一種香花崖豆藤組培快繁方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于香花崖豆藤組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體是涉及一種香花崖豆藤組培快繁 方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 香花崖豆藤（MillettiadielsianaHarms)又名山雞血藤、大巴豆、山胡豆，為蝶 形花科崖豆藤屬多年生半常綠木質(zhì)藤本植物，大多數(shù)都還處于野生狀態(tài)。其藤莖、根均可藥 用，能行氣、解熱、止血、驅(qū)風(fēng)除濕、通經(jīng)活絡(luò)，種子還可做為油料材料，花葉并美，花色多，顏 色鮮艷，花期長，在園林中應(yīng)可用于棚架、假山、墻面、坡坎、地被、屋頂、盆景等處的綠化，是 一種良好的藥用、觀賞兩用的園林綠化植物。近年來，由于香花崖豆藤既是一種重要的藥用 植物（從70年代開始，在兩廣地區(qū)廣泛采挖香花崖豆藤用于中成藥的生產(chǎn)），又是一類可以 作為優(yōu)良的園林觀賞植物，所以，目前頗受廣大市民喜愛，市場上對于香花崖豆藤的需求不 斷增長，使香花崖豆藤遭受濫采濫挖的現(xiàn)象越來越嚴(yán)重。如何使香花崖豆藤優(yōu)良母株的各 種優(yōu)良性狀在后代個體中遺傳性穩(wěn)定，繁殖系數(shù)高、繁殖速度快、生根效果好等優(yōu)點，通過 植物組培快繁是最有效途徑。香花崖豆藤的種子播種、藤條扦插和壓條方法進行繁殖，其繁 殖系數(shù)均不高，因此，加強香花崖豆藤的組培快繁研究工作具有重要的意義。
[0003] 有關(guān)香花崖豆藤組培快繁的報道1篇（1、黃艷寧，彭盡暉，周紅燦，等.香花崖 豆藤的組織培養(yǎng)與快速繁殖[J].植物生理學(xué)通訊，2007. 8, 43 (4) : 751.)及碩士論文1篇 (2、黃艷寧.香花崖豆藤的繁殖技術(shù)及園林應(yīng)用研究）。文獻1中以成熟青豆莢為組培材料 時，取材時間有限制，只能為每年的10月份豆莢成熟時取材，且種子在培養(yǎng)基里的萌芽率 不高，每一粒種子只能發(fā)出一株無菌苗，再通過無菌苗進行切段進行增殖培養(yǎng)，繁殖系數(shù)不 高，為5. 0。文獻2中以單芽及帶芽莖段為組培材料時，取材時耗材比較多，需要采摘大量的 幼嫩枝條，且繁殖系數(shù)不高，為5. 56。本發(fā)明以葉片為組培材料，通過愈傷組培進行叢芽誘 導(dǎo)增殖分化，可以在短時間內(nèi)以十幾倍的速度進行增殖，真正可以實現(xiàn)"給我一片綠葉，還 你一片森林"的說法，以種子和帶芽莖段為材料的繁殖方法，其增殖系數(shù)及速度在短時間內(nèi) 是無法達到的。同時，利用本發(fā)明方法獲得的幼芽，生根率高，移栽成活率高，真正做到了產(chǎn) 業(yè)化的發(fā)展。
[0004]目前，有關(guān)香花崖豆藤葉片組培快繁技術(shù)尚未報道，且該方法具有取材方便、耗材 少、培養(yǎng)周期短、繁殖系數(shù)高、繁殖速度快、生根效果好、保持母株優(yōu)良遺傳性狀等特點，使 香花崖豆藤能實行工廠化快速育苗。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是在于提供了一種香花崖豆藤組培快繁方法，本發(fā)明提供的組培快 繁方法，具有繁殖系數(shù)高、繁殖速度快、生根效果好、保持母株優(yōu)良遺傳性狀等特點，能在短 時期內(nèi)獲得香花崖豆藤優(yōu)質(zhì)苗木，并能實行工廠化快速育苗。
[0006] 為達到上述目的，本發(fā)明采取以下技術(shù)措施：
[0007] 本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是通過外植體選取及處理、初代愈傷組織培養(yǎng)、分化培 養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)形成了一套完整的香花崖豆藤組培快繁技術(shù)。
[0008] -種香花崖豆藤組培快繁方法，其步驟如下：
[0009] (1)外植體選取及處理：
[0010] 外植體選?。哼x擇生長健壯、無病蟲害的香花崖豆藤植株為繁殖材料，3月中下旬 采其一、二年生枝條當(dāng)年抽發(fā)的新梢幼嫩葉片為外植體，滅菌后，切成IcmXIcm的小方塊。 [0011] 所述的外植體材料選擇是生長健壯、無病蟲害、無機械損傷、沒有木質(zhì)化的幼嫩枝 條上剛展開的新葉。
[0012] 外植體處理：將取回的幼嫩葉片用少量的洗衣粉沖洗干凈放置瓶內(nèi)，瓶口用單層 醫(yī)用紗布封好，放在自來水中沖洗60min，然后倒出瓶內(nèi)的水，將材料放置超凈工作臺中，先 用75 %酒精處理30s，進行表面消毒，再用無菌水沖洗5?6次，然后用0. 1 %HgCl處理 5min，再用無菌水沖洗5?6次，再將葉片四周切除，然后切成IcmXIcm的小方塊。
[0013] (2)初代愈傷組織培養(yǎng)：將滅好菌切好塊的葉片接種到裝有初代培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶 中進行初代培養(yǎng)，接種時葉背面向下，緊貼于培養(yǎng)基上。材料培養(yǎng)均放在溫度為25°C±2°C 的光照培養(yǎng)室內(nèi)，光照時間為14h，光照強度為1500?2000Lx，培養(yǎng)25?35d將培育出的 愈傷組織轉(zhuǎn)入增殖分化培養(yǎng)基中。
[0014]所述的初代培養(yǎng)基的配方為：MS+6-BA0? 5mg/L+NAAI. 5mg/L+IAA0.lmg/L+瓊脂 8g/L+ 鹿糖 30g/L，pH值為 5. 5 ?6. 0。
[0015] (3)分化培養(yǎng)：將初代培養(yǎng)的愈傷組織切成0. 5cmX0. 5cm的小塊接種到裝有分化 培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中進行分化培養(yǎng)，pH值、培養(yǎng)溫度、光照時間、光照強度、培養(yǎng)時間均與（2) 初代愈傷組織培養(yǎng)相同。愈傷組織分化成芽叢的分化率為60%?70%。
[0016] 所述的分化培養(yǎng)基的配方為：MS+6-BA3.Omg/L+NAA0? 5mg/L+瓊脂8g/L+鹿糖 30g/L。
[0017] (4)增殖培養(yǎng)：將獲得的芽叢切成單芽（芽長0? 5?I. 0cm)接種到增殖培養(yǎng)基的 培養(yǎng)瓶中進行增殖培養(yǎng)，pH值、培養(yǎng)溫度、光照時間、光照強度、培養(yǎng)時間均與⑵初代愈傷 組織培養(yǎng)相同，形成叢生芽。待芽高〇. 5?I.Ocm可再切下，置于增殖培養(yǎng)基，相同培養(yǎng)條 件下繼續(xù)進行增殖培養(yǎng)，擴繁植株。
[0018] 所述的增殖培養(yǎng)基的配方為：MS+6-BA2.Omg/L+NAA0.5mg/L+瓊脂8g/L+蔗糖 30g/L。
[0019] (5)生根培養(yǎng)：將芽叢上的不定苗長至3?5cm，具有2?4片完整的葉片時，切割 成單株不定苗接種到進行生根培養(yǎng)。培養(yǎng)溫度、光照時間、培養(yǎng)時間均與（2)初代愈傷組織 培養(yǎng)相同，光照強度為800?lOOOLux，生根率可達90%以上，待不定苗在生根培養(yǎng)基中根 有2?3條、根長為2?5cm時準(zhǔn)備出瓶。
[0020] 所述的生根培養(yǎng)基的配方為：MS+IBA3. 0mg/L+NAA0. 5mg/L+瓊脂8g/L+蔗糖30g/ L，pH值為 5. 5 ?6. 0。
[0021] 出瓶后的操作按照常規(guī)方案進行，可參考碩士論文（黃艷寧.香花崖豆藤的繁殖 技術(shù)及園林應(yīng)用研究）
[0022] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于：
[0023] 首次公開了一種香花崖豆藤組培快繁方法，該方法通過葉片進行初代愈傷組織培 養(yǎng)、分化培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)來獲得繁殖系數(shù)高、繁殖速度快、生根效果好、保持母株 優(yōu)良遺傳性狀等特點的香花崖豆藤優(yōu)質(zhì)苗木，實現(xiàn)工廠化快速育苗，與以種子為材料萌發(fā) 獲得的無菌苗進行組培快繁相比較，其增殖系數(shù)高，可達15.O?18. 0,繁殖速度快，減少了 種子在培養(yǎng)基內(nèi)萌芽生長成無菌苗的階段，從而縮短了培養(yǎng)周期，以一個IcmXlcm的葉片 小方塊外植體在初代培養(yǎng)30d，分化、增殖培養(yǎng)各30d，每次繁殖倍數(shù)為16倍計算，一年根據(jù) 實際生產(chǎn)情況可以出苗約為42. 95億株，為一種藥用、觀賞兩用的良好園林綠化材料提供 了快速繁殖生產(chǎn)技術(shù)。
【主權(quán)項】
1. 一種香花崖豆藤組培快繁方法，其步驟如下： (1) 外植體選取及處理： 外植體選?。哼x擇生長健壯、無病蟲害的香花崖豆藤植株為繁殖材料，3月中下旬采其 一、二年生枝條當(dāng)年抽發(fā)的新梢幼嫩葉片為外植體，滅菌后，切成IcmX Icm的小方塊； (2) 初代愈傷組織培養(yǎng)：將滅好菌切好塊的葉片接種到裝有初代培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中進 行初代培養(yǎng)，接種時葉背面向下，緊貼于培養(yǎng)基上；材料培養(yǎng)均放在溫度為25°C ±2°C的光 照培養(yǎng)室內(nèi)，光照時間為14h，光照強度為1500?2000Lx，培養(yǎng)25?35d將培育出的愈傷 組織轉(zhuǎn)入增殖分化培養(yǎng)基中； 所述的初代培養(yǎng)基的配方為：MS+6-BA 0. 5 mg/L+NAA I. 5 mg/L+IAAO. I mg/L +瓊脂 8g/L + 鹿糖 30g/L，pH 值為 5· 5 ?6· 0 ; (3) 分化培養(yǎng)：將初代培養(yǎng)的愈傷組織切成0. 5cmX0. 5cm的小塊接種到裝有分化培養(yǎng) 基的培養(yǎng)瓶中進行分化培養(yǎng)，pH值、培養(yǎng)溫度、光照時間、光照強度、培養(yǎng)時間均與（2)初代 愈傷組織培養(yǎng)相同； 所述的分化培養(yǎng)基的配方為：MS+6-BA 3.0 mg/L+ NAA 0. 5mg/ L +瓊脂8g/L +蔗糖 30g/L ； (4) 增殖培養(yǎng)：將獲得的芽叢切成單芽，芽長0. 5?I. 0cm，接種到增殖培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶 中進行增殖培養(yǎng)，pH值、培養(yǎng)溫度、光照時間、光照強度、培養(yǎng)時間均與（2)初代愈傷組織培 養(yǎng)相同，形成叢生芽；待芽高〇. 5?I. Ocm可再切下，置于增殖培養(yǎng)基，相同培養(yǎng)條件下繼續(xù) 進行增殖培養(yǎng)，擴繁植株； 所述的增殖培養(yǎng)基的配方為：MS+6-BA 2.0 mg/L+ NAA 0. 5mg/ L +瓊脂8g/L +蔗糖 30g/L ； (5) 生根培養(yǎng)：將芽叢上的不定苗長至3?5cm，具有2?4片完整的葉片時，切割成 單株不定苗接種到進行生根培養(yǎng)；培養(yǎng)溫度、光照時間、培養(yǎng)時間均與（2)初代愈傷組織培 養(yǎng)相同，光照強度為800?1000 Lux，生根率可達90%以上，待不定苗在生根培養(yǎng)基中根有 2?3條、根長為2?5cm時準(zhǔn)備出瓶； 所述的生根培養(yǎng)基的配方為：MS+IBA3. Omg/L +ΝΑΑ0. 5 mg/L+瓊脂8g/L +蔗糖30g/ L，pH 值為 5· 5 ?6· 0。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于： 所述的外植體材料選擇是生長健壯、無病蟲害、無機械損傷、沒有木質(zhì)化的幼嫩枝條上 剛展開的新葉； 外植體處理：將取回的幼嫩葉片用少量的洗衣粉沖洗干凈放置瓶內(nèi)，瓶口用單層醫(yī)用 紗布封好，放在自來水中沖洗60min，然后倒出瓶內(nèi)的水，將材料放置超凈工作臺中，先用 75%酒精處理30 s，進行表面消毒，再用無菌水沖洗5?6次，然后用0. l%HgCl處理5 min， 再用無菌水沖洗5?6次，再將葉片四周切除，然后切成IcmX Icm的小方塊。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種香花崖豆藤組培快繁方法，該方法通過外植體選取及處理、初代培養(yǎng)、分化培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)形成了一套完整的香花崖豆藤組培快繁技術(shù)。本發(fā)明具有培養(yǎng)周期短，繁殖系數(shù)高、繁殖速度快、生根效果好、保持母株優(yōu)良遺傳性狀等特點，使香花崖豆藤能實行工廠化快速育苗，其增殖系數(shù)可達15.0～18.0，與以種子萌發(fā)、單芽和帶芽莖段為材料獲得的無菌苗進行組培快繁相比較，其增殖效果好、增殖效率高，減少了種子在培養(yǎng)基內(nèi)萌芽生長成無菌苗的階段，從而縮短了培養(yǎng)周期，為一種藥用、觀賞兩用的良好材料提供了快速繁殖生產(chǎn)技術(shù)。
【IPC分類】A01H4-00
【公開號】CN104604691
【申請?zhí)枴緾N201510071050
【發(fā)明人】黃艷寧, 彭福元, 朱校奇, 謝進, 范海珊, 彭斯文, 徐瑞
【申請人】湖南省農(nóng)業(yè)生物資源利用研究所
【公開日】2015年5月13日
【申請日】2015年2月11日