一種高油酸油菜品種的培育方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于油菜育種技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種高油酸油菜品種的培育方法。本發(fā) 明涉及利用小孢子培養(yǎng)、分子標(biāo)記輔助選擇和氣相色譜法相結(jié)合選育優(yōu)良高油酸油菜品系 的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 油菜種子中脂肪酸組成直接決定菜籽油的食用品質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。油酸是一種十八 碳單不飽和脂肪酸。普通油菜種子中油酸含量為17-65%，本發(fā)明中的高油酸油菜是指種子 及菜籽油脂肪酸中油酸的比例大于75%的油菜品種及其衍生的菜籽油。
[0003]高油酸食用油，包括高油酸菜籽油，在食用油和工業(yè)上有很高的應(yīng)用價(jià)值。高油酸 食用油的氧化穩(wěn)定性高，在煎炸食物時(shí)，高油酸食用油高溫不起煙，能夠縮短煎炸時(shí)間，減 少油吸收過(guò)量(Miller等，Genetic control of high oleic acid content in sunflower oil. Crop Sciences，1987,27:923-926)。在日常飲食中，高油酸可降低血液中的低密度脂 蛋白膽固醇的含量，從而有利于阻止動(dòng)脈血管硬化(Chang等，Effects of the ratio of polyunsaturated and monounsaturated fatty acid on rat plasma and liver lipid concentration · Lipids，1998，33:481-487)。由于油酸的十八碳鏈長(zhǎng)度與柴油組分相似，高 油酸菜籽油可用于生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)生物柴油，是重要的可再生性能源原料(Piazza等，Rapeseed oil for oleo chemical uses.Eur J Lipid Sci Techno 1,2001,103:405-454)。
[0004] 培育高油酸油菜是國(guó)內(nèi)外油菜育種的主要目標(biāo)之一。目前在中國(guó)還沒(méi)有高油酸油 菜品種通過(guò)審定。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)缺陷，提供一種油菜高油酸品種的培育方法，該 方法利用普通油酸含量（小于69%)的油菜品系或品種與高油酸（種子中油酸含量大于 75%)油菜材料為親本進(jìn)行雜交，利用氣相色譜分析和小孢子培養(yǎng)的輔助方法，通過(guò)雜交在 上述材料的雜交后代中培育出高油酸油菜選系，即獲得油酸含量大于78%的非轉(zhuǎn)基因高油 酸油菜材料和品種。
[0006] 本發(fā)明的技術(shù)方案如下所述：
[0007] (1)以甘藍(lán)型油菜品系甲A177為母本(2012年測(cè)定油酸含量65%)【該材料的種子 已于2009年11月20日送交中國(guó).武漢.武漢大學(xué)中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，其保藏號(hào)為 CCTCCN0:P200908;該生物材料已在專(zhuān)利號(hào)為ZL 2009 102734352,申請(qǐng)公布號(hào)為 CN101824472A，即本申請(qǐng)人的專(zhuān)利文獻(xiàn)中公開(kāi)，本申請(qǐng)不需要重新提交生物材料保藏與公 開(kāi)】與高油酸含量甘藍(lán)型油菜新資源甲H003為父本(2012年測(cè)定的油酸含量為80%。申請(qǐng)人 將所述的父本命名為油菜高油酸種子甲H003，Brassica napus L.甲H003,于2016年1月25 日送交中國(guó).武漢.武漢大學(xué)中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，其保藏號(hào)為CCTCC N0 P201604)雜交，通過(guò)人工去雄，得到F1;
[0008] (2)種植上步所得的FI，取花蕾進(jìn)行小孢子培養(yǎng)（小孢子培養(yǎng)培養(yǎng)方法參見(jiàn)：余鳳 群等，提高甘藍(lán)型油菜小孢子胚狀體成苗率的某些培養(yǎng)因素研究，作物學(xué)報(bào)，1997,23(2): 165-168)獲得分離的雙單倍體(簡(jiǎn)稱DH系)群體；
[0009] (3)利用高油酸分子標(biāo)記(例如YQ-Fad2a-1)對(duì)DH系群體的每一個(gè)株系的幼苗進(jìn)行 標(biāo)記分析，可以在苗期獲得每個(gè)株系的油酸基因型（該分子標(biāo)記的制備及其應(yīng)用方法參見(jiàn) 申請(qǐng)人，專(zhuān)利號(hào)為ZL 2009102734352文獻(xiàn)，申請(qǐng)公布號(hào)CN101824472A;申請(qǐng)公布日： 2010.09.08)，通過(guò)分子標(biāo)記分析可以減少花期及后續(xù)種子分析的工作量，提高鑒定的準(zhǔn)確 性；
[0010] 所用的分子標(biāo)記引物(YQ_Fad2a-l，本發(fā)明中所稱的分子標(biāo)記和分子標(biāo)記引物為 同一對(duì)序列)如下：
[0011] 正向引物5，-CAGTTCACTCTCGGCAGC-3，，
[0012] 反向引物5，-GCAACTCCTTGGACAGCA-3 ' ；
[0013] (4)利用氣相色譜儀測(cè)定每個(gè)株系種子的油酸含量(測(cè)定方法參照:楊燕宇等.無(wú) 芥酸甘藍(lán)型油菜十八碳不飽和脂肪酸含量的QTL定位.作物學(xué)報(bào)，（2011) .37(8): 1342-1350)，確認(rèn)每個(gè)初選系的油酸含量；
[0014] (5)種植種子中油酸含量大于75%的DH系，考察各個(gè)株系的全株角果數(shù)、每角果粒 數(shù)、千粒重、單株產(chǎn)量4個(gè)性狀;篩選得到全株角果數(shù)、每角果粒數(shù)、千粒重、單株產(chǎn)量4個(gè)性 狀的優(yōu)于普通油酸(油酸含量小于69%)含量親本的株系，獲得種子油酸含量大于78%的高 油酸油菜選系和品種。
【附圖說(shuō)明】
[0015]圖1:利用分子標(biāo)記引物(YQ-Fad2a-1)對(duì)高油酸FAD2基因在24個(gè)DH系材料中油酸 基因型鑒定結(jié)果。附圖標(biāo)記說(shuō)明：編號(hào)為2、3、4、5、9、10、11、12、13、15、16、17、18、21、24的樣 品，有擴(kuò)展產(chǎn)物的DH系鑒定為高油酸（油酸含量大于75%)基因型，沒(méi)有得到擴(kuò)增產(chǎn)物的個(gè) 體(編號(hào)為1、6、7、8、14、19、20、22、23樣品）為普通低油酸含量(油酸含量小于69%)基因型。
[0016]本發(fā)明的積極效果如下：
[0017] (1)本發(fā)明利用油酸含量大于75%的甘藍(lán)型油菜品系，通過(guò)與油酸含量小于69% 的優(yōu)良甘藍(lán)型油菜品系或品種為親本進(jìn)行雜交，在小孢子培養(yǎng)獲得的純系中進(jìn)行高油酸分 子標(biāo)記選擇，可以提前分離出高油酸基因型，減少育種工作量;通過(guò)對(duì)種子脂肪酸的氣相色 譜分析并結(jié)合后代農(nóng)藝性狀鑒定，可以選育出油酸含量穩(wěn)定大于78%的非轉(zhuǎn)基因高油酸材 料和品種。
[0018] (2)本發(fā)明為選育優(yōu)良高油酸油菜品種提供了一種簡(jiǎn)單、快速、有效的方法。利用 該方法可進(jìn)一步改良菜籽油的品質(zhì)，提高菜籽油的市場(chǎng)價(jià)值，為高端食用油生產(chǎn)企業(yè)提供 優(yōu)質(zhì)原料，通過(guò)降低生產(chǎn)成本，提高企業(yè)經(jīng)濟(jì)效益和市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力。
【具體實(shí)施方式】
[0019] 實(shí)施例1
[0020] (1)配制普通油酸含量和高油酸含量的F1組合
[0021] 以甘藍(lán)型油菜品系甲A177為母本(油酸含量65%)【該材料的種子已于2009年11月 20日送交中國(guó).武漢.武漢大學(xué)中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，其保藏號(hào)為CCTCC NO : P200908;該生物材料已在專(zhuān)利號(hào)為ZL 200910273435