本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，具體是一種遼阜品種大果沙棘莖尖組織培養(yǎng)基配方。
背景技術(shù)：
：：沙棘(拉丁學(xué)名：hippophaerhamnoidesl.)胡頹子科(elaeagnaceae)沙棘屬(hippophael.)植物,屬落葉灌木或小喬木，根系發(fā)達，枝葉茂密，適應(yīng)能力極強,抗嚴(yán)寒,抗風(fēng)沙耐干旱,是土壤貧瘠和沙漠化地區(qū)水土保持的先鋒樹種。沙棘主要生長在干旱、半干旱地區(qū)，抗逆能力強，有廣泛的適應(yīng)性，我國的西北、華北、東北、西南各省均有分布，是一種集社會效益、生態(tài)效益、經(jīng)濟效益于一身的珍貴樹種。近年來,隨著沙棘產(chǎn)品的不斷開發(fā),也極大促進了人們營造沙棘保護林的積極性,沙棘早已成為我國的一種防沙治沙改良土壤的一種標(biāo)示性植物，越來越受人們的喜愛，伴隨生態(tài)發(fā)展的同時新疆林果業(yè)也在快速發(fā)展，北疆的阿勒泰地區(qū)山區(qū)綠化、生態(tài)農(nóng)業(yè)建設(shè)急需大量的沙棘苗木,傳統(tǒng)的分株繁殖、幼枝扦插繁殖已不能滿足需要,而組織培養(yǎng)育苗由于不受季節(jié)和地域限制,既能達到快速繁育的目的,又能很好保持良種特性的優(yōu)勢,尤其可對雌雄異株的沙棘作定性繁育,具有很大的發(fā)展前景。沙棘組織培養(yǎng)研究已有相關(guān)文獻報道,但尚無可用于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的報道及配方。本試驗以阿勒泰地區(qū)重點發(fā)展品種之一“遼阜品種大果沙棘”為試驗材料，對其組織培養(yǎng)配方進行篩選試驗，為今后產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)奠定了一定基礎(chǔ)。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種遼阜品種大果沙棘莖尖組織培養(yǎng)基配方，以解決上述
背景技術(shù)：
：中提出的問題。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：一種遼阜品種大果沙棘莖尖組織培養(yǎng)基配方，包括初代培養(yǎng)基、愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基和繼代培養(yǎng)基三種，其中，初代培養(yǎng)基配方：1/2ms、6-ba0.5mg/l、蔗糖30g/l，瓊脂6g/l；愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方：1/2ms、6-ba0.5mg/l、iba0.5mg/l、蔗糖30g/l，瓊脂6g/l；繼代培養(yǎng)基配方：1/2ms、6-ba0.5mg/l、iba0.2mg/l、蔗糖30g/l，瓊脂6g/l。一種遼阜品種大果沙棘莖尖組織培養(yǎng)基的制備方法，初代培養(yǎng)基的配制：先量取ms培養(yǎng)基，添加6-ba，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，調(diào)整ph到5.6-6.0，加入瓊脂，加熱使瓊脂融化，高溫高壓滅菌，冷卻成固體備用；愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配制：先量取ms培養(yǎng)基，添加6-ba、iba，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，調(diào)整ph到5.6-6.0，加入瓊脂，加熱使瓊脂融化，高溫高壓滅菌，冷卻成固體備用；繼代培養(yǎng)基的配制：先量取ms培養(yǎng)基，添加6-ba、iba，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，調(diào)整ph到5.6-6.0，加入瓊脂，加熱使瓊脂融化，高溫高壓滅菌，冷卻成固體備用。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明的培養(yǎng)基配方專門適合于對遼阜品種大果沙棘莖尖組織的快速繁殖使用，初代培養(yǎng)基促進組織生長和側(cè)芽誘導(dǎo)，愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基可以誘導(dǎo)組織快速形成愈傷組織，繼代培養(yǎng)基的進行快速擴繁；本發(fā)明的三個培養(yǎng)基配方協(xié)同作用，方便遼阜品種大果沙棘莖尖組織的快速繁殖，為今后產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)奠定了一定基礎(chǔ)。具體實施方式下面結(jié)合具體實施方式對本專利的技術(shù)方案作進一步詳細地說明。一種遼阜品種大果沙棘莖尖組織培養(yǎng)基配方，包括初代培養(yǎng)基、愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基和繼代培養(yǎng)基三種，其中，初代培養(yǎng)基配方：1/2ms、6-ba0.5mg/l、蔗糖30g/l，瓊脂6g/l；配制時，先量取ms培養(yǎng)基，添加6-ba，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，調(diào)整ph到5.6-6.0，加入瓊脂，加熱使瓊脂融化，高溫高壓滅菌(121℃，25分鐘)，冷卻成固體備用。愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方：1/2ms、6-ba0.5mg/l、iba0.5mg/l、蔗糖30g/l，瓊脂6g/l；配制時，先量取ms培養(yǎng)基，添加6-ba、iba，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，調(diào)整ph到5.6-6.0，加入瓊脂，加熱使瓊脂融化，高溫高壓滅菌(121℃，25分鐘)，冷卻成固體備用；繼代培養(yǎng)基配方：1/2ms、6-ba0.5mg/l、iba0.2mg/l、蔗糖30g/l，瓊脂6g/l；配制時，先量取ms培養(yǎng)基，添加6-ba、iba，加入蔗糖，待蔗糖溶解后，調(diào)整ph到5.6-6.0，加入瓊脂，加熱使瓊脂融化，高溫高壓滅菌(121℃，25分鐘)，冷卻成固體備用。上述，1/2ms，為本領(lǐng)域技術(shù)人員的公知常識，其為大量元素減半的ms培養(yǎng)基，ms培養(yǎng)基同樣為為本領(lǐng)域技術(shù)人員的公知常識，所含有的組分及含量如表1：表1ms培養(yǎng)基的配方本發(fā)明的實驗過程：1材料與方法1.1材料試驗材料于7月中旬至8月下旬取成年植株當(dāng)年生枝條的莖尖。采于阿勒泰地區(qū)青河縣的遼阜品種大果沙棘。1.2培養(yǎng)條件蔗糖30g/l，瓊脂6g/l，每瓶分裝培養(yǎng)基25-35ml，ph5.6-6.0，培養(yǎng)室溫度20-26℃，濕度40-60％，光照強度2000lx，光照時間12-14h/d。特別說明，下述的培養(yǎng)基配方中均默認添加，蔗糖30g/l，瓊脂6g/l。1.3初代培養(yǎng)以莖尖為試材，先用自來水沖洗，再用洗潔精浸泡10min，期間不斷攪拌，然后用流動自來水清洗15min，蒸餾水沖洗3遍，之后裝入消毒燒杯中立即置于超凈工作臺上，接著用0.1％的hgcl2消毒3min，期間不斷震搖，最后用滅菌蒸餾水沖洗6次。將莖尖放在滅菌的濾紙上將水分吸干，切成0.5cm-1.5cm長，將莖尖基部葉片剝離，接種于初代培養(yǎng)基上，每瓶接種3個莖尖。初代培養(yǎng)基分別以1/2ms和1/3ms為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度的激素6-ba、iba和naa。初始培養(yǎng)基設(shè)計了以下10種：①1/2ms+6-ba1.0mg/l+iba0.5mg/l；②1/2ms+6-ba0.5mg/l+iba0.5mg/l；③1/2ms+6-ba0.5mg/l+iba0.2mg/l；④1/3ms+6-ba0.5mg/l+iba0.2mg/l；⑤1/3ms+6-ba0.2mg/l+iba0.2mg/l；⑥1/2ms+6-ba0.5mg/l；⑦1/2ms+6-ba0.2mg/l；⑧1/2ms+6-ba0.5mg/l+naa0.2mg/l；⑨1/3ms+6-ba0.2mg/l+naa0.05mg/l；⑩1/3ms+6-ba0.2mg/l+naa0.02mg/l。1.4繼代培養(yǎng)1.4.1莖尖基部愈傷組織誘導(dǎo)誘導(dǎo)愈傷組織時，將高于2cm的初代芽接種接種至以1/2ms和ms為基本培養(yǎng)基的繼代培養(yǎng)基上，添加不同濃度的激素6-ba和iba。愈傷組織誘導(dǎo)設(shè)計了以下4種1/2ms+6-ba0.5mg/l+iba0.5mg/l；1/2ms+6-ba0.5mg/l+iba0.2mg/l；ms+6-ba0.2mg/l+iba0.2mg/l；1/2ms+6-ba0.3mg/l+iba0.05mg/l。1.4.2增殖培養(yǎng)將初代的無菌苗切下，再將莖尖和帶有2-3片葉的莖段切分，莖尖接種至1/2ms+6-ba0.5mg/l+iba0.2mg/l的繼代培養(yǎng)基上，帶腋芽的莖段接種至1/2ms+6-ba0.5mg/l的繼代培養(yǎng)基上。2結(jié)果與分析2.1初代培養(yǎng)的建立初代培養(yǎng)基篩選結(jié)果表明，沙棘初代莖尖在培養(yǎng)基⑥和⑦上長勢最好。在培養(yǎng)基①②⑤⑧上萌發(fā)率低或生長較慢，其他培養(yǎng)基長勢一般。關(guān)于本實驗中培養(yǎng)基的細胞分裂素6-ba的用量，結(jié)果表明6-ba濃度在0.2-0.5mg/l不添加任何生長素時，對于7月中旬至8月下旬的莖尖有較好的側(cè)芽誘導(dǎo)效果，生長快，分化芽數(shù)最多。在細胞分裂素6-ba用量在0.5mg/l時，添加不同濃度的生長素iba結(jié)果表明，濃度低于0.2mg/l時生長迅速，但后期易死亡，濃度達到0.5mg/l時，基部愈傷組織開始形成。而6-ba與naa的組合則不適合遼阜品種大果沙棘初代的培養(yǎng)。其中培養(yǎng)基⑥即1/2ms+6-ba0.5mg/l成活率可達到92.3％，平均分化芽數(shù)可達2.53，為適宜初代培養(yǎng)基，詳細記錄如表2。表2不同培養(yǎng)基配方對初代培養(yǎng)的影響table2effectofdifferentculturemediumonprimaryculture2.2愈傷組織的誘導(dǎo)將初代培養(yǎng)萌發(fā)的2-3cm左右的側(cè)芽無菌苗切下，轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基中，成功誘導(dǎo)出愈傷組織。試驗結(jié)果表明，適合誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)基是1/2ms+6-ba0.5mg/l+iba0.5mg/l，誘導(dǎo)率達到100％。在此培養(yǎng)基上，無菌苗生長迅速，在15d左右根部切口部位開始膨大，愈傷組織為黃綠色，繼續(xù)培養(yǎng)至30d左右時，此時莖尖生長緩慢或停止，根部愈傷組織明顯增大，直徑可達到1.5cm左右，當(dāng)培養(yǎng)至40d左右時，愈傷組織變深褐色失去活力甚至開始死亡。而在培養(yǎng)基1/2ms+6-ba0.5mg/l+iba0.2mg/l愈傷組織誘導(dǎo)率為66.3％愈傷組織塊較1/2ms+6-ba0.5mg/l+iba0.5mg/l的體積小，30d時直徑約1cm，繼續(xù)培養(yǎng)至40天以上時，由愈傷組織萌發(fā)出少量芽，但是愈傷組織轉(zhuǎn)黑褐色，萌發(fā)的芽有玻璃化的現(xiàn)象，不能正常生長，詳細記錄如表3。表3不同培養(yǎng)基配方對愈傷組織的影響table3effectofdifferentculturemediumoncallus2.3繼代培養(yǎng)將初代形成的株高3cm以上的無菌苗截成帶腋芽莖段誘導(dǎo)增殖，轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基上進行繼代培養(yǎng)，經(jīng)過20d左右的培養(yǎng)后當(dāng)新芽高2cm以上時，再切分成小段轉(zhuǎn)接誘導(dǎo)增殖以達到擴繁的目的。在繼代培養(yǎng)基的篩選上發(fā)現(xiàn)莖尖在1/2ms+6-ba0.5mg/l+iba0.2mg/l上長勢迅速，莖段在1/2ms+6-ba0.5mg/l上誘導(dǎo)腋芽萌發(fā)生長效果較好；詳細記錄如表4。表4沙棘品種遼阜繼代培養(yǎng)效果table4theeffectofsubcultureinshenqiuhong3小結(jié)與討論通過對遼阜品種大果沙棘初步研究，以7月中旬至8月下旬采集的大田莖尖為外植體試材結(jié)果表明，適宜初代培養(yǎng)基為1/2ms+6-ba0.5mg/l，適宜愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為1/2ms+6-ba0.5mg/l+iba0.5mg/l，適宜繼代培養(yǎng)基為1/2ms+6-ba0.5mg/l+iba0.2mg/l，適宜腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為1/2ms+6-ba0.5mg/l。上面對本專利的較佳實施方式作了詳細說明，但是本專利并不限于上述實施方式，在本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所具備的知識范圍內(nèi)，還可以在不脫離本專利宗旨的前提下作出各種變化。上面對本專利的較佳實施方式作了詳細說明，但是本專利并不限于上述實施方式，在本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所具備的知識范圍內(nèi)，還可以在不脫離本專利宗旨的前提下作出各種變化。當(dāng)前第1頁12當(dāng)前第1頁12