用于制造癌癥組合物的方法
【專利說(shuō)明】用于制造癌癥組合物的方法
[00011 優(yōu)先權(quán)
[0002] 本申請(qǐng)要求2013年3月15日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)第61/791,909號(hào)的優(yōu)先權(quán)，該臨 時(shí)申請(qǐng)?jiān)诖送ㄟ^(guò)引用以其整體并入。 發(fā)明領(lǐng)域
[0003] 本發(fā)明涉及制造對(duì)癌癥有用的前藥化合物的方法。在一個(gè)實(shí)例中，本發(fā)明涉及制 造前藥的方法以及制造其某些中間體的方法，所述前藥包括連接至具有序列Asp-Glu*Glu* Glu*Glu(其中用*指示的鍵中的至少一個(gè)是γ羧基鍵合)的肽的天冬氨酸的毒胡蘿卜素衍生 物8-0-( 12-氨基十二烷酰基)-8-0-去丁?；竞}卜素（12ADT)，并且具有式1的式：
[0004]
[0005] 本發(fā)明還涉及通過(guò)本文闡明的工藝獲得的化合物和中間體。
[0006] 發(fā)明背景
[0007] 一種肽前藥化合物，其被鑒定為G-202并且包括被連接至具有序列Asp-Glu*Glu* Glu*Glu(其中用*指示的鍵中的至少一個(gè)是γ羧基鍵合)的肽的天冬氨酸的毒胡蘿卜素衍生 物8-0-(12-氨基十二烷?；?-8-0-去丁酰基毒胡蘿卜素(12ADT)，并且具有以下結(jié)構(gòu)式：
[0008]
[0009](式1)已經(jīng)在美國(guó)專利第7，767，648號(hào)和第7，468，354號(hào)中闡明并描述，該美國(guó)專 利以其整體并入本文。包含G-202的可注射的癌癥組合物和用于使用G-202治療肝細(xì)胞癌的 方法和組合物也在美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)第61/714,662號(hào)和第61/693,273號(hào)中公開，該臨時(shí)申請(qǐng)以 其整體并入本文。
[0010]對(duì)于產(chǎn)生G-202的工藝的主要挑戰(zhàn)是由于缺乏任何中間體或最終的活性藥物成分 (API)的結(jié)晶性。這阻止了在合成中的任何位置使用結(jié)晶來(lái)除去雜質(zhì)。此限制使反應(yīng)應(yīng)當(dāng)是 高效的且產(chǎn)生很少至沒(méi)有雜質(zhì)成為必要。此外，結(jié)晶性的缺乏增加了諸如以下的交替的純 化工藝的價(jià)值:水溶液萃取、極性/非極性有機(jī)分配、沉淀、研碎和有效的色譜純化。本文公 開的此工藝成功地并入了有效的合成策略和所有的這些純化技術(shù)以生成純的G-202。
[0011] 發(fā)明概述
[0012] 在一個(gè)方面中，本發(fā)明提供用于制造具有化學(xué)名稱8-0-(12-氨基十二烷酰基)-8_ 〇-去丁?；?毒胡蘿卜素)天冬氨酸-γ -谷氨酸-γ -谷氨酸-γ -谷氨酸-谷氨酸0H的式I的化 合物的方法：
[0013]
[0014] 所述方法包括：
[0015] (a)對(duì)毒胡蘿卜素(Tg)(式2)進(jìn)行改性
[0016]
[0017]以得到化合物8-0-去丁?；?毒胡蘿卜素(DBTg)(式3):
[0018]
[0019] 和(b)在二甲基氨基吡啶(DMAP)、二異丙基碳二亞胺(DIC)和CH2CI2的存在下添加 化合物 Boc-12-AD (式4):
[0020]
[0021] 以得到 Boc-12ADT(式 5):
[0022]
[0023] 和（c)使Boc-12ADT脫保護(hù)以得到12ADT(式6):
[0024]
I 1 ? IVI W = JSVZ.UU;
[0025] 和(d)在乙基-(二甲基氨基丙基)碳二亞胺(EDC)、二異丙基乙胺（iPr2NEt)、羥基 苯并三唑（HOBt)和二甲基甲酰胺（DMF)的存在下將12-ADT與Boc-Asp-Glu(OtBu)-Glu (0tBu)-Glu(0tBu)_0tBu(式7):
[0026]
[0027] 組合以得到PG_202(式8):
[0028]
[0029] 和(e)使PG-202發(fā)生反應(yīng)以得到化合物，粗制的G-202(式9):
[0030]
[0031]和(f)然后將粗制的G-202轉(zhuǎn)化為式1的化合物。
[0032]
[0033]在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了制造化合物B0C-12-AD(式4)的方法：
[0034]
[0035] 所述方法包括：
[0036] (i)在乙酰氯(AcCl)的存在下使化合物12-AD(式10):
[0037]
[0038] 與甲醇(MeOH)發(fā)生反應(yīng)以得到式11的化合物：
[0039]
[0040] 和（ii)在4-二甲基氨基吡啶(DMAP)和叔胺堿R3N的存在下使式11的化合物與二-(叔丁基)二碳酸酯(B 〇C20)發(fā)生反應(yīng)以得到式12的化合物：
[0041]
[0042] 其中所述叔胺可以是但不限于三乙胺(Et3N)、二異丙基乙胺（iPnNEt)或N-甲基吡 啶，和(iii)使式12的化合物發(fā)生反應(yīng)以產(chǎn)生式4的化合物(Boc-12-AD)。
[0043]本發(fā)明還涉及新穎的式1至式12的化合物(包括其變型和衍生物）、通過(guò)本文公開 的方法產(chǎn)生的式1至式12的化合物(包括其變型和衍生物）、以及可以使用本文提供的方法 產(chǎn)生或生成的其他化合物。
[0044] 本發(fā)明涉及這些以及下文描述的其他重要的目標(biāo)。
[0045] 附圖簡(jiǎn)述
[0046]圖1示出產(chǎn)生G-202的總反應(yīng)的示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0047] 按照長(zhǎng)期存在的專利法公約，術(shù)語(yǔ)"一個(gè)(a)"、"一個(gè)(an)"和"所述(the)"當(dāng)在本 申請(qǐng)(包括權(quán)利要求書）中使用時(shí)是指"一個(gè)或更多個(gè)"。因此，例如，提及"一個(gè)受試者"包括 多個(gè)受試者，除非上下文清楚地是相反的(例如，多個(gè)受試者），等等。
[0048] 為了此說(shuō)明書和所附權(quán)利要求書的目的，除非另外說(shuō)明，否則表達(dá)量、大小、尺寸、 比例、形狀、制劑、參數(shù)、百分比、參數(shù)、數(shù)量、特性的所有的數(shù)和在說(shuō)明書和權(quán)利要求書中使 用的其他數(shù)值，應(yīng)當(dāng)被理解為在所有情況下都被術(shù)語(yǔ)"約"修飾，即便術(shù)語(yǔ)"約"可能沒(méi)有清 楚地與這些值、量或范圍一起出現(xiàn)。
[0049] 除非另外定義，否則本文中使用的所有的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)都具有與本發(fā)明所屬領(lǐng) 域的普通技術(shù)人員所一般理解的一樣的含義。雖然與本文描述的那些相似的或等同的任何 機(jī)械、材料和方法可以被用于實(shí)踐或測(cè)試本發(fā)明，但現(xiàn)在描述優(yōu)選的機(jī)械、材料和方法。本 文提及的所有出版物被引用的目的是用于描述和公開在出版物中報(bào)道的并且可能關(guān)于本 發(fā)明的各種實(shí)施方案被使用的細(xì)胞系、方案、試劑和媒介物。本文決不應(yīng)當(dāng)被解釋為承認(rèn)本 發(fā)明沒(méi)有根據(jù)現(xiàn)有的發(fā)明先于這樣的公開內(nèi)容的權(quán)利。
[0050] 如本文使用的術(shù)語(yǔ)"G-202"是指具有式1的化學(xué)結(jié)構(gòu)的8-0-(12-氨基十二烷酰 基)-8-0-去丁?；?毒胡蘿卜素)天冬氨酸-γ -谷氨酸-γ -谷氨酸-γ -谷氨酸-谷氨酸0H。
[0051] G-202是毒胡蘿卜素前藥，其含有偶聯(lián)于抑制其生物活性直至在腫瘤位點(diǎn)處的蛋白 水解性裂解的掩蔽肽(masking peptide)的毒胡蘿卜素的細(xì)胞毒性類似物。毒胡蘿卜素自身 是天然產(chǎn)物，其被化學(xué)改性為8-0-( 12-氨基十二烷?；?8-0-去丁?；?毒胡蘿卜素） (12ADT)。此毒胡蘿卜素類似物在掩蔽肽Asp- γ -Glu- γ -Glu- γ -GluGlu的N末端處被偶聯(lián)于 Asp的辟愛基，以產(chǎn)生前藥（12ADT)-Asp- γ -Glu- γ -Glu- γ -GluGlu0H(G-202)。
[0052] G-202的化學(xué)名稱是(8-〇-( 12-氛基十二燒醜基)-8-〇-去丁醜基-毒胡蘿卜素)天冬 氨酸-γ -谷氨酸-γ -谷氨酸-γ -谷氨酸-谷氨酸oh。其有時(shí)以如下縮寫形式被提及： (12ADT)Asp- γ -Glu- γ -Glu- γ -Glu-GluOH，其中12ADT代表毒胡蘿卜素衍生物并且厶8?-丫-Glu- γ -Glu- γ -Glu-GluOH代表PSMA可裂解的掩蔽肽。G-202是具有1409.52的分子量的棕 褐色至白色的固體。
[0053] G-202由偶聯(lián)于天然產(chǎn)物毒胡蘿卜素的高細(xì)胞毒性類似物的PSMA選擇性的5氨基酸 肽底物組成。參見，例如，Denmeade，S · R·，等人，J ·Nat 1 · Cancer Inst · 2003; 9:990-1000;和 美國(guó)專利第7，767，648號(hào)和第7，468，354號(hào)。毒胡蘿卜素從作為遍及地中海盆地的野草生長(zhǎng) 的植物毒胡蘿KThapsia garganica