本發(fā)明屬于動(dòng)物模型制備，具體涉及一種腹瀉型腸易激綜合征動(dòng)物模型及其構(gòu)建和評(píng)價(jià)方法。
背景技術(shù)：
：：1、腸易激綜合征（irritable?bowel?syndrome,?ibs）是一種以腹痛、腹脹、糞便性狀及排便頻率異常為主要臨床表現(xiàn)的功能性胃腸疾病。該病的全球發(fā)病率約為9.2%，其中腹瀉型腸易激綜合征（irritable?bowel?syndrome-diarrhea,?ibs-d）占ibs患者的70%以上。ibs-d病程長(zhǎng)，難治愈，易復(fù)發(fā)，屬中醫(yī)學(xué)“泄瀉”范疇，其中脾腎陽(yáng)虛型ibs-d發(fā)病率占比達(dá)13.1%，且近年呈上升趨勢(shì)。制作符合中醫(yī)病因病機(jī)的病證結(jié)合動(dòng)物模型是中醫(yī)方藥研究及治則治法研究的關(guān)鍵前提。既往研究中，母子分離、避水應(yīng)激、直腸擴(kuò)張聯(lián)合中藥灌胃是ibs-d最常用的脾腎陽(yáng)虛證動(dòng)物模型制作方法，但操作困難且造模周期長(zhǎng)，一般長(zhǎng)達(dá)40天-75天，單因素西藥造模僅能復(fù)制疾病模型，無(wú)法建立符合中醫(yī)病因病機(jī)理論的病證結(jié)合模型。2、ibs-d發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，《腸易激綜合征中醫(yī)診療專(zhuān)家共識(shí)意見(jiàn)(2017)》強(qiáng)調(diào)肝郁脾虛、氣機(jī)失司是ibs-d發(fā)病的關(guān)鍵。本發(fā)明擬通過(guò)中西藥合用疊加低溫聯(lián)合束縛及夾尾刺激的方法制作脾腎陽(yáng)虛ibs-d小鼠模型，并應(yīng)用“以方測(cè)證”法，選取脾腎陽(yáng)虛證方證相應(yīng)方劑“四神丸”對(duì)模型進(jìn)行驗(yàn)證，旨在為建立符合中醫(yī)病因病機(jī)的、簡(jiǎn)便易操作的ibs-d脾腎陽(yáng)虛證動(dòng)物模型提供參考方法。技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路1、本發(fā)明的首要目的是提供一種腹瀉型腸易激綜合征動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，本發(fā)明方法相較于現(xiàn)有技術(shù)操作簡(jiǎn)單、造模周期短，且此模型更加符合脾腎陽(yáng)虛型ibs-d發(fā)病機(jī)制。2、所述的構(gòu)建方法包括以下步驟：給予低溫腺嘌呤灌胃，束縛及夾尾刺激，低溫番瀉葉水煎液灌胃聯(lián)合進(jìn)行造模。3、進(jìn)一步地，4、低溫腺嘌呤灌胃時(shí)，使用的腺嘌呤混懸液0-4℃，50-75mg/（kg·d）灌胃，每日1次，連續(xù)10-20天；5、優(yōu)選，6、低溫腺嘌呤灌胃時(shí)，使用的腺嘌呤混懸液溫度為0℃，50?mg/（kg·d）灌胃，每日1次，連續(xù)?14?天。7、進(jìn)一步地，8、束縛及夾尾刺激是從造模第5-12天開(kāi)始給予離心管束縛加間斷夾尾刺激1?h，連續(xù)7?天。9、優(yōu)選，10、束縛及夾尾刺激是從造模第8天開(kāi)始給予離心管束縛加間斷夾尾刺激1?h，連續(xù)7天。11、束縛及夾尾刺激同時(shí)進(jìn)行。12、具體操作：每天上午9點(diǎn)用離心管束縛模型組小鼠四肢限制活動(dòng)，同時(shí)用長(zhǎng)尾夾夾住小鼠鼠尾巴遠(yuǎn)端1/3處，束縛及間斷夾尾時(shí)間均為1?h，連續(xù)7?d。13、進(jìn)一步地：模型的制備操作和觀察測(cè)量于每日同一時(shí)間，即上午9點(diǎn)開(kāi)始進(jìn)行，造模時(shí)間均為7天。束縛刺激：用離心管固定法束縛1h，采用前端開(kāi)小口的50ml離心管，將小鼠放進(jìn)離心管中，用泡沫塊填充離心管過(guò)長(zhǎng)的部分以限制小鼠前后自由移動(dòng)，但保障頭部位置帶有氣流孔使空氣可以進(jìn)入。夾尾刺激：包頭鋼夾夾住小鼠尾巴遠(yuǎn)端1/3處，時(shí)間為1?h，為避免小鼠尾巴出現(xiàn)缺血壞死，需每隔1-3min進(jìn)行間斷夾尾。14、進(jìn)一步地，15、低溫番瀉葉水煎液灌胃從造模第8-10天開(kāi)始，使用的番瀉葉水煎液0-4℃，8-15g/（kg·d）灌胃，每日1次，連續(xù)5-7天。16、優(yōu)選，17、低溫番瀉葉水煎液灌胃從造模第10天開(kāi)始，使用的番瀉葉水煎液溫度為0℃，10g/（kg·d）灌胃，每日1次，連續(xù)5天。18、本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供所述的方法構(gòu)建得到的腹瀉型腸易激綜合征動(dòng)物模型。19、本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供一種腹瀉型腸易激綜合征動(dòng)物模型的評(píng)價(jià)方法，根據(jù)小鼠一般行為學(xué)變化、胃腸動(dòng)力及最小疼痛閾值、血清scfas、5-ht、acth、cort、d-木糖的指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)；一般行為學(xué)變化包括：包括精神狀態(tài)、扎堆聚集、形寒肢冷情況、皮毛色澤、爪甲顏色、糞便形態(tài)、肛周潔凈情況、糞便含水率、肛溫、體重、進(jìn)食量，再運(yùn)用四神丸以方測(cè)證。20、本發(fā)明有益效果：21、本發(fā)明采用低溫腺嘌呤疊加低溫番瀉葉灌胃聯(lián)合夾尾和離心管束縛成功構(gòu)建了ibs-d脾腎陽(yáng)虛證病證結(jié)合動(dòng)物模型。在檢測(cè)反映內(nèi)臟敏感性的宏觀指標(biāo)胃腸動(dòng)力和疼痛閾值的基礎(chǔ)上，結(jié)合了可調(diào)節(jié)內(nèi)臟高敏感的微觀指標(biāo)scfas、5-ht及反映脾腎之陽(yáng)的微觀指標(biāo)acth、cort、d-木糖進(jìn)行評(píng)價(jià)，并采用以方測(cè)證法對(duì)模型進(jìn)行了驗(yàn)證。在病證相關(guān)宏觀癥狀體征的基礎(chǔ)上，強(qiáng)化微觀指標(biāo)多樣化，融合以方測(cè)證進(jìn)行模型驗(yàn)證，構(gòu)建了高效完善的ibs-d脾腎陽(yáng)虛證病證結(jié)合模型的建立方法。本發(fā)明既考慮了ibs-d疾病的發(fā)病因素，也考慮了脾腎陽(yáng)虛證的發(fā)病機(jī)理，且模型制作時(shí)間僅需14天，大大縮短了目前常用的病證結(jié)合模型造模周期，同時(shí)，該模型選用小鼠制作，不僅價(jià)格低廉，操作也更加簡(jiǎn)便，可謂簡(jiǎn)便廉效，對(duì)于快速構(gòu)建短時(shí)有效、價(jià)優(yōu)且符合中醫(yī)病因病機(jī)的ibs-d脾腎陽(yáng)虛證病證結(jié)合動(dòng)物模型具有重要意義。技術(shù)特征：1.一種腹瀉型腸易激綜合征動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其特征在于，包括以下步驟：給予低溫腺嘌呤灌胃，束縛及夾尾刺激，低溫番瀉葉水煎液灌胃聯(lián)合進(jìn)行造模。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，低溫腺嘌呤灌胃時(shí)，使用的腺嘌呤混懸液0-4℃，50-75mg/（kg·d）灌胃，每日1次，連續(xù)10-20天。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的構(gòu)建方法，其特征在于，低溫腺嘌呤灌胃時(shí)，使用的腺嘌呤混懸液溫度為0℃，50?mg/（kg·d）灌胃，每日1次，連續(xù)?14?天。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的構(gòu)建方法，其特征在于，6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，低溫番瀉葉水煎液灌胃從造模第8-10天開(kāi)始，使用的番瀉葉水煎液0-4℃，8-15?g/（kg·d）灌胃，每日1次，連續(xù)5-7天。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的構(gòu)建方法，其特征在于，低溫番瀉葉水煎液灌胃從造模第10天開(kāi)始，使用的番瀉葉水煎液溫度為0℃，10?g/（kg·d）灌胃，每日1次，連續(xù)5天。8.權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的方法構(gòu)建得到的腹瀉型腸易激綜合征動(dòng)物模型。9.一種腹瀉型腸易激綜合征動(dòng)物模型的評(píng)價(jià)方法，其特征在于，根據(jù)小鼠一般行為學(xué)變化、胃腸動(dòng)力及疼痛閾值、血清scfas、5-ht、acth、cort、d-木糖的指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)；一般行為學(xué)變化包括：包括精神狀態(tài)、扎堆聚集、形寒肢冷情況、皮毛色澤、爪甲顏色、糞便形態(tài)、肛周潔凈情況、糞便含水率、肛溫、體重、進(jìn)食量，再運(yùn)用四神丸以方測(cè)證。技術(shù)總結(jié)本發(fā)明公開(kāi)了一種腹瀉型腸易激綜合征動(dòng)物模型及其構(gòu)建和評(píng)價(jià)方法。擬通過(guò)中西藥合用疊加低溫聯(lián)合束縛及夾尾刺激的方法制作脾腎陽(yáng)虛IBS?D小鼠模型，并應(yīng)用“以方測(cè)證”法，選取脾腎陽(yáng)虛證方證相應(yīng)方劑“四神丸”對(duì)模型進(jìn)行驗(yàn)證，旨在為建立符合中醫(yī)病因病機(jī)的、簡(jiǎn)便易操作的IBS?D脾腎陽(yáng)虛證動(dòng)物模型提供參考方法。本發(fā)明方法相較于現(xiàn)有技術(shù)操作簡(jiǎn)單、造模周期短，且此模型更加符合脾腎陽(yáng)虛型IBS?D發(fā)病機(jī)制。技術(shù)研發(fā)人員：鄧娜,謝詩(shī)琴,肖嫩群,劉琴,彭匯宜,譚周進(jìn)受保護(hù)的技術(shù)使用者：湖南中醫(yī)藥大學(xué)技術(shù)研發(fā)日：技術(shù)公布日：2025/1/9