本發(fā)明涉及非洲菊育苗技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種促進非洲菊組培移栽苗生根的方法。

背景技術(shù)：

非洲菊為菊科多年生草本植物，是世界五大切花之一。非洲菊自花不授粉，傳統(tǒng)非洲菊生產(chǎn)常采用分株繁殖的方法進行繁殖，但分株繁殖繁殖系數(shù)較低、易積累病害、分株后代生長不齊、苗弱、品種易退化。組培苗具有遺傳性狀穩(wěn)定、長勢均勻一致、生長快、抗逆能力強的優(yōu)點，因此目前國內(nèi)外非洲菊生產(chǎn)多采用組培苗。組培移栽苗若根系發(fā)育不好，將嚴重影響植株生長、降低其商品價值，多次繼代的組培移栽苗更是會出現(xiàn)根系弱、生長緩慢、長勢弱等問題，因此生產(chǎn)中大多需要每隔一段時間重新誘導一次而不是使用多次繼代的組培苗。因此采取某些手段促進非洲菊組培移栽苗生根對非洲菊工廠化生產(chǎn)具有一定的意義。

印度梨形孢是一種可以人工培養(yǎng)的類叢枝菌根真菌，眾多研究表明它對植物根系的形成、植株生長、植株抗性能力具有明顯的促進作用。但目前尚無其在非洲菊生產(chǎn)中應(yīng)用的報道。利用印度梨形孢促進非洲菊組培移栽苗生根一旦被證實可行，將會具有較大的生產(chǎn)應(yīng)用價值和經(jīng)濟價值。本發(fā)明提供了一種利用印度梨形孢促進非洲菊組培移栽苗生根和恢復多次繼代的非洲菊組培移栽苗根系活力的方法。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了一種促進非洲菊組培移栽苗生根的方法，能夠有效地解決非洲菊組培移栽苗根系發(fā)育較差及有其產(chǎn)生的一系列問題。

本發(fā)明的技術(shù)方案：

一種促進非洲菊組培移栽苗生根的方法，包括印度梨形孢發(fā)酵液的制備、非洲菊組培苗的移栽、印度梨形孢發(fā)酵液澆灌，之后驗證印度梨形孢發(fā)酵液促進生根的效果。通過澆灌印度梨形孢，利用印度梨形孢促進非洲菊組培移栽苗生根、改善根系、進而促進植株生長，此外本發(fā)明還可較好地多次繼代引起的再生植株根系弱、生長緩慢、苗弱、成活率低等問題，對非洲菊植株商品價值的提升具有重要意義。本發(fā)明步驟簡單、可操作性強、效果顯著。

具體方法為：

（1）印度梨形孢發(fā)酵液的制備

活化印度梨形孢菌株，然后挑取菌落邊緣部分的氣生菌絲接種于pda固體培養(yǎng)基上；放置于28℃的黑暗培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)5d，挑取菌絲于裝有100ml滅菌的pda液體培養(yǎng)基的250ml三角瓶內(nèi)，在溫度為28℃，轉(zhuǎn)速為120r/min的搖床內(nèi)培養(yǎng)3天，經(jīng)單層紗布過濾后收集濾液，用水稀釋至孢子濃度為2×10⁷個/ml，獲得印度梨形孢發(fā)酵液。

（2）非洲菊組培苗的移栽

選取連續(xù)繼代了5-20代的在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)了30天高度為3~4cm的非洲菊組培苗；開蓋煉苗2天后移栽至裝有盆體積3/4的腐殖質(zhì)的花盆中，每盆一株；所用花盆直徑為10cm、高度為10cm。

（3）印度梨形孢發(fā)酵液澆灌

向非洲菊組培移栽苗根系附近澆入50ml印度梨形孢發(fā)酵液。置于25±2℃的恒溫培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)室光照強度為1300±200lx，光照時間為12h/d。

本發(fā)明具有以下優(yōu)點：

1、本發(fā)明所用印度梨形孢是一種可以人工培養(yǎng)的類菌根真菌，擴繁簡單。

2、印度梨形孢發(fā)酵液制備工藝簡單，可操作性強，能在較短時間內(nèi)獲得大量發(fā)酵液。

3、印度梨形孢發(fā)酵液澆灌操作簡單。

4、本發(fā)明可以促進非洲菊組培移栽苗根系生長，可提高非洲菊的質(zhì)量和商品價值。

5、本發(fā)明可以恢復多次繼代的非洲菊組培移栽苗根系活力，可有效解決由于多次繼代引起的再生植株根系弱、生長緩慢、苗弱、成活率低等問題，具有較大的生產(chǎn)實踐應(yīng)用價值和經(jīng)濟價值。

附圖說明

圖1移栽后30天（a）和90天（b）的繼代5代的非洲菊植株，從左到右依次為：印度梨形孢發(fā)酵液處理組、滅菌的印度梨形孢發(fā)酵液處理組和pda液體培養(yǎng)基對照組。

圖2移栽后30天（a）和90天（b）的繼代10代的非洲菊植株，從左到右依次為：印度梨形孢發(fā)酵液處理組、滅菌的印度梨形孢發(fā)酵液處理組和pda液體培養(yǎng)基對照組。

圖3移栽后30天（a）和90天（b）的繼代15代的非洲菊植株，從左到右依次為：印度梨形孢發(fā)酵液處理組、滅菌的印度梨形孢發(fā)酵液處理組和pda液體培養(yǎng)基對照組。

圖4移栽后30天（a）和90天（b）的繼代20代的非洲菊植株，從左到右依次為：印度梨形孢發(fā)酵液處理組、滅菌的印度梨形孢發(fā)酵液處理組和pda液體培養(yǎng)基對照組。

圖5繼代20代的無印度梨形孢處理的非洲菊植株（a）和有印度梨形孢處理的非洲菊植株成活情況（b）。

具體實施方式

下面結(jié)合具體的實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案作進一步說明，但本發(fā)明并不僅限于此。

實施例1

1、印度梨形孢發(fā)酵液的制備

活化印度梨形孢菌株，然后挑取菌落邊緣部分的氣生菌絲接種于新的pda固體培養(yǎng)基上。放置于28℃的黑暗培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)5d，挑取菌絲于裝有100ml滅菌的pda液體培養(yǎng)基的250ml三角瓶內(nèi)，在溫度為28℃，轉(zhuǎn)速為120r/min的搖床內(nèi)培養(yǎng)3天，經(jīng)單層紗布過濾后收集濾液，用水稀釋至孢子濃度為2×10⁷個/ml，獲得印度梨形孢發(fā)酵液。

2、非洲菊組培苗的移栽

選取連續(xù)繼代了5代的在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)了30天高度為3~4cm的非洲菊組培苗。開蓋煉苗2天后移栽至裝有3/4腐殖質(zhì)的花盆中，每盆一株。所用花盆直徑為10cm、高度為10cm。

3、印度梨形孢發(fā)酵液澆灌

向非洲菊組培移栽苗根系附近澆入50ml印度梨形孢發(fā)酵液。同時設(shè)置滅菌印度梨形孢發(fā)酵液處理組和pda液體培養(yǎng)基對照組。置于25±2℃的恒溫培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)室光照強度為1300±200lx，光照時間為12h/d。分別在移栽后30天和90天觀察三組非洲菊植株根系生長情況并拍照。

連續(xù)繼代了5代的非洲菊組培移栽苗在移栽30天后（圖1a）：印度梨形孢發(fā)酵液處理組非洲菊移栽苗生根情況最佳，須根較多。滅菌的印度梨形孢發(fā)酵液處理組次之，pda液體培養(yǎng)基對照組根系生長情況最差。在移栽后90天（圖1b），印度梨形孢發(fā)酵液處理組和滅菌的印度梨形孢發(fā)酵液處理組非洲菊根系須根數(shù)均明顯多于pda液體培養(yǎng)基。

實施例2

1、印度梨形孢發(fā)酵液的制備

活化印度梨形孢菌株，然后挑取菌落邊緣部分的氣生菌絲接種于新的pda固體培養(yǎng)基上。放置于28℃的黑暗培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)5d，挑取菌絲于裝有100ml滅菌的pda液體培養(yǎng)基的250ml三角瓶內(nèi)，在溫度為28℃，轉(zhuǎn)速為120r/min的搖床內(nèi)培養(yǎng)3天，經(jīng)單層紗布過濾后收集濾液，用水稀釋至孢子濃度為2×10⁷個/ml，獲得印度梨形孢發(fā)酵液。

2、非洲菊組培苗的移栽

選取連續(xù)繼代了10代的在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)了30天高度為3~4cm的非洲菊組培苗。開蓋煉苗2天后移栽至裝有3/4腐殖質(zhì)的花盆中，每盆一株。所用花盆直徑為10cm、高度為10cm。

3、印度梨形孢發(fā)酵液澆灌

向連續(xù)繼代了10代的非洲菊組培移栽苗根系附近澆入50ml印度梨形孢發(fā)酵液。同時設(shè)置滅菌印度梨形孢發(fā)酵液處理組和pda液體培養(yǎng)基對照組。置于25±2℃的恒溫培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)室光照強度為1300±200lx，光照時間為12h/d。分別在移栽后30天和90天觀察三組非洲菊植株根系生長情況并拍照。

連續(xù)繼代了10代的非洲菊組培移栽苗在移栽30天后（圖2a），印度梨形孢發(fā)酵液處理組和滅菌印度梨形孢發(fā)酵液處理組非洲菊植株生根情況均略好于pda液體培養(yǎng)基對照組最佳，其中印度梨形孢發(fā)酵液處理組植株根系最佳。在移栽后90天（圖2b），pda液體培養(yǎng)基對照組植株根系比連續(xù)繼代了5代的非洲菊組培移栽苗差。印度梨形孢發(fā)酵液處理組和滅菌的印度梨形孢發(fā)酵液處理組非洲菊根系須根數(shù)均明顯多于pda液體培養(yǎng)基對照組，其中印度梨形孢發(fā)酵液處理組植株根系最佳。

實施例3

1、印度梨形孢發(fā)酵液的制備

活化印度梨形孢菌株，然后挑取菌落邊緣部分的氣生菌絲接種于新的pda固體培養(yǎng)基上。放置于28℃的黑暗培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)5d，挑取菌絲于裝有100ml滅菌的pda液體培養(yǎng)基的250ml三角瓶內(nèi)，在溫度為28℃，轉(zhuǎn)速為120r/min的搖床內(nèi)培養(yǎng)3天，經(jīng)單層紗布過濾后收集濾液，獲得印度梨形孢發(fā)酵液。

2、非洲菊組培苗的移栽

選取連續(xù)繼代了15代的在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)了30天高度為3~4cm的非洲菊組培苗。開蓋煉苗2天后移栽至裝有3/4腐殖質(zhì)的花盆中，每盆一株。所用花盆直徑為10cm、高度為10cm。

3、印度梨形孢發(fā)酵液澆灌

向連續(xù)繼代了15代的非洲菊組培移栽苗根系附近澆入50ml印度梨形孢發(fā)酵液。同時設(shè)置滅菌印度梨形孢發(fā)酵液處理組和pda液體培養(yǎng)基對照組。置于25±2℃的恒溫培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)室光照強度為1300±200lx，光照時間為12h/d。分別在移栽后30天和90天觀察三組非洲菊植株根系生長情況并拍照。

連續(xù)繼代了15代的非洲菊組培移栽苗在移栽30天后（圖3a），印度梨形孢發(fā)酵液處理組和滅菌印度梨形孢發(fā)酵液處理組非洲菊植株生根情況均略好于pda液體培養(yǎng)基對照組。在移栽后90天（圖3b），pda液體培養(yǎng)基對照組植株根系比連續(xù)繼代了5代和10代的非洲菊植株差。印度梨形孢發(fā)酵液處理組和滅菌的印度梨形孢發(fā)酵液處理組非洲菊根系須根數(shù)均明顯多于pda液體培養(yǎng)基對照組，其中印度梨形孢發(fā)酵液處理組植株根系最佳。

實施例4

1、印度梨形孢發(fā)酵液的制備

活化印度梨形孢菌株，然后挑取菌落邊緣部分的氣生菌絲接種于新的pda固體培養(yǎng)基上。放置于28℃的黑暗培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)5d，挑取菌絲于裝有100ml滅菌的pda液體培養(yǎng)基的250ml三角瓶內(nèi)，在溫度為28℃，轉(zhuǎn)速為120r/min的搖床內(nèi)培養(yǎng)3天，經(jīng)單層紗布過濾后收集濾液，用水稀釋至孢子濃度為2×10⁷個/ml，獲得印度梨形孢發(fā)酵液。

2、非洲菊組培苗的移栽

選取連續(xù)繼代了20代的在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)了30天高度為3~4cm的非洲菊組培苗。開蓋煉苗2天后移栽至裝有3/4腐殖質(zhì)的花盆中，每盆一株。所用花盆直徑為10cm、高度為10cm。

3、印度梨形孢發(fā)酵液澆灌

向連續(xù)繼代了20代的非洲菊組培移栽苗根系附近澆入50ml印度梨形孢發(fā)酵液。同時設(shè)置滅菌印度梨形孢發(fā)酵液處理組和pda液體培養(yǎng)基對照組。置于25±2℃的恒溫培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)室光照強度為1300±200lx，光照時間為12h/d。分別在移栽后30天和90天觀察三組非洲菊植株根系生長情況并拍照。

連續(xù)繼代了20代的非洲菊組培移栽苗在移栽30天后（圖4a），三組間根系差異不大，根系發(fā)育均較弱。在移栽后90天（圖4b），pda液體培養(yǎng)基對照組植株根系比連續(xù)繼代了5代、10代和15代的pda液體培養(yǎng)基對照組非洲菊植株差。印度梨形孢發(fā)酵液處理組和滅菌的印度梨形孢發(fā)酵液處理組非洲菊根系須根數(shù)均明顯多于pda液體培養(yǎng)基對照組，其中印度梨形孢發(fā)酵液處理組植株根系最佳。無印度梨形孢處理組的移栽苗（圖5a）成活率在86%左右，而印度梨形孢處理組的移栽苗（圖5b）成活率則可達到93%以上。

因此可以看出：利用印度梨形孢發(fā)酵液澆灌非洲菊可以顯著促進非洲菊組培移栽苗生根并能改善多次繼代的非洲菊組培移栽苗根系、提高多次繼代的組培移栽苗成活率。

本發(fā)明利用印度梨形孢發(fā)酵液澆灌非洲菊組培移栽苗，顯著促進了非洲菊組培移栽苗生根，可較好地改善了多次繼代的組培移栽苗根系，對于非洲菊生產(chǎn)意義重大，具有較高的應(yīng)用和經(jīng)濟價值。