專利名稱：姬松茸大規(guī)模液體深層發(fā)酵工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種姬松茸10噸罐及10噸罐以上大規(guī)模液體深層發(fā)酵工藝。
姬松茸(Agaricus blazei Murrill)是一種藥用價(jià)值很高的名貴真菌，分類學(xué)上屬擔(dān)子菌亞門(Basidiomycotina)，層菌綱(Hymenomycetes)，傘菌目(Agaricales)，傘菌科(Agaricaceae)，傘菌屬(Agaricus)。姬松茸(又名小松菇、巴西蘑菇，日本稱為草地姬松茸)原產(chǎn)于巴西，秘魯?shù)鹊?，主要分布于海岸地帶草?chǎng)及巴西東南部的皮也拿山地。姬松茸營(yíng)養(yǎng)豐富，味道鮮美，有濃烈的杏仁香味，具有抗腫瘤、預(yù)防癌的效果，同時(shí)具有防低血糖、降低血壓、膽固醇，改善動(dòng)脈硬化等作用。姬松茸子實(shí)體含水份85-87％，每100克干菇中含粗蛋白40-45％，糖質(zhì)38-45％，纖維質(zhì)6-8％，粗灰分5-7％，粗脂肪3-4％，是含糖質(zhì)和蛋白質(zhì)非常豐富的食用菌。姬松茸菌絲體含有多達(dá)18種氨基酸，包括人體必需的八種氨基酸，氨基酸總量為21.37g/100g干樣，其中八種氨基酸占氨基酸總量的39.7％。干菇含維生素B1、B2，還含有較多的麥角甾醇(0.1-0.2％)，經(jīng)過(guò)光照或加熱，這種維生素D原就會(huì)變成維生素D2。隨著研究的深入姬松茸多糖顯著的療效也逐漸被人們所認(rèn)識(shí)，多糖的功效，主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面(1)抗腫瘤、提高免疫功能。(2)降血壓、血脂。(3)健胃保肝。(4)除上述外，還具有抗衰老、抗感染、抗輻射、抗毒物損傷、抗水腫、抗暈、祛痰鎮(zhèn)咳等方面的功效。
目前姬松茸生產(chǎn)的原料多靠人工栽培和野外采集獲得，由于野生姬松茸在自然界中數(shù)量稀少，加上目前野生環(huán)境的破壞和人們對(duì)姬松茸的過(guò)度采集，野外采集的姬松茸來(lái)源越來(lái)越少，而人工栽培雖能提供一定數(shù)量的姬松茸，但具有周期長(zhǎng)(一般三個(gè)月左右)、占地面積大、產(chǎn)量低、需要的勞動(dòng)量大、病蟲害多、受季節(jié)性限制(一般僅限于夏秋季栽培)，無(wú)法進(jìn)行工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)等缺點(diǎn)，因而不能滿足市場(chǎng)上對(duì)姬松茸的需求。而深層培養(yǎng)方法具有周期較短、產(chǎn)量高且質(zhì)量穩(wěn)定，適合工業(yè)化生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)，可作為今后主要的生產(chǎn)方式。液體深層培養(yǎng)到一定規(guī)模時(shí)，各種參數(shù)的控制對(duì)整個(gè)發(fā)酵的質(zhì)量起著相當(dāng)重要的作用。如果將小試(搖瓶或小發(fā)酵罐)工藝直接套用到大規(guī)模發(fā)酵中往往會(huì)出現(xiàn)參數(shù)控制失調(diào)，進(jìn)而導(dǎo)致發(fā)酵產(chǎn)量質(zhì)量下降。因此到目前為止，尚未見(jiàn)到姬松茸大規(guī)模工業(yè)發(fā)酵技術(shù)方面的報(bào)道，僅有一些小試方面的研究。
本發(fā)明的目的提供了一種大規(guī)模的姬松茸液體深層發(fā)酵工藝，并且通過(guò)對(duì)工藝參數(shù)和培養(yǎng)基配方的優(yōu)化，使產(chǎn)量質(zhì)量都有明顯提高，從而解決了已有技術(shù)存在的各種問(wèn)題。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明姬松茸大規(guī)模液體深層發(fā)酵工藝依次包括以下步驟(1)將姬松茸斜面菌種接入裝有搖瓶培養(yǎng)基的搖瓶中，25～28℃溫度培養(yǎng)6～8天；(2)將步驟1中所得的菌種轉(zhuǎn)接入裝有搖瓶培養(yǎng)基的搖瓶中再進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，25～28℃溫度培養(yǎng)5～6天；(3)將步驟2中所得的菌種轉(zhuǎn)接入一個(gè)裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的一級(jí)種子罐中，保持罐溫25～28℃，罐壓40～50kPa，攪拌速率120～140r/min，通氣量1∶0.3～0.5，發(fā)酵72～96小時(shí)；(4)將一級(jí)種子罐中的菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的二級(jí)種子罐中，保持罐溫25～28℃，罐壓50～60kPa，攪拌速率120～140r/min，通氣量1∶0.4～0.6，發(fā)酵72～96小時(shí)；(5)將二級(jí)種子罐中的菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的三級(jí)種子罐中，保持罐溫25～28℃，罐壓60～70kPa，攪拌速率120～140r/min，通氣量1∶0.5～0.7，發(fā)酵85～110小時(shí)；(6)將三級(jí)種子罐中的菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的大型發(fā)酵罐中，保持罐溫25～28℃，罐壓70～90kPa，攪拌速率120～140r/min，通氣量為1∶0.7～0.8，發(fā)酵96～120小時(shí)，然后放罐將發(fā)酵液用板框壓濾機(jī)壓濾，得濕菌絲體，然后放入真空干燥機(jī)中50～60℃烘干至含水量低于8％。
本發(fā)明步驟1中搖瓶培養(yǎng)基與搖瓶的容積比為1∶5～1∶10；步驟2中搖瓶培養(yǎng)基與搖瓶的容積比為1∶2～1∶5。
本發(fā)明步驟3中一級(jí)種子罐的容積為150L～300L，在該一級(jí)種子罐中裝有的發(fā)酵培養(yǎng)基相應(yīng)為100L～250L；步驟4中二級(jí)、三級(jí)種子罐指的是1.5噸～5噸的發(fā)酵罐，在該二級(jí)、三級(jí)種子罐中裝有的發(fā)酵培養(yǎng)基相應(yīng)為1噸～4噸。
本發(fā)明步驟5中大型發(fā)酵罐指的是10噸～30噸發(fā)酵罐，在該發(fā)酵罐中裝有的發(fā)酵培養(yǎng)基相應(yīng)為7.5噸～24噸。
本發(fā)明中所述的搖瓶培養(yǎng)基的成份配比(重量體積比g/100ml)為馬鈴薯15％～25％，葡萄糖1％～3％，硫酸鎂0.08％～0.15％，磷酸二氫鉀0.2～0.4％，維生素B1為10～20ppm，加水定容至所需體積，該搖瓶培養(yǎng)基的PH值為5.5～6.0。
本發(fā)明中所述的發(fā)酵培養(yǎng)基的成份及配比(重量體積比g/100ml)為酵母粉0.5％～1.5％，(NH4)2SO40.5％～2％，玉米粉2％～3％，豆餅粉1％～2％，葡萄糖1.5％～2％，硫酸鎂0.03％～0.05％，磷酸二氫鉀0.1％～0.15％，維生素B1為10～20ppm，加水定容至所需體積，該發(fā)酵培養(yǎng)基的PH值為5.5～6.0。
本發(fā)明步驟5中放罐的標(biāo)準(zhǔn)為發(fā)酵液變得較為粘稠，鏡檢有大量菌絲體，PH值降至3.5～3.8左右，取樣離心稱濕菌絲體重量，較4小時(shí)前無(wú)明顯增加即可放罐。
本發(fā)明適用于各種姬松茸菌種10噸罐及10噸罐以上大規(guī)模液體深層發(fā)酵，解決了姬松茸尚不能大規(guī)模生產(chǎn)的局限，這對(duì)姬松茸工業(yè)化生產(chǎn)及其相關(guān)應(yīng)用產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有重要的意義。本發(fā)明工藝發(fā)酵規(guī)模達(dá)到10噸及10噸以上，干粉得率達(dá)到1.0％～1.2％，大大提高了產(chǎn)量；每100克菌絲體干粉多糖含量達(dá)到6～8克，比香菇(5.75g/100g)、毛木耳(4.71g/100g)、靈芝(1.30g/100g)高。此外所得到姬松茸發(fā)酵菌絲體的氨基酸的總量為22.90％，必需氨基酸占氨基酸總量的43.69％，高于子實(shí)體中的相應(yīng)含量；姬松茸發(fā)酵菌絲體的鈣含量是子實(shí)體的50倍，鎂元素的含量是子實(shí)體的7.3倍。另外發(fā)酵菌絲體中鎘元素的含量遠(yuǎn)低于子實(shí)體，因?yàn)榘l(fā)酵生產(chǎn)的姬松茸菌絲體能避免栽培基質(zhì)中有害元素的污染。從上述結(jié)果可以看出通過(guò)本發(fā)明發(fā)酵生產(chǎn)的姬松茸菌絲體不僅在產(chǎn)量和生產(chǎn)潛力遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于栽培方法生產(chǎn)姬松茸，而且在多糖、氨基酸和微量元素含量等方面不同程度優(yōu)于栽培姬松茸菌，因此說(shuō)明通過(guò)本發(fā)明發(fā)酵生產(chǎn)的姬松茸具有較栽培姬松茸更高的產(chǎn)量和更好的質(zhì)量，完全可以成為今后生產(chǎn)姬松茸菌的主要方法。
下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。
實(shí)施例1將新鮮的斜面菌種接入十個(gè)裝有100mL搖瓶培養(yǎng)基的500mL三角搖瓶中，26℃搖床培養(yǎng)8天。然后每?jī)蓚€(gè)500mL搖瓶種轉(zhuǎn)接入裝有1000mL搖瓶培養(yǎng)基的2000mL三角瓶中，26℃搖床培養(yǎng)5天。將5瓶2000ml搖瓶中的種轉(zhuǎn)接入一個(gè)裝有100L發(fā)酵培養(yǎng)基的總?cè)莘e為150L的一級(jí)種子罐，保持罐溫26℃，罐壓40kPa，攪拌速率120r/min，通氣量1∶0.35，發(fā)酵85小時(shí)。將種子罐菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有1噸發(fā)酵培養(yǎng)基的1.5噸二級(jí)種子罐中，保持罐溫26℃，罐壓50kPa，攪拌速率130r/min，通氣量1∶0.5，發(fā)酵90小時(shí)。將二級(jí)種子罐中菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有10噸發(fā)酵培養(yǎng)基的15噸發(fā)酵罐中，保持罐溫26℃，罐壓70kPa，攪拌速率140r/min，通氣量為1∶0.7，發(fā)酵110小時(shí)，然后放罐將發(fā)酵液用板框壓濾機(jī)壓濾，得濕菌絲體，然后放入真空干燥機(jī)中58℃烘干，干粉得率為1.14％，用苯酚-硫酸法測(cè)總多糖含量為6.16克/100克干粉。
本實(shí)施1中的搖瓶培養(yǎng)基的成份配比(重量體積比g/100ml)為馬鈴薯20％，葡萄糖2％，硫酸鎂0.1％，磷酸二氫鉀0.3％，維生素B1為15ppm，按上述的重量體積比分別加水定容至100mL、1000mL，搖瓶培養(yǎng)基的PH值為5.5～6.0。
本實(shí)施1中的發(fā)酵培養(yǎng)基的成份及配比(重量體積比g/100ml)為酵母粉1.5％，(NH4)2SO41.5％，玉米粉2％，豆餅粉2％，葡萄糖1.8％，硫酸鎂0.03％，磷酸二氫鉀0.15％，維生素B1為15ppm，按上述的重量體積比分別加水定容至100L、1噸、10噸，發(fā)酵培養(yǎng)基的PH值為5.5～6.0。
本實(shí)施1中放罐的標(biāo)準(zhǔn)為發(fā)酵液變得較為粘稠，鏡檢有大量菌絲體，PH值降至3.5～3.8左右，取樣離心稱濕菌絲體重量，較4小時(shí)前無(wú)明顯增加即可放罐。
實(shí)施例2將新鮮的斜面菌種接入十個(gè)裝有150mL搖瓶培養(yǎng)基的500mL三角搖瓶中，27℃搖床培養(yǎng)7天。然后每?jī)蓚€(gè)500mL搖瓶種轉(zhuǎn)接入裝有1000mL搖瓶培養(yǎng)基的3000mL三角瓶中，27℃搖床培養(yǎng)6天。將5瓶3000ml搖瓶中的種轉(zhuǎn)接入一個(gè)裝有100L發(fā)酵培養(yǎng)基的總?cè)莘e為150L的一級(jí)種子罐，保持罐溫27℃，罐壓45kPa，攪拌速率130r/min，通氣量1∶0.4，發(fā)酵72小時(shí)。將種子罐菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有1噸發(fā)酵培養(yǎng)基的1.5噸二級(jí)種子罐中，保持罐溫27℃，罐壓50kPa，攪拌速率120r/min，通氣量1∶0.5，發(fā)酵80小時(shí)。將二級(jí)種子罐中菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有10噸發(fā)酵培養(yǎng)基的15噸發(fā)酵罐中，保持罐溫27℃，罐壓75kPa，攪拌速率130r/min，通氣量為1∶0.7，發(fā)酵100小時(shí)，然后放罐將發(fā)酵液用板框壓濾機(jī)壓濾，得濕菌絲體，然后放入真空干燥機(jī)中55℃烘干，干粉得率為1.09％，用苯酚-硫酸法測(cè)總多糖含量為6.78克/100克干粉。
本實(shí)施2中的搖瓶培養(yǎng)基的成份配比(重量體積比g/100ml)為馬鈴薯25％，葡萄糖3％，硫酸鎂0.08％，磷酸二氫鉀0.2％，維生素B1為20ppm，按上述的重量體積比分別加水定容至150ml、1000mL，搖瓶培養(yǎng)基的PH值為5.5～6.0。
本實(shí)施2中的發(fā)酵培養(yǎng)基的成份及配比(重量體積比g/100ml)為酵母粉1％，(NH4)2SO42％，玉米粉3％，豆餅粉1％，葡萄糖2％，硫酸鎂0.05％，磷酸二氫鉀0.1％，維生素B1為20ppm，按上述的重量體積比分別加水定容至100L、1噸、10噸，發(fā)酵培養(yǎng)基的PH值為5.5～6.0。
本實(shí)施2中放罐的標(biāo)準(zhǔn)與實(shí)施1相同。
實(shí)施例3將新鮮的斜面菌種接入十個(gè)裝有100mL搖瓶培養(yǎng)基的500mL三角搖瓶中，28℃搖床培養(yǎng)6天。然后每?jī)蓚€(gè)500mL搖瓶種轉(zhuǎn)接入裝有1500mL搖瓶培養(yǎng)基的3000mL三角瓶中，28℃搖床培養(yǎng)5天。將5瓶3000ml搖瓶中的種轉(zhuǎn)接入一個(gè)裝有100L發(fā)酵培養(yǎng)基的總?cè)莘e為150L的一級(jí)種子罐，保持罐溫28℃，罐壓40kPa，攪拌速率120r/min，通氣量1∶0.35，發(fā)酵72小時(shí)。將種子罐菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有1噸發(fā)酵培養(yǎng)基的1.5噸二級(jí)種子罐中，保持罐溫28℃，罐壓50kPa，攪拌速率120r/min，通氣量1∶0.55，發(fā)酵72小時(shí)。將二級(jí)種子罐中菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有10噸發(fā)酵培養(yǎng)基的15噸發(fā)酵罐中，保持罐溫28℃，罐壓80kPa，攪拌速率120r/min，通氣量為1∶0.6，發(fā)酵96小時(shí)，然后放罐將發(fā)酵液用板框壓濾機(jī)壓濾，得濕菌絲體，然后放入真空干燥機(jī)中50℃烘干，干粉得率為0.92％，用苯酚-硫酸法測(cè)總多糖含量為5.60克/100克干粉。
本實(shí)施3中的搖瓶培養(yǎng)基的成份配比(重量體積比g/100ml)為馬鈴薯15％，葡萄糖1％，硫酸鎂0.15％，磷酸二氫鉀0.4％，維生素B1為10ppm，按上述的重量體積比分別加水定容至100mL、1500mL，搖瓶培養(yǎng)基的PH值為5.5～6.0。
本實(shí)施3中的發(fā)酵培養(yǎng)基的成份及配比(重量體積比g/100ml)為酵母粉0.5％，(NH4)2SO40.5％，玉米粉2％，豆餅粉1.5％，葡萄糖1.5％，硫酸鎂0.04％，磷酸二氫鉀0.1％，維生素B1為10ppm，按上述的重量體積比分別加水定容至100L、1噸、10噸，發(fā)酵培養(yǎng)基的PH值為5.5～6.0。
本實(shí)施3中放罐的標(biāo)準(zhǔn)與實(shí)施1相同。
實(shí)施例4將新鮮的斜面菌種接入十六個(gè)裝有80mL搖瓶培養(yǎng)基500mL三角搖瓶中，25℃搖床培養(yǎng)8天。然后每?jī)蓚€(gè)500mL搖瓶種轉(zhuǎn)接入裝有1000mL搖瓶培養(yǎng)基的3000mL三角瓶中，25℃搖床培養(yǎng)6天。將8瓶3000ml搖瓶中的種轉(zhuǎn)接入一個(gè)裝有150L發(fā)酵培養(yǎng)基的總?cè)莘e為300L的一級(jí)種子罐，保持罐溫25℃，罐壓50kPa，攪拌速率120r/min，通氣量1∶0.5，發(fā)酵96小時(shí)。將種子罐菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有1噸發(fā)酵培養(yǎng)基的1.5噸二級(jí)種子罐中，保持罐溫25℃，罐壓60kPa，攪拌速率120r/min，通氣量1∶0.55，發(fā)酵72小時(shí)。將二級(jí)種子罐中菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有3.5噸發(fā)酵培養(yǎng)基的5噸三級(jí)種子發(fā)酵罐中，保持罐溫25℃，罐壓65kPa，攪拌速率130r/min，通氣量為1∶0.6，發(fā)酵100小時(shí)。將三級(jí)種子罐中菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有22.5噸發(fā)酵培養(yǎng)基的30噸發(fā)酵罐中，保持罐溫25℃，罐壓85kPa，攪拌速率140r/min，通氣量為1∶0.8，發(fā)酵120小時(shí)，然后放罐將發(fā)酵液用板框壓濾機(jī)壓濾，得濕菌絲體，然后放入真空干燥機(jī)中55℃烘干，干粉得率為0.81％，用苯酚-硫酸法測(cè)總多糖含量為5.02克/100克干粉。
本實(shí)施4中的搖瓶培養(yǎng)基的成份配比(重量體積比g/100ml)為馬鈴薯19％，葡萄糖1.5％，硫酸鎂0.1％，磷酸二氫鉀0.2％，維生素B1為15ppm，按上述的重量體積比分別加水定容至80mL、1000mL，搖瓶培養(yǎng)基的PH值為5.5～6.0。
本實(shí)施4中的發(fā)酵培養(yǎng)基的成份及配比(重量體積比g/100ml)為酵母粉0.9％，(NH4)2SO41.5％，玉米粉2.5％，豆餅粉1％，葡萄糖2％，硫酸鎂0.03％，磷酸二氫鉀0.12％，維生素B1為15ppm，按上述的重量體積比分別加水定容至150L、1噸、3.5噸、22.5噸，發(fā)酵培養(yǎng)基的PH值為5.5～6.0。
本實(shí)施4中放罐的標(biāo)準(zhǔn)與實(shí)施1相同。
實(shí)施例5將新鮮的斜面菌種接入十八個(gè)裝有70mL搖瓶培養(yǎng)基的500mL三角搖瓶中，26℃搖床培養(yǎng)8天。然后每?jī)蓚€(gè)500mL搖瓶種轉(zhuǎn)接入裝有1500mL搖瓶培養(yǎng)基的4000mL三角瓶中，26℃搖床培養(yǎng)6天。將9瓶4000ml搖瓶中的種轉(zhuǎn)接入一個(gè)裝有200L發(fā)酵培養(yǎng)基的總?cè)莘e為300L的一級(jí)種子罐，保持罐溫26℃，罐壓40kPa，攪拌速率120r/min，通氣量1∶0.4，發(fā)酵96小時(shí)。將種子罐菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有1噸發(fā)酵培養(yǎng)基的1.5噸二級(jí)種子罐中，保持罐溫26℃，罐壓60kPa，攪拌速率130r/min，通氣量1∶0.4，發(fā)酵80小時(shí)。將二級(jí)種子罐中的菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有4噸發(fā)酵培養(yǎng)基的5噸三級(jí)種子罐中，保持罐溫26℃，罐壓70kPa，攪拌速率130r/min，通氣量為1∶0.6，發(fā)酵100小時(shí)。將三級(jí)種子罐中菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有24噸發(fā)酵培養(yǎng)基的30噸發(fā)酵罐中，保持罐溫26℃，罐壓90kPa，攪拌速率140r/min，通氣量為1∶0.75，發(fā)酵112小時(shí)，然后放罐將發(fā)酵液用板框壓濾機(jī)壓濾，得濕菌絲體，然后放入真空干燥機(jī)中60℃烘干，干粉得率為0.87％，用苯酚-硫酸法測(cè)總多糖含量為6.17克/100克干粉。
本實(shí)施5中的搖瓶培養(yǎng)基的成份配比(重量體積比g/100ml)為馬鈴薯22％，葡萄糖2.5％，硫酸鎂0.1％，磷酸二氫鉀0.3％，維生素B1為18ppm，按上述的重量體積比分別加水定容至70mL、1500mL，搖瓶培養(yǎng)基的PH值為5.5～6.0。
本實(shí)施5中的發(fā)酵培養(yǎng)基的成份及配比(重量體積比g/100ml)為酵母粉1.2％，(NH4)2SO42％，玉米粉2.5％，豆餅粉1.5％，葡萄糖1.5％，硫酸鎂0.04％，磷酸二氫鉀0.15％，維生素B1為20ppm，按上述的重量體積比分別加水定容至200L、1噸、4噸、24噸，發(fā)酵培養(yǎng)基的PH值為5.5～6.0。
本實(shí)施5中放罐的標(biāo)準(zhǔn)與實(shí)施1相同。
權(quán)利要求
1.一種姬松茸大規(guī)模液體深層發(fā)酵工藝，依次包括以下步驟(1)將姬松茸斜面菌種接入裝有搖瓶培養(yǎng)基的搖瓶中，25～28℃溫度培養(yǎng)6～8天；(2)將步驟1中所得的菌種轉(zhuǎn)接入裝有搖瓶培養(yǎng)基的搖瓶中再進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，25～28℃溫度培養(yǎng)5～6天；(3)將步驟2中所得的菌種轉(zhuǎn)接入一個(gè)裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的一級(jí)種子罐中，保持罐溫25～28℃，罐壓40～50kPa，攪拌速率120～140r/min，通氣量1∶0.3～0.5，發(fā)酵72～96小時(shí)；(4)將一級(jí)種子罐中的菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的二級(jí)種子罐中，保持罐溫25～28℃，罐壓50～60kPa，攪拌速率120～140r/min，通氣量1∶0.4～0.6，發(fā)酵72～96小時(shí)；(5)將二級(jí)種子罐中的菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的三級(jí)種子罐中，保持罐溫25～28℃，罐壓60～70kPa，攪拌速率120～140r/min，通氣量1∶0.5～0.7，發(fā)酵85～110小時(shí)；(6)將三級(jí)種子罐中的菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的大型發(fā)酵罐中，保持罐溫25～28℃，罐壓70～90kPa，攪拌速率120～140r/min，通氣量為1∶0.6～0.8，發(fā)酵96～120小時(shí)，然后放罐將發(fā)酵液用板框壓濾機(jī)壓濾，得濕菌絲體，然后放入真空干燥機(jī)中50～60℃烘干至含水量低于8％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的姬松茸大規(guī)模液體深層發(fā)酵工藝，其中步驟1中搖瓶培養(yǎng)基與搖瓶的容積比為1∶5～1∶10；步驟2中搖瓶培養(yǎng)基與搖瓶的容積比為1∶2～1∶5。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的姬松茸大規(guī)模液體深層發(fā)酵工藝，其中步驟3中一級(jí)種子罐的容積為150L～300L，在該一級(jí)種子罐中裝有的發(fā)酵培養(yǎng)基相應(yīng)為100L～250L；步驟4中二級(jí)、三級(jí)種子罐指的是1.5噸～5噸的發(fā)酵罐，在該二級(jí)、三級(jí)種子罐中裝有的發(fā)酵培養(yǎng)基相應(yīng)為1噸～4噸。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的姬松茸大規(guī)模液體深層發(fā)酵工藝，其中步驟5中大型發(fā)酵罐指的是10噸～30噸發(fā)酵罐，在該發(fā)酵罐中裝有的發(fā)酵培養(yǎng)基相應(yīng)為7.5噸～24噸。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的姬松茸大規(guī)模液體深層發(fā)酵工藝，其中所述的搖瓶培養(yǎng)基的成份及其重量體積比(g/100ml)為馬鈴薯15％～25％，葡萄糖1％～3％，硫酸鎂0.08％～0.15％，磷酸二氫鉀0.2～0.4％，維生素B1為10～20ppm，加水定容至所需體積，該搖瓶培養(yǎng)基的PH值為5.5～6.0。
6.根據(jù)權(quán)利要求1、3或4所述的姬松茸大規(guī)模液體深層發(fā)酵工藝，其中所述的發(fā)酵培養(yǎng)基的成份及其重量體積比(g/100ml)為酵母粉0.5％～1.5％，(NH4)2SO40.5％～2％，玉米粉2％～3％，豆餅粉1％～2％，葡萄糖1.5％～2％，硫酸鎂0.03％～0.05％，磷酸二氫鉀0.1％～0.15％，維生素B1為10～20ppm，加水定容至所需體積，該發(fā)酵培養(yǎng)基的PH值為5.5～6.0。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的姬松茸大規(guī)模液體深層發(fā)酵工藝，其中步驟5中放罐的標(biāo)準(zhǔn)為發(fā)酵液變得較為粘稠，鏡檢有大量菌絲體，PH值降至3.5～3.8左右，取樣離心稱濕菌絲體重量，較4小時(shí)前無(wú)明顯增加即可放罐。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種姬松茸大規(guī)模液體深層發(fā)酵工藝,依次包括以下步驟:(1)將姬松茸斜面菌種接入裝有搖瓶培養(yǎng)基的搖瓶中培養(yǎng);(2)將步驟1中所得的菌種轉(zhuǎn)接入搖瓶中再進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng);(3)將步驟2中所得的菌種依次轉(zhuǎn)接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的一級(jí)種子罐、二級(jí)種子罐、三級(jí)種子罐中發(fā)酵;(4)將三級(jí)種子罐中的菌種轉(zhuǎn)接到大型發(fā)酵罐中發(fā)酵,然后放罐將發(fā)酵液用板框壓濾機(jī)壓濾,得濕菌絲體。通過(guò)對(duì)姬松茸發(fā)酵工藝的步驟、參數(shù)和培養(yǎng)基配方的改進(jìn),成功地建立了姬松茸10噸罐及10噸罐以上發(fā)酵工藝,打破了以往姬松茸發(fā)酵只限于小試而不能工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)的局限,所得的姬松茸菌絲干粉得率達(dá)0.80%～1.20%,每百克菌絲干粉的姬松茸多糖含量達(dá)到5～7克。
文檔編號(hào)C12N1/14GK1339582SQ0112971
公開(kāi)日2002年3月13日 申請(qǐng)日期2001年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2001年9月29日
發(fā)明者李寶健, 程度, 徐志祥 申請(qǐng)人:李寶健, 程度, 徐志祥