大規(guī)模生產(chǎn)果實細(xì)胞以及用此類細(xì)胞治療疾病的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及大規(guī)模生產(chǎn)果實細(xì)胞的方法。本發(fā)明的一個實施方案涉及大規(guī)模體外 生產(chǎn)果實細(xì)胞的方法，其包括初級和次生代謝物。本發(fā)明進(jìn)一步涉及通過施用果實細(xì)胞的 細(xì)胞系愈傷組織培養(yǎng)物治療、預(yù)防、緩解或減輕與代謝綜合征或代謝疾病相關(guān)聯(lián)的一或多 種病癥或并發(fā)癥的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 大規(guī)模方法為本領(lǐng)域已知且為工業(yè)化生產(chǎn)各種材料所必需。由于大規(guī)模方法不能 通過與小規(guī)模方法相同的方式進(jìn)行，因此即使存在小規(guī)模生產(chǎn)方法，也必須設(shè)計大規(guī)模生 產(chǎn)材料的特定方法。
[0003] 營養(yǎng)保健品有時是使用合成方法制備的，提供希望的活性成分，如多酚，其是在果 實細(xì)胞中天然發(fā)現(xiàn)。然而，使用合成方法未與活性成分一起提供有時有助于配制物的效力 的天然成分。
[0004] 其它類型的營養(yǎng)保健品是從天然植物中制備的；然而，所有已知的從植物中制備 營養(yǎng)保健品的大規(guī)模生產(chǎn)方法包括從制備的植物細(xì)胞中提取，以獲得希望的活性成分。然 而，當(dāng)提取例如含有多酚的植物時，在提取物中，多酚（包括白藜蘆醇）的量可能非常高，因 此，最終產(chǎn)物也許是苦味的。僅一部分植物可以被成功提取，因為僅其含有希望量的活性成 分。
[0005] 制備果實細(xì)胞的小規(guī)模方法為本領(lǐng)域已知；然而，大規(guī)模方法更難以設(shè)計，因為其 趨于擴(kuò)大初級代謝物的生產(chǎn)，同時使次生代謝物的產(chǎn)生最小化。由于活性成分如多酚是次 生代謝物，因此其大規(guī)模生產(chǎn)是復(fù)雜的。
[0006]因此，本領(lǐng)域需要從天然物料制備果實細(xì)胞的大規(guī)模方法，其包括生產(chǎn)果實細(xì)胞 的初級代謝產(chǎn)物和次生代謝產(chǎn)物。
[0007] 代謝異常與肥胖癥、胰島素抗性、葡萄糖耐量下降、II型糖尿病（DMII)、血脂異 常、脂肪肝、脂肪性肝炎、脂肪性變相關(guān)。這些異常使中風(fēng)、心血管疾病的風(fēng)險上升。代謝綜 合征的病因?qū)W被認(rèn)為是多因素的，涉及遺傳學(xué)影響和環(huán)境影響。
[0008] 動脈粥樣硬化是血管床疾病，是由血管壁中形成脂肪沉積物使得血管內(nèi)血流通道 狹窄引起的。這一過程可能影響所有的動脈，尤其是冠狀動脈，并且可能導(dǎo)致最終的冠狀動 脈堵塞，結(jié)果是心臟病發(fā)作，其是美國早逝的主要原因。
[0009] 脂肪肝疾病涵蓋一系列的臨床病癥，其組織學(xué)特征主要在于肝的大泡性脂肪變 性。脂肪肝疾病的組織病理學(xué)譜的范圍是從簡單的脂肪肝（脂肪變性）到脂肪性肝炎一一 脂肪肝的一種，其具有不同程度的纖維化。脂肪性肝炎可以是漸進(jìn)性的，并且可以導(dǎo)致肝硬 化、肝衰竭以及肝細(xì)胞性肝癌，并且可能是隱源性肝硬化的主要原因。脂肪肝疾病的通常的 風(fēng)險因素是肥胖癥、II型糖尿病和高脂血癥。
[0010] II型糖尿病是最普通的慢性人疾病，在美國影響成年人群的8%以及65歲以上年 齡的人口的19%。
[0011] 代謝綜合征也稱為"死亡四重奏"或"綜合征X"或"胰島素抗性綜合征"，是一系列 各種疾病的風(fēng)險因素，所述疾病例如心血管疾病、中風(fēng)和II型糖尿?。匆葝u素抗性）、高 胰島素血癥、腹部肥胖癥（由腹部內(nèi)脂肪積聚引起）、升高的血清脂質(zhì)以及高血壓。25%在 美國生活的成年人被診斷為患有代謝綜合征。有人認(rèn)為代謝綜合征的病理生理學(xué)與胰島素 抗性相關(guān)。風(fēng)險因素包括如下：升高的腰圍（男性彡l〇2cm，女性彡88cm)、升高的甘油三酯 (>150mg/dL)、降低的高密度脂蛋白（HDL)膽固醇（男性<40mg/dL，女性<50mg/dL)、升高的 血壓（>130/85mm Hg)以及升高的空腹血糖（>100mg/dL)。其它風(fēng)險因素也可能促成代謝綜 合征。另外，在不同人群中所述風(fēng)險因素可能改變。
[0012] 空腹血糖異常（IFG)是與胰島素抗性相關(guān)聯(lián)的血糖代謝障礙的糖尿病前狀態(tài)，定 義為空腹血糖水平101_126mg/dL。
[0013] 糖耐量異常（IGT)是與胰島素抗性相關(guān)聯(lián)的血糖代謝障礙的糖尿病前狀態(tài)，其定 義與IFG的定義相似，或者定義為口服高葡萄糖飲食，通常是75克葡萄糖，之后兩小時血糖 水平 141-199mg/dL。
[0014] 許多代謝疾病的特征在于甘油三酯積聚和胰島素抗性。
[0015] 各種身體組織如肌肉、肝和胰腺組織中的甘油三酯積聚被認(rèn)為是導(dǎo)致代謝疾病 產(chǎn)生的器官特異性胰島素抗性的重要因素。此外，組織中脂滴（其與術(shù)語脂肪粒（lipid body)相同）的積聚在胰島素抗性的產(chǎn)生中早期出現(xiàn)，并且與其嚴(yán)重性相關(guān)。
[0016] 持續(xù)性高血壓是一些疾病和失調(diào)的風(fēng)險因素之一。高血壓是缺血性中風(fēng)，西方世 界的第三大致死原因的單一最重要的可修正的風(fēng)險因素。在血壓（BP)讀數(shù)高于120/80毫 米萊柱（mm Hg)，中風(fēng)的風(fēng)險開始增加。多數(shù)對高血壓的判斷表明，當(dāng)高血壓定義為收縮血 壓（SBP)彡160mm Hg和/或舒張血壓（DBP)彡95mm Hg時，中風(fēng)的相對風(fēng)險為大約4〇
[0017] 基于社區(qū)的研究證明在多達(dá)50-60 %的患者中高血壓促成心臟衰竭的產(chǎn)生。 在高血壓患者中，心臟衰竭的風(fēng)險上升，男性上升2倍，女性上升3倍。根據(jù)弗雷明漢 (Framingham)研究，高血壓占心臟衰竭案例的約四分之一。
[0018] 高血壓不僅是確定的心血管風(fēng)險因素，還增加動脈粥樣硬化的風(fēng)險。臨床試驗顯 示，在DBP最高的五分之一中，即使具有額外的高膽固醇和吸煙的風(fēng)險，高血壓仍然顯著促 成動脈粥樣硬化的風(fēng)險。
[0019] 據(jù)報道，在85%-95%的患有慢性腎?。–KD)的患者中出現(xiàn)高血壓。未控制的高 血壓是產(chǎn)生CKD的風(fēng)險因素，并且是美國末期腎臟疾病的第二主要原因。
[0020] 過去，多數(shù)注意力關(guān)注于DBP ;但是現(xiàn)在認(rèn)識到高SBP和高脈壓差（SBP和DBP之 間的數(shù)值差異）也是風(fēng)險因素。重要的是，有人證明了，將SBP和DBP組合評估相較于評估 2個單獨因素改進(jìn)了心血管風(fēng)險預(yù)測。盡管如此，DBP仍然是重要的心血管風(fēng)險因素。在 Franklin等的研究中，單獨的舒張高血壓是心血管風(fēng)險因素?；加袉为毜氖鎻埜哐獕旱膶?象占高血壓人群的14%，且發(fā)現(xiàn)其心血管風(fēng)險是具有正常BP的對象的約兩倍（Schillaci 等，2009)。此外，中國全國范圍的數(shù)據(jù)庫確定了，單獨的舒張高血壓是心血管疾病的獨立的 風(fēng)險因素。
[0021] 脂質(zhì)過氧化是指細(xì)胞損害中的過程中的脂質(zhì)氧化變質(zhì)。脂質(zhì)過氧化可能是一種若 干風(fēng)險因素可以通過其促進(jìn)心血管疾病的機(jī)制。
[0022] 發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)過氧化與心血管風(fēng)險因素，如年齡、甘油三酯、吸煙、膽固醇高密度脂蛋 白（HDL)和體重指數(shù)（BMI)，高度相關(guān)。
[0023] 懷孕、卵巢切除和絕經(jīng)后的女性顯示比未懷孕、卵巢未切除和絕經(jīng)前的女性更高 的脂質(zhì)過氧化水平，并且這些狀態(tài)過程中的高脂質(zhì)過氧化水平是其上升的CVD風(fēng)險的原 因，至少是部分原因。
[0024] 從患有原發(fā)性高血壓的患者費力的低密度脂蛋白（LDL)顯示上升的氧化傾向。因 此，氧化的LDL (Ox-LDL)可能傾向于加速的動脈粥樣硬化，并且脂質(zhì)過氧化的LDL的傾向可 能是與LDL血漿濃度本身同樣重要的動脈粥樣硬化的風(fēng)險因素。
[0025] 流量介導(dǎo)的擴(kuò)張（FMD)，內(nèi)皮功能紊亂的表現(xiàn)，可以作為若干疾病的指標(biāo)。FMD對 于冠狀動脈疾病有高度預(yù)測性，F(xiàn)MD每下降百分之一的優(yōu)勢比為1. 32 (p = 0. 001)。不僅在 動脈粥樣硬化中，F(xiàn)MD還在系統(tǒng)性硬化中與疾病進(jìn)展高度相關(guān)。FMD值與疾病持續(xù)時間負(fù)相 關(guān)。
[0026] 在絕經(jīng)后的女性中，低FMD值與產(chǎn)生高血壓的想到風(fēng)險的升高相關(guān)。
[0027] FMD與缺血性晚期慢性心臟衰竭（ACHF)患者中升高的死亡風(fēng)險相關(guān)（Shechter 等，2009)。此外，無論對心臟衰竭（HF)和動脈粥樣硬化風(fēng)險因素的治療情況如何，持續(xù)性 低FMD均是慢性缺血性HF患者中的心臟事件的預(yù)測指標(biāo)。
[0028] 中風(fēng)患者具有比非中風(fēng)患者顯著更低的流量介導(dǎo)的擴(kuò)張（FMD)值。經(jīng)調(diào)整年齡、 性別和存在卵圓孔未閉（PF0)之后，F(xiàn)DM是隱源性中風(fēng)的獨立的預(yù)測指標(biāo)。
[0029] 最后，在患有雜合的家族性高膽固醇血癥（heFH)的兒童中，所述兒童易感于提早 的動脈粥樣硬化，在結(jié)構(gòu)性動脈粥樣硬化性變化出現(xiàn)之前檢測到降低的FMD。
[0030] 已知源自含有多酚的果實的營養(yǎng)保健品的有益作用。紅葡萄酒作為這些調(diào)節(jié)性 成分的來源的用途因為其較高的乙醇含量和糖分而受限。此外，已經(jīng)顯示葡萄酒和釀酒葡 萄的治療性作用依賴于種類、位置、年份（年度氣候）、加工等，及因此依賴紅葡萄酒、葡萄 或葡萄種子作為這些調(diào)節(jié)性化合物的來源導(dǎo)致無法進(jìn)行原材料的均一的或一致的供應(yīng)。此 外，果實通常被殘余的殺真菌劑、病原體、殺蟲劑和污染物等污染。
[0031] 此外，來自紅葡萄酒和果實提取物的多酚的胃腸道輸送的潛在益處受限于其靶組 織和細(xì)胞的生物利用度。由于其通過腸道時的生物利用度的明顯差異，在指定食物中某一 多酚的豐度與其作為體內(nèi)活性化合物的濃度之間無相關(guān)性可描繪。例如小腸中類黃酮的吸 收范圍為劑量的0-60%范圍，消除半衰期為2-48小時。大多數(shù)多酚在腸道中經(jīng)歷廣泛代 謝，主要以甲基葡糖苷酸或葡糖苷酸硫酸鹽形式存在于血清和尿液中。在已知的多酚中， 在紅葡萄、紅葡萄酒及其它食物如不同種類的漿果和花生中發(fā)現(xiàn)的植物抗毒素白藜蘆醇 (反式-3, 5, 4'-三羥基芪）（RES)已經(jīng)引起眾多關(guān)注。確信其是造成"法國悖論（French paradox) "的原因，這是與盡管高脂飲食但心血管疾病的低發(fā)生率相關(guān)的一個現(xiàn)象，是適度 引用紅葡萄酒的結(jié)果。然而，RES的物理化學(xué)性質(zhì)如低水溶性及其高肝臟攝取有損于其生物 利用度。此外，由于快速和廣泛代謝隨之形成各種代謝物，RES的口服生物利用度非常低。
[0032] 關(guān)于RES活性和作用的研究主要依賴于白藜蘆醇的三個來源，即純合成的RES，天 然植物來源的RES (例如Poligonum cupcidatum提取物）產(chǎn)物，或者較低程度的完整紅葡 萄或其產(chǎn)物（紅葡萄酒、葡萄汁、葡萄提取物）。紅葡萄細(xì)胞（RGC;Fruitura Bioscience Ltd, Israel)是一種天然的專利保護(hù)的培養(yǎng)細(xì)胞配制物，源自葡萄（Vitis vinifera L.)栽 培品種的果實，包含多酚的全部基質(zhì)，包括白藜蘆醇及天然存在于紅葡萄中的其它成分。
[0033]因此，需要可以在大規(guī)模生產(chǎn)方法中制備的天然（植物）組合物，其中活性成分的 量是一致及復(fù)現(xiàn)的（例如克隆制品），是高生物利用度的，及易于施用以治療各種疾病和失 調(diào)，包括與代謝失調(diào)或代謝疾病相關(guān)的病癥或并發(fā)癥。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0034] 在本發(fā)明的實施方案中，提供了治療、減輕、緩解或預(yù)防代謝綜合征或代謝疾病的 方法，所述方法包括施用包含體外生長的果實細(xì)胞的細(xì)胞系愈傷組織培養(yǎng)物的組合物。
[0035] 根據(jù)一些實施方案，本發(fā)明提供用于治療對象中的選自如下的一或多種病癥的方 法：冠心病（動脈粥樣硬化）、血壓、缺血性疾病、心臟衰竭、動脈粥樣硬化、慢性腎病（CKD) 和腎臟疾病、系統(tǒng)性硬化、慢性心臟衰竭、高血壓、糖尿病、高脂血癥、糖耐量異常、肝性脂肪 變性、高血糖癥、糖尿病前狀態(tài)、新發(fā)糖尿病、胰島素抗性、糖尿病、空腹血糖異常、高甘油三 酯血癥、抗炎癥（脂聯(lián)素）、高膽固醇血癥、低HDL水平、脂肪肝和肥胖癥，所述方法包括給所 述對象施用包含體外生長的果實細(xì)胞的細(xì)胞系愈傷組織培養(yǎng)物的組合物的步驟。在一些實 施方案中，所述對象被診斷為患有代謝綜合征。
[0036] 根據(jù)一些實施方案，果實細(xì)胞的細(xì)胞系愈傷組織培養(yǎng)物根據(jù)大規(guī)模方法制備，所 述方法包括：將果實細(xì)胞在瓶中生長；將果實細(xì)胞從瓶接種到第一生物反應(yīng)器中；將果實 細(xì)胞從第一生物反應(yīng)器接種到另一個生物反應(yīng)器中，其中另一個生物反應(yīng)器是最后的生物 反應(yīng)器或者是中間生物反應(yīng)器，及其中第一生物反應(yīng)器和另一生物反應(yīng)器至少一個是一次 性的；及從最后的生物反應(yīng)器中收獲果實細(xì)胞；其中將從最后的生物反應(yīng)器中收獲的果實 細(xì)胞干燥。
[0037] 根據(jù)一些實施方案，使用補充有（enrichedwith)鎂、磷酸鹽或硝酸鹽或者其組合 的GamborgB5培養(yǎng)基。
[0038] 在一些實施方案中，一次性生物反應(yīng)器是由一或多層聚乙烯制成的。在一些實施 方案中，一次性生物反應(yīng)器是由聚乙烯內(nèi)層和外層及中間尼龍層制成的。
[0039] 在一些實施方案中，提供用于治療、減輕、緩解或預(yù)防代謝綜合征或代謝疾病的方 法，所述方法包括施用包含果實細(xì)胞的細(xì)胞系愈傷組織培養(yǎng)物的組合物，所述果實細(xì)胞是 根據(jù)包括如下步驟的方法制備的：使果實細(xì)胞在瓶中生長；將果實細(xì)胞從所述瓶接種到第 一生物反應(yīng)器中；將果實細(xì)胞從所述第一生物反應(yīng)器接種到另一個生物反應(yīng)器中，其中所 述另一生物反應(yīng)器是最后的生物反應(yīng)器或者是中間生物反應(yīng)器，且其中所述第一生物反應(yīng) 器和另一個生物反應(yīng)器的至少一個是一次性的；及從最后的生物反應(yīng)器收獲果實細(xì)胞；其 中使從最后的生物反應(yīng)器收獲的果實細(xì)胞干燥。
[0040] 在一些實施方案中，提供用于治療、減輕、緩解或預(yù)防炎癥的方法，所述方法包括 施用包含果實細(xì)胞的細(xì)胞系愈傷組織培養(yǎng)物的組合物，所述果實細(xì)胞是根據(jù)包括如下步驟 的方法制備的：使果實細(xì)胞在瓶中生長；將果實細(xì)胞從所述瓶接種到第一生物反應(yīng)器中； 將果實細(xì)胞從所述第一生物反應(yīng)器接種到另一個生物反應(yīng)器中，其中所述另一生物反應(yīng)器 是最后的生物反應(yīng)器或者是中間生物反應(yīng)器，且其中所述第一生物反應(yīng)器和另一個生物反 應(yīng)器的至少一個是一次性的；及從最后的生物反應(yīng)器收獲果實細(xì)胞；其中使從最后的生物 反應(yīng)器收獲的果實細(xì)胞干燥。
[0041] 在一些實施方案中，所述組合物可以每天施用一次。
[0042] 在一些實施方案中，提供粉末形式的組合物，其包含在大規(guī)模生產(chǎn)方法中體外生 長的葡萄漿果細(xì)胞的細(xì)胞系愈傷組織培養(yǎng)物，其中葡萄漿果細(xì)胞的細(xì)胞系愈傷組織培養(yǎng)物 源自葡萄漿果橫切片、葡萄漿果皮、葡萄漿果肉、葡萄種子、有種子或無種子栽培種的葡萄 胚或者葡萄種皮中的一或多種；其中葡萄漿果細(xì)胞的細(xì)胞系愈傷組織培養(yǎng)物包含白藜蘆醇 的量為至少l〇〇〇mg/kg粉末。
[0043] 在一些實施方案中，所述組合物的特征在于在施用一次所述組合物后血漿中白藜 蘆醇的濃度的兩個峰。
[0044] 在一些實施方案中，提供降低在靜止?fàn)顟B(tài)和/或在運動中的舒張血壓和收縮血壓 和/或靜息心率的方法，包括給所述對象施用包含體外生長的果實細(xì)胞的細(xì)胞系愈傷組織 培養(yǎng)物的組合物的步驟。
【附圖說明】
[0045]本發(fā)明附圖（僅作為示例）加以描述。具體關(guān)于附圖的詳細(xì)描述，需要強調(diào)的是 圖中顯示的事項只是為了舉例及論述本發(fā)明優(yōu)選的實施方案，及是為了提供確信最有效和 易于理解的本發(fā)明的原理描述和觀點而呈現(xiàn)。在這方面，未嘗試顯示比基本理解本發(fā)明必 需的更詳細(xì)的本發(fā)明的結(jié)構(gòu)詳情，結(jié)合附圖的描述使得本領(lǐng)域技術(shù)人員了解可以實施的本 發(fā)明的一些形式。
[0046] 圖1證實在角叉菜膠注射之前用RGC制備物、吲哚美辛和水（作為對照）處理的 大鼠中足水腫的測量（體積％ )，。使用重復(fù)測量的雙向AN0VA，然后用Bonferroni事后檢 定進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。對照組（1M)與陽性對照組（2M)的對比在2和4小時顯示統(tǒng)計學(xué)顯著 差異（p〈0. 001)。對照組與RGC-制備物（3M)組的對比在2和4小時顯示統(tǒng)計學(xué)顯著差異 (p<0. 001) 〇
[0047] 圖2顯示在研究期間通過熱板（Hot Plate)測量的每組的痛覺過敏作用分布（結(jié) 果以與時間成函數(shù)的"熱板延時，自基線％ "表示）。使用重復(fù)測量的雙向AN0VA，然后用 Bonferroni事后檢定進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。對照組（1M)與陽性對照組（2M)的對比在2和4小 時顯示統(tǒng)計學(xué)顯著差異（P〈〇. 05-0. 01)。對照組與RGC(3M)對比在4小時顯示統(tǒng)計學(xué)顯著 差異（P〈〇. 01)。
[0048] 圖3顯示通過熱板測量的每組的痛覺過敏作用分布（結(jié)果以與時間成函數(shù)的"熱 板延時s，基線-實際時間"表示）。使用重復(fù)測量的雙向AN0VA，然后用Bonferroni事后 檢定進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。對照組（1M)與陽性對照組（2M)的對比在2和4小時顯示統(tǒng)計學(xué)顯 著差異（P〈〇. 05-0. 01)。對照組與RGC-處理的小鼠（3M)對比在4小時顯示統(tǒng)計學(xué)顯著差 異（p〈0. 01) 〇
[0049] 圖4顯示4個不同批次的在補充的Gamborg B5培養(yǎng)基的大規(guī)模一次性生物反應(yīng) 器中生長的紅葡萄細(xì)胞的生長曲線。在20直至40天，細(xì)胞經(jīng)歷指數(shù)生長，產(chǎn)生500gr/l鮮 生物量。這些細(xì)胞繼續(xù)生長并且可以達(dá)到更高的生物量。
[0050] 圖5顯示高果糖飲食飼喂的大鼠中的收縮血壓（BP)vs時間，補充或不補充不同量 的紅葡萄細(xì)胞（RGC)，在基線以及飲食3周后和5周后。
[0051] 圖6A是關(guān)于RGC中的白藜蘆醇的LC-MS分析的UV色譜圖（人=306nm)且圖6B 是關(guān)于RGC中的白藜蘆醇的LC-MS分析的提取離子色譜圖（m/z-227. 0701-227. 0737)。
[0052] 圖7顯示陰性的代表性的反式-RES配糖體的ESI質(zhì)譜（RT 4. 64min，m/ z389. 1250)，其中白藜蘆醇（m/z 227. 0719)是m/z 389. 1250的源內(nèi)片段化產(chǎn)物離子。
[0053] 圖8提供了白藜蘆醇（RES)在水中的溶解性結(jié)果，比較RGC-RES、合成的RES和植 物RES的溶解性。
[0054] 圖9A和9B顯示在施用一劑RGC RES之后反式-RES的血漿含量，其中圖9A顯示 總反式-RES，圖9B顯示游離反式-RES。呈現(xiàn)的數(shù)值是平均數(shù)（n = 15)。
[0055] 圖10顯示在食用RGC之后12周RGC對對象中血漿脂質(zhì)過氧化的作用（一起顯示 施用了 200mg和400mg RGC的對象）。
[0056] 圖11顯示FMD值相對陽性的變化70%的對象的百分比（*p〈0. 05, #p〈0. 005)。
[0057] 發(fā)明詳述
[0058] 在如下詳細(xì)描述中，闡述了很多具體細(xì)節(jié)以充分理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人 員應(yīng)理解本發(fā)明可以不用這些具體細(xì)節(jié)而實施。在其它情況中，未詳細(xì)描述熟知的方法、程 序和成分免得使本發(fā)明模糊不清。
[0059] 本發(fā)明的實施方案涉及治療、減輕、緩解或預(yù)防代謝綜合征或與代謝綜合征相關(guān) 的任何病癥或并發(fā)癥的方法，所述方法包括施用包含體外生長的果實細(xì)胞的細(xì)胞系愈傷組 織培養(yǎng)物的組合物，所述病癥或并發(fā)癥例如高血壓、糖尿?。╠iabetes)、高脂血癥、糖耐量 異常、肝性脂肪變性、高血糖癥、糖尿病前狀態(tài)、新發(fā)糖尿病、胰島素抗性、糖尿病（Diabetes Mellitus)、空腹血糖異常、高甘油三酯血癥、高膽固醇血癥、低HDL水平、脂肪肝和肥胖癥。 在本發(fā)明的一些實施方案中，所述細(xì)胞在如下所描述的大規(guī)模方法中生長。
[0060] 如本文所用，短語"果實細(xì)胞培養(yǎng)物"是指在大規(guī)模方法中體外生長的果實細(xì)胞的 細(xì)胞系愈傷組織培養(yǎng)物。所述果實細(xì)胞培養(yǎng)物可以是單一細(xì)胞培養(yǎng)物（如本文所用，果實 細(xì)胞系培養(yǎng)物或克隆培養(yǎng)物）或包含來源于具有不同基因型的果實（例如，不同品種）的 細(xì)胞或來源于單一果實的若干細(xì)胞類型或組織的異源細(xì)胞培養(yǎng)物。本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)物可 以源自果實的任何部分，例如，果皮、果肉、種皮和種仁（seed flesh)。
[0061] 如本文所用，術(shù)語"治療（treating) "是指預(yù)防一些或全部與疾病、病癥或失調(diào)相 關(guān)的癥狀。術(shù)語"治療"也指緩解、改善或減輕癥狀或疾病的潛在原因，延長患有疾病的患 者的預(yù)期壽命，預(yù)防疾病以及完全從疾病復(fù)原。
[0062] 詞語"治療（treat) "或"治療（treatment) "可以進(jìn)一步指目的在于減緩（減輕） 不想要的生理學(xué)變化或失調(diào)的治療。為了本發(fā)明的目的，有益的或想要的臨床結(jié)果包括但 不限于緩和癥狀、減小疾病程度、穩(wěn)定的（即不變壞）疾病狀態(tài)、延遲或減緩疾病進(jìn)展、改善 或減輕疾病狀態(tài)以及緩解（部分或全部），無論可檢測或不可檢測。"治療（treating)"還 可以指與不接受治療的預(yù)期存活相比延長存活。
[0063] 詞語"預(yù)防（prevent) "和"預(yù)防（prevention) "涉及用于保護(hù)或防止沒有給定病 癥的個體進(jìn)展到該病癥的預(yù)防藥或預(yù)防性手段。需要預(yù)防的個體包括易發(fā)或易感病癥的那 些個體。
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