專利名稱:熒光假單胞桿菌防治煙草角斑病的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種熒光假單胞桿菌防治煙草角斑病的應(yīng)用，屬于微生物領(lǐng)域。
技術(shù)背景
煙草是我國重要的經(jīng)濟作物之一。煙草角斑病是煙草主要的細菌性病害，在全國 各煙區(qū)均有發(fā)生，每年均造成一定程度的危害和經(jīng)濟損失。
目前該病害的防治方法主要以化學(xué)農(nóng)藥為主，然而化學(xué)農(nóng)藥使用帶來的農(nóng)藥殘 留、污染環(huán)境等問題正日益受到全世界的關(guān)注，發(fā)展綠色農(nóng)業(yè)是農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的需要，也 是全球農(nóng)業(yè)發(fā)展的趨勢和走向。
“無公害煙葉”、“煙草可持續(xù)發(fā)展”等農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展戰(zhàn)略的實施，引起了人們對 化學(xué)農(nóng)藥的潛在危險和危害的重視。因此，符合環(huán)保、健康，可持續(xù)發(fā)展理念的高效、低毒、 低殘留、與環(huán)境相容的生物防治，就成為當前無公害農(nóng)業(yè)生產(chǎn)研究的主題。
本申請人已經(jīng)申請的中國專利，公開號為CNlO 1372680A，發(fā)明名稱為“一株防治 煙草野火病的熒光假單胞桿菌”中公開了一株熒光假單胞桿菌PF7-5，其保藏登記號CGMCC No. 2069，并且公開了該菌株在防治煙草野火病中的應(yīng)用。通過試驗發(fā)現(xiàn)該菌株還具有防治 煙草其它病害的作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供熒光假單胞桿菌PF7-5CGMCC No. 2069在制備防 治煙草角斑病藥物中的應(yīng)用，該菌株對煙草生長無危害且對煙草角斑病具有有顯著防效。
本發(fā)明所涉及的熒光假單胞桿菌PF7-5經(jīng)鑒定確定為熒光假單胞桿菌 (Pseudomonas fluorescens)的一個株系，定名為PF7-5，已于2007年5月31日保存在中 國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)進行了菌種保藏，并證明存活，其 保藏登記號為CGMCC No. 2069。保存地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院，中國科學(xué)院微生 物研究所，郵政編碼100101。
該菌株的形態(tài)特征如下革蘭氏陰性菌，極生鞭毛，可游動，大小 0. 5-1. OumX 1. 5-5. Oum。LB培養(yǎng)基上菌落金黃色，氧化酶反應(yīng)陽性，精氨酸雙水解酶陽性， 產(chǎn)生黃綠色熒光色素；對氨芐青霉素、氯霉素具有較強的抗性。在PH值低于4及大于10的 條件下細菌幾乎不能生長，最適PH值為7。最佳培養(yǎng)基成份蛋白胨25g，葡萄糖6. 2g，硫 酸鎂2g，磷酸氫二鉀1.5g，甘油10ml，瓊脂15g。最適生長溫度。
本申請人已經(jīng)申請的中國專利，公開號為CNlO 1372680A，發(fā)明名稱為“一株 防治煙草野火病的熒光假單胞桿菌”中公開了熒光假單胞桿菌PF7-5，其保藏登記號 CGMCCNo. 2069，并且公開了該菌株在防治煙草野火病中的應(yīng)用。通過試驗發(fā)現(xiàn)該菌株還具 有防治煙草角斑病的作用。
本發(fā)明所述的熒光假單孢桿菌PF7-5是從煙草根際土壤中分離得到。該菌株的代 謝產(chǎn)物對煙草角斑病具有顯著抑制作用。[0011]培養(yǎng)條件
(1)斜面培養(yǎng)培養(yǎng)時間2-3天，培養(yǎng)基成分(1升)蛋白胨25g，葡萄糖6.2g，硫 酸鎂2g，磷酸氫二鉀1.5g，甘油10ml，瓊脂15g。pH值7. 0，最適生長溫度。
(2)種子培養(yǎng)超凈工作臺中從斜面挑取經(jīng)活化的但菌落接入種子培養(yǎng)液中， 搖菌16-18個小時，轉(zhuǎn)速200rpm。種子培養(yǎng)液成分(1升)蛋白胨25g，葡萄糖6. 2g，
硫酸鎂2g，磷酸氫二鉀1.5g，甘油10ml。pH值7.0。
C3)發(fā)酵按5 %的的接種量接入種子培養(yǎng)基，振蕩培養(yǎng)3天(72小時)，轉(zhuǎn)速 200rpm。培養(yǎng)液成分同上。
本發(fā)明的優(yōu)點是本發(fā)明所述的熒光假單胞桿菌PF7-5為一種生防細菌，它能夠 通過微生物發(fā)酵途徑獲得對煙草角斑病具有顯著防效的代謝產(chǎn)物，具有良好的生物農(nóng)藥開 發(fā)前景。
下面結(jié)合
和具體實施方式
對本發(fā)明作進一步說明，凡依照本發(fā)明公開 內(nèi)容所做的任何本領(lǐng)域的等同替換，均屬于本發(fā)明的保護范圍。


圖1為本發(fā)明菌株的光鏡照片，圖中細胞為桿狀，并具有一條或兩條極生鞭毛。
具體實施方式
實施例1 熒光假單胞桿菌PF7_5(CGMCC No. 2069)的培養(yǎng)
培養(yǎng)條件
(1)斜面培養(yǎng)培養(yǎng)時間2-3天，培養(yǎng)基成分(1升)蛋白胨25g，葡萄糖6.2g，硫 酸鎂2g，磷酸氫二鉀1.5g，甘油10mL，瓊脂15g。pH值7. 0，溫度。
(2)種子培養(yǎng)超凈工作臺中從斜面挑取經(jīng)活化的但菌落接入種子培養(yǎng)液中， 搖菌16-18個小時，轉(zhuǎn)速200rpm。種子培養(yǎng)液成分(1升)蛋白胨25g，葡萄糖6. 2g，
硫酸鎂2g，磷酸氫二鉀1.5g，甘油10mL。pH值7.0。
C3)發(fā)酵按5 %的的接種量接入種子培養(yǎng)基，振蕩培養(yǎng)3天(72小時)，轉(zhuǎn)速 200rpm。培養(yǎng)液成分同上。
實施例2 熒光假單胞桿菌PF7-5 (CGMCC No. 2069)對煙草角斑病室內(nèi)拮抗試驗
上述熒光假單胞桿菌PF7-5發(fā)酵液2000rpm離心后80°C 15分鐘滅活，同時對普通 細菌LBA4404的代謝產(chǎn)物進行滅活。試驗進行如下處理
A =CGMCC No. 2069 (PF7-5) IOmL+100 μ L 角斑病(煙草病原細菌)+40mL 液體 LB ；
B 普通細菌代IOmL+100 μ L角斑病+40 μ L液體LB ；
C 農(nóng)用鏈霉素+100 μ L角斑病+50mL液體LB ；
D 角斑凈+100 μ L角斑病+50mL液體LB ；
E 對照，100 μ L 角斑病 +50mL 液體 LB。
各處理25°C過夜振蕩培養(yǎng)。次日測OD6tltl的吸光值(用各處理的備用樣進行調(diào)零)， 計算抑菌率。抑菌率=(1-(ODM/0DW) XlOO0
實驗結(jié)果見下表1，結(jié)果表明熒光假單胞桿菌PF7-5發(fā)酵液對煙草角斑病的抑菌 效果達到71%。[0032]表1.熒光假單胞桿菌PF7-5發(fā)酵液對煙草角斑病的抑菌效果
權(quán)利要求
1.熒光假單胞菌(Pseudomonas f luorescens) PF7-5 CGMCC No. 2069 在制備防治煙草 角斑病藥物中的應(yīng)用。
專利摘要
本發(fā)明公開了熒光假單胞桿菌防治煙草角斑病的應(yīng)用，屬于微生物領(lǐng)域。具體涉及熒光假單胞桿菌PF7-5，其保藏登記號CGMCC No.2069在制備防治煙草角斑病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的優(yōu)點是本發(fā)明所述的熒光假單胞桿菌PF7-5為一種生防細菌，它能夠通過微生物發(fā)酵途徑獲得對煙草角斑病具有顯著防效的代謝產(chǎn)物，具有良好的生物農(nóng)藥開發(fā)前景。
文檔編號A01N63/02GKCN101632389 B發(fā)布類型授權(quán) 專利申請?zhí)朇N 200910088952
公開日2011年7月20日 申請日期2009年7月14日
發(fā)明者萬秀清, 喬嬋, 劉德育, 李麗杰, 焦玉生, 趙光偉, 郭兆奎, 顏培強 申請人:中國煙草總公司黑龍江省公司牡丹江煙草科學(xué)研究所導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan專利引用 (2),