蛋白質(zhì)用作細(xì)胞增殖抑制劑(即，蛋白質(zhì)制劑)。例如，將P0U2AF1基因的功能缺失型蛋白質(zhì)作為細(xì)胞增殖抑制劑使用時(shí)，可以以藥物組合物的形式使用，該藥物組合物包含作為有效成分的功能缺失型P0U2AF1蛋白質(zhì)或其功能缺失型的等同蛋白質(zhì)、制劑用添加物(例如載體、賦形劑等)。對(duì)上述蛋白質(zhì)制劑的形式不作特別限定。經(jīng)口給藥的制劑例如可以列舉片劑、膠囊劑、細(xì)粒劑、粉末劑、顆粒劑、口服液劑、糖漿劑等；非經(jīng)口給藥的制劑例如可以列舉注射劑、滴劑、栓劑、吸入劑、黏膜吸收劑、皮膚吸收劑等等。對(duì)上述蛋白質(zhì)制劑的給藥途徑不作特別限定，經(jīng)口給藥或非經(jīng)口給藥(例如肌肉給藥、靜脈給藥、皮下給藥、腹腔給藥等粘膜給藥、或者吸入給藥等等)中的任意一種均可。上述蛋白質(zhì)治療劑的給藥量因患者年齡、性別、癥狀、給藥途徑、給藥次數(shù)、劑型等等而異，但一般成年人每日的攝入量在0.001ng/kg體重1000iig/kg體重左右的范圍內(nèi)。優(yōu)選為在0.001嗎/kg體重10(Hig/kg體重左右的范圍內(nèi)。對(duì)給藥次數(shù)不作特別限定。上述本發(fā)明的細(xì)胞增殖抑制劑可以以其有效劑量通過對(duì)包括人在內(nèi)的哺乳動(dòng)物進(jìn)行給藥用于抑制腫瘤。而且，上述抗腫瘤劑也可以以其預(yù)防和/或治療有效劑量通過對(duì)包括人在內(nèi)的哺乳動(dòng)物進(jìn)行給藥用于預(yù)防和/或治療腫瘤。(3)細(xì)胞增殖的激活方法以及細(xì)胞增殖激活劑根據(jù)本發(fā)明，進(jìn)一步提供一種激活細(xì)胞增殖的方法，其包括將從RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中選擇的基因在體外導(dǎo)入到細(xì)胞中。而且提供一種包括上述基因的細(xì)胞增殖激活劑。在處理P0U2AF1基因時(shí)，基因也可以是本領(lǐng)域技術(shù)人員采用公知的技術(shù)從培養(yǎng)細(xì)胞等中獲得的cDNA，或者也可以是基于本說(shuō)明書SEQIDNO:l所述的堿基序列，通過PCR法等進(jìn)行酶學(xué)合成得到的DNA。當(dāng)通過PCR法來(lái)獲取具有SEQIDNO:1所述堿基序列的DNA的時(shí)候，使用人染色體DNA或cDNA文庫(kù)作為模板，設(shè)計(jì)可以擴(kuò)增SEQIDNO:1所述堿基序列的引物，使用該引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR擴(kuò)增的DNA片斷在大腸桿菌等宿主體內(nèi)可以克隆進(jìn)入能夠擴(kuò)增的適當(dāng)?shù)妮d體中。POU2AF1基因的檢測(cè)探針或引物的制備、以及目的基因的克隆等等操作對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)均是已知的，例如，可以參照1989年冷泉港實(shí)驗(yàn)室(冷泉港，紐約)編著的"分子克隆實(shí)驗(yàn)手冊(cè)(第2版)"，或JohnWiley&Sons19871997年出版的"CurrentProtocolsinMolecularBiology,Supplement138"等記載的方法進(jìn)行制備。而當(dāng)處理的是POU2AF1基因以外的其它基因時(shí)，可以按與POU2AF1基因的情形同樣進(jìn)行。從RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AFl基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中選擇的基因可以重組入載體中以重組載體的形式使用。載體為病毒載體或動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)用載體，優(yōu)選使用病毒載體。作為病毒載體，可以列舉逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、腺病毒載體、腺病毒伴隨病毒載體、桿狀病毒載體、牛痘病毒載體、慢病毒載體等。其中，由于逆轉(zhuǎn)錄病毒載體在感染細(xì)胞以后病毒基因組整合進(jìn)入宿主染色體內(nèi)，從而可以使整合進(jìn)入載體內(nèi)的外源基因能夠穩(wěn)定、長(zhǎng)期地表達(dá)，所以特別優(yōu)選使用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)用載體例如可以采用pCXN2(Gene,1991年第108巻第193-200頁(yè))或PAGE207(日本特開平6-46841號(hào)公報(bào))或其變體等。將上述重組載體導(dǎo)入到適當(dāng)?shù)乃拗髦羞M(jìn)行轉(zhuǎn)化，對(duì)得到的轉(zhuǎn)化體進(jìn)行培養(yǎng)即可以進(jìn)行生產(chǎn)。當(dāng)重組載體為病毒載體時(shí)，導(dǎo)入該載體的宿主可以采用具有產(chǎn)生病毒能力的細(xì)胞，例如，COS-7細(xì)胞、CHO細(xì)胞、BALB/3T3細(xì)胞、HeLa細(xì)胞等等。逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的宿主可以使用YCRE、甲CRIP、MLV等；腺病毒載體及腺病毒伴隨病毒載體的宿主可以是來(lái)源于人胎兒腎臟的293細(xì)胞等?？梢圆捎昧姿徕}法等將病毒載體導(dǎo)入到動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)。而重組載體為動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)用載體時(shí)，導(dǎo)入該載體的宿主可以使用大腸桿菌K12菌株、HB101菌株、DH5a菌株等，大腸桿菌的轉(zhuǎn)化是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。所得到的轉(zhuǎn)化體分別在合適的培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件下培養(yǎng)。例如，大腸桿菌轉(zhuǎn)化體的培養(yǎng)可以使用含有生長(zhǎng)發(fā)育所必需的碳源、氮源、無(wú)機(jī)物以及其它物質(zhì)的pH58左右的液體培養(yǎng)基來(lái)進(jìn)行培養(yǎng)。通常在1543'C培養(yǎng)約824小時(shí)左右。此時(shí)，在培養(yǎng)結(jié)束以后，目的重組載體可以通過通常的DNA分離純化方法制得。動(dòng)物細(xì)胞轉(zhuǎn)化體的培養(yǎng)例如可以使用含有約520%胎牛血清的199培養(yǎng)基、MEM培養(yǎng)基、DMEM培養(yǎng)基等進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)基的pH優(yōu)選為約68。通常在304(TC培養(yǎng)約18~60小時(shí)。此時(shí)，由于含有該載體的病毒粒子釋放于培養(yǎng)上清中，目的重組載體可以經(jīng)病毒粒子濃縮、氯化銫離心純化法、聚乙二醇沉淀法、過濾濃縮法等等進(jìn)行制備。本發(fā)明的細(xì)胞增殖激活劑可以通過將作為有效成分的上述基因或其等同基因與基因治療劑中通常使用的基劑一起配合而制得。而且，當(dāng)將上述基因或其等同基因重組整合進(jìn)入病毒載體中時(shí)，制備含有重組載體的病毒粒子，將其與基因治療劑中通常使用的基劑一起配合。本發(fā)明中的所謂"等同基因"是指在某個(gè)特定基因的堿基序列中有l(wèi)個(gè)至多個(gè)堿基被缺失、被添加或被取代的堿基序列的基因；或者是具有與某個(gè)特定基因的堿基序列在嚴(yán)謹(jǐn)條件下雜交的堿基序列的基因。本發(fā)明所述的"等同基因"優(yōu)選的是具有對(duì)腫瘤化活性的蛋白質(zhì)進(jìn)行編碼的堿基序列的基因。而且，某一基因的等同基因也包括該基因的片段。上述"在堿基序列中1個(gè)至多個(gè)堿基被缺失、被添加或被取代的堿基序列"中，對(duì)"l個(gè)至多個(gè)"的范圍并不作特別限定，例如，其意指1個(gè)至60個(gè)，優(yōu)選為1個(gè)至30個(gè)，更優(yōu)選為1個(gè)至20個(gè)，進(jìn)一步優(yōu)選為1個(gè)至10個(gè)，特別優(yōu)選為意指1個(gè)至5個(gè)左右。上述"在某一特定的堿基序列中具有1個(gè)至多個(gè)堿基被缺失、被添加或被取代的堿基序列的基因"可以通過化學(xué)合成、基因工程方法或誘發(fā)突變等本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任意方法進(jìn)行制備。具體而言，利用上述特定的基因，通過在這些DNA中導(dǎo)入變異即可以獲得上述基因。例如，對(duì)于上述特定基因，可以采用與作為變異原的藥劑接觸的方法、采用紫外線照射的方法、采用基因工程的方法等等來(lái)進(jìn)行。作為基因工程的方法之一，定點(diǎn)特異誘變法由于可以在特定位置上引入特定變異而非常有用，可以參照1989年冷泉港實(shí)驗(yàn)室(冷泉港，紐約)編著的"分子克隆試驗(yàn)手冊(cè)(第2版)"或JohnWiley&Sons19871997年出版的"CurrentProtocolsinMolecularBiology,Supplement138"等記載的方法進(jìn)行制備。上述"在嚴(yán)謹(jǐn)條件下雜交的堿基序列"是指將DNA作為探針使用、采用菌落雜交法、噬菌斑雜交法、或者Southern印記雜交法等而得到的DNA的堿基序列。例如，可以列舉的是，采用固定有來(lái)源于菌落或噬菌斑的DNA或該DNA片段的濾膜，在0.71.0M的NaCl存在下，在65T進(jìn)行雜交以后，使用0.12xSSC溶液(lxSSC溶液含有150mM氯化鈉、15mM檸檬酸鈉)在65"C條件下清洗膜，以此來(lái)鑒定獲得的DNA等。雜交可以參照1989年冷泉港實(shí)驗(yàn)室(冷泉港，紐約)編著的"分子克隆試驗(yàn)手冊(cè)(第2版)"等記載的方法進(jìn)行。在嚴(yán)謹(jǐn)條件下雜交的DNA可以列舉與作為探針使用的DNA堿基序列具有一定程度以上的同源性的DNA，例如，具有70%以上，優(yōu)選80%以上，更優(yōu)選90%以上，進(jìn)一步優(yōu)選93%以上，特別優(yōu)選95%以上同源性的DNA。上述的所謂"具有與某一特定堿基序列在嚴(yán)謹(jǐn)條件下雜交的堿基序列的基因"，如上所述，可以在一定嚴(yán)謹(jǐn)度雜交條件下通過采用菌落雜交法、噬菌斑雜交法、或者Southern印記雜交法等而得到。為了配合作為有效成分的上述基因或其等同基因，所使用的基劑可以使用通常注射液中使用的基劑，例如，蒸餾水、氯化鈉或氯化鉀與無(wú)機(jī)鹽的混合物等的鹽溶液、甘露醇、乳糖、葡聚糖、葡萄糖等的溶液、甘氨酸、精氨酸等氨基酸溶液、有機(jī)酸溶液或鹽溶液與葡萄糖溶液的混合溶液等等?；蛘撸鶕?jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的常用方法，也可以在這些基劑中使用滲透壓調(diào)節(jié)劑、pH調(diào)節(jié)劑、植物油、表面活性劑等佐劑，以溶液、懸濁液、分散液的形式調(diào)制為注射劑。這些注射劑可以通過粉末化、凍干等操作制備為用時(shí)溶解的制劑。本發(fā)明的細(xì)胞增殖激活劑的給藥形式可以是通常的靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)等的全身給藥方式，或者也可以是局部注射或經(jīng)口給藥等局部給藥方式。當(dāng)細(xì)胞增殖激活劑在給藥時(shí)，也可以采用與插管技術(shù)、基因?qū)爰夹g(shù)、或者外科手術(shù)等的組合給藥形式。本發(fā)明的細(xì)胞增殖激活劑的給藥量因患者年齡、性別、癥狀、給藥途徑、給藥次數(shù)、劑型等等而異，但一般成年人每日攝入的重組基因的重量在lpg/kg體重至1000mg/kg體重左右的范圍內(nèi)。優(yōu)選為從10叫/kg體重至100mg/kg體重左右的范圍內(nèi)。對(duì)給藥次數(shù)不作特別限定。下面通過實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)地說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明并不特別限定于以下這些實(shí)施例。實(shí)施例試驗(yàn)材料所使用的28種來(lái)源于多發(fā)性骨髓瘤的細(xì)胞株為由臨床檢體建立的AMOl、KMM1、KM-1、KM-4、KM-5、KM-6、KM-7、KM-ll、KMS-5、KMS陽(yáng)ll、KMS-18、KMS-20、KMS-26、KMS-27、KMS-34、KMS匿12BM、KMS-12PE、KMS-21BM、KMS-21PE、KMS-28BM、KMS匿28PE、HS、ILKM-IO、IL認(rèn)-12、ILKM-13、MOLP-2、MOLP-6、OPM-2以及一種用Epstein-Barr病毒轉(zhuǎn)化的來(lái)源于正常健康人淋巴細(xì)胞的細(xì)胞株。這些細(xì)胞株在10%胎牛血清的存在下在RPMI-1640培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。來(lái)源于臨床檢體中的32人的骨髓檢體獲自名古屋市立大學(xué)醫(yī)院，取得了各患者的同意且得到了該醫(yī)院的倫理委員會(huì)的認(rèn)可。通過采用抗CD-138抗體珠的自動(dòng)磁性細(xì)胞分選系統(tǒng)(德國(guó)美天旎生物技術(shù)公司生產(chǎn))進(jìn)行陽(yáng)性分選來(lái)篩選診斷時(shí)的來(lái)源于多發(fā)性骨髓瘤的細(xì)胞。實(shí)施例l:多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中的人基因區(qū)域的擴(kuò)增及缺失為了擴(kuò)增檢測(cè)出多發(fā)性骨髓瘤中的新型基因，采用由28種多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞制備的基因組DNA，采用MCGCancerArray-800型分析儀來(lái)分析CGH陣列。以來(lái)源于正常人淋巴細(xì)胞的細(xì)胞株的基因組DNA為研究對(duì)象用Cy5進(jìn)行標(biāo)記；以由上述多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞制備的基因組DNA為被檢DNA采用Cy3進(jìn)行標(biāo)記。具體地講，是將DpnII消化基因組DNA(0.5)tig)、分別在0.6mMdATP、0.6mMdTTP、0.6mMdGTP、0.3mMdCTP、0.3mMCy3-dCTP(多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞)或者0.3mMCy5-dCTP(正常細(xì)胞)的存在下，用BioPrimeArrayCGHGenomicLabelingSystem(Invitrogen公司生產(chǎn))進(jìn)行標(biāo)記。Cy3禾口Cy5標(biāo)記的dCTP購(gòu)自AmershamBiosciences公司。在Cot-1DNA(Invitrogen公司生產(chǎn))的存在下將兩種標(biāo)記的基因組DNA加入乙醇中使其沉淀，然后溶解于120^1的雜交混合液(50%甲酰胺、10%硫酸葡聚糖(Dextransulfate)、2xSSC(lxSSC:150mMNaCl/15mM檸檬酸鈉)、4%SDS、pH7.0)中，在37。C孵育30分鐘以后，加到設(shè)于雜交室中的CGH陣列上，在37t:下以3rpm(轉(zhuǎn)/分鐘)的速度邊震蕩邊孵育4872小時(shí)。然后，將CGH陣列在50。/。甲酰胺/2xSSC溶液(pH7.0)中在50。C下清洗15分鐘，接下來(lái)在2xSSC/0.1%SDS中于50。C下清洗15分鐘。風(fēng)干以后，將CGH陣列用GenePix4000B掃描儀(美國(guó)加利福尼亞州AxonInstruments公司制造)監(jiān)測(cè)來(lái)源于Cy3和Cy5的熒光。得到的結(jié)果用GenePixPro6.0成像軟件(美國(guó)加利福尼亞州AxonInstruments公司制造)進(jìn)行分析。將來(lái)源于Cy3的熒光強(qiáng)度的平均值和來(lái)源于Cy5的熒光強(qiáng)度的平均值調(diào)整為相同值，通過求得的Cy3/Cy5的比值來(lái)檢測(cè)出各個(gè)基因的由陣列CGH所得到的量的變化。當(dāng)在基因組中沒有異常時(shí)，Cy3/Cy5的比值為1，而該比值以2為底的log值為正或負(fù)偏離0.4以上時(shí)被判定為基因異常(擴(kuò)增或缺失)。關(guān)于擴(kuò)增和缺失的染色體區(qū)域的異常，參照在縱軸上的擴(kuò)增(綠色)、缺失(紅色)、在橫軸上的UCSC作圖位置(http:〃genome.ucsc.edu/[versionMay,2004])，相對(duì)于全部細(xì)胞株的異常細(xì)胞頻率以染色體位置的形式被示出(圖1)。在lq、7q、8q上出現(xiàn)擴(kuò)增的頻率為50%以上，而在lp、13q、14q、17p、22q上出現(xiàn)缺失的頻率為50%以上。在14q32觀察到了最大頻率的缺失，是隨著在眾多的白血病、骨髓瘤中觀察到的免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)Yl基因(immunoglobulinheavyconstantgamma1gene,IGHG1)的轉(zhuǎn)座的缺失所致。進(jìn)一步，將其分類為高水平擴(kuò)增(log2比值>2.0)、和同源缺失Uog2比值《2.0)，將變化大的基因與被觀察的細(xì)胞一同列出(表1)。表l:根據(jù)陣列CGH分析(MCGCancerArray-800)，在多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中顯示高水平擴(kuò)增(log2比值>2.0)、和同源缺失(log2比值<-2.0)的基因群<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>a根據(jù)UCSCGenomeBrowser(2004年5月裝)b代表性候選的與腫瘤有關(guān)的基因或位于BAC附近的標(biāo)記物在28個(gè)細(xì)胞株中，11株觀察到了同源缺失的基因，在KMS-5細(xì)胞中觀察到9p21.3區(qū)域的MTAP和CDKN2A/pl6的缺失。另外，在28株細(xì)胞株中有11株觀察到了高水平擴(kuò)增的16個(gè)基因。其中，在AMOl和MOLP-2兩株細(xì)胞中，llq23區(qū)的POU2AF1和PPP2R1B基因表現(xiàn)擴(kuò)增。由于基因擴(kuò)增在腫瘤病理學(xué)、臨床上的意義很大，與治療方法密切相聯(lián)，所以對(duì)該llq23區(qū)域進(jìn)行了進(jìn)一步分析。實(shí)施例2:AMOl和MOLP-2細(xì)胞中的FISH分析對(duì)實(shí)施例1用CGH陣列法確定的llq23區(qū)域的染色體區(qū)域，采用RPll-792p2的BAC克隆，按已知方法(InoueJ,OtsukiT,HirasawaA，等在AmJPathol.2004年第165巻第7181頁(yè))進(jìn)行FISH分析(圖2)。兩個(gè)細(xì)胞株在原本染色體位置上的FISH信號(hào)(箭頭)以外，還觀察到了由多拷貝構(gòu)成的強(qiáng)擴(kuò)增信號(hào)(楔形)，從而證實(shí)了確實(shí)發(fā)生了基因擴(kuò)增。實(shí)施例3:由AMOl和MOLP-2細(xì)胞中的FISH分析進(jìn)行擴(kuò)增區(qū)域的精細(xì)定位與構(gòu)成基因的表達(dá)分析采用以RP11-792P2為大致中心的15種BAC克隆進(jìn)行FISH分析，由其熒光信號(hào)強(qiáng)度將對(duì)應(yīng)的基因組區(qū)域的拷貝數(shù)做圖(圖3左)?？v軸表示在llq23區(qū)域BAC克隆ID和它們的相對(duì)位置。平均染色亮度最高的區(qū)域(均質(zhì)染色區(qū)，HSRs)在兩種細(xì)胞間幾乎一致，這兩個(gè)區(qū)域被定位于RP11-25I9與708L7之間約3Mb(megabase)的位置上。接下來(lái)，對(duì)存在于已定位的llq23區(qū)域的AMOKRDX、ARHGAP20、POU2AFl、SNF1LK2、PPP2R1B、ALG9基因進(jìn)行以簡(jiǎn)易定量為目的的PCR反應(yīng)。作為RT-PCR的表達(dá)量對(duì)照，采用已知道表達(dá)量不會(huì)隨細(xì)胞種類、條件變化而變化的GAPDH。從對(duì)數(shù)增長(zhǎng)期的各細(xì)胞提取總RNA以后，按照常法制備cDNA。預(yù)先設(shè)定好各基因的特異的引物和條件，進(jìn)行PCR反應(yīng)后進(jìn)行3。/。瓊脂糖凝膠電泳。用LAS-3000(富士寫真膠巻株式會(huì)社生產(chǎn))測(cè)定凝膠圖像，用MultiGauge軟件(富士寫真膠巻株式會(huì)社生產(chǎn))進(jìn)行圖像分析(圖3右)。所采用的細(xì)胞株除了在11q23區(qū)域有擴(kuò)增的AMOl、MOLP-2以外，還有在該區(qū)域沒有觀察到擴(kuò)增的KMM1、KM-5以及作為對(duì)照的來(lái)源于正常人的LCL(淋巴細(xì)胞克隆)。其定量結(jié)果匯總于表2。表2在11q23區(qū)域中觀察到基因組DNA有擴(kuò)增的區(qū)域的細(xì)胞以及沒有擴(kuò)增的細(xì)胞中，存在于該區(qū)域的基因的表達(dá)分析比較<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>a每個(gè)細(xì)胞株中每個(gè)基因的表達(dá)水平被KMM1和KM-5細(xì)胞株中每個(gè)基因表達(dá)水平的平均值(參考值)相除后作為表達(dá)水平的增加倍數(shù)。用GAPDH標(biāo)準(zhǔn)化，KMM1和KM-5細(xì)胞株具有標(biāo)準(zhǔn)的llq拷貝數(shù)。相對(duì)表達(dá)水平的增加倍數(shù)>2.0時(shí)可以認(rèn)為是顯著的，以黑粗體表示出。1lq23區(qū)域作為擴(kuò)增結(jié)果的顯著過表達(dá)的單個(gè)基因以灰色背景示出。bN.T.表示表達(dá)水平低于定量的下限。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在AMOl和MOLP-2細(xì)胞所定位的區(qū)域中POU2AF1的基因表達(dá)比在基因沒有擴(kuò)增的細(xì)胞(KMMl、KM-5)中的平均表達(dá)量升高4.55.0倍。實(shí)施例4:多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中的P0U2AF1基因的蛋白質(zhì)表達(dá)水平的驗(yàn)證用Western印跡法對(duì)8種多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株的P0U2AF1蛋白質(zhì)的表達(dá)量進(jìn)行了定量(圖4)。將各細(xì)胞溶解于含有蛋白酶抑制劑混合物(羅氏診斷公司生產(chǎn))的RIPA緩沖液U0mMTris-HCl，150mMNaCl，lmMEDTA,1%脫氧膽酸鈉，0.1%SDS,1%TritonX-100,pH7.4)中以后，用BCAarray(Piercechemical公司生產(chǎn))測(cè)定蛋白質(zhì)濃度，將各10貼進(jìn)行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，然后，將其復(fù)印于difluoride膜上，用抗POU2AF1抗體(SantaCruzBiotechnology公司生產(chǎn))、作為對(duì)照的抗(3-肌動(dòng)蛋白抗體(Sigma公司生產(chǎn))進(jìn)行第一次檢測(cè)以后，用結(jié)合了過氧化物酶的二抗、經(jīng)enhancedelectrochemiluminescencesystem(Amersham公司產(chǎn)生)進(jìn)行顯色檢觀!j。圖中，POU2AFl蛋白質(zhì)可以觀察到2條帶，除分子量較小的p34以外，還有p35。p34是p35的轉(zhuǎn)錄后修飾的同功異構(gòu)型，據(jù)報(bào)道，對(duì)OCT結(jié)合因子1的轉(zhuǎn)錄激活的增強(qiáng)效果較高(YuX,等，Immunity,2001年第14巻第157167頁(yè))。圖的下半部分示出了由FISH測(cè)定的POU2AF1基因在基因組DNA上的拷貝數(shù)。與預(yù)想的相同，在基因組DNA中發(fā)現(xiàn)有POU2AFl基因擴(kuò)增的AMOl和MOLP-2細(xì)胞中，相較其它細(xì)胞，觀察到了強(qiáng)的P0U2AF1蛋白表達(dá)。實(shí)施例5:通過向細(xì)胞中添加POU2AF1基因的siRNA對(duì)POU2AF1蛋白質(zhì)的表達(dá)抑制和細(xì)胞增殖的抑制效果將POU2AF1的siRNA設(shè)計(jì)為POU2AF1-A:CACCUUACACCGAGUAUGU(SEQIDNO:3)、POU2AF1-B:GGUUCUGUGUCUGCAGU(SEQIDNO:4)，購(gòu)入(日本Bioservice)以后，用Nucleofector(德國(guó))將200nM的各個(gè)引物導(dǎo)入到發(fā)現(xiàn)有2xl06個(gè)POU2AFl基因表達(dá)的AMOl和KMS-21BM細(xì)胞的基因中。用熒光標(biāo)記的pmaxGFP分析儀一邊監(jiān)測(cè)其效率，一邊同實(shí)施例4一樣進(jìn)行Western印跡分析(圖5A)。對(duì)照釆用抗(3-肌動(dòng)蛋白抗體。與預(yù)想的相同，觀察到了由于siRNA的添加，POU2AFl的表達(dá)被抑制。在"104個(gè)AMOl和KMS-21BM細(xì)胞中導(dǎo)入POU2AF1基因的siRNA以后，將細(xì)胞接種于96孔板中，用水溶性四氮唑鹽(WST)分析(Cellcountingkit-8試劑盒，日本同仁堂生產(chǎn))隨時(shí)地測(cè)定活細(xì)胞個(gè)數(shù)(圖5B、C)。試驗(yàn)平行3份，重復(fù)進(jìn)行兩次，星號(hào)表示在采用沒有對(duì)應(yīng)的Student'sttest法時(shí)兩者有顯著性差別。兩種細(xì)胞也都由于導(dǎo)入了POU2AF1的siRNA而增殖被抑制。實(shí)施例6:KMS-ll細(xì)胞的POU2AF1基因表達(dá)細(xì)胞株的建立、分布、以及對(duì)活細(xì)胞數(shù)的影響的觀察在全長(zhǎng)POU2AFl基因(p34)的N末端結(jié)合Myc，構(gòu)建用于表達(dá)的表達(dá)載體(pCMV-Tag3-p34-POU2AFl)。將其用Nucleofector導(dǎo)入原本內(nèi)源性POU2AF1基因表達(dá)很低的KMS-ll細(xì)胞中，用G418(50叫/ml)進(jìn)行藥劑篩選3周。用細(xì)胞裂解液、經(jīng)Western印跡法和抗Myc抗體檢測(cè)POU2AF1基因表達(dá)的有無(wú)(圖6A)。同時(shí)也準(zhǔn)備了在KMS-ll細(xì)胞中導(dǎo)入無(wú)外源基因的pCMV-3B的細(xì)胞，將其作為空白對(duì)照。與預(yù)想的相同，僅在有基因?qū)氲募?xì)胞中檢測(cè)到了重組POU2AF1蛋白質(zhì)。將上述轉(zhuǎn)化細(xì)胞在ShandonCytospin(美國(guó)Thermo公司生產(chǎn))玻璃板上培養(yǎng)、離心以后，用10%甲酰胺固定，用抗Myc多克隆抗體(CellSignalingTechnology公司生產(chǎn))染色一晚，將反應(yīng)后的抗體用Alexa488標(biāo)記的羊抗兔抗體(MolecularProbes公司生產(chǎn))進(jìn)行染色，用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察。同時(shí)，用DAPI進(jìn)行核染色。兩者的色調(diào)重合后表示為merge(圖6B)。結(jié)果確認(rèn)，P0U2AF1為核內(nèi)蛋白質(zhì)與DAPI同樣都能被核染色，其顯示POU2AFl原本的分布。通過用WST分析活細(xì)胞數(shù)，測(cè)定了空白對(duì)照細(xì)胞和POU2AF1基因表達(dá)細(xì)胞這兩種細(xì)胞的細(xì)胞增殖速度(圖6C)。由于POU2AFl基因的導(dǎo)入，細(xì)胞增殖速度顯著加快，由此確認(rèn)了該基因的顯著促進(jìn)細(xì)胞增殖的效果。實(shí)施例7:POU2AF1基因的調(diào)控基因TNFRSF17根據(jù)采用POU2AF1基因敲除的小鼠試驗(yàn)，已報(bào)道POU2AF1基因與免疫球蛋白基因以外的基因表達(dá)有關(guān)(TeitellMA等，TrendsImmunol.2003年第24巻第546553頁(yè))。與癌的發(fā)生、進(jìn)展、細(xì)胞增殖、細(xì)胞粘連、轉(zhuǎn)移等有關(guān)的基因已知有BAFFR、TNFRSF17(tumornecrosisfactorreceptorsuperfamily,member17)、Bcl國(guó)2、cyclinD3、osteopontin等，通過實(shí)時(shí)RT-PCR分析發(fā)現(xiàn)，在多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株中與POU2AF1基因的表達(dá)和表現(xiàn)唯一同步的基因就是TNFRSF17(數(shù)據(jù)沒有示出)。因此，對(duì)TNFRSF17的基因表達(dá)情況進(jìn)行了詳細(xì)分析(圖7)。首先，對(duì)2xl()6個(gè)AMOl和KMS-21BM細(xì)胞株的細(xì)胞，用Nucleofector將200nM的POU2AF1-A禾卩POU2AF1-B的各個(gè)siRNA(KMS-21BM細(xì)胞中僅為POU2AF1-B)進(jìn)行基因?qū)搿?8小時(shí)以后，用實(shí)時(shí)RT-PCR分析TNFRSF17基因的表達(dá)(圖7A)。結(jié)果證實(shí)，由于兩種細(xì)胞中的POU2AF1基因均被敲除，TNFRSF17基因的表達(dá)降低。同時(shí)制備了實(shí)施例6中的KMS-ll細(xì)胞的POU2AF1基因表達(dá)細(xì)胞株與空白對(duì)照，采用實(shí)時(shí)RT-PCR對(duì)它們進(jìn)行了TNFRSF17基因表達(dá)的比較分析(圖7B)。在這種情況下，發(fā)現(xiàn)在POU2AFl基因被強(qiáng)制表達(dá)的細(xì)胞中，TNFRSF17基因的表達(dá)增強(qiáng)。利用數(shù)據(jù)庫(kù)(RecGroupScan;http:〃www.mgs.bionet.nsc.ru/mgs/programs/yura/RecGroupScanStart.html)對(duì)基因組DNA上的人TNFRSF17基因的5'區(qū)域搜索轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合部位，從而發(fā)現(xiàn)從轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)(+1)上游3642位堿基開始存在有促進(jìn)POU2AFl轉(zhuǎn)錄的octamer位點(diǎn)(圖7C)。接下來(lái)，對(duì)AM01和KMS-ll細(xì)胞(空白對(duì)照、表達(dá)P0U2AF1基因的細(xì)胞)的染色質(zhì)來(lái)說(shuō)，對(duì)使用抗P0U2AF1蛋白質(zhì)的抗體的免疫沉淀物進(jìn)行PCR以驗(yàn)證其是否含有octamer位點(diǎn)(圖7D)。所使用的PCR引物如圖7C的箭頭所示，使用了夾有octamer位點(diǎn)的引物。用抗POU2AF1抗體(SantaCruzBiotechnology公司生產(chǎn))的免疫沉淀物的1/100作為PCR反應(yīng)的模板，Input為免疫沉淀前的染色體材料，(-)表示沒有免疫沉淀抗體狀態(tài)下的陰性對(duì)照。如箭頭所示，在表達(dá)POU2AF1基因的細(xì)胞株中與在表達(dá)內(nèi)源性POU2AF1基因的AMOl細(xì)胞中，均檢測(cè)出了與POU2AF1蛋白質(zhì)結(jié)合的octamer位點(diǎn)。施例8:使用包含了TNFRSF17基因上游的octamer位點(diǎn)的區(qū)域的POU2AF1表達(dá)載體和重組的啟動(dòng)子-報(bào)告基因分析用PCR克隆獲得了含有TNFRSF17基因上游的octamer位點(diǎn)的307個(gè)堿基對(duì)的DNA區(qū)域，將包含野生型(wt:TTTAGCAT)和突變型(Mut:TTCCGCAT)的octamer位點(diǎn)的區(qū)域?qū)氲捷d體pGL3-啟動(dòng)子(Promega)中，分別命名為pGL3-TNFRSF17-野生型octamer和pGL3陽(yáng)TNFRSF17-突變型octamer。采用lipofectamine2000(Invitrogen公司生產(chǎn))將上述兩種熒光素酶啟動(dòng)子-報(bào)告基因載體與pCMV-Tag3-POU2AFl的p34或p35以及校正基因?qū)胄实膬?nèi)標(biāo)載體phRL-TK(Promega公司生產(chǎn))一起導(dǎo)入KMS-ll細(xì)胞中。48小時(shí)以后，采用Dual-LuciferaseReporterAssaysystem(Promega公司生產(chǎn))進(jìn)行發(fā)光測(cè)定。將基因?qū)氲膒GL3-TNFRSF17-野生型octamer和pCMV-Tag3(空白對(duì)照)的值設(shè)定為1，表示相對(duì)的熒光素酶活性(圖8)。POU2AF1的異構(gòu)型p34和p35都為野生型的octamer位點(diǎn)時(shí)，雖然其相較于對(duì)照顯示出較高的報(bào)告基因活性，但由于結(jié)合區(qū)域的變異導(dǎo)致其活性降低，其證實(shí)POU2AF1通過與轉(zhuǎn)錄因子OCT1或OCT2結(jié)合使其活性增強(qiáng)，從而對(duì)TNFRSF17基因的表達(dá)進(jìn)行調(diào)節(jié)。實(shí)施例9:POU2AFl、TNFRSF17兩基因的信使RNA的表達(dá)相關(guān)性用定量PCR法測(cè)定多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞以及由多發(fā)性骨髓瘤臨床檢體建立的初級(jí)細(xì)胞中的POU2AFl、TNFRSF17的基因表達(dá)。用相對(duì)于(3-肌動(dòng)蛋白以及卩2-微球蛋白(!32M)的比值來(lái)表示(圖9A:細(xì)胞株；B:初級(jí)細(xì)胞)。無(wú)論是在細(xì)胞株中還是在初級(jí)細(xì)胞中，P0U2AF1、TNFRSF17兩基因的表達(dá)均高度相關(guān)，兩者均顯示顯著的p值(在非配對(duì)t檢驗(yàn)中表現(xiàn)出顯著性差異(p<0.05))。由此可以看出，在細(xì)胞株中當(dāng)然不用說(shuō)，即便是在臨床檢體中，TNFRSF17基因的表達(dá)由POU2AF1基因的表達(dá)量按正相關(guān)的方式進(jìn)行調(diào)控。實(shí)施例10:使用siRNA后抑制了TNFRSF17基因表達(dá)，所引起的對(duì)細(xì)胞增殖的抑制效果采用高表達(dá)POU2AF1基因的AMOl細(xì)胞與可見有表達(dá)的KMS-21BM細(xì)胞，首先將非特異性序列作為對(duì)照siRNA，將200nMP0U2AF1基因、TNFRSF17基因的siRNA(Dharmacon公司生產(chǎn)，M-011217-00)進(jìn)行基因?qū)耄?8小時(shí)以后，以p-肌動(dòng)蛋白為指標(biāo)，用定量PCR測(cè)定POU2AF1基因、TNFRSF17基因的表達(dá)(圖10A:POU2AF1;B:TNFRSF17)。與預(yù)想一致，由于POU2AF1的siRNA所導(dǎo)致的抑制，POU2AF1基因的表達(dá)當(dāng)然被抑制，但由TNFRSF17基因的siRNA并不能抑制POU2AF1基因的表達(dá)，而由POU2AF1的siRNA所導(dǎo)致的抑制能夠抑制TNFRSF17基因的表達(dá)。這就說(shuō)明，POU2AF1基因是在TNFRSF17基因的上游，調(diào)控TNFRSF17基因的表達(dá)。同時(shí)，用WST法檢測(cè)了AMOl細(xì)胞與KMS-21BM細(xì)胞中由TNFRSF17基因的siRNA所導(dǎo)致的抑制后的活細(xì)胞數(shù)(圖10C)。兩種細(xì)胞都是在由TNFRSF17基因的siRNA導(dǎo)入4天后觀察到了細(xì)胞增殖的顯著被抑制(星號(hào)是非配對(duì)t檢驗(yàn)(p<0.05))。由這些結(jié)果可以看出，TNFRSF17基因的表達(dá)受POU2AF1基因表達(dá)的正調(diào)控，其效果就是顯現(xiàn)出細(xì)胞增殖效果。實(shí)施例的總結(jié)(1)通過陣列CGH法進(jìn)行篩選，將28種來(lái)源于多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的DNA的基因擴(kuò)增的篩選與表達(dá)分析數(shù)據(jù)結(jié)合起來(lái)，確認(rèn)POU2AF1基因表現(xiàn)異常。(2)P0U2AF1基因的表達(dá)位于TNFRSF17基因表達(dá)的上游位置，對(duì)TNFRSF17基因的表達(dá)進(jìn)行正調(diào)控，其效果表現(xiàn)為對(duì)細(xì)胞增殖的正向調(diào)控，具有促進(jìn)細(xì)胞增殖的功能。序列表<110>富士膠片株式會(huì)社國(guó)立大學(xué)法人東京醫(yī)科齒科大學(xué)〈120〉多發(fā)性骨髓瘤的檢測(cè)方法及抑制方法<130>F卜071154-59<150>JPNo.255155/2006<151>2006-09-21〈160>4〈170>PatentInversion3.3〈210>〈211><212>〈213〉13314DNAHomosapiens<400>1gaattccggcaggcgcccatggcgggctgagtcctgcccatgccctggtggcctggaagc60ctgcatgggcgccgtgcaaagatcaacgttttccagaggagcttttgggctcatcactgg120cctggggagggcttgacacggggttcccacagcttgccccacaccaccttcacacccaca180cacagcaggtccccgcggggccggtgcaggctgtggctgcccgcgctgcgctgttgctct240gtcccggctggctggctccgagtgtggggcgctctgggccggggccgctggggcgcgcac3003gtggggtg3C3ggCggCCtggCtgC3g333CgttgC3CCggtgCCtgaggtggg3gg3t360gtgatgacgcggcccacgcagcgggaacccaggcctttaaaaagcccaggaaacagcctc420agctcaagcggtggctccactggaggaaaacacaccccggtctcacattaaagaagccaa480actgtcggcttcaaagagaaaaggcaacatcctgtcacaggccatgctctggcaaaaacc540cacagctccggagcaagccccagccccggcccggccataccagggcgtccgtgtgaagga600gccagtgaaggaactgctgaggaggaagcgaggccacgccagcagtggggcagcacctgc660acctacggcggtggtgctgccccstcsgccctgcctggacatggaaggttctgtgtctgcCtggCtCtCCC3gCCC3CCCCggCC3CCCtCg3gt3tgtgCCCC3tg33gCtgtC3gCtgCgtgtgCCCC3gCt3C3CggtggtggggCCactC3tC3CC33tgtC3CgaC33g33gCtCgggCCC3g3gC3CC3ggC3CCCCtC3CCt3aCCC3CCtCC3CCCtgC3gt3CCggCCtCCCCagCtCCCC3tCtCt3tCCC3g3gCC3gtCgCC3gCtCgttg3CC3tCgSC33gCtgCtgcttaaccacactctctctgtggaaggcttcctgaaactggg3ttttaaaatgagcctgggt3gtC3tttCatg3Ct3CtCtttCt3CgCcttcccttcttccttcccctCCCtCCCtC3tcccctccctcccttcttcctttCC3SCCCCCtCCttCCCttCtCCCtttCC33CCCCttccttcccttctccctttccttcttt3cctc3CttCttttttC33ttctgttCC3ttttggtttt3tgtC333tgttgCC33gtctgtggtttCttgg3333ggCCtCCttCCtCC3gtgCCtCtgt33tttt33g3tgtatgtggtggCCtgagaaagtc3gcc33gggcctsccctgatcctggcgacctacaccacagtgggtccttc720agtgacagaggaggctgccctgtgtgccgg780gcagcccctggccccatggacaccttacac840cccctactcagctgacatgtatgtgcagcc900ctcctcagtgttggcctatgcctctccgcc960cgccacgcccgcagtggggcccccgctgga1020tttcccgtggcctcagcccctttccacact1080ggccccagccctacctgggccccagtttgt1140ccttcaggacatggaagaccccagaagagc1200tttggaggaagaggatagcgacgcctatgc1260ttaggcgtggctcccacctgagtcctgttc1320aattgagccccaggttcatgcttgtttgga1380acagctagaattgtagacctgtaaaccttc1440cttcctccctctcccccatccttccattct1500cttccttccttttcctccctcccttccttc1560ccttccttttcctccctcccttccttccct1620cctccctccctcgcttcttctctctttctt1680gaggtaattatagggattttagcaataaca1740ccatgggctttcatttctgtcacatttcat1800ctgctgaaccatcttagggtcactcacacc1860ggcgggaagaccagccccgacagcacctcc1920gccagagtccttgagctgtcagttcccaca1980<image>imageseeoriginaldocumentpage38</image>gaaaaaaaaaaaaa3314〈210〉2<211>256<212〉PRT<213>Homosapiens〈400〉2MetLeuTrpGinl_ysProThrAlaProGluGinAlaProAlaProAla151015ArgProTyrGinGlyValArgValLysGluProValLysGluLeuLeu202530ArgArgLysArgGlyHisAlaSerSerGlyAlaAlaProAlaProThr354045AlaValValLeuProHisGinProLeuAlaThrTyrThrThrValGly505560ProSerCysLeuAspMetGluGlySerValSerAlaValThrGluGlu65707580AlaAlaLeuCysAlaGlyTrpLeuSerGinProThrProAlaThrLeu859095GinProLeuAlaProl>pThrProTyrThrGluTyrValProHisGlu100105110AlaValSerCysProTyrSerAlaAspMetTyrValGinProValCys"5120125ProSerTyrThrValValGlyProSerSerValLeuAlaTyrAlaSer130135140ProProLeuMeThrAsnValThrThrArgSerSerAlaThrProAla145150155160ValGlyProProLeuGluGlyProGluHisGinAlaProLeuThrTyr165170175PheProTrpProGinProl_euSerThrLeuProThrSerThrLeuGin180185190TyrArgProProAlaProAlaLeuProGlyProGinPheValGinl_eu195200205ProMeSerMeProGluProValLeuGinAspMetGluAspProArg210215220ArgAlaAlaSerSerLeuThrMeAspLysLeuLeuLeuGluGluGlu225230235240AspSerAspAlaTyrAlaLeuAsnHisThrLeuSerValGluGlyPhe245250255〈210〉〈211>〈212〉<213>319隱人工序列〈220〉〈223〉人工序列的描述合成RNA<400>3caccuuacaccgaguaugu〈210〉〈211〉<212><213>417RNA人工序列<220>〈223〉人工序列的描述:合成RNA<400>4gguucuguguCUgC3gU191權(quán)利要求1、一種癌癥檢測(cè)方法，其包括以檢體中第11號(hào)染色體q23區(qū)域的基因擴(kuò)增為指標(biāo)，對(duì)該檢體的腫瘤化進(jìn)行檢測(cè)和/或分類。2、權(quán)利要求1所述的癌癥檢測(cè)方法，所述基因是RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、P0U2AF1基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中的任意一種。3、權(quán)利要求1或2所述的癌癥檢測(cè)方法，所述擴(kuò)增的指標(biāo)是同正常檢體相比，為大于等于1.32倍。4、權(quán)利要求13任意一項(xiàng)中所述的癌癥檢測(cè)方法，所述檢體是多發(fā)性骨髓瘤的檢體。5、權(quán)利要求14任意一項(xiàng)中所述的癌癥檢測(cè)方法，所述癌癥為多發(fā)性骨髓瘤。6、一種多發(fā)性骨髓瘤的檢測(cè)方法，其包括在多發(fā)性骨髓瘤的檢體中，以P0U2AF1基因的擴(kuò)增為指標(biāo)，對(duì)該檢體的腫瘤化進(jìn)行檢測(cè)和/或分類。7、權(quán)利要求16任意一項(xiàng)中所述的癌癥檢測(cè)方法，所述基因的擴(kuò)增可以采用DNA芯片法、Southern印跡法、Northern印跡法、PCR法、實(shí)時(shí)RT-PCR法、FISH法、CGH法、基因擴(kuò)增法、RFLP檢測(cè)法、核苷酸測(cè)序法或陣列CGH法中的任意一種方法來(lái)檢測(cè)。8、一種癌癥檢測(cè)方法，其包括在檢體中，以RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、P0U2AF1基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中的任意一種基因的表達(dá)增強(qiáng)為指標(biāo)，對(duì)該檢體的腫瘤化進(jìn)行檢測(cè)和/或分類。9、一種抑制細(xì)胞增殖的方法，其包括將從RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、P0U2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中選擇的基因的siRNA、shRNA、反義寡核苷酸或功能缺失型基因在體外導(dǎo)入到腫瘤細(xì)胞中。10、一種抑制細(xì)胞增殖的方法，其包括將從RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中選擇的基因的功能缺失型蛋白質(zhì)在體外導(dǎo)入到腫瘤細(xì)胞中。11、一種細(xì)胞增殖抑制劑，其包含從RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中選擇的基因的siRNA、shRNA、反義寡核苷酸或功能缺失型基因。12、一種細(xì)胞增殖抑制劑，其包含從RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中選擇的基因的功能缺失型蛋白質(zhì)。13、一種激活細(xì)胞增殖的方法，其包括將從RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中選擇的基因在體外導(dǎo)入到細(xì)胞中。14、一種細(xì)胞增殖的激活劑，其包含從RDX基因、FDX1基因、ARHGAP20基因、POU2AF1基因、TNFRSF17基因、LAYN基因、SNF1LK2基因、PPP2R1B基因或ALG9基因中所選擇的基因。全文摘要本發(fā)明通過對(duì)多發(fā)性骨髓瘤等癌癥中表現(xiàn)出特征性表現(xiàn)的基因進(jìn)行鑒定來(lái)提供一種癌癥檢測(cè)方法和細(xì)胞增殖抑制劑。本發(fā)明提供一種癌癥檢測(cè)方法，該方法包括以檢體中第11號(hào)染色體q23區(qū)域的基因擴(kuò)增為指標(biāo)來(lái)對(duì)該檢體的腫瘤化進(jìn)行檢測(cè)和/或分類。文檔編號(hào)C12N5/10GK101392285SQ200710140650公開日2009年3月25日申請(qǐng)日期2007年9月21日優(yōu)先權(quán)日2006年9月21日發(fā)明者井上純,井本逸勢(shì),稻澤讓治,晨趙申請(qǐng)人:富士膠片株式會(huì)社;國(guó)立大學(xué)法人東京醫(yī)科齒科大學(xué)