一種柳樹帶芽莖皮的組織培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種生物技術(shù)領(lǐng)域的組織培養(yǎng)方法，特別是一種柳樹帶芽莖皮的組織培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]柳樹組織培養(yǎng)方法主要是先產(chǎn)生愈傷組織到叢生芽再到生根這樣一個(gè)過程，繁殖速度比較慢。本方法直接誘導(dǎo)叢成芽到生根，縮短了繁殖時(shí)間。組培中一般外植體選擇為芽時(shí)，在誘導(dǎo)過程中愈傷產(chǎn)生的機(jī)率的比較多，本方法中采用帶莖皮的芽作為外植體目的是提高叢成芽的誘導(dǎo)效率。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是為了克服柳樹組培中的繁殖不足，提供繁殖速度快，繁殖效率高，成活率高的一種柳樹帶芽莖皮的組織培養(yǎng)方法。
[0004]本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn):
本發(fā)明涉及一種柳樹帶芽莖皮的組織培養(yǎng)方法，包括下列步驟:
(1)選枝培芽:選取生長(zhǎng)健壯、無病蟲害的I年生柳樹帶休眠芽枝條，剪成1cm帶有側(cè)芽的莖段，先用洗滌精水漂洗10-15min，再用自來水沖洗10_15min，浸泡在20%多菌靈溶液中15-20min后置于光照培養(yǎng)箱中進(jìn)行水培，培養(yǎng)條件:溫度24_26°C，光強(qiáng)2000Lx，水培5-6天，待水培枝條的休眠芽剛剛吐白萌動(dòng)時(shí)為止；
(2)外植體選擇:用刀片將含芽枝條帶木質(zhì)部切下約1cm，用洗滌精水浸泡20min，用自來水沖洗30min,置超凈工作臺(tái)無菌條件下,用70%的酒精消毒30s,用無菌水沖洗3次,用20%次氯酸鈉消毒液消毒20分鐘，用無菌水沖洗5次，將外植體表面用經(jīng)過滅菌處理的濾紙吸干，用鑷子挑去芽的外層表皮，用刀片切下與芽連接的莖皮，莖皮不帶木質(zhì)部；
(3)培育無菌試管苗:將帶芽莖皮接種在誘導(dǎo)叢成芽培養(yǎng)基上，莖皮貼進(jìn)培養(yǎng)基，芽保持向上，培養(yǎng)基配方:MS+0.4mg/L 6-BA+0.lmg/L NAA+0.2mg/L KT+0.6mg/L PVP，置于普通日光燈光源的環(huán)境下，光照強(qiáng)度為1500-2000LX，每日光照時(shí)間為20小時(shí)，溫度25 ± 2 °C，相對(duì)濕度在65%-70%，培養(yǎng)約20天，長(zhǎng)成2-3cm的叢成芽的無菌試管苗；
(4)育苗生根:將叢生芽分離切成單株，對(duì)基部進(jìn)行剪切，接入到增殖生根培養(yǎng)基中，增殖生根培養(yǎng)基配方:l/2MS+0.2mg/L 6-BA+0.8mg/L IAA+0.5mg/L NAA+lg/L 活性炭，置于普通日光燈光源的環(huán)境下，光照強(qiáng)度為1500-2000LX，每日光照時(shí)間為20小時(shí)，溫度25 ±2 V，相對(duì)濕度在65%-70%，培養(yǎng)約30天，長(zhǎng)成6_8cm的試管生根苗；
(5)煉苗:將試管苗開瓶保存2天，取出試管苗洗凈，移栽到含松樹皮的基質(zhì)中，其中松樹皮，粒徑7-15mm，保持溫度24°C左右，相對(duì)濕度75%左右，培養(yǎng)兩個(gè)星期。
[0005]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于:
縮短了柳樹組培繁殖時(shí)間，提高了叢成芽的誘導(dǎo)率，利用帶莖皮的休眠芽進(jìn)行大量的繁殖，一可以有效防止木質(zhì)部腐化對(duì)培育無菌試管苗時(shí)的無菌環(huán)境的影響，二提高叢成芽的誘導(dǎo)率，具有很強(qiáng)實(shí)用性；在育苗生根過程中，生根率可達(dá)到100%，從而有效地提高了成活率；本發(fā)明有效地提高了繁殖速度和繁殖率，使得繁殖的速度比其他方法快2-3倍，繁殖率高達(dá)3-5倍，成活率保證在99%以上。
[0006]【具體實(shí)施方式】:
為了加深對(duì)本發(fā)明的理解，下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳述，該實(shí)施例僅用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限定。
[0007]一種柳樹帶芽莖皮的組織培養(yǎng)方法20小時(shí)，溫度25±2°C，相對(duì)濕度在65%_70%，培養(yǎng)約30天，長(zhǎng)成6-8cm的試管生根苗；
(5)煉苗:將試管苗開瓶保存2天，取出試管苗洗凈，移栽到含松樹皮的基質(zhì)中，其中松樹皮，粒徑7-15mm，保持溫度24°C左右，相對(duì)濕度75%左右，培養(yǎng)兩個(gè)星期。
[0008]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于:
縮短了柳樹組培繁殖時(shí)間，提高了叢成芽的誘導(dǎo)率，利用帶莖皮的休眠芽進(jìn)行大量的繁殖，一可以有效防止木質(zhì)部腐化對(duì)培育無菌試管苗時(shí)的無菌環(huán)境的影響，二提高叢成芽的誘導(dǎo)率，具有很強(qiáng)實(shí)用性；在育苗生根過程中，生根率可達(dá)到100%，從而有效地提高了成活率；本發(fā)明有效地提高了繁殖速度和繁殖率，使得繁殖的速度比其他方法快2-3倍，繁殖率高達(dá)3-5倍，成活率保證在99%以上。
[0009]【具體實(shí)施方式】:
為了加深對(duì)本發(fā)明的理解，下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳述，該實(shí)施例僅用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限定。
[0010]一種柳樹帶芽莖皮的組織培養(yǎng)方法，每日光照時(shí)間為20小時(shí)，溫度25±2°C，相對(duì)濕度在65%-70%，培養(yǎng)約20天，長(zhǎng)成2-3cm的叢成芽的無菌試管苗；
(4)育苗生根:將叢生芽分離切成單株，對(duì)基部進(jìn)行剪切，接入到增殖生根培養(yǎng)基中，增殖生根培養(yǎng)基配方:l/2MS+0.2mg/L 6-BA+0.8mg/L IAA+0.5mg/L NAA+lg/L 活性炭，置于普通日光燈光源的環(huán)境下，光照強(qiáng)度為1500-2000LX，每日光照時(shí)間為20小時(shí)，溫度25±2°C，相對(duì)濕度在65%-70%，培養(yǎng)約30天，生根率可達(dá)100%，長(zhǎng)成6_8cm的試管生根苗。
[0011](5)煉苗:將試管苗開瓶保存2天，取出試管苗洗凈，移栽到含松樹皮的基質(zhì)中，其中松樹皮，粒徑7-15mm，保持溫度24°C左右，相對(duì)濕度75%左右，培養(yǎng)兩個(gè)星期可適應(yīng)存活。成活率在99%以上。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種柳樹帶芽莖皮的組織培養(yǎng)方法，其特征在于包括下列步驟: (1)選枝培芽:選取生長(zhǎng)健壯、無病蟲害的I年生柳樹帶休眠芽枝條，剪成1cm帶有側(cè)芽的莖段，先用洗滌精水漂洗10-15min，再用自來水沖洗10_15min，浸泡在20%多菌靈溶液中15-20min后置于光照培養(yǎng)箱中進(jìn)行水培，培養(yǎng)條件:溫度24_26°C，光強(qiáng)2000Lx，水培.5-6天，待水培枝條的休眠芽剛剛吐白萌動(dòng)時(shí)為止； (2)外植體選擇:用刀片將含芽枝條帶木質(zhì)部切下約1cm，用洗滌精水浸泡20min，用自來水沖洗30min,置超凈工作臺(tái)無菌條件下,用70%的酒精消毒30s,用無菌水沖洗3次,用20%次氯酸鈉消毒液消毒20分鐘，用無菌水沖洗5次，將外植體表面用經(jīng)過滅菌處理的濾紙吸干，用鑷子挑去芽的外層表皮，用刀片切下與芽連接的莖皮，莖皮不帶木質(zhì)部； (3)培育無菌試管苗:將帶芽莖皮接種在誘導(dǎo)叢成芽培養(yǎng)基上，莖皮貼進(jìn)培養(yǎng)基，芽保持向上，培養(yǎng)基配方:MS+0.4mg/L 6-BA+0.lmg/L NAA+0.2mg/L KT+0.6mg/L PVP，置于普通日光燈光源的環(huán)境下，光照強(qiáng)度為1500-2000LX，每日光照時(shí)間為20小時(shí)，溫度25 ± 2 °C，相對(duì)濕度在65%-70%，培養(yǎng)約20天，長(zhǎng)成2-3cm的叢成芽的無菌試管苗； (4)育苗生根:將叢生芽分離切成單株，對(duì)基部進(jìn)行剪切，接入到增殖生根培養(yǎng)基中，增殖生根培養(yǎng)基配方:l/2MS+0.2mg/L 6-BA+0.8mg/L IAA+0.5mg/L NAA+lg/L 活性炭，置于普通日光燈光源的環(huán)境下，光照強(qiáng)度為1500-2000LX，每日光照時(shí)間為20小時(shí)，溫度.25 ±2 V，相對(duì)濕度在65%-70%，培養(yǎng)約30天，長(zhǎng)成6_8cm的試管生根苗； (5)煉苗:將試管苗開瓶保存2天后，取出試管苗洗凈，移栽到含松樹皮的基質(zhì)中，其中松樹皮，粒徑7-15mm，保持溫度24°C左右，相對(duì)濕度75%左右，培養(yǎng)兩個(gè)星期。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種柳樹帶芽莖皮的組織培養(yǎng)方法，包括選枝培芽、外植體選擇、培育無菌試管苗、育苗生根、煉苗等步驟。本發(fā)明具有很強(qiáng)的實(shí)用性，提高了柳樹組培繁殖速度和繁殖率，使得繁殖的速度比其他方法快2-3倍，繁殖率高達(dá)3-5倍，成活率可保證在99％以上。
【IPC分類】A01H4-00
【公開號(hào)】CN104604684
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510045532
【發(fā)明人】李敏, 張健, 李玉娟
【申請(qǐng)人】江蘇沿江地區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所
【公開日】2015年5月13日
【申請(qǐng)日】2015年1月29日