專利名稱：高密度脂蛋白中膽甾醇的測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及檢測樣品中高密度脂蛋白中膽甾醇的測定方法、測定用試劑及測定用試劑盒。
背景技術(shù)：
生物體中的脂蛋白根據(jù)比重分成高密度脂蛋白(以下縮寫為HDL)、低密度脂蛋白(以下縮寫為LDL)、極低密度脂蛋白(以下縮寫為VLDL)、乳糜微粒(以下縮寫為CM)，各自由于載脂蛋白的種類不同在生物體內(nèi)起的作用非常不同，脂質(zhì)的成分也各式各樣。已經(jīng)了解到，其中HDL由于會接受來自包括動脈血管壁在內(nèi)的各種組織的膽甾醇，因而和清除積累在細胞內(nèi)的膽甾醇的作用有關(guān)，是預(yù)防以冠狀動脈硬化為主的各種動脈硬化癥等危險的因子，它在血液中的水平作為預(yù)測動脈硬化性疾病的有用指標。
現(xiàn)有的測定HDL中的膽甾醇(以下簡稱HDL膽甾醇)的方法，包括經(jīng)超速離心法、免疫化學(xué)法、電泳法、沉淀法等分離操作和定量膽甾醇的兩步。然而分離操作手續(xù)煩雜，需時長，在可靠性方面也存在問題。因此這種要同時進行分離操作的測定方法效率很低，在實際應(yīng)用中不合適。
為了解決上述問題，近來報道了各種測定方法。例如已知有將血清或血漿放在含有膽甾醇酯水解酶、膽甾醇氧化酶，以及膽汁酸鹽或膽汁酸衍生物或二辛基磺基琥珀酸鹽的緩沖液中，使的與相應(yīng)的酶反應(yīng)，VLDL和LDL中的膽甾醇先于HDL發(fā)生反應(yīng)，測定所生成的過氧化氫后，向反應(yīng)液中加入含有非離子系列的聚氧化乙烯基的表面活性劑，使HDL膽甾醇與相應(yīng)的酶反應(yīng)，特異地分別定量HDL膽甾醇的方法(參見專利文獻1)，還有一種方法是在特定pH和特定的溫度條件下，使血清和含有來自胰臟的膽甾醇酯水解酶、膽甾醇氧化酶、膽汁酸類表面活性劑以及非離子系列的表面活性劑的緩沖液中使的與相應(yīng)的酶反應(yīng)，測定HDL膽甾醇的方法(參見專利文獻2)。在專利文獻2所述方法中，首先LDL膽甾醇與相應(yīng)的酶反應(yīng)，然后HDL膽甾醇與相應(yīng)的酶反應(yīng)，可以測定HDL膽甾醇。然而，這些測定方法需要較長的測定時間，而且未必是特異測定HDL膽甾醇的方法。
作為使HDL以外的脂蛋白凝集然后測定HDL膽甾醇的方法，已知有采用硫酸葡聚糖等使HDL以外的脂蛋白凝集的試劑、二價金屬鹽及經(jīng)化學(xué)修飾的酶進行測定的方法(參見專利文獻3)；有用聚合陰離子等與HDL以外的脂蛋白形成復(fù)合體的試劑、聚氧化乙烯聚氧丙烯縮合物等不溶解脂蛋白的表面活性劑的測定方法(參見專利文獻4)；有采用硫酸葡聚糖等聚合陰離子、二價金屬鹽、特定的非離子性表面活性劑及可與來自樣品的白蛋白不同的白蛋白進行測定的方法(參見專利文獻5)；以及測定血清或血漿中HDL膽甾醇的方法，其特征在于，將血清或血漿用含有脂蛋白分離劑(硫酸葡聚糖等聚合陰離子與錳離子等二價陽離子相組合而成)的溶液處理，將所得的混合液不進行固體和液體的分離處理，在陰離子性表面活性劑(烷基磺酸或膽汁酸及其衍生物)存在的條件下，使其和膽甾醇酯水解酶及膽甾醇氧化酶反應(yīng)，測定生成的過氧化氫的方法(參見專利文獻6)等。
但是，這些使HDL以外的脂蛋白凝集來測定HDL膽甾醇的方法，與以往的標準方法有良好的相關(guān)性，但還存在問題，諸如反應(yīng)產(chǎn)生的凝集物造成的混濁造成不準確性，用堿洗滌反應(yīng)池時，由于與反應(yīng)液中的金屬鹽反應(yīng)生成的金屬氫氧化物析出，造成自動分析裝置的負荷過量等。
使HDL以外的脂蛋白不凝集來測定HDL膽甾醇的方法，已知還有例如使生物樣品和來自胰臟的膽甾醇酯水解酶及膽甾醇氧化酶，在膽汁酸或其鹽以及白蛋白存在的條件下進行反應(yīng)，測定相應(yīng)的酶反應(yīng)消耗的或生成的化合物，從而測定生物樣品中HDL膽甾醇的方法(參見專利文獻7)；在對HDL部分有反應(yīng)選擇性的HLB為16以上的非離子性表面活性劑存在條件下，使檢測樣品與優(yōu)先作用于HDL部分的脂蛋白酯酶和/或膽甾醇酯水解酶，以及膽甾醇氧化酶反應(yīng)，測定檢測樣品中的HDL膽甾醇的方法(參見專利文獻8)等。另外，已知還有用?；垩趸蚁┥嚼婢厶酋?yōu)先將HDL以外的脂蛋白中的膽甾醇轉(zhuǎn)變?yōu)檫^氧化氫，除去生成的過氧化氫后，通過添加聚氧化乙烯烷基醚來進行HDL膽甾醇測定的酶測定法(參見專利文獻9)。
但是，在這些不使HDL以外的脂蛋白凝集而測定HDL膽甾醇的方法中，有時存在由于HDL以外的脂蛋白中的膽甾醇消除得不完全，及對HDL以外的脂蛋白中的膽甾醇會發(fā)生非特異反應(yīng)產(chǎn)生的測定數(shù)據(jù)不準確的問題。
專利文獻1特開昭62-69999號公報專利文獻2特開昭63-126498號公報專利文獻3特開平8-131197號公報專利文獻4特開平8-201393號公報專利文獻5特開平9-285298號公報專利文獻6特開平8-116996號公報專利文獻7國際公開第97/40376號快報專利文獻8國際公開第00/52480號快報專利文獻9特開平9-299號公報發(fā)明內(nèi)容發(fā)明所解決的問題本發(fā)明的目的在于，提供可以簡便且準確地進行測定的HDL膽甾醇測定方法、測定用試劑和測定用試劑盒。
解決問題的手段本發(fā)明涉及以下[1]～[19]項。
一種測定檢測樣品內(nèi)高密度脂蛋白中膽甾醇的方法，該方法包含使檢測樣品與(i)膽甾醇酯水解酶和膽甾醇氧化酶，或(ii)膽甾醇酯水解酶、氧化型輔酶及膽甾醇脫氫酶，在含有選自烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物、聚氧化乙烯烷基胺硫酸鹽、聚氧化乙烯芐基烷基季銨鹽、聚氧化乙烯酸酰胺、氧化烷基胺和烷基丙烯二胺衍生物等構(gòu)成的族中的至少一種物質(zhì)的水溶性介質(zhì)中進行反應(yīng)生成過氧化氫或還原型輔酶；以及測定所生成的過氧化氫或還原型輔酶。
第[1]項所述的方法，水溶性介質(zhì)還包含選自聚合陰離子、膽汁酸衍生物、乙二胺四聚氧化烯烴、聚氧化乙烯烷基胺和聚氧化乙烯鏈烯基胺等構(gòu)成的族中的至少一種物質(zhì)。
第[2]項所述的方法，聚合陰離子是硫酸葡聚糖或其鹽。
第[2]或[3]項所述的方法，膽汁酸衍生物是選自膽酸或其鹽、?；悄懰峄蚱潲}、甘氨膽酸或其鹽、石膽酸或其鹽、脫氧膽酸或其鹽、鵝脫氧膽酸或其鹽、熊脫氧膽酸或其鹽、7-氧代石膽酸或其鹽、12-氧代石膽酸或其鹽、12-氧代鵝脫氧膽酸或其鹽、7-氧代脫氧膽酸或其鹽、豬膽酸或其鹽、豬脫氧膽酸或其鹽、脫氫膽酸或其鹽、通式(I)[化1]R1-CH2-CH(R2)-CH2-SO3-(I)[此通式中，R1表示3-(3-膽丙酰胺基)二甲氨基，R2表示氫原子或羥基]表示的化合物和通式(II)[化2] [此通式中，X表示氫原子或羥基，R3和R43可以相同或相異，表示取代或未取代的烷基，或取代或未取代的烷?；鵠表示的化合物構(gòu)成的族中的至少一種物質(zhì)。
第[2]～[4]任一項所述的方法，水性介質(zhì)還包括白蛋白。
測定高密度脂蛋白中膽甾醇的試劑，其特征在于，含有選自烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物、聚氧化乙烯烷基胺硫酸鹽、聚氧化乙烯芐基烷基季銨鹽、聚氧化乙烯酸酰胺、氧化烷基胺和烷基丙烯二胺衍生物構(gòu)成的族中的至少一種物質(zhì)，膽甾醇酯水解酶，膽甾醇氧化酶及過氧化氫的測定用試劑。
測定高密度脂蛋白中膽甾醇的試劑，其特征在于，含有選自烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物、聚氧化乙烯烷基胺硫酸鹽、聚氧化乙烯芐基烷基季銨鹽、聚氧化乙烯酸酰胺、氧化烷基胺和烷基聚氧丙烯二胺衍生物構(gòu)成的族中的至少一種物質(zhì)，膽甾醇酯水解酶，膽甾醇脫氫酶及氧化型輔酶。
第[7]項所述的試劑，還含有測定還原型輔酶的試劑。
第[6]～[8]任一項所述的試劑，還含有選自聚合陰離子、膽汁酸衍生物、乙二胺四聚氧化烯烴、聚氧化乙烯烷基胺和聚氧化乙烯鏈烯基胺構(gòu)成的族中的至少一種物質(zhì)。
第[9]項所述的試劑，聚合陰離子是硫酸葡聚糖或其鹽。
第[9]或[10]所述的試劑，膽汁酸衍生物是選自膽酸或其鹽、?；悄懰峄蚱潲}、甘氨膽酸或其鹽、石膽酸或其鹽、脫氧膽酸或其鹽、鵝脫氧膽酸或其鹽、熊脫氧膽酸或其鹽、7-氧代石膽酸或其鹽、12-氧代石膽酸或其鹽、12-氧代鵝脫氧膽酸或其鹽、7-氧代脫氧膽酸或其鹽、豬膽酸或其鹽、豬脫氧膽酸或其鹽、脫氫膽酸或其鹽、通式(I)[化3]R1-CH2-CH(R2)-CH2-SO3-(I)[此通式中，R1表示3-(3-膽丙酰胺基)二甲氨基，R2表示氫原子或羥基]表示的化合物和通式(II)[化4]
[此通式中，X表示氫原子或羥基，R3和R4可以相同或相異，表示取代或未取代的烷基，或取代或未取代的烷酰基]表示的化合物構(gòu)成的族中的至少一種物質(zhì)。
第[9]～[11]任一項所述的試劑，還含有白蛋白。
測定高密度脂蛋白中膽甾醇的試劑盒，其特征在于，含有第一試劑及第二試劑，在第一試劑及第二試劑中含有測定過氧化氫的試劑，在第二試劑中含有膽甾醇氧化酶，在第一試劑和第二試劑二者中或其中之一中含有選自烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物、聚氧化乙烯烷基胺硫酸鹽、聚氧化乙烯芐基烷基季銨鹽、聚氧化乙烯酸酰胺、氧化烷基胺和烷基丙烯二胺衍生物構(gòu)成的族中的至少一種物質(zhì)，以及膽甾醇酯水解酶。
測定高密度脂蛋白中膽甾醇的試劑盒，其特征在于，含有第一試劑及第二試劑，在第一試劑中含有氧化型輔酶，在第二試劑中含有膽甾醇脫氫酶，在第一試劑和第二試劑二者中或其中之一中含有選自烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物、聚氧化乙烯烷基胺硫酸鹽、聚氧化乙烯芐基烷基季銨鹽、聚氧化乙烯酸酰胺，氧化烷基胺和烷基丙烯二胺衍生物構(gòu)成的族中的至少一種物質(zhì)，以及膽甾醇酯水解酶。
第[14]項所述的試劑盒，在第一試劑和第二試劑二者中或其中之一中還含有還原型輔酶測定用試劑。
第[13]～[15]任一項所述的試劑盒，在第一試劑和第二試劑二者中或其中之一中還含有選自聚合陰離子、膽汁酸衍生物、乙二胺四聚氧化烯烴、聚氧化乙烯烷基胺和聚氧化乙烯鏈烯基胺構(gòu)成的族中的至少一種物質(zhì)。
第[16]項所述的試劑盒，聚合陰離子是硫酸葡聚糖或其鹽。
第[16]或[17]項所述的試劑盒，膽汁酸衍生物是選自膽酸或其鹽、?；悄懰峄蚱潲}、甘氨膽酸或其鹽、石膽酸或其鹽、脫氧膽酸或其鹽、鵝脫氧膽酸或其鹽、熊脫氧膽酸或其鹽、7-氧代石膽酸或其鹽、12-氧代石膽酸或其鹽、12-氧代鵝脫氧膽酸或其鹽、7-氧代脫氧膽酸或其鹽、豬膽酸或其鹽、豬脫氧膽酸或其鹽、脫氫膽酸或其鹽、通式(I)的[化5]R1-CH2-CH(R2)-CH2-SO3-(I)[此通式中，R1表示3-(3-膽丙酰胺基)二甲氨基，R2表示氫原子或羥基]表示的化合物和通式(II)[化6] [此通式中，X表示氫原子或羥基，R3和R4可以相同或相異，表示取代或未取代的烷基，或取代或未取代的烷?；鵠表示的化合物構(gòu)成的族中的至少一種物質(zhì)。
第[6]～[18]任一項所述的試劑盒，在第一試劑和第二試劑二者中或其中之一中還含有白蛋白。
發(fā)明效果根據(jù)本發(fā)明，提供簡便且準確地進行HDL膽甾醇測定的方法、測定用試劑和測定用試劑盒。
具體實施例方式
本發(fā)明的HDL膽甾醇測定方法，是不去除HDL以外的脂蛋白中的膽甾醇而測定HDL膽甾醇的方法。
本發(fā)明的測定方法中所用的檢測樣品例如有全血、血漿、血清、脊髓液、唾液、羊水、尿、汗、胰液等，優(yōu)選血漿和血清。
本發(fā)明中的膽甾醇酯水解酶，并無特別限制，只要是有水解膽甾醇酯能力的酶即可，例如除來自動物、植物或微生物的膽甾醇酯水解酶，脂蛋白脂肪酶的外等，也可以用通過基因工程手段制造的膽甾醇酯水解酶，脂蛋白脂肪酶等。
膽甾醇酯水解酶既可用未經(jīng)修飾的膽甾醇酯水解酶，也可用經(jīng)化學(xué)修飾過的膽甾醇酯水解酶。還可以用市售品作為膽甾醇酯水解酶。
市售的膽甾醇酯水解酶，例如有膽甾醇酯水解酶“Amano”2(CHE2；天野酶制劑公司制)、膽甾醇酯水解酶“Amano”3(CHE3；天野酶制劑公司制)、脂蛋白脂肪酶(LPL311；東洋紡織公司制)、脂蛋白脂肪酶“Amano”6(LPL6；天野酶制劑公司制)、43kDa脂蛋白脂肪酶(天野酶制劑公司制)、膽甾醇酯水解酶[COE313(化學(xué)修飾的膽甾醇酯水解酶)；東洋紡織公司制]等。另外，本發(fā)明中，也可以將兩種以上的膽甾醇酯水解酶進行組合應(yīng)用。
膽甾醇酯水解酶化學(xué)修飾時，用以修飾該酶的基團(化學(xué)修飾基團)例如有例如以聚乙二醇為主要成分的基團、以聚丙二醇為主要成分的基團、具有聚乙二醇和聚丙二醇共聚物的基團、含水溶性多糖類的基團、磺丙基、磺丁基、聚氨酯基、有螯合功能的基團等，優(yōu)選以聚乙二醇為主要成分的基團。水溶性多糖例如有例如葡聚糖、茁霉多糖、可溶性淀粉等。
化學(xué)修飾膽甾醇酯水解酶所用的試劑(化學(xué)修飾劑)，例如有同時具有上述化學(xué)修飾基，和可以與酶的氨基、羧基、巰基等反應(yīng)的功能基或結(jié)構(gòu)的化合物等。能與酶中氨基反應(yīng)的功能基或結(jié)構(gòu)，例如有羧基、活性酯基(N-羥基琥珀酰亞胺基等)、酸酐、酸性氯化物、醛、環(huán)氧化物基、1，3-丙基磺內(nèi)酯、1，4-丁基磺內(nèi)酯等。能與酶中羧基反應(yīng)的功能基或結(jié)構(gòu)，例如有氨基等。與酶的巰基具有反應(yīng)性的功能基或結(jié)構(gòu)，例如有馬來酰亞胺基、二硫化物、α-鹵代酯(α-碘代酯等)。
化學(xué)修飾劑也可以使用市售產(chǎn)品。市售的化學(xué)修飾劑，例如有具有以聚乙二醇為主要成分的基團和N-羥基琥珀酰亞胺基團的サンブライト(陽光)VFM-4101、サンブライト(陽光)ME-050AS、サンブライト(陽光)DE-030AS(均為日本油脂公司制造)；具有以聚亞烷基二醇為主要成分的基團和酸酐結(jié)構(gòu)的サンブライト(陽光)AKM系列(例如サンブライトAKM-1510等)、サンブライト(陽光)ADM系列、サンブライト(陽光)ACM系列(均為日本油脂公司制造)；具有以聚乙二醇為主要成分的基團和環(huán)氧基的EPOX-3400、M-EPOX-5000(均為Sheawater Polymers公司制造)；具有螯合功能的基團和酸酐結(jié)構(gòu)的二乙烯基三胺基-N，N，N’，N”-五無水二乙酸(無水DTPA同仁化學(xué)公司制造)等。
膽甾醇酯水解酶的化學(xué)修飾可以用例如以下方法進行，但并不僅限于這種方法。首先，將膽甾醇酯水解酶溶解在pH8.0以上的緩沖液(例如HEPES緩沖液)中，在0～55℃，以0.01～500倍摩爾量添加化學(xué)修飾劑，攪拌5分鐘～5小時。在實際的酶反應(yīng)中，化學(xué)修飾過的膽甾醇酯水解酶，不僅是這種反應(yīng)液本身，也可以使用必要時采用超濾膜等除去未反應(yīng)的化學(xué)修飾劑等的酶。
在本反應(yīng)的方法中所用的膽甾醇酯水解酶的濃度沒有特別限定，只要可以進行本發(fā)明的HDL膽甾醇測定即可，不過反應(yīng)液中濃度優(yōu)選0.01～400U/mL，更優(yōu)選0.02～200U/mL。
本發(fā)明中的膽甾醇氧化酶沒有特別限定，只要是有氧化膽甾醇產(chǎn)生過氧化氫能力的酶即可，例如除來自動物、植物或微生物的膽甾醇氧化酶的外，還可以采用通過基因工程手段制備的膽甾醇氧化酶等，也可以用市售的商品，如膽甾醇氧化酶“Amano”1(CHOD1；天野酶制劑公司制造)、膽甾醇氧化酶(CO-PE；KIKKOMAN公司制造)、膽甾醇氧化酶(COO321；東洋紡織公司制造)、膽甾醇氧化酶協(xié)和(協(xié)和發(fā)酵公司制造)等。另外，在本發(fā)明中，也可以將兩種以上的膽甾醇氧化酶組合使用。
膽甾醇氧化酶可以是未經(jīng)修飾的酶，也可以是經(jīng)化學(xué)修飾的酶。經(jīng)化學(xué)修飾的膽甾醇氧化酶可以用例如上述化學(xué)修飾劑，通過上述化學(xué)修飾方法制備。
在本反應(yīng)的方法中的膽甾醇氧化酶的濃度，沒有特別限定，只要是能夠進行本發(fā)明的HDL膽甾醇測定的濃度即可，不過反應(yīng)液中濃度優(yōu)選0.01～400U/mL，更優(yōu)選0.02～200U/mL。
本發(fā)明中的膽甾醇脫氫酶沒有特別限定，只要是當存在氧化型輔酶時有氧化膽甾醇產(chǎn)生還原型輔酶能力的酶即可，除例如來自動物、植物或微生物的膽甾醇脫氫酶以外，還可以采用通過基因工程手段制備的膽甾醇脫氫酶等。也可以用市售的商品，如膽甾醇脫氫酶“Amano”5(CHDH5；天野酶制劑公司制造)等。另外，在本發(fā)明中，也可以將兩種以上的膽甾醇脫氫酶組合使用。膽甾醇脫氫酶可以是未經(jīng)修飾的酶，也可以是經(jīng)化學(xué)修飾的酶。經(jīng)化學(xué)修飾的膽甾醇脫氫酶可以用上述化學(xué)修飾劑，通過上述化學(xué)修飾方法制備。
在本反應(yīng)的方法中所用的膽甾醇脫氫酶濃度，沒有特別限定，只要是能夠進行本發(fā)明的HDL膽甾醇測定的濃度即可，不過反應(yīng)液中濃度優(yōu)選0.01～400U/mL，更優(yōu)選0.02～200U/mL。
在本發(fā)明的采用膽甾醇脫氫酶的測定方法中，采用氧化型輔酶。氧化型輔酶有例如NAD、NADP、thio-NAD和thio-NADP等。
本發(fā)明中采用的烷基胺聚氧乙烯聚氧丙烯縮合物、聚氧乙烯烷基胺硫酸鹽、聚氧乙烯芐基烷基季銨鹽、聚氧乙烯酸酰胺、烷基丙烯二胺衍生物并非特別限定，只要能用作本發(fā)明的HDL膽甾醇測定即可。
氧化烷基胺，有如氧化烷基二甲胺、氧化二羥基乙烷基胺、氧化聚氧化乙烯二甲胺等。烷基丙烯二胺衍生物例如有烷基丙烯二胺、聚氧化乙烯烷基丙烯二胺等。
在烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物，聚氧化乙烯烷基胺硫酸酯、聚氧化乙烯芐基烷基季銨鹽、聚氧化乙烯酸酰胺、氧化烷基胺及烷基丙烯二胺衍生物中的烷基是，直鏈或支鏈狀的碳原子數(shù)6～30個的烷基，例如己烷基、庚烷基、辛烷基、異辛烷基、壬烷基、癸烷基、十一烷基、十二烷基(月桂烷基)、十三烷基、十四烷基(肉豆蔻烷基)、十五烷基、十六烷基(棕櫚烷基)、十七烷基、十八烷基(硬脂烷基)、十九烷基、二十烷基、二十一烷基、二十二烷基(山崳烷基)、二十三烷基、二十四烷基、二十五烷基、二十六烷基、二十七烷基、二十八烷基、二十九烷基、三十烷基等。
烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物，聚氧化乙烯烷基胺硫酸酯、聚氧化乙烯芐基烷基季銨鹽、聚氧化乙烯酸酰胺、氧化聚氧化乙烯二甲胺及聚氧化乙烯烷基丙烯二胺中，氧化乙烯鏈的聚合度優(yōu)選1～100的，更優(yōu)選為1～50。
烷基胺聚氧化乙烯聚氧丙烯縮合物的具體物質(zhì)(包括制劑)，有BLAUNON SAP3004、BLAUNON SAP3010(牛油胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物；均為青木油脂公司制造)、C16EO30PO10[十六胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物(氧化乙烯鏈的聚合度30，氧化丙烯鏈聚合度10)，日本油脂公司制造]、C16EO30PO20[十六胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物(氧化乙烯鏈的聚合度30，氧化丙烯鏈的聚合度20)，日本油脂公司制造]、C16EO40PO10[十六胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物(氧化乙烯鏈的聚合度40，氧化丙烯鏈的聚合度10)，日本油脂公司制造]、C16EO20PO10[十六胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物(氧化乙烯鏈的聚合度20，氧化丙烯鏈的聚合度10)，日本油脂公司制造]等。
聚氧化乙烯烷基胺硫酸酯的具體物質(zhì)(制劑)，有レベロンA-625X(一方公司油脂公司制造)、ミグノ-ルPA-30(一方公司油脂公司制造)ニユ-ポ-ルPE-61(三洋化成公司制造)等。
聚氧化乙烯芐基烷基季銨鹽的具體物質(zhì)(制劑)，有ビスノ-ルSK(一方公司油脂公司制造)等。
聚氧化乙烯酸酰胺的具體物質(zhì)(制劑)，有ニツコ-ルTAMDS15(日光化學(xué)公司制造)、ナイミツドMT-215(日本油脂公司制造)等。
氧化烷基胺的具體物質(zhì)(制劑)，有ユニセ-フA-LE(氧化二羥基乙基月桂基胺；日本油脂公司制造)、ユニセ-フA-LM(氧化烷基二甲基胺；日本油脂公司制造)、ユニセ-フA-LY(氧化聚氧化乙烯椰油烷基二甲基胺；日本油脂公司制造)等。
烷基丙烯二胺衍生物的具體物質(zhì)(制劑)，有BLAUNON DT03、BLAUNON DT15(烷基丙烯二胺；均為青木油脂公司制造)アスフアゾ-ル#10(聚氧化乙烯牛油丙烯二胺；日本油脂公司制造)等。
另外，在本發(fā)明中，使用選自烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物、聚氧化乙烯烷基胺硫酸酯、聚氧化乙烯芐基烷基季銨鹽、聚氧化乙烯酸酰胺、氧化烷基胺及烷基丙烯二胺衍生物構(gòu)成的族中的至少一種即可，也可以任意組合使用多種。在本發(fā)明的HDL膽甾醇測定方法中，選自烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物、聚氧化乙烯烷基胺硫酸酯、聚氧化乙烯芐基烷基季銨鹽、聚氧化乙烯酸酰胺、氧化烷基胺及烷基丙烯二胺衍生物構(gòu)成的族中的至少一種物質(zhì)，其濃度并無特別限定，只要是能夠測定本發(fā)明中的HDL膽甾醇的濃度即可，反應(yīng)液中的濃度優(yōu)選0.0001～1％，更優(yōu)選0.001～0.1％。
本發(fā)明中使用的聚合陰離子沒有特別限定，只要是可以進行本發(fā)明的HDL膽甾醇測定的聚合陰離子即可，例如有硫酸葡聚糖或其鹽、肝素或其鹽、磷鎢酸或其鹽、硫酸化環(huán)糊精或其鹽、硫酸化寡糖或其鹽等，但以硫酸葡聚糖或其鹽為最佳。硫酸葡聚糖例如有分子量為4萬、8萬、20萬、50萬、100萬、200萬等的硫酸葡聚糖。硫酸化寡糖例如有例如硫酸化瓊脂糖、硫酸化海藻糖、硫酸軟骨素等。鹽例如有鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、銨鹽、錳鹽等。此外，本發(fā)明中也可以使用兩種以上的聚合陰離子。在本發(fā)明的HDL膽甾醇測定中聚合陰離子的濃度沒有特別限定，只要是可以進行本發(fā)明的HDL膽甾醇測定的濃度即可，但反應(yīng)液中的濃度優(yōu)選0.001～10％，更優(yōu)選0.01～1％。
在本發(fā)明中的膽汁酸衍生物沒有特別限定，只要是可以進行本發(fā)明的HDL膽甾醇測定的膽汁酸衍生物即可，例如有具有陰離子性表面活性作用的膽汁酸衍生物、具有兩性表面活性作用的膽汁酸衍生物、具有非離子性表面活性作用的膽汁酸衍生物等。
有陰離子性表面活性作用的膽汁酸衍生物、例如膽酸或其鹽、?；悄懰峄蚱潲}、甘氨膽酸或其鹽、石膽酸或其鹽、脫氧膽酸或其鹽、鵝膽酸或其鹽、熊膽酸或其鹽、7-氧代石膽酸或其鹽、12-氧代石膽酸或其鹽、12-鵝脫氧膽酸或其鹽、7-氧代脫氧膽酸或其鹽、豬膽酸或其鹽、豬脫鹽膽酸或其鹽、脫氫膽酸或其鹽等。鹽則有例如銨鹽、鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽、錳鹽、鈣鹽等。有陰離子表面活性作用的膽汁酸衍生物的濃度沒有特別限定，只要是可以進行本發(fā)明的HDL膽甾醇測定的濃度即可，但反應(yīng)液中的濃度優(yōu)選0.001～10％，更優(yōu)選0.01～1％。
有兩性表面活性作用的膽汁酸衍生物、有如通式(I)[化7]R1-CH2-CH(R2)-CH2-S03-(I) 表示的化合物(以下簡稱化合物(I))R2是氫原子的化合物(I)，以下稱為CHAPS，R2是羥基的化合物(I)，以下稱為CHAPSO。有兩性表面活性作用的膽汁酸衍生物的濃度沒有特別限定，只要是可以進行本發(fā)明的HDL膽甾醇測定的濃度即可，但反應(yīng)液中的濃度優(yōu)選0.001～10％，更優(yōu)選0.01～1％。
有非離子性表面活性作用的膽汁酸衍生物，有如以通式(II)[化8] [此通式中，X表示氫原子或羥基，R3和R4可以相同或相異，表示取代或未取代的烷基，或取代或未取代的鏈烷?；鵠表示的化合物(以下簡稱化合物(II))等。烷基、鏈烷?；械耐榛瑸?～10個碳原子的直鏈或支鏈的基團，如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、新戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基等。取代烷基或鏈烷?；械娜〈鶊F，有羥基、鹵素原子等。鹵素原子指氟、氯、溴、碘等各原子?；衔?II)中，R3和R4同時是[化9]COCH(OH)CH(OH)CH(OH)CH(OH)CH2(OH)(以下稱為取代基A)的化合物。下文中，把X、R3和R4分別是氫原子、取代基A和取代基A的化合物稱為deoxy-BIGCHAP；分別是羥基、取代基A和取代基A的化合物稱為BIGCHAP。有非離子性表面活性作用的膽汁酸衍生物濃度沒有特別限定，只要是可以進行本發(fā)明的HDL膽甾醇測定的濃度即可，但反應(yīng)液中的濃度優(yōu)選0.001～10％，更優(yōu)選0.01～1％。本發(fā)明中也可以采用兩種以上的膽汁酸衍生物。
乙二胺四聚氧化烯烴，有乙二胺聚氧化丙烯聚氧化乙烯縮合物、乙二胺四聚氧化乙烯、乙二胺聚氧化丙烯等。乙二胺四聚氧化烯烴的具體物質(zhì)(包括制劑)，有アデカプルロニツクTR704、アデカプルロニツクTR701、アデカプルロニツクTR913R(均為乙二胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物；旭電化公司制造)ユニル-ブ32TY-65BI(乙二胺四聚氧化烯烴日本油脂公司制造)乙二胺PO52EO60(氧化乙烯鏈的聚合度的總和60；氧化丙烯鏈的聚合度的總和52；日本油脂公司制造)等。乙二胺四聚氧化烯烴的聚合度優(yōu)選1～100，更優(yōu)選1～60。本發(fā)明中，也可以采用兩種以上的乙二胺四聚氧化烯烴。乙二胺四聚氧化烯烴的濃度沒有特別限定，只要是可以進行本發(fā)明的HDL膽甾醇測定的濃度即可，但反應(yīng)液中的濃度優(yōu)選0.001～10％，更優(yōu)選0.01～1％。聚氧化乙烯烷基胺及聚氧化乙烯鏈烯基胺，有例如通式(III)[化10] [式中R表示直鏈或支鏈的烷基或鏈烯基，X表示氫原子或(CH2CH2O)nH，m和n表示相同或不同的1～100的整數(shù)，m+n為2～200的整數(shù)]表示的化合物[以下稱為化合物(III)]，化合物(III)中，烷基為直鏈或支鏈的6～30個碳原子的化合物，例如己基、庚基、辛基、異辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基(月桂烷基)、十三烷基、十四烷基(肉豆蔻烷基)、十五烷基、十六烷基(棕櫚烷基)、十七烷基、十八烷基(硬脂烷基)、十九烷基、二十烷基、二十一烷基、二十二烷基(山崳烷基)、二十三烷基、二十四烷基、二十五烷基、二十六烷基、二十七烷基、二十八烷基、二十九烷基、三十烷基等?；衔?IN)中的烯基例如有直鏈或支鏈上的碳原子6～30的，例如己烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基、香茅基、十一烯基、十二烯基(月桂烷基)、十三烯基、十四烯基、十五烯基、十六烯基、十七烯基、油烯基、十九烯基、二十烯基、二十一烯基、二十二烯基、二十三烯基、二十四烯基、二十五烯基、二十六烯基、二十七烯基、二十八烯基、二十九烯基、三十烯基等。
聚氧化乙烯烷基胺或聚氧化乙烯鏈烯胺的具體物質(zhì)(制劑)，例如有ナイミ-ンL201(氧化乙烯十二烷胺；日本油脂公司制造)、ナイミ-ンL207(聚氧化乙烯十二烷胺；日本油脂公司制造)、ナイミ-ンS204、ナイミ-ンS210(聚氧化乙烯十八烷胺；日本油脂公司制造)、ニユ-コ-ルOD420(聚氧化乙烯十八烷胺；日本乳化劑公司制造)、パイオニンD3104(聚氧化乙烯月桂胺；竹本油脂公司制造)、パイオニンD3110(聚氧化乙烯月桂胺；竹本油脂公司制造)、パイオニンD3605[(聚氧化乙烯烷基(大豆)胺；竹本油脂公司制造)]パイオニンD3615T[(聚氧化乙烯烷基(牛油)胺；竹本油脂公司制造)]、BLAUNON O209(聚氧化乙烯油烯基氨基醚；青木油脂公司制造)等聚氧化乙烯烷基胺和聚氧化乙烯鏈烯胺中氧化乙烯鏈的聚合度優(yōu)選1～100，更優(yōu)選1～60。在本發(fā)明中，可以采用兩種以上的聚氧化乙烯烷基胺或聚氧化乙烯鏈烯胺。聚氧化乙烯烷基胺或聚氧化乙烯鏈烯胺的濃度沒有特別限定，只要是可以進行本發(fā)明的HDL膽甾醇測定的濃度即可，但反應(yīng)液中的濃度優(yōu)選0.0001～1％，更優(yōu)選0.01～1％。
本發(fā)明中采用的白蛋白，沒有特別限定，只要是可以進行本發(fā)明的HDL膽甾醇測定的濃度即可，例如來自牛、馬、羊或人的白蛋白等，優(yōu)選牛血清白蛋白(BSA)。另外，也可以用基因工程手段制造的白蛋白。本發(fā)明中，也可以組合使用兩種以上的白蛋白。本發(fā)明的HDL膽甾醇測定中白蛋白濃度沒有特別限定，只要是可以進行本發(fā)明的HDL膽甾醇測定的濃度即可，但反應(yīng)液中的濃度優(yōu)選0.001～10％，更優(yōu)選0.01～1％。
本發(fā)明的HDL膽甾醇測定方法中使用的水性介質(zhì)，有諸如去離子水、蒸餾水、緩沖液等，優(yōu)選緩沖液。緩沖液中所用的緩沖劑，有諸如三(羥甲基)氨基甲烷緩沖劑、磷酸緩沖劑、硼酸緩沖劑、優(yōu)良緩沖劑等。優(yōu)良緩沖劑，例如有2-(N-嗎啉基)-乙基磺酸(MES)、雙(2-羥乙基)氨基三(羥甲基)-甲烷(Bis-Tris)、N-(2-乙酰胺基)-亞氨二乙酸(ADA)、哌嗪-N，N’-雙(2-乙磺酸)(PIPES)、N-(2-乙酰胺基)-2-氨乙基磺酸(ACES)、3-嗎啉代)-2-羥丙基磺酸(MOPSO)、N，N-雙(二羥乙基)-2-氨基乙烷磺酸(BES)、3-(N-嗎啉代)丙烷磺酸(MOPS)、N-[3(羥甲基)甲基]-2-氨基乙烷磺酸(TES)、2-[4-(2-羥乙基)-1-哌嗪基]乙烷磺酸(HEPES)、3-[N，N-雙(2-羥乙基)氨基]-2-羥基丙烷磺酸(DIPSO)、N-[3(羥甲基)甲基]-2-羥基-3-氨基丙烷磺酸(TAPSO)、哌嗪-N，N’-雙(2-羥基丙烷磺酸)(POPSO)、3-[4-(2-羥乙基)-1-哌嗪基]-2-羥基丙烷磺酸(HEPPSO)、3-[4-(2-羥乙基)-1-哌嗪基]丙烷磺酸[(H)EPPS]、N-[3(羥甲基)甲基]甘氨酸(Tricine)、N，N’-雙(2-羥乙基)甘氨酸(Bicine)、N-3(羥甲基)甲基-3-氨基丙烷磺酸(TAPS)、N-環(huán)己基-2-氨基乙烷磺酸(CHES)、N-環(huán)己基-3-氨基-2-羥基丙烷磺酸(CAPSO)、N-環(huán)己基-3-氨基丙烷磺酸(CAPS)等。緩沖液的濃度沒有特別限定，只要適合測定的濃度即可，優(yōu)選0.001～2.0mol/L，更優(yōu)選0.005～1.0mol/L。
以下具體說明本發(fā)明的HDL膽甾醇測定方法、測定用試劑和測定用試劑盒。
(HDL膽甾醇的測定方法)現(xiàn)舉以下所述方法為例說明本發(fā)明的HDL膽甾醇的測定方法。
測定方法(1)使檢測樣品與膽甾醇酯水解酶和膽甾醇氧化酶，或膽甾醇酯水解酶、氧化型輔酶及膽甾醇脫氫酶，在至少含有選自烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物、聚氧化乙烯烷基胺硫酸鹽、聚氧化乙烯芐基烷基季銨鹽、聚氧化乙烯酸酰胺、氧化烷基胺和烷基丙烯二胺衍生物構(gòu)成的族中的一種物質(zhì)，根據(jù)需要含有聚合陰離子、膽汁酸衍生物、乙烯二氨基四聚氧化烯烴、聚氧化乙烯烷基胺、聚氧化乙烯鏈烯胺和白蛋白構(gòu)成的族中的一種物質(zhì)的水溶性介質(zhì)中，進行反應(yīng)使其生成過氧化氫或還原型輔酶；(2)測定生成的過氧化氫或還原型輔酶；(3)根據(jù)(2)測定的值和事先制備的標準曲線，通過計算出檢測樣品中HDL膽甾醇的濃度，可以測定出檢測樣品的HDL膽甾醇。
本測定方法中，反應(yīng)(1)可在10～50℃，優(yōu)選20～40℃下，反應(yīng)1～60分鐘，優(yōu)選2～30分鐘。
生成的過氧化氫的量，可以用諸如過氧化氫測定用試劑進行測定。過氧化氫測定用試劑，是為了把生成的過氧化氫轉(zhuǎn)換成能夠檢測的物質(zhì)的試劑。能夠檢測的物質(zhì)有例如色素、發(fā)光等，優(yōu)選色素。能夠檢測的物質(zhì)是色素時，檢測過氧化氫用的試劑含有氧化發(fā)色型生色體和過氧化氫酶等過氧化活性物質(zhì)。氧化發(fā)色型生色體有例如下述氧化發(fā)色型生色體。當能夠檢測的物質(zhì)會發(fā)光時，檢測過氧化氫用的試劑含有化學(xué)發(fā)光物質(zhì)?；瘜W(xué)發(fā)光物質(zhì)有如魯米那、異魯米那、光澤精、吖啶基酯等。
檢測過氧化氫用的試劑，在采用含有氧化發(fā)色型生色體和過氧化氫酶等過氧化活性物質(zhì)時，過氧化氫在過氧化活性物質(zhì)存在時會和氧化發(fā)色型生色體發(fā)生反應(yīng)而生成色素，通過定量所生成的色素，能定量過氧化氫。另外，在采用含有化學(xué)發(fā)光物質(zhì)的檢測過氧化氫用的試劑時，過氧化氫與化學(xué)發(fā)光物質(zhì)反應(yīng)生成光子，通過定量生成的光子，即能定量過氧化氫。
氧化發(fā)色型生色體，例如有無色型生色體、氧化偶合發(fā)色型生色體等。無色型生色體在有過氧化氫和過氧化氫酶等過氧化活性物質(zhì)存在時，單獨地向色素轉(zhuǎn)換的物質(zhì)。具體物質(zhì)有10-N-羧甲基氨基甲?；?3，7-雙(二甲胺基)-10H-吩噻嗪(CCAP)、10-N-甲基氨基甲?；?3，7-雙(二甲胺基)-10H-吩噻嗪(MCDP)、N-(羧甲基氨基甲酰基)-4，4’-雙(二甲胺基)聯(lián)苯胺鈉鹽(DA-64)、4，4’-雙(二甲胺基)聯(lián)苯胺、雙[3-雙(4-氯苯)甲基-4-二甲氨基苯基]胺(BCMA)等。
氧化偶合發(fā)色型生色體，是在有過氧化氫和過氧化氫酶等過氧化活性物質(zhì)存在下，兩種化合物通過氧化偶合生成色素的物質(zhì)。兩種化合物的組合，例如有偶合劑和苯胺類的組合、偶合劑和酚類的組合等。偶合劑有例如4-氨基-安替比林(4-AA)、3-甲基-2-苯并噻唑酮肼等。苯胺類則有N-(3-磺基丙烷基)苯胺、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺基丙烷基)-3-甲基苯胺(TOOS)、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺基丙烷基)-3，5-二甲基苯胺(MAOS)、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺基丙烷基)-3，5-二甲氧基苯胺(DAOS)、N-乙基-N-(3-磺基丙烷基)-3-甲基苯胺(TOPS)、N-(2-羥基-3-磺基丙烷基)-3，5-二甲氧基苯胺(HDAOS)、N-N-二甲基-3-甲基苯胺、N-N-二(3-磺基丙烷基)-3，5-二甲氧基苯胺、N-乙基-N-(3-磺基丙烷基)-3-甲氧基苯胺、N-乙基-N-(3-磺基丙烷基)苯胺、N-乙基-N-(3-磺基丙烷基)-3，5-二甲氧基苯胺、N-(3-磺基丙烷基)-3，5-二甲氧基苯胺、N-乙基-N-(3-磺基丙烷基)-3，5-二甲基苯胺、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺基丙烷基)-3-甲氧基苯胺、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺基丙烷基)苯胺、N-乙基-N-(3-甲苯基)-N’-琥珀酰乙烯二胺(EMSE)、N-乙基-N-(3-甲苯基)-N’-乙酰乙烯二胺、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺基丙烷基)-4-氟-3，5-二甲氧基苯胺(F-DAOS)等。酚類有苯酚、4-氯酚、3-甲基酚、3-羥基-2，4，6-三碘苯甲酸(HTIB)等。
在過氧化氫測定中，過氧化活性物質(zhì)的濃度沒有特別限定，只要是適合測定的濃度即可，在用過氧化氫酶作為過氧化活性物質(zhì)時，優(yōu)選1～100kU/L。另外，氧化發(fā)色型生色體的濃度沒有特別限定，只要是適合測定的濃度即可，優(yōu)選0.01～10g/L。
還原型輔酶的測定方法，例如有測定所生成的還原型輔酶吸光度的方法、采用測定還原型輔酶用試劑的方法等。測定還原型輔酶吸光度的方法中的吸光度，優(yōu)選300～500nm，更優(yōu)選330～400nm間，特別優(yōu)選340nm附近。測定還原型輔酶用的試劑，是為了把還原型輔酶轉(zhuǎn)變成可檢測的物質(zhì)的制劑?？梢詸z測的物質(zhì)例如有色素等?？蓹z測的物質(zhì)是色素時還原型輔酶測定用試劑，例如有含有心肌黃酶、電子載體和還原發(fā)色型生色體的試劑。電子載體有如1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy-5-methylphenazinium methylsulfate)等。在采用含有心肌黃酶、電子載體和還原發(fā)色型生色體的試劑作為測定還原型輔酶試劑時，通過定量轉(zhuǎn)換還原發(fā)色型生色體而生成的色素，即可定量還原型輔酶。
還原發(fā)色型生色體，有例如3-(4，5-二甲基-2-噻唑基)-2，5-聯(lián)苯基-2H-溴代四唑鎓(MTT)、2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基酚)-5-(2，4-二磺苯基)-2H-四唑鎓單鈉鹽(WST-1)、2-(4-碘苯基)-3-(2，4-二硝基酚)-5-(2，4-二磺苯基)-2H-四唑鎓單鈉鹽(WST-3)等。
(HDL膽甾醇測定用試劑)本發(fā)明的HDL膽甾醇測定用試劑含有選自烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物、聚氧化乙烯烷基胺硫酸鹽、聚氧化乙烯芐基烷基季銨鹽、聚氧化乙烯酸酰胺、氧化烷基胺和烷基丙烯二胺衍生物構(gòu)成的族中的一種物質(zhì)，以及膽甾醇酯水解酶，膽甾醇氧化酶和過氧化氫檢測用試劑，必要時還含有選自聚合陰離子、膽汁酸衍生物、乙二胺四聚氧化烯烴、聚氧化乙烯烷基胺和聚氧化乙烯鏈烯基胺構(gòu)成的族中的至少一種物質(zhì)。
另外，本發(fā)明的HDL膽甾醇測定用試劑含有選自烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物、聚氧化乙烯烷基胺硫酸鹽、聚氧化乙烯芐基烷基季銨鹽、聚氧化乙烯酸酰胺、氧化烷基胺和烷基丙烯二胺衍生物構(gòu)成的族中的一種物質(zhì)，膽甾醇酯水解酶，膽甾醇脫氫酶及氧化型輔酶，必要時還含有聚合陰離子、膽汁酸衍生物、乙二胺四聚氧化烯烴、聚氧化乙烯烷基胺和聚氧化乙烯鏈烯基胺構(gòu)成的族中的至少一種物質(zhì)，或者測定還原型輔酶用的試劑。
本發(fā)明的HDL膽甾醇測定用試劑例如有以下形式的試劑，但對本發(fā)明的范圍沒有任何限定。
此外，烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物、聚氧化乙烯烷基胺硫酸鹽、聚氧化乙烯芐基烷基季銨鹽、聚氧化乙烯酸酰胺，氧化烷基胺和烷基丙烯二胺衍生物構(gòu)成的族中的一種物質(zhì)，以下稱為[化合物A]。
另外，聚合陰離子、膽汁酸衍生物、乙二胺四聚氧化烯烴、聚氧化乙烯烷基胺和聚氧化乙烯鏈烯基胺等化合物構(gòu)成的族中的至少一種物質(zhì)，以下稱為[化合物B]。在本發(fā)明的測定試劑中，化合物A可以使用一種或多種，化合物B可以使用一種或多種。
試劑1含有化合物A、膽甾醇酯水解酶、膽甾醇氧化酶和過氧化氫檢測用試劑的試劑。
試劑2含有化合物A、化合物B、膽甾醇酯水解酶、膽甾醇氧化酶和過氧化氫檢測用試劑的試劑。
試劑3含有化合物A、化合物B、白蛋白、膽甾醇酯水解酶、膽甾醇氧化酶和過氧化氫檢測用試劑的試劑。
試劑4含有化合物A、膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶和氧化型輔酶的試劑。
試劑5含有化合物A、化合物B、膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶和氧化型輔酶的試劑。
試劑6含有化合物A、化合物B、白蛋白、膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶和氧化型輔酶的試劑。
試劑7含有化合物A、膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶、氧化型輔酶和測定還原型輔酶用試劑的試劑。
試劑8含有化合物A、化合物B、膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶、氧化型輔酶和測定還原型輔酶用試劑的試劑。
試劑9含有化合物A、化合物B、白蛋白、膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶、氧化型輔酶和測定還原型輔酶用試劑的試劑。
本發(fā)明的HDL膽甾醇測定用試劑，可以使用已經(jīng)在上述本發(fā)明的HDL膽甾醇測定方法中列舉的烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物、聚氧化乙烯烷基胺硫酸鹽、聚氧化乙烯芐基烷基季銨鹽、聚氧化乙烯酸酰胺、氧化烷基胺和烷基丙烯二胺衍生物、膽甾醇酯水解酶、膽甾醇氧化酶、膽甾醇脫氫酶、聚合陰離子、膽汁酸衍生物、乙二胺四聚氧化烯烴、聚氧化乙烯烷基胺和聚氧化乙烯鏈烯基胺、白蛋白、過氧化氫測定用試劑、氧化型輔酶、還原型輔酶測定用試劑。
(HDL膽甾醇測定用試劑盒)本發(fā)明的HDL膽甾醇測定用試劑，可用試劑盒形式保存、流通和使用。試劑盒的形式并無特別限制，二試劑系統(tǒng)和三試劑系統(tǒng)等均可，但優(yōu)選二試劑系統(tǒng)。
由第一試劑和第二試劑組成的二試劑系統(tǒng)HDL膽甾醇測定用試劑盒中，膽甾醇酯水解酶和膽甾醇氧化酶或膽甾醇脫氫酶，可以分別含在第一試劑和第二試劑中，也可以全部含在第二試劑中。當分別含在第一試劑和第二試劑中時，最好的形式是膽甾醇酯水解酶可以含在第一試劑中，膽甾醇氧化酶或膽甾醇脫氫酶含在第二試劑中。烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物、聚氧化乙烯烷基胺硫酸鹽、聚氧化乙烯芐基烷基季銨鹽、聚氧化乙烯酸酰胺、氧化烷基胺和烷基丙烯二胺衍生物、膽汁酸衍生物、乙二胺四聚氧化烯烴、聚氧化乙烯烷基胺、聚氧化乙烯鏈烯基胺和白蛋白含于第一試劑或第二試劑二者的一或二者的中均可。在采用膽甾醇脫氫酶的測定方法中使用的氧化型輔酶，含于第一試劑或第二試劑二者的一或二者的中均可。
過氧化氫測定用試劑含于第一試劑或第二試劑二者的一或二者的中均可，但在該試劑含有氧化偶聯(lián)型發(fā)色體時，優(yōu)選的形式是將各種氧化偶合型發(fā)色體各種化合物含在不同的試劑中。測定還原型輔酶用的試劑可以含于第一試劑或第二試劑二者的一或二者的中均可，優(yōu)選含于第一試劑和第二試劑二者的中。
本發(fā)明的HDL膽甾醇測定用試劑盒，例如有以下形式的試劑盒，但這些對本發(fā)明的范圍沒有任何限定。
試劑盒1第一試劑膽甾醇酯水解酶第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A試劑盒2第一試劑膽甾醇酯水解酶第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B試劑盒3第一試劑膽甾醇酯水解酶第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B、白蛋白試劑盒4第一試劑膽甾醇酯水解酶、化合物B第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A試劑盒5第一試劑膽甾醇酯水解酶、化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A試劑盒6第一試劑膽甾醇酯水解酶、化合物B第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B試劑盒7
第一試劑膽甾醇酯水解酶、化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B試劑盒8第一試劑膽甾醇酯水解酶、化合物A第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑試劑盒9第一試劑膽甾醇酯水解酶、化合物A第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物B試劑盒10、第一試劑膽甾醇酯水解酶、化合物A第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物B、白蛋白試劑盒11第一試劑膽甾醇酯水解酶、化合物A、化合物B第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑試劑盒12
第一試劑膽甾醇酯水解酶、化合物A、化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑試劑盒13、第一試劑膽甾醇酯水解酶、化合物A、化合物B第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物B試劑盒14第一試劑膽甾醇酯水解酶、化合物A、化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物B試劑盒15第一試劑膽甾醇酯水解酶、化合物A第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A試劑盒16第一試劑膽甾醇酯水解酶、化合物A第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B試劑盒17
第一試劑膽甾醇酯水解酶、化合物A第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B、白蛋白試劑盒18第一試劑膽甾醇酯水解酶、化合物A、化合物B第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A試劑盒19第一試劑膽甾醇酯水解酶、化合物A、白蛋白、化合物B第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A試劑盒20第一試劑膽甾醇酯水解酶、化合物A、化合物B第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B試劑盒21第一試劑膽甾醇酯水解酶、化合物A、化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B
試劑盒22第一試劑膽甾醇酯水解酶、過氧化氫檢測用試劑第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A試劑盒23第一試劑膽甾醇酯水解酶、過氧化氫檢測用試劑第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A試劑盒24第一試劑膽甾醇酯水解酶、過氧化氫檢測用試劑第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B、白蛋白試劑盒25第一試劑膽甾醇酯水解酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物B第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A試劑盒26第一試劑膽甾醇酯水解酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A
試劑盒27第一試劑膽甾醇酯水解酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物B第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B試劑盒28第一試劑膽甾醇酯水解酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B試劑盒29第一試劑膽甾醇酯水解酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑試劑盒30第一試劑膽甾醇酯水解酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物B試劑盒31第一試劑膽甾醇酯水解酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物B、白蛋白試劑盒32第一試劑膽甾醇酯水解酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑試劑盒33第一試劑膽甾醇酯水解酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑試劑盒34第一試劑膽甾醇酯水解酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物B試劑盒35第一試劑膽甾醇酯水解酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物B試劑盒36第一試劑膽甾醇酯水解酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A
第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A試劑盒37第一試劑膽甾醇酯水解酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B試劑盒38第一試劑膽甾醇酯水解酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B、白蛋白試劑盒39第一試劑膽甾醇酯水解酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A試劑盒40第一試劑膽甾醇酯水解酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物B、白蛋白、化合物A第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A試劑盒41
第一試劑膽甾醇酯水解酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B試劑盒42第一試劑膽甾醇酯水解酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B試劑盒43第一試劑化合物B第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A試劑盒44第一試劑化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A試劑盒45第一試劑化合物B第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B試劑盒46第一試劑化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B試劑盒47第一試劑化合物A第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑試劑盒48第一試劑化合物A第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物B試劑盒49第一試劑化合物A第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物B、白蛋白試劑盒50第一試劑化合物A、化合物B第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑試劑盒51第一試劑化合物A、化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑試劑盒52第一試劑化合物A、化合物B第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物B試劑盒53第一試劑化合物A、化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物B試劑盒54第一試劑化合物A第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A試劑盒55第一試劑化合物A第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B試劑盒56第一試劑化合物A第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B、白蛋白試劑盒57第一試劑化合物A、化合物B第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A試劑盒58第一試劑化合物A、化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A
試劑盒59第一試劑化合物A、化合物B第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B試劑盒60第一試劑化合物A、化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B試劑盒61第一試劑過氧化氫檢測用試劑第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A試劑盒62第一試劑過氧化氫檢測用試劑第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B試劑盒63
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第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B試劑盒77第一試劑過氧化氫檢測用試劑、化合物A第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B、白蛋白試劑盒78第一試劑過氧化氫檢測用試劑、化合物A化合物B第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A試劑盒79第一試劑過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A試劑盒80第一試劑過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B試劑盒81第一試劑過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇氧化酶、過氧化氫檢測用試劑、化合物A、化合物B試劑盒82第一試劑氧化型輔酶第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶、化合物A試劑盒83第一試劑氧化型輔酶第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶、化合物A、化合物B試劑盒84第一試劑氧化型輔酶第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶、化合物A、化合物B、白蛋白試劑盒85第一試劑氧化型輔酶、化合物B第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶、化合物A試劑盒86第一試劑氧化型輔酶、化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶、化合物A試劑盒87第一試劑氧化型輔酶、化合物B第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶、化合物A、化合物B試劑盒88第一試劑氧化型輔酶、化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶、化合物A、化合物B試劑盒89第一試劑氧化型輔酶、化合物A第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶試劑盒90第一試劑氧化型輔酶、化合物A第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶、化合物B試劑盒91第一試劑氧化型輔酶、化合物A第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶、化合物B、白蛋白試劑盒92第一試劑氧化型輔酶、化合物A、化合物B第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶試劑盒93第一試劑氧化型輔酶、化合物A、化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶試劑盒94第一試劑氧化型輔酶、化合物A、化合物B第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶、化合物B試劑盒95第一試劑氧化型輔酶、化合物A、化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶、化合物B試劑盒96第一試劑氧化型輔酶、化合物A第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶、化合物A試劑盒97第一試劑氧化型輔酶、化合物A第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶、化合物A、化合物B試劑盒98第一試劑氧化型輔酶、化合物A第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶、化合物A、化合物B、白蛋白試劑盒99第一試劑氧化型輔酶、化合物A、化合物B第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶、化合物A試劑盒100
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試劑盒118第一試劑氧化型輔酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B試劑盒119第一試劑氧化型輔酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B、白蛋白試劑盒120第一試劑氧化型輔酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A試劑盒121第一試劑氧化型輔酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A試劑盒122
第一試劑氧化型輔酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B試劑盒123第一試劑氧化型輔酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B試劑盒124第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶第二試劑膽甾醇脫氫酶、化合物A試劑盒125第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶第二試劑膽甾醇脫氫酶、化合物A、化合物B試劑盒126第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶第二試劑膽甾醇脫氫酶、化合物A、化合物B、白蛋白試劑盒127第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、化合物B第二試劑膽甾醇脫氫酶、化合物A試劑盒128第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇脫氫酶、化合物A試劑盒129第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、化合物B第二試劑膽甾醇脫氫酶、化合物A、化合物B試劑盒130第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇脫氫酶、化合物A、化合物B試劑盒131第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、化合物A第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶試劑盒132第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、化合物A第二試劑膽甾醇脫氫酶、化合物B試劑盒133第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、化合物A第二試劑膽甾醇脫氫酶、化合物B、白蛋白試劑盒134第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、化合物A、化合物B第二試劑膽甾醇脫氫酶試劑盒135第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、化合物A、化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇脫氫酶試劑盒136第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、化合物A、化合物B第二試劑膽甾醇脫氫酶、化合物B試劑盒137第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、化合物A、化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇脫氫酶、化合物B試劑盒138第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、化合物A第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶、化合物A試劑盒139第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、化合物A第二試劑膽甾醇脫氫酶、化合物A、化合物B試劑盒140第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、化合物A第二試劑膽甾醇脫氫酶、化合物A、化合物B、白蛋白試劑盒141第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、化合物A、化合物B第二試劑膽甾醇脫氫酶、化合物A試劑盒142第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、化合物A、化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇脫氫酶、化合物A試劑盒143第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、化合物A、化合物B第二試劑膽甾醇脫氫酶、化合物A、化合物B試劑盒144第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、化合物A、化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇脫氫酶、化合物A、化合物B試劑盒145第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑第二試劑膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A試劑盒146第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑第二試劑膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B試劑盒147第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑第二試劑膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B、白蛋白試劑盒148第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物B第二試劑膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A試劑盒149第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A試劑盒150第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物B第二試劑膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B
試劑盒151第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B試劑盒152第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑試劑盒153第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A第二試劑膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物B試劑盒154第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑第二試劑膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物B、白蛋白試劑盒155第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B第二試劑膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑試劑盒156第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑試劑盒157第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B第二試劑膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物B試劑盒158第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物B試劑盒159第一試劑氧化型輔酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A第二試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A試劑盒160第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A第二試劑膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B試劑盒161第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A第二試劑膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B、白蛋白試劑盒162第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B第二試劑膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A試劑盒163第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A
試劑盒164第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B第二試劑膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B試劑盒165第一試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B、白蛋白第二試劑膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B試劑盒166第一試劑膽甾醇酯水解酶、第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、化合物A試劑盒167第一試劑膽甾醇酯水解酶第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、化合物A、化合物B試劑盒168第一試劑膽甾醇酯水解酶第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、化合物A、化合物B、白蛋白試劑盒169第一試劑膽甾醇酯水解酶、化合物B第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、化合物A試劑盒170第一試劑膽甾醇酯水解酶、化合物B、白蛋白第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、化合物A試劑盒171第一試劑膽甾醇酯水解酶、化合物B第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、化合物A、化合物B試劑盒172第一試劑膽甾醇酯水解酶第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、化合物A、化合物B試劑盒173第一試劑膽甾醇酯水解酶第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶試劑盒174第一試劑膽甾醇酯水解酶第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、化合物B試劑盒175第一試劑膽甾醇酯水解酶第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、化合物B、白蛋白試劑盒176第一試劑膽甾醇酯水解酶、化合物A、化合物B第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶試劑盒177第一試劑膽甾醇酯水解酶、化合物A、化合物B、白蛋白第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶試劑盒178第一試劑膽甾醇酯水解酶、化合物A、化合物B第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、化合物B試劑盒179
第一試劑膽甾醇酯水解酶、化合物A、化合物B、白蛋白第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、化合物B試劑盒180第一試劑膽甾醇酯水解酶、化合物A第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶、化合物A試劑盒181第一試劑膽甾醇酯水解酶、化合物A第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、化合物A、化合物B試劑盒182第一試劑膽甾醇酯水解酶第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、化合物A、化合物B、白蛋白試劑盒183第一試劑膽甾醇酯水解酶、化合物A、化合物B第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、化合物A試劑盒184
第一試劑膽甾醇酯水解酶、化合物A、化合物B、白蛋白第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、化合物A試劑盒185第一試劑膽甾醇酯水解酶、化合物A、化合物B第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、化合物A、化合物B試劑盒186第一試劑膽甾醇酯水解酶、化合物A、化合物B、白蛋白第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、化合物A、化合物B試劑盒187第一試劑膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A試劑盒188第一試劑膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B
試劑盒189第一試劑膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B、白蛋白試劑盒190第一試劑膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物B第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A試劑盒191第一試劑膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物B、白蛋白第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A試劑盒192第一試劑膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物B第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B試劑盒193第一試劑膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物B、白蛋白第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B試劑盒194第一試劑膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑試劑盒195第一試劑膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物B試劑盒196第一試劑膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物B、白蛋白試劑盒197第一試劑膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B
第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑試劑盒198第一試劑膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B、白蛋白第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑試劑盒199第一試劑膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物B試劑盒200第一試劑膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B、白蛋白第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物B試劑盒201第一試劑膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A
試劑盒202第一試劑膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B試劑盒203第一試劑膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B、白蛋白試劑盒204第一試劑膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A試劑盒205第一試劑膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B、白蛋白第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A
試劑盒206第一試劑膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇脫氫酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B試劑盒207第一試劑膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B、白蛋白第二試劑氧化型輔酶、膽甾醇酯水解酶、還原型輔酶測定用試劑、化合物A、化合物B用于本發(fā)明HDL膽甾醇測定的試劑盒，可以采用上述本發(fā)明HDL膽甾醇測定方法中所列舉的試劑膽甾醇酯水解酶、膽甾醇氧化酶、膽甾醇脫氫酶、烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物、聚氧化乙烯烷基胺硫酸鹽、聚氧化乙烯芐基烷基季銨鹽、聚氧化乙烯酸酰胺，氧化烷基胺、烷基丙烯二胺衍生物、聚合陰離子、膽汁酸衍生物、乙二胺四聚氧化烯烴、聚氧化乙烯烷基胺、聚氧化乙烯鏈烯基胺、白蛋白、過氧化氫測定用試劑、氧化型輔酶、還原型輔酶測定用試劑等。
本發(fā)明的HDL膽甾醇測定用試劑和測定用試劑盒中，可根據(jù)必要，也可以含有水性介質(zhì)、穩(wěn)定劑、防腐劑、干擾物質(zhì)消除劑、反應(yīng)促進劑等。水性介質(zhì)例如有上述水性介質(zhì)等；穩(wěn)定劑有如乙二胺四乙酸(EDTA)、蔗糖、氯化鈣等；防腐劑例如有如疊氮化鈉、抗生素等；干擾物質(zhì)消除劑例如有消除抗壞血酸干擾的抗壞血酸氧化酶等；反應(yīng)促進劑例如有共脂肪酶和磷酸酯酶等酶、硫酸鈉和氯化鈉等鹽類等。
本發(fā)明的HDL膽甾醇測定用試劑和測定用試劑盒，可以是冷凍干燥狀態(tài)，也可以是溶解在水性介質(zhì)的狀態(tài)。采用冷凍干燥狀態(tài)的制劑測定檢測樣品中HDL膽甾醇時，要將該試劑溶解在水性介質(zhì)中使用。
本發(fā)明的HDL膽甾醇測定用試劑和測定用試劑盒中，膽甾醇酯水解酶、膽甾醇氧化酶、膽甾醇脫氫酶的含量，在以水性介質(zhì)溶解狀態(tài)下的濃度優(yōu)選配成0.01～1200U/mL，更優(yōu)選0.02～600U/mL。本發(fā)明的HDL膽甾醇測定用試劑和測定用試劑盒中，烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物、聚氧化乙烯烷基胺硫酸鹽、聚氧化乙烯芐基烷基季銨鹽、聚氧化乙烯酸酰胺，氧化烷基胺和烷基丙烯二胺衍生物的含量，在以水性介質(zhì)溶解狀態(tài)下的濃度優(yōu)選配成0.0001～3％，更優(yōu)選0.001～0.3％；本發(fā)明的HDL膽甾醇測定用試劑和測定用試劑盒中，聚合陰離子的含量，在以水性介質(zhì)溶解狀態(tài)下的濃度優(yōu)選配成0.001～30％，更優(yōu)選0.01～3％。
本發(fā)明的HDL膽甾醇測定用試劑和測定用試劑盒中，膽汁酸衍生物的含量，在以水性介質(zhì)溶解狀態(tài)下的濃度優(yōu)選配成0.001～30％，更優(yōu)選0.01～3％。
本發(fā)明的HDL膽甾醇測定用試劑和測定用試劑盒中，乙二胺四聚氧化烯烴的含量，在以水性介質(zhì)溶解狀態(tài)下的濃度優(yōu)選配成0.001～30％，更優(yōu)選配成0.01～3％。
本發(fā)明的HDL膽甾醇測定用試劑和測定用試劑盒中，聚氧化乙烯胺或聚氧化乙烯鏈烯胺的含量，在以水性介質(zhì)溶解狀態(tài)下的濃度優(yōu)選配成0.0001～3％，更優(yōu)選配成0.001～0.3％。
本發(fā)明的HDL膽甾醇測定用試劑和測定用試劑盒中，白蛋白的含量，在以水性介質(zhì)溶解狀態(tài)下的濃度優(yōu)選配成0.001～30％，更優(yōu)選配成0.01～3％。
下面用實施例詳細說明本發(fā)明，但這些實施例對本發(fā)明的范圍的沒有任何限定。另外，在本實施例中，使用了下述制造商的試劑和酶制劑。
HEPES(BDH Laboratory公司制)、EMSE(ダイト化學(xué)公司制)、硫酸葡聚糖鈉(分子量50萬)(Phamaica公司制)、牛血清白蛋白(BSA；東洋紡織公司制)、4-氨基安替比林(埼京化成公司制)、過氧化氫酶(東洋紡織公司制)、COO321(膽甾醇氧化酶；東洋紡織公司制)、CHODI(膽甾醇氧化酶；天野酶制劑公司制)、CHOD協(xié)和(膽甾醇氧化酶；協(xié)和發(fā)酵公司制)、LPL311(膽甾醇酯水解酶；東洋紡織公司制)、LPL6(膽甾醇酯水解酶；天野酶制劑公司制)、43kDa酯酶(膽甾醇酯水解酶；天野酶制劑公司制)、BLAUONON SAP3010、BLAUONON SAP3004(均為牛油胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物；青木油脂公司制)、C16EO30PO10、C16EO30PO20、C16EO40PO10、C16EO20PO10(均為十六烷基聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物；日本油脂公司制)、ビスノ-ル(Bisnol)SK(聚氧化乙烯芐基烷基季銨鹽；一方公司油脂公司制)、ミゲノ-ル(Mignol)PA-30(聚氧化乙烯烷基胺硫酸鹽；一方公司油脂公司制)、ニツコ-ル(Nicol)TAMDS15(聚氧化乙烯硬脂酸酰胺；日光化學(xué)公司制)、ナイミツド(Naimizdo)MT-215(聚氧化乙烯酸酰胺；日光化學(xué)公司制)、BLAUONON DT03、BLAUNON DT15(均為烷基丙烯二胺；青木油脂公司制)、ユニセ-フ(Unisef)A-LM(氧化烷基二甲胺；日本油脂公司制)、ユニセ-フA-LY(聚氧化乙烯椰子油烷基二甲基氧化胺；日本油脂公司制)、アスフアゾ-ル(Asphazol)#10(聚氧化乙烯牛油丙烯二胺；日本油脂公司制)、乙二胺PO52EO60(乙二胺四聚氧化烯烴；日本油脂公司制)、アデカプルロニツク(Adecarnic)TR704(乙二胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物；旭電化公司制)、ナイミ-ン(Naimin)L207(聚氧化乙烯十二烷基胺；日本油脂公司制)、膽酸鈉(陰離子性膽汁酸衍生物；ACROS公司制)、CHAPS(兩性膽汁酸衍生物；同仁化學(xué)公司制)、BIGCHAP(非離子性膽汁酸衍生物；同仁化學(xué)公司制)。
參考例1化學(xué)修飾LPL311(經(jīng)化學(xué)修飾的LPL311)的制備在HEPES緩沖液(pH8.5 0.15mol/L)中加入LPL311使其濃度為33g/L，冷卻到5℃后，加入サンブライト(Sanbride)VFM-4101(日本油脂公司制)使其濃度為330g/L，再反應(yīng)3小時。所得到的修飾酶溶液無需純化即直接作為化學(xué)修飾的LPL311使用。
實施例1制備了由以下第一試劑(試劑A)和第二試劑(試劑a)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑A)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L第二試劑(試劑a1)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林0.3g/L過氧化氫酶20kU/L化學(xué)修飾的LPL311 0.2kU/LCOO3215.0kU/LBLAUNON SAP3004 0.1g/L實施例2制備了由以下第一試劑(試劑A)和第二試劑(試劑a2)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑A)HEPES(pH7.5) 10mmol/L
EMSE 0.3g/L第二試劑(試劑a2)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林0.3g/L過氧化氫酶20kU/L化學(xué)修飾的LPL311 0.2kU/LCOO3215.0kU/LBLAUNON SAP3010 0.5g/L實施例3制備由以下第一試劑(試劑A)和第二試劑(試劑a3)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑A)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L第二試劑(試劑a3)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林0.3g/L過氧化氫酶20kU/L化學(xué)修飾的LPL311 0.2kU/LCOO3215.0kU/LC16EO30PO10 0.5g/L實施例4制備由以下第一試劑(試劑A)和第二試劑(試劑a4)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑A)HEPES(pH7.5) 10mmol/L
EMSE 0.3g/L第二試劑(試劑a4)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林0.3g/L過氧化氫酶20kU/L化學(xué)修飾的LPL311 0.2kU/LCOO3215.0kU/LC16EO40PO10 1.0g/L實施例5制備由以下第一試劑(試劑A)和第二試劑(試劑a5)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑A)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L第二試劑(試劑a5)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林0.3g/L過氧化氫酶20kU/L化學(xué)修飾的LPL311 0.2kU/LCOO3215.0kU/LC16EO30PO20 0.5g/L實施例6制備由以下第一試劑(試劑A)和第二試劑(試劑a6)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑A)HEPES(pH7.5) 10mmol/L
EMSE0.3g/L第二試劑(試劑a6)HEPES(pH7.0)10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L過氧化氫酶 20kU/L化學(xué)修飾的LPL3110.2kU/LCOO321 5.0kU/LC16EO20PO10 0.5g/L實施例7制備由以下第一試劑(試劑A)和第二試劑(試劑a7)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑A)HEPES(pH7.5)10mmol/LEMSE0.3g/L第二試劑(試劑a7)HEPES(pH7.0)10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L過氧化氫酶 20kU/L化學(xué)修飾的LPL3110.2kU/LCOO321 5.0kU/Lビスノ-ルSK 0.3g/L實施例8制備由以下第一試劑(試劑A)和第二試劑(試劑a8)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑A)HEPES(pH7.5)10mmol/L
EMSE 0.3g/L第二試劑(試劑a8)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L過氧化氫酶 20kU/L化學(xué)修飾的LPL311 0.2kU/LCOO321 5.0kU/Lミゲノ-ルPA-30 0.5g/L實施例9制備由以下第一試劑(試劑A)和第二試劑(試劑a9)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑A)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L第二試劑(試劑a9)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L過氧化氫酶 20kU/L化學(xué)修飾的LPL311 0.2kU/LCOO321 5.0kU/Lニツコ-ルTAMDS15 0.1g/L實施例10制備由以下第一試劑(試劑A)和第二試劑(試劑a10)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑A)HEPES(pH7.5) 10mmol/L
EMSE 0.3g/L第二試劑(試劑a10)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林0.3g/L過氧化氫酶20kU/L化學(xué)修飾的LPL311 0.2kU/LCOO3215.0kU/LBLAUNONDT03 0.5g/L實施例11制備由以下第一試劑(試劑A)和第二試劑(試劑a11)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑A)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L第二試劑(試劑a11)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林0.3g/L過氧化氫酶20kU/L化學(xué)修飾的LPL311 0.2kU/LCOO3215.0kU/LBLAUNON DT15 0.1g/L實施例12制備由以下第一試劑(試劑A)和第二試劑(試劑a12)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑A)HEPES(pH7.5) 10mmol/L
EMSE 0.3g/L第二試劑(試劑a12)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林0.3g/L過氧化氫酶20kU/L化學(xué)修飾的LPL311 0.2kU/LCOO3215.0kU/Lアスフアゾ-ル#10 0.1g/L對照例1制備由以下第一試劑(試劑A)和第二試劑(試劑a)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑A)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L第二試劑(試劑a)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林0.3g/L過氧化氫酶20kU/L化學(xué)修飾的LPL311 0.2kU/LCOO3215.0kU/L實施例13用實施例1的試劑盒測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
(1)標準曲線的制備用實施例1的試劑盒，用生理鹽水(HDL膽甾醇濃度0.0mg/dL)和血清(HDL膽甾醇濃度80.0mg/dL)作為標準液，在日立7170S型自動分析裝置上，制備表示HDL膽甾醇濃度和吸光度的間關(guān)系的標準曲線。
此處所謂的「吸光度」，表示根據(jù)通過以下反應(yīng)測定的兩個吸光度值(E1和E2)，從E2中扣除E1所得的數(shù)值。
在反應(yīng)池中加入標準液(2μL)和第一試劑(0.15mL)，37℃保溫5分鐘，用主波長600nm、副波長700nm測定反應(yīng)液的吸光度(E1)，然后在反應(yīng)液中加入第二試劑(0.05mL)，再在37℃保溫5分鐘，用主波長600nm、副波長700nm測定反應(yīng)液的吸光度(E2)(2)根據(jù)人血清檢測樣品與實施例1或?qū)φ绽?的試劑盒反應(yīng)，算出該檢測樣品中的吸光度除用人血清檢測樣品代替(1)中制備標準曲線使用的標準液外，用計算(1)的吸光度同樣的方法，算出該檢測樣品中的吸光度。
(3)人血清檢測樣品中的HDL膽甾醇濃度的測定根據(jù)由(2)算出的「吸光度」與由(1)制備的標準曲線，測定各檢測樣品中HDL膽甾醇的濃度。
實施例14除用實施例2的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
實施例15除用實施例3的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
實施例16除用實施例4的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
實施例17除用實施例5的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
實施例18除用實施例6的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
實施例19除用實施例7的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
實施例20除用實施例8的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
實施例21除用實施例9的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
實施例22除用實施例10的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定3人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
實施例23除用實施例11的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
實施例24除用實施例12的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
對照例2除用對照例1的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
然后，用在實施例13～24和對照例2中使用的人血清30樣品，按Clinical Chemisty第45卷10期(1999年)所述的DCM法(DesignatedComparison Method)測定該檢測樣品中的HDL膽甾醇，并比較各實施例和對照例中的數(shù)據(jù)。將各實施例和對照例分別的測定，與用DCM法測定所得相關(guān)系數(shù)，表示在第1表1中。
第1表

根據(jù)實施例13～24和對照例2的比較，得知采用了化合物A(特別是乙烯胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物、聚氧化乙烯烷基胺硫酸鹽、聚氧化乙烯芐基烷基季銨鹽、聚氧化乙烯酸酰胺或烷基丙烯二胺衍生物)的試劑盒中，可以得到與用DCM法進行的測定具有有良好的相關(guān)系數(shù)。
制備由以下成分組成的第一試劑(試劑B)。
實施例25制備由以下第一試劑(試劑B)和第二試劑(試劑a2)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑B)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L硫酸葡聚糖鈉鹽 1.0g/L第二試劑(試劑a2)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L過氧化氫酶 20kU/L化學(xué)修飾的LPL311 0.2kU/LCOO321 5.0kU/LBLAUNON SAP3010 0.5g/L實施例26制備由以下第一試劑(試劑B)和第二試劑(試劑a5)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑B)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L硫酸葡聚糖鈉鹽1.0g/L第二試劑(試劑a5)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林0.3g/L過氧化氫酶20kU/L化學(xué)修飾的LPL311 0.2kU/LCOO3215.0kU/LC16EO30PO20 0.5g/L實施例27制備由以下第一試劑(試劑B)和第二試劑(試劑a7)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑B)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L硫酸葡聚糖鈉鹽1.0g/L第二試劑(試劑a7)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林0.3g/L過氧化氫酶20kU/L化學(xué)修飾的LPL311 0.2kU/LCOO3215.0kU/L(Bisnol)ビスノ-ルSK 0.3g/L實施例28制備由以下第一試劑(試劑B)和第二試劑(試劑a9)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑B)HEPES(pH7.5)10mmol/LEMSE0.3g/L硫酸葡聚糖鈉鹽 1.0g/L第二試劑(試劑a9)HEPES(pH7.0)10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L過氧化氫酶 20kU/L化學(xué)修飾的LPL3110.2kU/LCOO321 5.0kU/Lニツコ-ルTAMDS150.1g/L實施例29制備由以下第一試劑(試劑B)和第二試劑(試劑a13)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑B)HEPES(pH7.5)10mmol/LEMSE0.3g/L硫酸葡聚糖鈉鹽 1.0g/L第二試劑(試劑a13)HEPES(pH7.0)10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L過氧化氫酶 20kU/L化學(xué)修飾的LPL3110.2kU/LCOO321 5.0kU/Lユニセ-フA-LM 0.5g/L
實施例30制備由以下第一試劑(試劑B)和第二試劑(試劑a10)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑B)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L硫酸葡聚糖鈉鹽 1.0g/L第二試劑(試劑a10)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L過氧化氫酶 20kU/L化學(xué)修飾的LPL311 0.2kU/LCOO321 5.0kU/LBLAUNON DT03 0.5g/L對照例3制備由以下第一試劑(試劑B)和第二試劑(試劑a)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑B)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L硫酸葡聚糖鈉鹽 1.0g/L第二試劑(試劑a)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L過氧化氫酶 20kU/L化學(xué)修飾的LPL311 0.2kU/LCOO321 5.0kU/L
實施例31除用實施例25的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
實施例32除用實施例26的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
實施例33除用實施例27的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
實施例34除用實施例28的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
實施例35除用實施例29的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
實施例36除用實施例30的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
對照例4除用對照例3的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
將實施例31～36和對照例4分別的測定與用DCM法的測定的相關(guān)系數(shù)，表示在第2表中。
第2表

由第2表可知，采用含有化合物A的試劑盒進行測定時，即使同時加有化合物B(聚合陰離子)，也未見與DCM測定的相關(guān)性。從第2表還得知，采用了化合物A(特別是烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物、聚氧化乙烯芐基烷基季銨鹽、聚氧化乙烯酸酰胺，氧化烷基胺或烷基丙烯二胺衍生物)及化合物B(聚合陰離子)的試劑盒，與DCM法進行的測定具有良好的相關(guān)性。另外還得知，比較實施例31和實施例14、實施例32和實施例17、實施例33和實施例19、實施例34和實施例21以及實施例36和實施例22，通過采用化合物A和化合物B(聚合陰離子)，提高了與DCM法測定的相關(guān)系數(shù)。
實施例37制備由以下第一試劑(試劑A)和第二試劑(試劑b1)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑A)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L第二試劑(試劑b1)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L過氧化氫酶 20kU/LBIGCHAP 3.0g/L化學(xué)修飾的LPL311 0.2kU/LCOO321 5.0kU/LC16EO30PO20 0.24g/L對照例5制備由以下第一試劑(試劑A)和第二試劑(試劑b)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑A)HEPES(pH7.5)10mmol/LEMSE0.3g/L第二試劑(試劑b)HEPES(pH7.0)10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L過氧化氫酶 20kU/LBIGCHAP 3.0g/L化學(xué)修飾的LPL3110.2kU/LCOO321 5.0kU/L實施例38除用實施例37的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
對照例6除用對照例5的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
將對照例6和實施例38各自的測定與上述DCM法進行的測定的相關(guān)系數(shù)，表示在第3表中。
第3表

由第3表可見，采用含有化合物B(非離子性膽汁酸衍生物)的試劑盒測定時，通過與化合物A并用，可使其與DCM法測定的相關(guān)性更好。另外，比較實施例17與實施例38可知，使烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物(化合物A)與非離子性膽汁酸衍生物(化合物B)共存，可使其與DCM法的測定的相關(guān)性更好。
實施例39制備由以下第一試劑(試劑A)和第二試劑(試劑c1)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑A)HEPES(pH7.5)10mmol/LEMSE0.3g/L第二試劑(試劑c1)HEPES(pH7.0)10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L過氧化氫酶 20kU/L膽酸鈉 6.0g/L化學(xué)修飾的LPL3110.2kU/L
COO3215.0kU/LC16EO30PO20 0.2g/L對照例7制備由以下第一試劑(試劑A)和第二試劑(試劑c)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑A)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L第二試劑(試劑c)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林0.3g/L過氧化氫酶20kU/L膽酸鈉6.0g/L化學(xué)修飾的LPL311 0.2kU/LCOO3215.0kU/L實施例40除用實施例39的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
對照例8除用對照例7的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
將對照例6與實施例40各自的測定，與上述DCM法的測定的相關(guān)系數(shù)，表是在第4表中。
第4表

由第4表可見，采用含有化合物B(陰離子性膽汁酸衍生物)的試劑盒測定時，通過與化合物A并用，可使其與DCM的相關(guān)性更好。另外，比較實施例17與實施例40可知，使烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物(化合物A)與陰離子性膽汁酸衍生物(化合物B)共存，可使其與DCM法測定的相關(guān)性更好。
實施例41制備由以下第一試劑(試劑A)和第二試劑(試劑d1)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑A)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L第二試劑(試劑d1)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林0.3g/L過氧化氫酶20kU/LCHAPS 6.0g/L
化學(xué)修飾的LPL311 0.2kU/LCOO3215.0kU/LC16EO30PO20 0.2g/L對照例9制備由以下第一試劑(試劑A)和第二試劑(試劑d)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑A)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L第二試劑(試劑d)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林0.3g/L過氧化氫酶20kU/LCHAPS 6.0g/L化學(xué)修飾的LPL311 0.2kU/LCOO3215.0kU/L實施例42除用實施例41的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
對照例10除用對照例9的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
將對照例10與實施例42各自的測定，與利用上述DCM法測定的褶關(guān)系數(shù)，表示在表5中。
第5表

由第5表可見，采用含有化合物B(兩性膽汁酸衍生物)的試劑盒測定時，通過與化合物A并用，可使其與DCM法的相關(guān)性更好。另外，比較實施例17與實施例42可知，使烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物(化合物A)與兩性膽汁酸衍生物(化合物B)共存，可使其與DCM法進行的測定的相關(guān)性更好。
實施例43制備由以下第一試劑(試劑B)和第二試劑(試劑c1)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑B)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L硫酸葡聚糖鈉鹽 1.0g/L第二試劑(試劑c1)HEPES(pH7.0) 10mmol/L
4-氨基安替比林0.3g/L過氧化氫酶20kU/L膽酸鈉6.0g/L化學(xué)修飾的LPL311 0.2kU/LCOO3215.0kU/LC16EO30PO20 0.2g/L實施例44制備由以下第一試劑(試劑B)和第二試劑(試劑c2)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑B)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L硫酸葡聚糖鈉鹽1.0g/L第二試劑(試劑c2)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林0.3g/L過氧化氫酶20kU/L膽酸鈉6.0g/L化學(xué)修飾的LPL311 0.2kU/LCOO3215.0kU/Lビスノ一ルSK 0.3g/L對照例11制備由以下第一試劑(試劑B)和第二試劑(試劑c)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑B)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L
硫酸葡聚糖鈉鹽 1.0g/L第二試劑(試劑c)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L過氧化氫酶 20kU/L膽酸鈉 6.0g/L化學(xué)修飾的LPL311 0.2kU/LCOO321 5.0kU/L實施例45除用實施例43的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
實施例46除用實施例44的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
對照例12除用對照例11的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
將對照例12與實施例45和實施例46各自的測定與上述DCM法進行的測定的相關(guān)系數(shù)，表示在第6表中。
第6表

由第6表可見，采用含有聚合陰離子和陰離子性膽汁酸衍生物(均為化合物B)的試劑盒測定時，通過與化合物A并用，可使其與DCM法的測定的相關(guān)性更好。另外，比較實施例17與實施例45，以及實施例19與實施例46可知，使烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物(化合物A)與聚合陰離子和陰離子性膽汁酸衍生物(2個化合物B)共存，或者使聚氧化乙烯芐基烷基季銨鹽(化合物A)與聚合陰離子和陰離子性膽汁酸衍生物(2個化合物B)共存，可使其與DCM法進行測定的相關(guān)性更好。
實施例47制備由以下第一試劑(試劑C)和第二試劑(試劑c1)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑C)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L
硫酸葡聚糖鈉鹽 1.0g/LBSA1.0g/L第二試劑(試劑c1)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L過氧化氫酶 20kU/L膽酸鈉 6.0g/L化學(xué)修飾的LPL311 0.2kU/LCOO321 5.0kU/LC16EO30PO200.2g/L對照例13制備由以下第一試劑(試劑C)和第二試劑(試劑c)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑C)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L硫酸葡聚糖鈉鹽 1.0g/LBSA1.0g/L第二試劑(試劑c)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L過氧化氫酶 20kU/L膽酸鈉 6.0g/L化學(xué)修飾的LPL311 0.2kU/LCOO321 5.0kU/L實施例48除用實施例47的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
對照例14除用對照例13的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
將對照例14與實施例48各自的測定與上述DCM法進行測定的相關(guān)系數(shù)，表示在第7表中。
第7表

由第7表可見，采用含有聚合陰離子和陰離子性膽汁酸衍生物，以及白蛋白(都是化合物B)的試劑盒測定時，通過與化合物A(烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物)并用，可使其與DCM法的相關(guān)性更好。另外，比較實施例17與實施例48可知，使烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物(化合物A)與聚合陰離子和陰離子性膽汁酸衍生物(2個化合物B)、白蛋白共存，可使其與DCM法進行的測定的相關(guān)性更好。
實施例49
制備由以下第一試劑(試劑A)和第二試劑(試劑e1)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑A)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L第二試劑(試劑e1)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L過氧化氫酶 20kU/LアデカプルロニツクTR704 5.0g/L化學(xué)修飾的LPL311 0.2kU/LCOO321 5.0kU/LBLAUNONSAP3010 0.5g/L實施例50制備由以下第一試劑(試劑A)和第二試劑(試劑e2)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑A)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L第二試劑(試劑e2)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L過氧化氫酶 20kU/LアデカプルロニツクTR704 5.0g/L化學(xué)修飾的LPL311 0.2kU/LCOO321 5.0kU/Lミグノ-ルPA-30 0.5g/L
實施例51制備由以下第一試劑(試劑A)和第二試劑(試劑e3)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑A)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L第二試劑(試劑e3)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林0.3g/L過氧化氫酶20kU/LアデカプルロニツクTR704 5.0g/L化學(xué)修飾的LPL311 0.2kU/LCOO3215.0kU/Lユニセ-フA-LY 0.5g/L對照例15制備由以下第一試劑(試劑A)和第二試劑(試劑e)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑A)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L第二試劑(試劑e)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林0.3g/L過氧化氫酶20kU/LアデカプルロニツクTR704 5.0g/L化學(xué)修飾的LPL311 0.2kU/L
COO321 5.0kU/L實施例52除用實施例49的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
實施例53除用實施例50的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
實施例54除用實施例51的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
對照例16除用對照例15的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
將對照例16、實施例52、實施例53和實施例54各自的測定，與上述DCM法進行的測定的相關(guān)系數(shù)，表示在第8表。
第8表

由第8表可見，采用含有乙二胺四聚氧化烯烴(化合物B)的試劑盒測定時，通過與化合物A(烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物、聚氧化乙烯烷基胺硫酸鹽或氧化烷基胺)并用，可使其與DCM法的相關(guān)性更好。另外，根據(jù)比較實施例14與實施例52可知，使乙二胺四聚氧化烯烴與烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物(化合物A)共存，可使其與DCM法進行的測定的相關(guān)系數(shù)更好。根據(jù)比較實施例20與實施例53可知，乙二胺四聚氧化烯烴(化合物B)與聚氧化乙烯烷基胺硫酸鹽(化合物A)共存，與DCM法進行的測定的相關(guān)系數(shù)得到提高。另外，根據(jù)比較實施例53實施例54可知，用氧化烷基胺(化合物A)代替聚氧化乙烯烷基胺硫酸鹽，通過使乙二胺四聚氧化烯烴(化合物B)共存，使其與DCM法進行的測定的相關(guān)性更好。
第9表

由第9表可見，采用含有聚合陰離子和乙二胺四聚氧化烯烴(均為化合物B)的試劑盒測定時，通過與化合物A(烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物、聚氧化乙烯烷基胺硫酸鹽、氧化烷基胺、聚氧化乙烯芐基烷基季銨鹽或聚氧化乙烯酸酰胺)并用，使其與DCM法的相關(guān)性更好。另外，根據(jù)比較實施例14與實施例60可知，使聚合陰離子及乙二胺四聚氧化烯烴2個化合物B)與烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物(化合物A)共存，使其與DCM法進行的測定的相關(guān)性更好。根據(jù)比較實施例20與實施例61可知，使聚合陰離子及乙二胺四聚氧化烯烴(2個化合物B)與聚氧化乙烯烷基胺硫酸鹽(化合物A)共存，使其與DCM法進行的測定的相關(guān)性更好。根據(jù)比較實施例61和實施例62可知，即使是用氧化烷基胺代替化合物A聚氧化乙烯烷基胺硫酸鹽，也使其與DCM法進行的測定的相關(guān)性更好。
再根據(jù)比較實施例19和實施例63可知，用聚合陰離子和乙二胺四聚氧化烯烴(2個化合物B)與聚氧化乙烯芐基烷基季銨鹽(化合物A)共存，使其與DCM法進行的測定的相關(guān)性更好。另外，根據(jù)比較實施例63和實施例64可知，用聚氧化乙烯酸酰胺代替化合物A聚氧化乙烯芐基烷基季銨鹽時，也其使與DCM法進行的測定的相關(guān)性更好。
實施例65制備由以下第一試劑(試劑D)和第二試劑(試劑f1)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑D)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L硫酸鈉5.0/L硫酸葡聚糖鈉鹽1.0/L
BSA 2.0/L第二試劑(試劑f1)HEPES(pH7.0)10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L過氧化氫酶 20kU/Lナイミ-ンL207 0.3g/L膽酸鈉 1.5g/L化學(xué)修飾的LPL3110.1kU/LCOO321 5.0kU/LBLAUNON SAP3004 0.15g/L實施例66制備由以下第一試劑(試劑D)和第二試劑(試劑f2)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑D)HEPES(pH7.5)10mmol/LEMSE0.3g/L硫酸鈉 5.0/L硫酸葡聚糖鈉鹽 1.0/LBSA 2.0/L第二試劑(試劑f2)HEPES(pH7.0)10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L過氧化氫酶 20kU/Lナイミ-ンL207 0.3g/L膽酸鈉 1.5g/L化學(xué)修飾的LPL3110.1kU/LCOO321 5.0kU/LC16EO30PO10 0.3g/L
對照例19制備由以下第一試劑(試劑D)和第二試劑(試劑f)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑D)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L硫酸鈉5.0/L硫酸葡聚糖鈉鹽1.0/LBSA 2.0/L第二試劑(試劑f)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林0.3g/L過氧化氫酶20kU/Lナイミ-ンL207 0.3g/L膽酸鈉1.5g/L化學(xué)修飾的LPL311 0.1kU/LCOO3215.0kU/L實施例67除用實施例65的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
實施例68除用實施例66的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
對照例20除用對照例19的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
將對照例20、實施例67和68各自的測定，與上述DCM法進行的測定的相關(guān)系數(shù)，表示在第10表中。
第10表

由第10表可見，采用含有聚合陰離子、聚氧化乙烯烷基胺和膽汁酸衍生物(均為化合物B)以及白蛋白的試劑盒測定時，通過使其與化合物A(烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物)共存，使其與DCM法的相關(guān)性更好。
實施例69制備由以下第一試劑(試劑D)和第二試劑(試劑g1)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑D)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L硫酸鈉5.0g/L硫酸葡聚糖鈉鹽1.0g/LBSA 2.0g/L第二試劑(試劑g1)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林0.3g/L過氧化氫酶20kU/Lナイミ-ンL207 0.3g/L乙二胺PO52EO601.0g/L化學(xué)修飾的LPL311 0.1kU/LCOO3215.0kU/LBLAUNON SAP3004 0.05g/L實施例70制備由以下第一試劑(試劑D)和第二試劑(試劑g2)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑D)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L硫酸鈉5.0g/L硫酸葡聚糖鈉鹽1.0g/LBSA 2.0g/L第二試劑(試劑g2)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林0.3g/L
過氧化氫酶 20kU/Lナイミ-ンL2070.3g/L乙二胺PO52EO60 1.0g/L化學(xué)修飾的LPL311 0.1kU/LCOO321 5.0kU/LC16EO30PO10 0.2g/L實施例71制備由以下第一試劑(試劑D)和第二試劑(試劑g3)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑D)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L硫酸鈉 5.0g/L硫酸葡聚糖鈉鹽 1.0g/LBSA 2.0g/L第二試劑(試劑g3)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L過氧化氫酶 20kU/Lナイミ-ンL2070.3g/L乙二胺PO52EO60 1.0g/L化學(xué)修飾的LPL311 0.1kU/LCOO321 5.0kU/LナイミツドMT-215 0.06g/L實施例72制備由以下第一試劑(試劑D)和第二試劑(試劑g4)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑D)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L硫酸鈉5.0g/L硫酸葡聚糖鈉鹽1.0g/LBSA 2.0g/L第二試劑(試劑g4)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林0.3g/L過氧化氫酶20kU/Lナイミ-ンL207 0.3g/L乙二胺PO52EO601.0g/L化學(xué)修飾的LPL311 0.1kU/LCOO3215.0kU/Lビスノ-ルSK 0.1g/L對照例21制備由以下第一試劑(試劑D)和第二試劑(試劑g)組成的HDL膽甾醇測定用試劑盒。
第一試劑(試劑D)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L硫酸鈉5.0g/L硫酸葡聚糖鈉鹽1.0g/LBSA 2.0g/L第二試劑(試劑g)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林0.3g/L
過氧化氫酶 20kU/Lナイミ-ンL2070.3g/L乙二胺PO52EO60 1.0g/L化學(xué)修飾的LPL311 0.1kU/LCOO321 5.0kU/L實施例73除用實施例69的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
實施例74除用實施例70的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
實施例75除用實施例71的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
實施例76除用實施例72的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
對照例22除用對照例21的試劑盒代替實施例1的試劑盒外，用與實施例13相同的測定方法，在日立7170型自動分析裝置上，測定人血清30檢測樣品中的HDL膽甾醇。
將對照例22與實施例73～76各自的測定，與上述DCM法進行的測定的相關(guān)系數(shù)，表示在第11表中。
第11表

由第11表可見，采用含有聚合陰離子、聚氧化乙烯烷基胺和膽汁酸衍生物(均為化合物B)以及白蛋白的試劑盒測定時，通過與化合物A(烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物、聚氧化乙烯芐基烷基季銨鹽或聚氧化乙烯酸酰胺)共存，使其與DCM法的相關(guān)性更好。
工業(yè)實用性根據(jù)本發(fā)明，提供了對診斷動脈硬化等疾病有用的簡便而準確的HDL膽甾醇測定方法、測定試劑及測定用試劑盒。
權(quán)利要求
1.一種測定檢測樣品內(nèi)高密度脂蛋白中膽甾醇的方法，其中，包含使檢測樣品與(i)膽甾醇酯水解酶和膽甾醇氧化酶，或(ii)膽甾醇酯水解酶、氧化型輔酶及膽甾醇脫氫酶，在含有選自烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物、聚氧化乙烯烷基胺硫酸鹽、聚氧化乙烯芐基烷基季銨鹽、聚氧化乙烯酸酰胺、氧化烷基胺和烷基丙烯二胺衍生物構(gòu)成的族中的至少的一種物質(zhì)的水溶性介質(zhì)中，進行反應(yīng)生成過氧化氫或還原型輔酶；以及測定所生成的過氧化氫或還原型輔酶。
2.權(quán)利要求1所述的方法，其中，水溶性介質(zhì)還包含選自聚合陰離子、膽汁酸衍生物、乙二胺四聚氧化烯烴、聚氧化乙烯烷基胺和聚氧化乙烯鏈烯基胺構(gòu)成的族中的至少一種物質(zhì)。
3.權(quán)利要求2所述的方法，其中，聚合陰離子是硫酸葡聚糖或其鹽。
4.權(quán)利要求2或3所述的方法，其中，膽汁酸衍生物是選自膽酸或其鹽、?；悄懰峄蚱潲}、甘氨膽酸或其鹽、石膽酸或其鹽、脫氧膽酸或其鹽、鵝脫氧膽酸或其鹽、熊脫氧膽酸或其鹽、7-氧代石膽酸或其鹽、12-氧代石膽酸或其鹽、12-氧代鵝脫氧膽酸或其鹽、7-氧代脫氧膽酸或其鹽、豬膽酸或其鹽、豬脫氧膽酸或其鹽、脫氫膽酸或其鹽、通式(I)[化11]R1-CH2-CH(R2)-CH2-SO3-(I)[此通式中，R1表示3-(3-膽丙酰胺基)二甲氨基，R2表示氫原子或羥基]表示的化合物和通式(II)[化12] [X表示氫原子或羥基，R3和R4可以相同或相異，表示取代或未取代的烷基，或取代或未取代的烷?；鵠表示的化合物構(gòu)成的族中的至少一種物質(zhì)。
5.權(quán)利要求2～4任一項所述的方法，其中，水性介質(zhì)還包括白蛋白。
6.測定高密度脂蛋白中膽甾醇的試劑，其特征在于，含有選自烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物、聚氧化乙烯烷基胺硫酸鹽、聚氧化乙烯芐基烷基季銨鹽、聚氧化乙烯酸酰胺、氧化烷基胺和烷基丙烯二胺衍生物構(gòu)成的族中的至少一種物質(zhì)，膽甾醇酯水解酶，膽甾醇氧化酶及過氧化氫測定用試劑。
7.測定高密度脂蛋白中膽甾醇的試劑，其特征在于，含有選自烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物、聚氧化乙烯烷基胺硫酸鹽、聚氧化乙烯芐基烷基季銨鹽、聚氧化乙烯酸酰胺、氧化烷基胺和烷基聚氧化丙烯二胺衍生物構(gòu)成的族中的至少一種物質(zhì)，膽甾醇酯水解酶，膽甾醇脫氫酶及氧化型輔酶。
8.權(quán)利要求7所述的試劑，其中，還含有測定還原型輔酶的試劑。
9.權(quán)利要求6～8任一項所述的試劑，其中，還含有選自聚合陰離子、膽汁酸衍生物、乙二胺四聚氧化烯烴、聚氧化乙烯烷基胺和聚氧化乙烯鏈烯基胺構(gòu)成的族中的至少一種物質(zhì)。
10.權(quán)利要求9所述的試劑，其中，聚合陰離子是硫酸葡聚糖或其鹽。
11.權(quán)利要求9或10所述的試劑，其中，膽汁酸衍生物是選自膽酸或其鹽、?；悄懰峄蚱潲}、甘氨膽酸或其鹽、石膽酸或其鹽、脫氧膽酸或其鹽、鵝脫氧膽酸或其鹽、熊脫氧膽酸或其鹽、7-氧代石膽酸或其鹽、12-氧代石膽酸或其鹽、12-氧代鵝脫氧膽酸或其鹽、7-氧代脫氧膽酸或其鹽、豬膽酸或其鹽、豬脫氧膽酸或其鹽、脫氫膽酸或其鹽、通式(I)[化13]R1-CH2-CH(R2)-CH2-SO3-(I)[此通式中，R1表示3-(3-膽丙酰胺基)二甲氨基，R2表示氫原子或羥基]表示的化合物和通式(II)[化14] [X表示氫原子或羥基，R3和R4可以相同或相異，表示取代或未取代的烷基，或取代或未取代的烷?；鵠表示的化合物構(gòu)成的族中的至少的一種物質(zhì)。
12.權(quán)利要求9～11任一項所述的試劑，其中，還含有白蛋白。
13.測定高密度脂蛋白中膽甾醇的試劑盒，其特征在于，含有第一試劑及第二試劑，在第一試劑及第二試劑中含有測定過氧化氫的試劑，在第二試劑中含有膽甾醇氧化酶，在第一試劑和第二試劑二者中或其中之一中含有選自烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物、聚氧化乙烯烷基胺硫酸鹽、聚氧化乙烯芐基烷基季銨鹽、聚氧化乙烯酸酰胺、氧化烷基胺和烷基聚氧丙烯二胺衍生物構(gòu)成的族中的至少一種物質(zhì)以及膽甾醇酯水解酶。
14.測定高密度脂蛋白中膽甾醇的試劑盒，其特征在于，含有第一試劑及第二試劑，在第一試劑中含有氧化型輔酶，在第二試劑中含有膽甾醇脫氫酶，在第一試劑和第二試劑二者中或其中之一中含有選自烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物、聚氧化乙烯烷基胺硫酸鹽、聚氧化乙烯芐基烷基季銨鹽、聚氧化乙烯酸酰胺氧化烷基胺和烷基氧化丙烯二胺衍生物構(gòu)成的族中的至少一種物質(zhì)，以及膽甾醇酯水解酶。
15.權(quán)利要求14所述的試劑盒，其中，在第一試劑和第二試劑二者中或其中之一中還含有還原型輔酶測定用試劑。
16.權(quán)利要求13～15任一項所述的試劑盒，其中，在第一試劑、第二試劑二者中或其中之一中還含有選自聚合陰離子、膽汁酸衍生物、乙二胺四聚氧化烯烴、聚氧化乙烯烷基胺和聚氧化乙烯鏈烯基胺構(gòu)成的族中的至少一種物質(zhì)。
17.權(quán)利要求16所述的試劑盒，其中，聚合陰離子是硫酸葡聚糖或其鹽。
18.權(quán)利要求16或17所述的試劑盒，其中，膽汁酸衍生物是選自膽酸或其鹽、?；悄懰峄蚱潲}、甘氨膽酸或其鹽、石膽酸或其鹽、脫氧膽酸或其鹽、鵝脫氧膽酸或其鹽、熊脫氧膽酸或其鹽、7-氧代石膽酸或其鹽、12-氧代石膽酸或其鹽、12-氧代鵝脫氧膽酸或其鹽、7-氧代脫氧膽酸或其鹽、豬膽酸或其鹽、豬脫氧膽酸或其鹽、脫氫膽酸或其鹽、通式(I)[化15]R1-CH2-CH(R2)-CH2-SO3-(I)[R1表示3-(3-膽丙酰胺基)二甲氨基，R2表示氫原子或羥基]表示的化合物和通式(II)[化16] [X表示氫原子或羥基，R3和R4可以相同或相異，表示取代或未取代的烷基，或取代或未取代的烷?；鵠表示的化合物構(gòu)成的族中的至少一種物質(zhì)。
19.權(quán)利要求16～18任一項所述的試劑盒，其中，在第一試劑和第二試劑二者中或其中之一中還含有白蛋白。
全文摘要
一種測定檢測樣品內(nèi)高密度脂蛋白中膽甾醇的方法，該方法包含使檢測樣品與(i)膽甾醇酯水解酶和膽甾醇氧化酶，或(ii)膽甾醇酯水解酶、氧化型輔酶及膽甾醇脫氫酶，在含有選自烷基胺聚氧化乙烯聚氧化丙烯縮合物、聚氧化乙烯烷基胺硫酸鹽、聚氧化乙烯芐基烷基季銨鹽、聚氧化乙烯酸酰胺、氧化烷基胺和烷基丙烯二胺衍生物構(gòu)成的族中的至少一種物質(zhì)的水溶性介質(zhì)中進行反應(yīng)，生成過氧化氫或還原型輔酶；以及測定所生成的過氧化氫或還原型輔酶。
文檔編號C12Q1/44GK1918303SQ20058000499
公開日2007年2月21日 申請日期2005年4月15日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月15日
發(fā)明者片山有基, 藤中真由美 申請人:協(xié)和梅迪克斯株式會社