專利名稱：分離核酸的方法，該核酸在提高的溫度下固定于基質(zhì)上的制作方法
分離核酸的方法，該核酸在提高的溫度下固定于基質(zhì)上 本發(fā)明涉及一種改進(jìn)的分離核酸的方法。
通常根據(jù)如下統(tǒng)一的基本模式從植物細(xì)胞、動物細(xì)胞或人類細(xì)胞以及細(xì)胞培養(yǎng)
物或病毒培養(yǎng)物中分離核酸(如DNA和RNA):首先部分地采用蛋白降解酶類消化 含有核酸的原材料。各個組分即可以在隨后步驟中通過多種不同方法進(jìn)行分離。
不可避免地存在于每種細(xì)胞裂解液中的蛋白質(zhì)片段的分離是一個尤其重要的 步驟。該分離可以通過，例如，使蛋白質(zhì)/核酸混合物接觸苯酚和/或氯仿/異戊醇來 進(jìn)行。還可以通過添加諸如鹽酸胍或異硫氰酸胍的變性鹽類將蛋白質(zhì)片段從水相中 沉淀出來。還可以通過添加蛋白酶并隨后除去以降解該蛋白質(zhì)。最終通過選擇性添 加DNA酶或RNA酶來除去不想要的核酸，并得到各自所需的核酸。然而，為了 防止核酸在分離過程中遭受不必要的酶性降解，必須在無菌和無核酸酶的條件下進(jìn) 行操作。核酸的分離也可以通過超速離心來實現(xiàn)。
大部分現(xiàn)有技術(shù)的方法均基于以下兩種分離原理之一
"傳統(tǒng)方法"是基于一種單階段過程，其中，在添加緩沖液(其在大多情況下包 含胍鹽)和有機(jī)提取劑(大多為氯仿或苯酚)之后進(jìn)行提取。不需要的附帶材料然后與 有機(jī)相一起被除去。留在水相中的核酸然后可通過相分離分開并分離。
該方法的主要缺點是，除了使用有毒和有害健康的物質(zhì)(如異硫氰酸胍、苯酚或 氯仿)之外，作為雜質(zhì)留在核酸水溶液中的水溶性材料必須在額外的、非常耗時的 純化步驟中分離。該問題讓使用此方法從植物中分離核酸變得復(fù)雜，例如，這是因 為這些植物中大多含有相當(dāng)量的多糖和此類水溶性物質(zhì)。
考慮到這些缺點，現(xiàn)有技術(shù)中還有一種可選的方法，該方法基于將核酸選擇性 吸附到固態(tài)(通常為礦物質(zhì))載體上(如二氧化硅)。在這種多階段過程中，不同的緩 沖液(裂解、結(jié)合、洗滌和洗脫緩沖液)被依次加入細(xì)胞或病毒裂解液；最后步驟中， 從載體上將純化的核酸洗脫下。
同時，專家圈已經(jīng)研究過在存在離液鹽時核酸結(jié)合到礦物質(zhì)載體的物理化學(xué)原 理。他們認(rèn)為核酸結(jié)合到礦物質(zhì)載體表面是基于水環(huán)境高度有序的結(jié)構(gòu)的破壞，核 酸因此才吸附到礦物質(zhì)材料(尤其是玻璃顆粒和二氧化硅顆粒)表面。
上述方法的一個特別不利之處在于，當(dāng)使用由特別高比例的偽二級原料
(spurious secondary material)增強(qiáng)的樣品時，為了得到期望的高純度，必須考慮合理 的得率損失。
因此，本發(fā)明的目的是提供一種不存在上述從現(xiàn)有技術(shù)中得知的缺點的分離 RNA或DNA的方法，并提供高得率和高純度的核酸。
我們激動地發(fā)現(xiàn)，如果含有核酸的溶液在結(jié)合之前或結(jié)合時被加熱，那么在存 在離液劑和/或醇時，尤其當(dāng)存在離液劑和醇時，核酸與二氧化硅顆粒(優(yōu)選磁性二 氧化硅顆粒)的結(jié)合便能得到改進(jìn)。所述改進(jìn)對病毒RNA、 DNA和人工合成的 RNA，以及其它核酸種類均特別有效。
本發(fā)明的生物材料應(yīng)該理解為粒子或分子基原料。尤其包括病毒、噬菌體和細(xì) 胞(例如，細(xì)菌細(xì)胞、以及人類細(xì)胞、動物細(xì)胞(如白細(xì)胞)或植物細(xì)胞)。尤其地， 本發(fā)明的方法優(yōu)選地適合于從人或動物來源(例如，臨床樣品如血液、血漿、血清、 漱口水、尿液、腦脊髓液、痰、糞便、穿刺(punctates)上皮、涂片、活檢和其它組 織或骨髓樣品)的樣品原料中分離核酸(如DNA或RNA)。
樣品還可以來源于環(huán)境分析、食品分析或分子生物學(xué)研究中，例如，來自細(xì)菌 培養(yǎng)物、病毒培養(yǎng)物、噬菌體裂解液、氣體或水過濾物和擴(kuò)增產(chǎn)物(如PCR)。
天然或修飾的生物材料可以用本發(fā)明的方法進(jìn)行分離。天然生物材料應(yīng)該理解 為與自然發(fā)生的生物材料相比，其結(jié)構(gòu)未經(jīng)不可逆地修飾的材料。然而，并不排除 樣品的其它組分的修飾。例如，當(dāng)需要分離細(xì)胞時，需要真正改變細(xì)胞周圍的介質(zhì)， 而非細(xì)胞本身。當(dāng)需要分離核酸時，其也應(yīng)該是以天然形式，即未經(jīng)切割或通過在 其上偶聯(lián)反應(yīng)性基團(tuán)而修飾。因此，定義的天然生物材料尤其不含生物素化的核酸。 其中，病毒DNA、病毒RNA或來自人或動物樣品材料的細(xì)胞核酸是天然生物材料 的具體例子。
修飾的生物材料包括不天然發(fā)生的材料，例如通過附加反應(yīng)性、可檢測的或穩(wěn) 定化基團(tuán)或固定基團(tuán)進(jìn)行修飾的核酸，例如生物素化的核酸；此外還有合成的DNA 和RNA，例如'武裝(armored)RNA，。
某些情況下，樣品可未經(jīng)預(yù)處理便用于本發(fā)明的方法。然而多數(shù)情況下，樣品 需要通過適當(dāng)手段進(jìn)行消化以釋放樣品中所含的生物材料。消化樣品的方法被本領(lǐng) 域技術(shù)人員所熟知，本質(zhì)上其可以是化學(xué)的、酶的或物理的方法。還可能是這些方 法的組合。
本文中，對不同生物材料采用不同方法似乎更加有利，然而在另一方面，下述
任何一種方法在原理上都是適當(dāng)?shù)牧呀猓陔x子和非離子表面活性劑(例如，溶
于適當(dāng)緩沖液的SDS、 LiDS或Sarcosyl)的幫助下采用離液鹽(例如鹽酸胍(GHCl)、 硫氰酸胍(GTC)、碘化鈉、高氯酸鈉等)進(jìn)行；機(jī)械崩解，通過例如弗氏壓碎器、超 聲、用玻璃球研磨、用鋁研磨、或在液氮中研磨進(jìn)行；酶促裂解，例如采用溶菌酶、 蛋白酶、鏈霉蛋白酶或纖維素酶，或其它能通過商業(yè)渠道購買到的裂解酶；通過噬 菌體或病毒感染裂解細(xì)胞；冷凍干燥；滲透壓休克；微波處理；溫度處理，如加溫、 加熱、或冷凍(如在干冰或液氮)和解凍；堿裂解。
如上所述，所有上述方法代表了本領(lǐng)域熟知的標(biāo)準(zhǔn)裂解方法，可以使用任何一 種方法或其組合。
因此，離液劑和表面活性劑的組合對裂解細(xì)菌細(xì)胞特別有效。用于裂解的示例 用的適當(dāng)?shù)脑噭┮虼税x液劑(例如，GTC或GHC1)和去污劑(例如SDS或 Sarcosyl)。這些裂解劑可以存在于水溶液或緩沖液溶液(即所謂的裂解緩沖液)。任 何適當(dāng)?shù)木彌_液均可用作緩沖液，例如，Tris、 Bicin、 Tricin或磷酸鹽緩沖液。可 選地，裂解劑還可以分別添加。裂解劑的合適濃度和含量隨各系統(tǒng)、細(xì)胞類型等變 化，并且可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員決定，其中，例如，可以采用濃度范圍在2M到 7M的離液劑(例如，GTC、 GHC1或碘化鈉或高氯酸鈉)，O.IM到1M的堿試劑(如， NaOH)，和0.1到50 wt^(重量/體積)的去污劑。此類裂解緩沖液的例子有4M GTC 和1%(重量/體積)Sarcosyl的水溶液。
不同培養(yǎng)條件可能適合于不同的裂解系統(tǒng)并且可從現(xiàn)有技術(shù)中得知。對含有去 污劑和/或離液劑的裂解緩沖液而言，可在例如室溫或升高的溫度(例如在37到65 'C的范圍內(nèi))下進(jìn)行培育。
同樣地，培養(yǎng)時間也可在幾分鐘到最多達(dá)24小時之間變化，例如，從5分鐘 到2小時。對GTC/Sarcosyl裂解緩沖液和細(xì)菌細(xì)胞而言，在例如65'C培育10到 20分鐘被證明是最有利的，但也可根據(jù)需要而改變。對用例如蛋白酶K等進(jìn)行的 酶裂解而言，需要更長的處理時間，例如，超過12小時。
裂解優(yōu)選在存在離液鹽時進(jìn)行，其中這類鹽的濃度在2和8mol/l之間，優(yōu)選地 為4到6mo1/1。離液鹽為，例如，碘化鈉、高氯酸鈉、硫氰酸胍、異硫氰酸胍或鹽 酸胍。然而結(jié)合不限于此類化合物。優(yōu)選地，結(jié)合發(fā)生于醇環(huán)境下。優(yōu)選具有1 到5個碳原子的短鏈、支鏈或直鏈垸醇，如，甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇或 戊醇。烷醇的濃度范圍從1至1」100%(體積/體積)，優(yōu)選從2到80%，更優(yōu)選從5到 70%，還更優(yōu)選從10到60%，最優(yōu)選從15到50%變化。激動人心的是，試驗顯示
尤其在離液劑和醇條件下加熱含有核酸的溶液對病毒RNA和DNA以及對合成的 RNA和其它核酸種類的結(jié)合均有類似的影響。
為了分離核酸，使樣品與支持材料接觸，優(yōu)選的支持材料為上述顆粒，并培養(yǎng) 一段時間，使樣品足以結(jié)合到支持材料上。對核酸而言，適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)時間為10秒 和30分鐘之間。實際上被證明最有利的培養(yǎng)時間的范圍在11+/-10分鐘。
優(yōu)選采用粒度在5到25(im，優(yōu)選地從6至U 15jim，尤其優(yōu)選地從6到10|im和 非?，F(xiàn)在的粒度分布的珠形或球形硅垸化磁性顆粒來分離核酸。能在本發(fā)明的方法 中有利地使用的磁性二氧化硅顆粒描述于國際專利申請WO 01/71732第6頁第29 行到第8頁第22行，且對其所有方面進(jìn)行參考。本發(fā)明中的結(jié)合發(fā)生于36到75 "C的溫度范圍內(nèi)，優(yōu)選地46到7(TC,尤其優(yōu)選地50到65。C和最優(yōu)選地在56'C。 ..變性劑(如二甲基亞砜)對核酸的結(jié)合顯示出類似的效果。
繼培養(yǎng)之后，要從樣品液中分離生物材料(優(yōu)選地為核酸)。在本發(fā)明中，這通 常需要在磁場幫助下，使用磁性二氧化硅顆粒，通過分離結(jié)合到顆粒的核酸而實現(xiàn)。 例如，所述磁性顆?？梢员晃降桨l(fā)生培養(yǎng)的容器的壁上。接下來除去含有未與磁 性顆粒結(jié)合的樣品內(nèi)容物的液體。
所述去除根據(jù)發(fā)生培養(yǎng)的容器的類型而定。適當(dāng)?shù)某ヒ后w的方法步驟為，例 如，用移液管移除或用吸管吸除液體。
如果需要，負(fù)載的磁性顆?？梢杂孟礈煲杭兓淮位蚨啻巍＿x擇適當(dāng)?shù)南礈煲?以使生物材料(如核酸)優(yōu)選地不會從顆粒表面釋放，或者至少不以任何顯著量釋 放，但盡可能洗去任何雜質(zhì)。所述洗滌步驟優(yōu)選地通過將洗滌溶液與負(fù)載的顆粒進(jìn) 行培養(yǎng)而實現(xiàn)，其中，優(yōu)選地，例如通過搖晃或施加不同于第一磁場的磁場來重懸 顆粒。被污染的洗滌溶液優(yōu)選地以與核酸結(jié)合結(jié)束時除去裂解液同樣的方式除去。
可以采用任何常規(guī)的洗滌緩沖液或任何其它適當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)作為洗滌溶液。通常優(yōu) 選具有低或中等離子強(qiáng)度的緩沖液，例如，pH為8的lOmM Tris-HCl、 0-10mM NaCl。然而，還可以采用具有較高鹽濃度的洗滌緩沖液，例如，3M鹽酸胍。同樣 地，可以采用其它用于進(jìn)行洗滌步驟的標(biāo)準(zhǔn)介質(zhì)，如含醇介質(zhì)，例如具有1至lj 5 個碳原子的低級垸醇的溶液，優(yōu)選乙醇水溶液，特別優(yōu)選70%的乙醇水溶液。
采用磁性顆粒能簡化洗滌步驟的操作，其利用了顆粒的磁性聚集作用，分離核 酸結(jié)合介質(zhì)，除去洗滌介質(zhì)并在每當(dāng)本領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)為必要時加入新鮮洗滌介 質(zhì)。
核酸分離步驟以及任何任選的洗滌步驟之后，載有核酸的載體被轉(zhuǎn)移(如重懸或
浸沒)到任何適當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)內(nèi)(如水或低離子強(qiáng)度緩沖液)。
在最后一次洗滌步驟之后可在真空下或通過分離(stripping)液體對磁性顆粒進(jìn) 行短時干燥。
當(dāng)然顯然的是，上述洗滌和干燥步驟不僅適用于純化和/或分離核酸，也適用于 純化和/或分離其它上述生物材料。
根據(jù)載體和后續(xù)工作的性質(zhì)來選擇是否要將核酸從載體上洗脫下來。對特定的 固態(tài)載體如上述磁性顆粒而言，在多數(shù)情況下它們可以直接使用，例如用于PCR 或其它擴(kuò)增方法，此時就不需要將核酸從載體上洗脫下來。而且，對許多DNA檢 測方法或DNA鑒定方法而言，盡管DNA偶爾會與球形的表面接觸并可能通過氫 鍵、離子鍵或其它作用力結(jié)合到許多位置上，仍然有足夠長的DNA可用于與寡核 苷酸雜交和擴(kuò)增，因此洗脫同樣是不必要的。
當(dāng)所述生物材料為天然核酸時，根據(jù)本發(fā)明，需要用低鹽含量的洗脫緩沖液將 核酸從磁性顆粒上除去。此類緩沖液從現(xiàn)有技術(shù)中獲知[Analytical Biochemistry 175,196-201(1988)]。鹽濃度低于0.1mol/l的緩沖液特別適合作為低鹽含量的洗脫緩 沖液。尤其優(yōu)選的洗脫緩沖液含有Tris-HCl。
去離子水也特別適用于洗脫。
如果需要，還可以將RNA與DNA分離并除去，這可以通過在DNA分離步驟 之前破壞RNA來實現(xiàn)，例如，通過添加RNA酶或堿，如NaOH。
通過將本發(fā)明上文所述的細(xì)胞分離與本發(fā)明其它地方所述的核酸分離相結(jié)合， 優(yōu)選在本發(fā)明所述的升高的結(jié)合溫度下以它們的天然形式結(jié)合到優(yōu)選為顆粒形式 的磁性載體材料上，提供一種尤其有利的從細(xì)胞樣品中分離核酸的方法。該實施方 案的優(yōu)勢不僅在于它的簡單與高靈敏度，還在于它通過在升高的溫度下根據(jù)本發(fā)明 將核酸結(jié)合到二氧化硅表面以易于自動化地卻特別地獲得高得率。
作為本發(fā)明的方法的結(jié)果，分離的生物材料可以任何所需方式進(jìn)一步使用。例
如，它可用來作為各種酶反應(yīng)的底物。就以實施例的方式提到的核酸而言，可用于 測序、放射性或非放射性標(biāo)記、含有所述核酸的單或多序列的擴(kuò)增、轉(zhuǎn)錄、與標(biāo)記 有探針的核酸雜交、翻譯或結(jié)合。本發(fā)明方法的一中優(yōu)勢在于，從液體中分離生物 材料，特別是核酸，不僅僅簡單，而且具有高得率和高通過率。


圖1顯示了實時(RT)-PCR之后HCV-RNA的Ct值的平均數(shù)與結(jié)合溫度的關(guān)系。 該圖進(jìn)一步的描述在實施例1中。
圖2顯示了實時(RT)-PCR之后HCV-RNA(圖2a))、 HBV-DNA(圖2b))和'武裝
HIV'(圖2c))的Ct值的平均數(shù)與結(jié)合溫度的關(guān)系。該圖進(jìn)一步的描述在實施例2中。
實施例1
提取病毒RNA和病毒DNA(采用MagAttract Virus Mini M48 Kit (QIAGEN， Hilden，德國))。
400|il血漿、血清或CSF(液態(tài))用市售裂解緩沖液如含有3嗎載體RNA的435pJ QIAGEN裂解緩沖液AL和蛋白酶如80^1重懸于QIAGEN蛋白酶重懸緩沖液的凍 干的QIAGEN蛋白酶處理，并混勻?；旌衔镌?6'C下培養(yǎng)15分鐘。
然后加入磁性二氧化硅顆粒如30|il MagAttract Suspension B (QIAGEN， Hilden， 德國)和525|il異丙醇。然后在8°C、 18°C、 26°C、 36°C、 46°C、 56°C、 65。C或75 'C培養(yǎng)5分鐘(見下文)，其間核酸結(jié)合到磁性二氧化硅顆粒上。分離顆粒之后丟棄 液相，顆粒用洗滌緩沖液如500|il用乙醇重建的QIAGEN洗滌緩沖液AW2洗滌。 重復(fù)后面的洗滌步驟。顆粒然后用500pl乙醇洗滌。分離顆粒之后丟棄乙醇相，并 在室溫下千燥顆粒。接下來用市售的洗脫緩沖液如100pl QIAGEN AVE洗脫緩沖液 洗脫核酸，丟棄磁性二氧化硅顆粒，所述洗出液在75。C加熱超過5分鐘。
按照上述方法處理HCV(RNA病毒)陰性的人血漿。樣品分成同樣的12份，先 回火，然后每份分別在8'C、 18°C、 26°C、 36°C、 46。C、 56°C、 65。C和75。C進(jìn)行結(jié) 合。每份獲得的洗出液進(jìn)行HCV-特異性實時(RT)-PCR。從對應(yīng)于結(jié)合溫度的Ct 值的平均數(shù)來看(圖1)，清楚地知道采用本發(fā)明的方法，溫度范圍從36"C到75i:時 進(jìn)行的結(jié)合，令人印象深刻地解決了作為本發(fā)明的基礎(chǔ)的目標(biāo)。
實施例2
在另一個試驗中，HCV(單鏈RNA病毒)、HBV(雙鏈RNA病毒)和'武裝HIV' (包裝入蛋白鎧甲內(nèi)的合成的RNA)陰性的人血漿根據(jù)上述實施例中描述的方法進(jìn) 行處理。
每種條件下對6份同樣的樣品分別進(jìn)行6輪試驗， 一方面用標(biāo)準(zhǔn)QIAGEN MagAttract Virus Mini M48試驗方法(實施例1中的試驗方法，但在8匸時結(jié)合核酸)， 另外采用修改的MagAttract Virus Mini M48試驗方法，即裂解產(chǎn)物在結(jié)合前先于 56'C回火。每種條件下獲得的洗出液進(jìn)行針對HCV、HBV和HIV的實時(RT)-PCR。 從對應(yīng)于結(jié)合溫度的Ct值的平均數(shù)(如圖2a到圖2c所示)可以很明顯看出，采用本 發(fā)明的方法，在升高的溫度下結(jié)合核酸顯著增加了得率。
權(quán)利要求
1.一種分離和/或純化核酸的方法，所述方法包括以下步驟a)裂解生物樣品，b)在離液序列高的化合物和/或支鏈或直鏈烷醇存在的情況下，將釋放出的核酸固定在基于一種或多種硅-氧化合物的基質(zhì)上，并任選洗滌固定在所述基質(zhì)上的核酸，c)用已知方式分離結(jié)合的核酸，其特征在于，所述核酸的固定是在36℃到75℃的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行的。
2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述固定是在46'C到7(TC的溫度范 圍內(nèi)進(jìn)行的。
3. 如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述固定是在50'C到65'C的溫度范 圍內(nèi)進(jìn)行的。
4. 如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述固定是在56'C的溫度下進(jìn)行的。
5. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述硅-氧化合物為二氧化硅。
6. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述基質(zhì)為具有二氧化硅表面的磁 性顆粒。
7. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述離液序列高的化合物為離液序 列高的鈉鹽或胍鹽。
8. 如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述離液序列高的鈉鹽或胍鹽為碘 化鈉、高氯酸鈉、硫氰酸胍、異硫氰酸胍或鹽酸胍或兩種或多種所述鹽的混合物。
9. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述支鏈或直鏈烷醇為具有1到5 個碳原子的醇。
10. 如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述醇為甲醇、乙醇、異丙醇、支 鏈或直鏈丁醇、戊醇、或所述醇的混合物。
11.如權(quán)利要求9或10所述的方法，其特征在于，所述醇以水溶液形式存在， 其濃度從1到100%(體積/體積)，優(yōu)選地從2到80%，更優(yōu)選地從5到70%,還更 優(yōu)選地從10到60%,最優(yōu)選地從15到50%。
12. 用權(quán)利要求1到11中任一項所述方法分離的核酸。
13. —種在存在離液劑和/或支鏈或直鏈烷醇的情況下將核酸固定在基于硅-氧化 合物的基質(zhì)上的方法，其特征在于，所述核酸的固定是在36。C到75X:的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行的。
14. 如權(quán)利要求13所述的方法，其特征在于，所述固定在具有二氧化硅表面的 基質(zhì)上是在存在具有1到5個碳原子的支鏈或直鏈垸醇或其水溶液時，在46'C到 7(TC的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行的。
15. 如權(quán)利要求14所述的方法，其特征在于，所述固定是在存在甲醇、乙醇、 丙醇、異丙醇、和/或支鏈或直鏈丁醇、或戊醇時，或是在存在所述醇或其混合物 的水溶液時，在5(TC到65'C的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行的。
16. 如權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于，所述固定是在存在濃度范圍從1 到100%(體積/體積)，優(yōu)選地從2到80%，更優(yōu)選地從5到70%,還更優(yōu)選地從10 到60%，最優(yōu)選地從15到50%的甲醇、乙醇、丙醇和/或異丙醇的水溶液時，在溫 度為56'C時進(jìn)行的。
17. 如權(quán)利要求13所述的方法，其特征在于，所述離液序列高的化合物為離液 序列高的鈉鹽或胍鹽。
18. 如權(quán)利要求17所述的方法，其特征在于，所述離液序列高的鈉鹽或胍鹽為 碘化鈉、高氯酸鈉、硫氰酸胍、異硫氰酸胍或鹽酸胍或兩種或多種所述鹽的混合物。
19. 如權(quán)利要求13、 17或18中任一項所述的方法，其特征在于，所述固定在具 有二氧化硅表面的基質(zhì)上是在46X:到7(TC的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行的。
20. 如權(quán)利要求19所述的方法，其特征在于，所述固定是在5(TC到65'C的溫度 范圍內(nèi)進(jìn)行的。
21. 如權(quán)利要求20所述的方法，其特征在于，所述固定是在溫度為65X:時進(jìn)行的。
22. 如權(quán)利要求13所述的方法，其特征在于，所述基質(zhì)為具有二氧化硅表面的 磁性顆粒。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種改進(jìn)的從細(xì)菌、植物、動物或人類細(xì)胞以及細(xì)胞培養(yǎng)物和病毒培養(yǎng)物中分離核酸(如DNA和RNA)的方法。
文檔編號C12N15/10GK101115833SQ200680004094
公開日2008年1月30日 申請日期2006年2月13日 優(yōu)先權(quán)日2005年2月11日
發(fā)明者G·舒爾特, M·斯普倫加-豪斯塞爾, S·費勒克, T·多伊奇曼 申請人:恰根有限公司