一種提高白僵蠶得率的孢子懸液及其應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種提高白僵蠶得率的孢子懸液及其應用，一種提高白僵蠶得率的孢子懸液，其原料組分包括：白僵菌孢子粉、聚山梨酯-80、蔗糖、蛋白胨、輔料物質、無菌水，所述孢子懸液中各成分的占比為：白僵菌孢子1×106-5×106個/mL、聚山梨酯-800.2份（質量百分比）、蔗糖1-3份、蛋白胨0.4-0.6份、輔料物質0.05份、其余為無菌水，所述輔料物質可以是硫酸鎂、氯霉素、硫酸鏈霉素。公開了一種能夠顯著提高白僵蠶得率的白僵菌孢子懸液，提供一種優(yōu)化的白僵菌懸液濃度，同時提高了白僵菌懸液的粘附性和活力，提高其發(fā)芽率，對于白僵蠶的生產在產量和質量方面都有著顯著提升。
【專利說明】—種提局白僵奮得率的孢子懸液及其應用

【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于中藥生產【技術領域】，具體涉及一種提高白僵蠶得率的孢子懸液及其應用。

【背景技術】
[0002]僵蠶是一種優(yōu)良的中藥材，具有息風止痙、祛風止痛、化痰散結的功效，在中成藥和中藥方劑中應用廣泛。據統(tǒng)計，在513種人用成藥中有49種含白僵蠶，64種兒科成藥中含白僵蠶的有29種。隨著僵蠶藥理成分和功能研究的深入，發(fā)現僵蠶水提物或醇提物在美白祛斑、抗驚厥、抗凝、降糖降脂等方面也表現出良好的功效。近年來，僵蠶相關產品的研發(fā)也開始起步，進一步拓展了僵蠶在藥食領域的應用，最新資料表明，僵蠶國內年需求量已達2500-3000噸，僵蠶需求呈逐年增加的趨勢，僵蠶的生產和加工具有廣闊的市場前景。
[0003]僵蠶人工生產的步驟是:家蠶飼養(yǎng)至五齡起蠶，體表噴灑白僵菌孢子懸液，待病原充分粘附后開始喂食桑葉，一般在5-6天內家蠶出現大批量死亡，死蠶進一步僵化，最后曬干或烘干后獲得僵蠶。
[0004]一般的家蠶品種在五齡期食桑七日即成熟蠶，第7天開始吐絲結繭。因此，家蠶若在第6天還不發(fā)病，一般都會在結繭過程中死亡，或者成為僵蛹，不僅降低了僵蠶得率，還增加了僵蠶收獲的難度。白僵菌在保存過程中孢子活力出現一定程度地下降，往往造成僵蠶延遲發(fā)病，影響到僵蠶的得率和產量。另一方面，家蠶發(fā)病太早則會影響僵蠶收獲的質量，導致收獲的白僵蠶較小，因為家蠶在五齡第3-5天為盛食期，所以，提高家蠶在第5、6天的發(fā)病率對于提高白僵蠶的質量有很大影響，這就對白僵菌的粘附性、感染率、單位濃度和單位施用量等都有較大的要求。
[0005]申請?zhí)枮椤癈N201010536189.8”的中國專利中，公開了名稱為“一種用添加營養(yǎng)物質提高球孢白僵菌孢子萌發(fā)率的方法”的發(fā)明專利，該發(fā)明以球孢白僵菌(Beauveriabassiana)(保藏編號為CCTCC No:M209238)為發(fā)酵菌株，將其產生的孢子配制成一定濃度的孢子懸浮液，在該孢子懸浮液中添加最終濃度為0.5%-10%的麩皮浸出液，在適當的條件下(250mL的三角瓶，裝液量50mL;25°C、180rpm搖床12h)進行培養(yǎng)。該添加麩皮浸出液的方式能夠提升白僵菌孢子的萌芽率，然而該方式只能單方面的提高白僵菌孢子的萌芽率，對于白僵菌孢子的活力的保持效果和粘附性提升不明顯，且每次使用都需重新發(fā)酵，時間跨度大。
[0006]申請?zhí)枮椤癈N201110025267.2”的中國專利中，公開了名稱為“一種球孢白僵菌殺蟲劑懸乳劑及其制備方法”的發(fā)明專利，其特征在于按重量份數由以下成分組成:球孢白僵菌孢子粉:20-80份；乳化分散劑:10-60份；增稠劑:10-30份；懸浮穩(wěn)定劑:10-30份；展著劑:10-30份；糖:10-60份；蛋白胨:1-10份；所述的球孢白僵菌孢子粉的白僵菌含孢量為500億/克。該球孢白僵菌殺蟲劑中球孢白僵菌孢子粉的配比較高，主要用做殺蟲劑，不能控制家蠶的發(fā)病時間，不適合作為白僵蠶的生產。


【發(fā)明內容】

[0007]為了解決上述問題，本發(fā)明公開了一種提高白僵蠶得率的孢子懸液及其應用，以解決現有的白僵蠶在生產中出現的白僵蠶的產量和質量的問題，提供了一種能夠顯著提高白僵蠶得率的白僵菌孢子懸液，對白僵菌懸液的濃度進行了優(yōu)化，同時提高了白僵菌懸液的粘附性和活力，提高其發(fā)芽率，對于白僵蠶的生產在產量和質量方面都有著顯著提升。
[0008]一種提高白僵蠶得率的孢子懸液，其原料組分包括:白僵菌孢子粉、聚山梨酯-80、蔗糖、蛋白胨、輔料物質、無菌水，所述孢子懸液中各成分的占比為:白僵菌孢子1\106-5父106個/1^、聚山梨酯-80 0.2份(質量百分比)、蔗糖1-3份、蛋白胨0.4-0.6份、輔料物質0.05份、其余為無菌水。
[0009]作為一種優(yōu)選方式，所述輔料物質可以是硫酸鎂、氯霉素、硫酸鏈霉素。
[0010]作為一種優(yōu)選方式，其原料及配比包括:白僵菌孢子3 X 16個/mL、聚山梨酯-80
0.2份(質量百分比)、蔗糖2份、蛋白胨0.5份、輔料物質I份，其余為無菌水。
[0011]一種提高白僵蠶得率的孢子懸液的制作方法，包括以下配置步驟:(1)使用聚山梨酯-80、白僵菌孢子粉和無菌水配制孢子初步懸液，可采用血球計數法進行濃度確定；
(2)在所述孢子初步懸液中加入蔗糖、蛋白胨及輔料物質，混合充分溶解。
[0012]一種提高白僵蠶得率的孢子懸液的接種方法，包括以下步驟:(I)選取某一品種的家蠶進行飼養(yǎng)，飼養(yǎng)至第四次蛻皮進入五齡起蠶階段(食桑之前)；(2)以權利要求4的方法配制孢子懸液，將孢子懸液置于噴霧器中；(3)將孢子懸液體噴于家蠶的體表，至家蠶體表全部濕潤為止，一小時后將處理過的家蠶繼續(xù)進行桑葉飼養(yǎng)，控制環(huán)境處于適宜的溫度和濕度；(4)將死亡的家蠶待稍變硬后挑出，進行進一步充分僵化，然后烘干制成白僵蠶。
[0013]本發(fā)明在白僵菌懸液中加入了蔗糖跟蛋白胨，蔗糖能夠為白僵菌孢子發(fā)芽提供碳源和維持滲透壓，蛋白胨主要提供發(fā)芽所需氮源，提高其發(fā)芽率，營養(yǎng)物質能夠延長白僵菌在家蠶表面的存活時間，保持白僵菌孢子的活力，同時，加入了蔗糖和蛋白胨也提高了白僵菌懸液的粘度，提高其粘附性，使其更加容易粘附在家蠶的體表，提高了其感染效率。
[0014]對白僵菌孢子懸液的孢子濃度進行優(yōu)化和確定，采用了 1父106-5父106個/1^的菌體濃度，該數據是根據該白僵菌孢子懸液的活力和粘附性進行調整，目的是提高家蠶在第5、6天的發(fā)病率，控制家蠶發(fā)病時間的一致性，從而提高白僵蠶的得率和質量。
[0015]在白僵菌孢子懸液中加入了氯霉素、硫酸鏈霉素等輔料物質，其目的是對細菌進行抑制，防止其它細菌對白僵菌孢子感染效果的影響。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0016]為了更清楚地說明本發(fā)明實施例或現有技術中的技術方案，下面將對實施例或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實施例，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他的附圖。
[0017]圖1為實施例的家蠶死亡率實驗結果圖。

【具體實施方式】
[0018]本發(fā)明主要針對現有的僵蠶生產方法存在發(fā)病延遲、得率低的缺陷，提供一種提高白僵蠶得率的孢子懸浮液，該方法通過在孢子懸浮液中加入促進孢子發(fā)芽的營養(yǎng)物質來實現。將該懸浮液體噴家蠶后，能夠增加孢子在家蠶體表的粘附性，加快孢子的發(fā)芽，提高白僵菌入侵蠶體的成功率。本發(fā)明的方法可操作性強，家蠶發(fā)病整齊，僵蠶質量和產量高。
[0019]下面將對本發(fā)明中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動的前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。
[0020]實施例1:
本實施例的原料及其配比包括:白僵菌孢子3X106個/mL、聚山梨酯-80 0.2份(質量百分比)、蔗糖2份、蛋白胨0.5份、輔料物質0.05份，其余為無菌水。
[0021]其接種步驟為:(1)選取某一品種的家蠶進行飼養(yǎng)，飼養(yǎng)至第四次蛻皮后五齡起蠶階段(食桑之前)，2小時之后，挑選出來進入后續(xù)處理，該處理組設置30頭蠶；(2)以上述的方法配置孢子懸液，將孢子懸液置于噴霧器中；(3)將孢子懸液體噴于家蠶的體表，至家蠶體表全部濕潤為止，一小時后將處理過的家蠶繼續(xù)進行桑葉飼養(yǎng)，控制飼養(yǎng)環(huán)境處于適宜的溫度和濕度，7天內每天調查其死亡情況；(4)記錄每天死亡家蠶數，將死亡的家蠶待稍變硬后挑出，進行進一步充分僵化，然后烘干制成白僵蠶。
[0022]實施例2:
本實施例的原料及其配比包括:白僵菌孢子3X106個/mL、聚山梨酯-80 0.2份(質量百分比)、其余為無菌水。
[0023]其接種步驟為:(1)選取某一品種的家蠶進行飼養(yǎng)，飼養(yǎng)至第四次蛻皮后五齡起蠶階段(食桑之前)，2小時之后，挑選出來進入后續(xù)處理，該處理組設置30頭蠶；(2)以上述的方法配置孢子懸液，將孢子懸液置于噴霧器中；(3)將孢子懸液體噴于家蠶的體表，至家蠶體表全部濕潤為止，一小時后將處理過的家蠶繼續(xù)進行桑葉飼養(yǎng)，控制飼養(yǎng)環(huán)境處于適宜的溫度和濕度，7天內每天調查其死亡情況；(4)記錄每天死亡家蠶數，將死亡的家蠶待稍變硬后挑出，進行進一步充分僵化，然后烘干制成白僵蠶。
[0024]實施例1和2的實驗結果如圖1所示。
[0025]在進行不同實施例的實驗接種過程中，發(fā)現本發(fā)明提供的白僵菌孢子接種液相對于常用的白僵菌孢子接種液在粘附性方面具有更加優(yōu)異的效果，與五齡蠶的體表有較高的親和力，降低了生產人員的操作難度，也提高了白僵菌孢子的感染成功率。
[0026]由圖1可以看出，本發(fā)明公布的白僵菌孢子接種液組能夠加快家蠶發(fā)病死亡時間。對照組第5天死亡率為4.17%，而試驗組死亡率達到29.9%，相應的第6天的死亡率試驗組也有明顯的提升，此外，到家蠶上蔟前為止，對照組僵化率為70.1%，新接種液組僵化率達到83.3%。因此，用本接種方法可以明顯提高家蠶發(fā)病率和僵蠶得率，尤其是第5-7天的發(fā)病率，此時死亡的家蠶所制得的白僵蠶的質量是最高的，增加僵蠶質量和收益。
[0027]以上內容是結合具體的優(yōu)選實施方式對本發(fā)明所作的進一步詳細說明，不能認定本發(fā)明的具體實施只局限于這些說明。對于本發(fā)明所屬【技術領域】的普通技術人員來說，在不脫離本發(fā)明構思的前提下，還可以做出若干簡單推演或替換，都應當視為屬于本發(fā)明的保護范圍。
【權利要求】
1.一種提高白僵蠶得率的孢子懸液，其特征在于，其原料組分包括:白僵菌孢子粉、聚山梨酯-80、蔗糖、蛋白胨、輔料物質、無菌水，所述孢子懸液中各成分的占比為:白僵菌孢子1\106-5父106個/1^、聚山梨酯-80 0.2份(質量百分比)、蔗糖1_3份、蛋白胨0.4-0.6份、輔料物質0.05份、其余為無菌水。
2.根據權利要求1所述的一種提高白僵蠶得率的孢子懸液，其特征在于，所述輔料物質可以是硫酸鎂、氯霉素、硫酸鏈霉素。
3.根據權利要求1所述的一種提高白僵蠶得率的孢子懸液，其特征在于，其原料及配比包括:白僵菌孢子3X 16個/mL、聚山梨酯-80 0.2份(質量百分比)、蔗糖2份、蛋白胨0.5份、輔料物質0.05份，其余為無菌水。
4.一種提高白僵蠶得率的孢子懸液的制作方法，其特征在于，包括以下配置步驟:(1)使用聚山梨酯-80、白僵菌孢子粉和無菌水配制孢子初步懸液，可采用血球計數法進行濃度確定；(2)在所述孢子初步懸液中加入蔗糖、蛋白胨及輔料物質，混合充分溶解。
5.一種提高白僵蠶得率的孢子懸液的接種方法，其特征在于，包括以下步驟:(1)選取某一品種的家蠶進行飼養(yǎng)，飼養(yǎng)至第四次蛻皮進入五齡起蠶階段(食桑之前)；(2)以權利要求4的方法配制孢子懸液，將孢子懸液置于噴霧器中；(3)將孢子懸液體噴于家蠶的體表，至家蠶體表全部濕潤為止，一小時后將處理過的家蠶繼續(xù)進行桑葉飼養(yǎng)，控制環(huán)境處于適宜的溫度和濕度；(4)將死亡的家蠶待稍變硬后挑出，進行進一步充分僵化，然后烘干制成白僵蠶。
【文檔編號】A01K67/04GK104430212SQ201410788630
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月17日 優(yōu)先權日:2014年12月17日
【發(fā)明者】邢東旭, 楊瓊, 李麗, 羅國慶, 肖陽, 李慶榮, 葉明強, 劉新濤 申請人:廣東省農業(yè)科學院蠶業(yè)與農產品加工研究所