專利名稱：一種真菌細(xì)菌培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于微生物領(lǐng)域。更具體地說，本發(fā)明涉及一種既適合真菌生長，也適合細(xì)菌生長的無菌試驗(yàn)專用培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
眾所周知，培養(yǎng)基是人工合成各種營養(yǎng)物質(zhì)供微生物生長的基質(zhì)。一般而言，對培養(yǎng)不同營養(yǎng)類型的微生物需要采用不同的培養(yǎng)基比如無菌試驗(yàn)中有一些專用培養(yǎng)基，中國藥典2000年版收載了一種無菌試驗(yàn)用真菌培養(yǎng)基(中國藥典，2000年版(二部)附錄89頁，培養(yǎng)基2，以下簡稱“中國藥典培養(yǎng)基”)，USP 24版藥典收載了一種無菌試驗(yàn)用大豆-胰酪胨培養(yǎng)基(USP 241818，以下簡稱“美國藥典培養(yǎng)基”)。美國藥典培養(yǎng)基適宜細(xì)菌生長，但不是真菌生長適宜的培養(yǎng)基。而中國藥典培養(yǎng)基是真菌生長的適宜培養(yǎng)基，但不適合細(xì)菌生長，即使供試品污染了細(xì)菌，也有可能出現(xiàn)漏檢。在無菌試驗(yàn)中，定量供試品需要一半接種到需氣菌厭氣菌培養(yǎng)基檢查細(xì)菌，另一半接種到真菌培養(yǎng)基檢查真菌，因此，中國藥典和美國藥典培養(yǎng)基都存在缺陷，利用它們進(jìn)行無菌檢查都不是最理想的培養(yǎng)基。

發(fā)明內(nèi)容要解決的問題本發(fā)明的目的是提供一種既適合真菌生長，也適合細(xì)菌生長的無菌試驗(yàn)專用培養(yǎng)基。
技術(shù)方案發(fā)明人在大量深入系統(tǒng)研究中國藥典無菌試驗(yàn)用真菌培養(yǎng)基，比較中國藥典培養(yǎng)基和美國藥典培養(yǎng)基優(yōu)劣的基礎(chǔ)上，對培養(yǎng)基組分進(jìn)行拆方分析，以多株微生物菌株進(jìn)行靈敏度對比試驗(yàn)，大膽創(chuàng)新，精心設(shè)計(jì)，獲得了本發(fā)明性能優(yōu)良的真菌細(xì)菌培養(yǎng)基(以下簡稱“本發(fā)明的培養(yǎng)基”)。
本發(fā)明的培養(yǎng)基由胨、酵母浸出粉、葡萄糖、氯化鈉、磷酸氫二鉀、七水硫酸鎂和水組成。
在1000毫升水中，各組份的含量分別為胨13-17克、酵母浸出粉2-4克、葡萄糖8-20克、氯化鈉4-6克、磷酸氫二鉀2-4克、七水硫酸鎂0.3-0.7克。
在1000毫升水中，各組份優(yōu)選的含量分別為胨15克、酵母浸出粉3克、葡萄糖15克、氯化鈉5克、磷酸氫二鉀3克、七水硫酸鎂0.5克。
本發(fā)明的培養(yǎng)基的pH值為7.2±0.有益效果生長性能測試表明，就細(xì)菌生長管數(shù)而言，本發(fā)明的培養(yǎng)基多于中國藥典培養(yǎng)基和美國藥典培養(yǎng)基；雖然就真菌生長管數(shù)而言，本發(fā)明的培養(yǎng)基比兩種藥典培養(yǎng)基略少，但從最能反映培養(yǎng)基質(zhì)量的生長指數(shù)來看，本發(fā)明的培養(yǎng)基的生長指數(shù)均值卻大于美國藥典培養(yǎng)基。因此，本發(fā)明的真菌細(xì)菌培養(yǎng)基與兩種藥典培養(yǎng)基比較，具有更廣的適用性，其既適合真菌生長，也適合細(xì)菌生長。
本發(fā)明的培養(yǎng)基比中國藥典培養(yǎng)基提高細(xì)菌檢出率約50％，能大大增加檢測的可靠性，從而大大提高藥品的安全性。
本發(fā)明的培養(yǎng)基原料易得，無需依賴進(jìn)口，其成本比美國藥典培養(yǎng)基低約25％。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1制備本發(fā)明的培養(yǎng)基向2000毫升玻璃容器倒入1000毫升蒸餾水，稱取胨13克、酵母浸出粉4克、葡萄糖20克、氯化鈉4克、磷酸氫二鉀4克和七水硫酸鎂0.7克分別置于玻璃容器中，振蕩均勻。由此獲得的培養(yǎng)基pH值為7.4。
實(shí)施例2制備本發(fā)明的培養(yǎng)基向2000毫升玻璃容器倒入1000毫升蒸餾水，稱取胨15克、酵母浸出粉3克、葡萄糖15克、氯化鈉5克、磷酸氫二鉀3克和七水硫酸鎂0.5克分別置于玻璃容器中，振蕩均勻。由此獲得的培養(yǎng)基pH值為7.2實(shí)施例3制備本發(fā)明的培養(yǎng)基向2000毫升玻璃容器倒入1000毫升蒸餾水，稱取胨17克、酵母浸出粉2克、葡萄糖8克、氯化鈉6克、磷酸氫二鉀2克和七水硫酸鎂0.3克分別置于玻璃容器中，振蕩均勻。由此獲得的培養(yǎng)基pH值為7.0效果實(shí)例中國藥典培養(yǎng)基、美國藥典培養(yǎng)基和本發(fā)明的培養(yǎng)基的靈敏度比較培養(yǎng)基取新近生產(chǎn)的干燥的中國藥典培養(yǎng)基和美國藥典培養(yǎng)基各三批，培養(yǎng)基由中國藥品生物制品檢定所提供，中國藥典培養(yǎng)基的批號為0105252、20110、010524，美國藥典培養(yǎng)基的批號為1109、001108、00032。本發(fā)明的培養(yǎng)基采用實(shí)施例2制備的培養(yǎng)基。均配制成10ml/支。
使用的菌株為枯草桿菌CMCC 63501，黑曲霉ATCC 16404、白色念珠菌CMCC 98001、蠟葉芽枝霉7702。
菌液制備取蠟葉芽枝霉、黑曲霉和枯草桿菌的新鮮斜面培養(yǎng)物制備成菌液，再比濁；白色念珠菌直接進(jìn)行液體培養(yǎng)。然后根據(jù)菌株的特性分別按10倍稀釋法稀釋至1∶105、1∶106、1∶107或1∶107、1∶108、1∶109。
靈敏度測定每株實(shí)驗(yàn)菌均選用最后三個(gè)稀釋級的菌液，每個(gè)稀釋級的菌液分別加至每種培養(yǎng)基每批各3支管，每支管1ml菌液，均置20-25℃培養(yǎng)，逐日觀察培養(yǎng)結(jié)果。重復(fù)進(jìn)行三次。結(jié)果見表1和表2。
表1 4株菌在3種培養(yǎng)基中三次生長試驗(yàn)的結(jié)果實(shí)驗(yàn)菌株每次平均培養(yǎng)基 每天生長管數(shù)總和生長管數(shù)12 3 4 5 6 7枯草桿菌中國藥典培養(yǎng)基15 15 15 15 15 15 1513 14 14 14 14 14 1439 1310 10 10 10 10 10 10美國藥典培養(yǎng)基17 17 18 18 18 18 1815 15 15 15 15 15 1543 14.310 10 10 10 10 10 10本發(fā)明的培養(yǎng)基15 15 15 15 15 15 1515 15白色念珠菌 中國藥典培養(yǎng)基18 18 18 18 18 18 1817 18 18 18 18 18 1854 1818 18 18 18 18 18 18美國藥典培養(yǎng)基15 16 16 16 16 16 1613 15 16 16 16 16 1649 16.316 17 17 17 17 17 17本發(fā)明的培養(yǎng)基10 13 16 16 16 16 1616 16黑曲霉 中國藥典培養(yǎng)基15 18 22 22 22 22 2213 23 23 23 23 23 2367 22.320 22 22 22 22 22 22美國藥典培養(yǎng)基10 21 21 21 21 21 2112 20 20 20 20 20 2061 20.314 20 20 20 20 20 20本發(fā)明的培養(yǎng)基0 19 21 22 22 22 2222 22蠟葉芽枝霉 中國藥典培養(yǎng)基0 17 20 20 20 20 200 20 20 20 20 20 2062 20.60 22 22 22 22 22 22美國藥典培養(yǎng)基3 14 19 19 20 20 200 8 15 15 15 15 1555 18.30 20 20 20 20 20 20本發(fā)明的培養(yǎng)基0 15 18 20 20 20 2020 20
表2 4株菌在3種培養(yǎng)基中三次生長試驗(yàn)生長指數(shù)*和的平均值比較菌株次數(shù)中國藥典培養(yǎng)基 大豆胰酪胨培養(yǎng)基 本發(fā)明的培養(yǎng)基枯草桿菌1 10-810-710-710-810-810-810-82 10-810-810-710-810-810-710-83 10-710-810-710-710-710-710-867/3＝22.3 68/3＝22.6 24/1＝24白色念珠菌 1 10-710-710-710-710-610-710-72 10-710-710-710-610-710-710-73 10-710-710-710-610-710-710-663/3＝21 60/3＝20 20/1＝20黑曲真菌1 10-610-610-710-610-610-710-72 10-610-710-710-610-710-610-63 10-610-710-610-610-610-610-658/3＝19.3 56/3＝18.6 19/1＝19蠟葉芽枝霉 1 10-610-610-610-610-610-710-62 10-610-610-610-610-610-510-63 10-710-710-610-610-610-610-755/3＝18.3 54/3＝18 19/1＝19·指培養(yǎng)基接種至少3個(gè)稀釋級對照菌液，以生長2管的最高稀釋級為該批培養(yǎng)基的生長指數(shù)，可表示為如10-7(1∶107)。
各批次培養(yǎng)基通過4株菌3級稀釋3次生長試驗(yàn)的生長管數(shù)總和的每次平均生長管數(shù)比較表明(表1)中國藥典培養(yǎng)基，除枯草桿菌外，其他3株真菌每次平均生長管數(shù)(22、20、18)多于美國藥典培養(yǎng)基(20、18、16)，與本發(fā)明的培養(yǎng)基的平均生長管數(shù)(22、20、16)相當(dāng)；而本發(fā)明的真菌細(xì)菌培養(yǎng)基與美國藥典培養(yǎng)基比較，4株菌中，除白色念珠菌每次平均生長管數(shù)兩者相當(dāng)外，其他3株菌每次平均生長管數(shù)(22、20、15)均多于美國藥典培養(yǎng)基的每次平均生長管數(shù)(20、18、14)。
三種培養(yǎng)基三次生長試驗(yàn)生長指數(shù)和的平均值比較表明(表2)中國藥典培養(yǎng)基，除枯草桿菌外，其他3株真菌每次生長指數(shù)均值(19、18、21)均大于美國藥典培養(yǎng)基的生長指數(shù)均值(18、18、20)；而本發(fā)明的培養(yǎng)基與美國藥典培養(yǎng)基的4株菌每次生長指數(shù)均值比較，除白色念珠菌每次生長指數(shù)均值相當(dāng)外，其他3株菌每次生長指數(shù)均值(24、19、19)均大于美國藥典培養(yǎng)基的生長指數(shù)均值(22、18、18)。
就真菌生長而言，本發(fā)明的培養(yǎng)基具有英、美、歐、日無菌試驗(yàn)廣泛采用的美國藥典培養(yǎng)基的特性，而它既適合真菌生長，又適合細(xì)菌生長，4株菌每次平均生長管數(shù)(表1)及每次生長指數(shù)均值(表2)均高于美國藥典培養(yǎng)基的生長管數(shù)。且培養(yǎng)基的原材料易得，成本低，優(yōu)于美國藥典培養(yǎng)基。
生長速度比較表明枯草桿菌在中國藥典培養(yǎng)基中不如在美國藥典培養(yǎng)基和本發(fā)明的培養(yǎng)基中生長旺盛，且無菌膜生長。在3種培養(yǎng)基中的生長速度一致，從第1天開始的生長管數(shù)均未增加。白色念珠菌在中國藥典培養(yǎng)基中生長快，從第2天開始生長的管數(shù)不再增加。在美國藥典培養(yǎng)基和本發(fā)明的培養(yǎng)基中生長一致、從第3天開始生長的管數(shù)不再增加。黑曲霉在中國藥典培養(yǎng)基中生長快，從第2天開始生長的管數(shù)不再增加。美國藥典培養(yǎng)基中從第3天開始生長的管數(shù)不再增加。而在本發(fā)明的培養(yǎng)基中第3天生長管數(shù)已超過美國藥典培養(yǎng)基，第4天生長管數(shù)不再增加。蠟葉芽枝霉在中國藥典培養(yǎng)基和美國藥典培養(yǎng)基生長速度一致。培養(yǎng)3天生長管數(shù)不再增加。而在本發(fā)明的培養(yǎng)基中需培養(yǎng)4天其生長管數(shù)才不再增加。
上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，本發(fā)明的培養(yǎng)基可取代中國藥典培養(yǎng)基和美國藥典培養(yǎng)基。中國藥品生物制品檢定所擬將本發(fā)明的培養(yǎng)基可取代中國藥典培養(yǎng)基的試驗(yàn)結(jié)果以及將本發(fā)明的培養(yǎng)基載入中國藥典的建議提交國家藥典委員會(huì)。
權(quán)利要求
1.一種真菌細(xì)菌培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基由胨、酵母浸出粉、葡萄糖、氯化鈉、磷酸氫二鉀、七水硫酸鎂和水組成。
2.如權(quán)利要求1的真菌細(xì)菌培養(yǎng)基，其中各組份在1000毫升水中的含量分別為胨13-17克、酵母浸出粉2-4克、葡萄糖8-20克、氯化鈉4-6克、磷酸氫二鉀2-4克、七水硫酸鎂0.3-0.7克。
3.如權(quán)利要求2的真菌細(xì)菌培養(yǎng)基，其中各組份在1000毫升水中的含量分別為胨15克、酵母浸出粉3克、葡萄糖15克、氯化鈉5克、磷酸氫二鉀3克、七水硫酸鎂0.5克。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種既適合真菌生長，也適合細(xì)菌生長的無菌試驗(yàn)專用培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基由胨、酵母浸出粉、葡萄糖、氯化鈉、磷酸氫二鉀、七水硫酸鎂和水組成。就細(xì)菌生長管數(shù)而言，本發(fā)明的培養(yǎng)基多于中國藥典和美國藥典收載的無菌試驗(yàn)培養(yǎng)基，并且其生長指數(shù)均值優(yōu)于美國藥典收載的培養(yǎng)基。本發(fā)明的真菌細(xì)菌培養(yǎng)基比中國藥典培養(yǎng)基提高污染菌檢出率約50％，檢測費(fèi)用比美國藥典培養(yǎng)基低約25％。
文檔編號C12N1/20GK1488751SQ02131148
公開日2004年4月14日 申請日期2002年10月11日 優(yōu)先權(quán)日2002年10月11日
發(fā)明者蘇德模, 許華玉, 劉鵬 申請人:中國藥品生物制品檢定所