專利名稱：高產(chǎn)洛伐他汀的紅曲霉變異株及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一株由酒曲中分離到的并經(jīng)誘變篩選獲得的高產(chǎn)洛伐他汀(Lovastatin)的紅曲霉變異株，命名為紅曲霉白色變種(Monascussp.var.white 3001-18)。本發(fā)明還涉及利用所述菌株生產(chǎn)治療心血管疾病的藥物或保健品的方法，及所得制品。
紅曲霉是我國(guó)寶貴的微生物資源，其保健功能和藥用價(jià)值日益受到世人關(guān)注，有關(guān)紅曲霉生理活性物質(zhì)的研究方興未艾。紅曲霉的一個(gè)重要的藥用價(jià)值即在于其可產(chǎn)生目前用于治療心血管疾病的藥物。目前這類藥物的不足是制品中發(fā)酵產(chǎn)生的洛伐他汀含量較低，小于10mg/g。因此，尋找高產(chǎn)洛伐他汀的紅曲霉菌株仍十分需要。
本發(fā)明人在對(duì)紅曲霉高產(chǎn)降血脂生理活性物質(zhì)洛伐他汀的研究中，選育獲得了一株高產(chǎn)洛伐他汀的紅曲霉變異株，由此完成了本發(fā)明。
因此，本發(fā)明的目的在于提供一種新的紅曲霉變異株，其高產(chǎn)洛伐他汀，利用該菌株可生產(chǎn)治療心血管疾病的藥物或保健品。
本發(fā)明的另一目的在于提供本發(fā)明菌株生產(chǎn)治療心血管疾病的藥物或保健品的方法，及所得制品。
具體地，本發(fā)明的一個(gè)方面涉及一種高產(chǎn)洛伐他汀的紅曲霉變異株，命名為紅曲霉白色變種(Monascus sp.var.white 3001-18)。該菌株已于2000年11月28日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)為CGMCC NO.0517。
該菌株在10°Bx麥芽汁瓊脂平板(1L 10°Bx麥芽汁，20g瓊脂，pH5.5)上生長(zhǎng)良好，菌落呈絨毛狀、中心隆起、白色，背面有稀疏的輻射狀皺褶。菌絲體發(fā)達(dá)，菌絲寬度約1.9-3.4μm，分支多，有橫隔。分生孢子著生在沒有特殊分化的分生孢子梗的頂端，孢子單個(gè)或成鏈狀，鏈長(zhǎng)一般不超過10個(gè)孢子，分生孢子梨形，大小約為(3.2-4.2)×2.5×(2.6-4)×2.5μm。該菌株的有性繁殖器官為閉囊殼、球形、有短柄，大小約為25-45μm；子囊圓形，子囊孢子卵圓形，直徑約為5.0μm。
該菌株的碳源利用試驗(yàn)、氮源利用試驗(yàn)、糖生酸試驗(yàn)及初始pH和培養(yǎng)溫度的對(duì)生長(zhǎng)的影響如表1、表2、表3、表4、表5所示。
表1碳源利用結(jié)果碳源 結(jié)果 碳源 結(jié)果蔗糖+乳糖 +麥芽糖 +山梨糖 -纖維二糖+棉子糖 +甘露糖 +半乳糖 +木糖+可溶性淀粉 +“+”表示生長(zhǎng)，“-”表示不生長(zhǎng)表2 氮源利用結(jié)果氮源(NH4)2SO4NaNO3NaNO2尿素結(jié)果+ +- (+)“+”表示生長(zhǎng)，“-”表示不生長(zhǎng)，“(+)”表示生長(zhǎng)很弱表3糖生酸結(jié)果碳源棉子糖蔗糖麥芽糖半乳糖結(jié)果 - ++-“+”表示利用且產(chǎn)酸，“-”表示利用但不產(chǎn)酸表4 pH對(duì)生長(zhǎng)的影響pH3 4 5 6 7結(jié)果 ++++ +++(+)“++”生長(zhǎng)好，“+”生長(zhǎng)一般，“(+)”生長(zhǎng)不好，“-”不生長(zhǎng)表5 溫度對(duì)生長(zhǎng)的影響溫度 10℃ 25℃ 30℃ 37℃40℃結(jié)果-+ ++++ (+)“++”生長(zhǎng)好，“+”生長(zhǎng)一般，“(+)”生長(zhǎng)不好，“-”不生長(zhǎng)本發(fā)明菌株在以米為主要原料，添加適量的營(yíng)養(yǎng)輔料，在25℃-35℃，培養(yǎng)12-18天，經(jīng)滅菌、干燥、粉碎后得到的制品中洛伐他汀含量高達(dá)15-20mg/g；粗脂肪含量為17mg/g，其中油酸、亞油酸占73％；氨基酸含量110mg/g，共含有18種氨基酸，其中含有8種人體必須氨基酸，占氨基酸總量的40％；此外，還含有20ppm的維生素E和鐵、鋅、錳等微量元素和常量元素。制品中不含桔霉素，動(dòng)物急性毒性試驗(yàn)結(jié)果，LD50＞24g/kg，小鼠最大耐受劑量大于24g/kg。
本發(fā)明的另一方面涉及利用本發(fā)明菌株生產(chǎn)治療心血管疾病的藥物或保健品的方法，所述方法包括如下步驟
a)制備種子液首先配制種子培養(yǎng)基，使每升種子培養(yǎng)基含葡萄糖50g，蛋白胨20g，酵母膏5g，NaNO32g，MgSO4·7H2O 1g，滅菌后接種，30-32℃通風(fēng)培養(yǎng)40小時(shí)，得到種子液；b)制備發(fā)酵培養(yǎng)基米用水浸泡10-16小時(shí)，瀝干，使浸泡米的水份含量達(dá)35-50％，每100g這樣的米中加入15-45ml營(yíng)養(yǎng)液(每升營(yíng)養(yǎng)液含葡萄糖和/或蔗糖150g-400g、蛋白胨50-200g、酵母膏20-100g、NaNO320-50g)混合后高溫滅菌，得到發(fā)酵培養(yǎng)基；c)向上述發(fā)酵培養(yǎng)基中加入培養(yǎng)好的種子液，接種量20-40ml種子液/100g米，混勻，在25℃-35℃，培養(yǎng)12-18天，之后進(jìn)行培養(yǎng)物滅菌、干燥、粉碎，得到洛伐他汀含量高達(dá)15-20mg/g的制品。
以下以實(shí)例更詳細(xì)地說明本發(fā)明。
實(shí)施例1稱取葡萄糖3.5g，蛋白胨1.4g，酵母膏0.35g，NaNO30.14g，MgSO4.7H2O 0.07g，用水定容70ml，裝入500ml三角瓶，滅菌。冷卻后在無菌條件下接入一環(huán)菌體，250rpm、30-32℃振蕩培養(yǎng)40小時(shí)，得到種子液。
取米(市場(chǎng)所售)200g，加水400ml，室溫(約25℃)浸泡過夜(約16小時(shí))，瀝干。
稱取葡萄糖10g，蛋白胨3g，酵母膏1.2g，NaNO30.5g，用25ml水溶解，制成營(yíng)養(yǎng)液。
將上述營(yíng)養(yǎng)液加入瀝干的米中，拌勻，然后平均分裝到5個(gè)500ml的玻璃三角燒瓶中，用紗布、牛皮紙包扎，0.1MPa加熱滅菌30分鐘，取出冷卻至室溫。在無菌條件下，每瓶接入10ml培養(yǎng)好的種子液，搖勻，于25℃-32℃，培養(yǎng)15天。將培養(yǎng)物滅菌、干燥、粉碎后得到的制品，用HPLC法測(cè)定洛伐他汀(Lovastatin)的含量為16.1mg/g。
實(shí)施例2如實(shí)施例1，只是將營(yíng)養(yǎng)液中的葡萄糖改為蔗糖，最后得到洛伐他汀(Lovastatin)含量為15.8mg/g的制品。
實(shí)施例3如實(shí)施例1，只是將營(yíng)養(yǎng)液中的葡萄糖10g改為葡萄糖5g和蔗糖5g，最后得到洛伐他汀(Lovastatin)含量為18.3mg/g的制品。
權(quán)利要求
1.一種紅曲霉變異株，命名為紅曲霉白色變種3001-18(Monascussp.var.white 3001-18)，其保藏號(hào)為CGMCC0517。
2.利用權(quán)利要求1的紅曲霉變異株生產(chǎn)治療心血管疾病的藥物或保健品的方法，包括如下步驟a)制備種子液首先配制種子培養(yǎng)基，使每升種子培養(yǎng)基含葡萄糖50g，蛋白胨20g，酵母膏5g，NaNO32g，MgSO4·7H2O 1g，滅菌后接種，30-32℃通風(fēng)培養(yǎng)40小時(shí)，得到種子液；b)制備發(fā)酵培養(yǎng)基米用水浸泡10-16小時(shí)，瀝干，使浸泡米的水份含量達(dá)35-50％，每100g這樣的米中加入15-45ml營(yíng)養(yǎng)液混合后高溫滅菌，得到發(fā)酵培養(yǎng)基，其中每升所述營(yíng)養(yǎng)液含葡萄糖和/或蔗糖150g-400g、蛋白胨50-200g、酵母膏20-100g、NaNO320-50g；c)向上述發(fā)酵培養(yǎng)基中加入培養(yǎng)好的種子液，接種量20-40ml種子液/100g米，混勻，在25℃-35℃，培養(yǎng)12-18天，之后進(jìn)行培養(yǎng)物滅菌、干燥、粉碎，得到洛伐他汀含量高達(dá)15-20mg/g的制品。
3.由權(quán)利要求2的方法獲得的制品。
全文摘要
本發(fā)明公開了一株由酒曲中分離到的并經(jīng)誘變篩選獲得的高產(chǎn)洛伐他汀(Lovastatin)的紅曲霉變異株,命名為紅曲霉白色變種3001－18(Monascus sp.var.white 3001－18)。本發(fā)明還涉及利用該菌株生產(chǎn)治療心血管疾病的藥物或保健品的方法,及該方法所得制品,該制品的洛伐他汀含量高達(dá)15－20mg/g。
文檔編號(hào)C12N1/14GK1373208SQ0110438
公開日2002年10月9日 申請(qǐng)日期2001年2月28日 優(yōu)先權(quán)日2001年2月28日
發(fā)明者諸葛健 申請(qǐng)人:無錫輕工大學(xué)