建立家兔動(dòng)脈粥樣硬化模型的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了建立家兔動(dòng)脈粥樣硬化模型的方法，包括對(duì)家兔基礎(chǔ)飼料的高脂化加工，靜脈注射牛血清蛋白，還包括采用血管鞘與測(cè)力計(jì)聯(lián)合使用將家兔動(dòng)脈血管內(nèi)皮損傷，具體包括如下步驟：以21G橈動(dòng)脈穿刺針在股動(dòng)脈中下段行穿刺術(shù)；穿刺成功后，借助于導(dǎo)絲插入橈動(dòng)脈鞘管達(dá)5cm深；之后在耳緣靜脈注射肝素200U/Kg；拔出導(dǎo)絲后，在血鞘管尾部固定一根細(xì)線，細(xì)線另一端接測(cè)力計(jì)，術(shù)者左手手指并攏按壓內(nèi)有血管鞘的股動(dòng)脈部分，右手握測(cè)力計(jì)向外將血管鞘拉出4cm，左手按壓力量以測(cè)力計(jì)上顯示10牛頓為度，以造成血管內(nèi)皮損傷。本發(fā)明的目的是要提供一種周期短、可操作性強(qiáng)且成本較為低廉的家兔動(dòng)脈粥樣硬化模型的造模方法。
【專利說(shuō)明】建立家兔動(dòng)脈粥樣硬化模型的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物疾病模型的范疇，具體為建立家兔動(dòng)脈粥樣硬化模型的方 法。

【背景技術(shù)】
[0002] 動(dòng)脈粥樣硬化是一種有免疫系統(tǒng)參與的慢性反應(yīng)性炎性疾病，是心腦血管疾病的 主要病理基礎(chǔ)，嚴(yán)重危害人類健康，是造成心腦血管疾病的主要原因。但其發(fā)病其機(jī)制至今 仍未完全闡明，需要進(jìn)行深入的實(shí)驗(yàn)研宄，因此迫切需要一種快速、經(jīng)濟(jì)、易于制造及復(fù)制、 與人類動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制更接近的動(dòng)物模型。
[0003] 張軍平等人曾在《中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志》2009年第19卷第1期報(bào)道中提出采用"高 脂飼料+靜脈注射牛血清白蛋白+動(dòng)脈內(nèi)皮球囊拉傷"法制備家兔腹主動(dòng)脈粥樣硬化模型 的方法，符凌等人在《中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志》2010年7月第8卷第七期中報(bào)道，在高 脂飼料中加入一定量的丙基硫氧嘧啶，它能夠抑制甲狀腺功能，使肝內(nèi)膽固醇增加，減少對(duì) 膽固醇的代謝，保證血清膽固醇含量的升高，進(jìn)而誘發(fā)高脂血癥，加快建模的進(jìn)程。但"高脂 飼料+靜脈注射牛血清白蛋白+動(dòng)脈內(nèi)皮球囊拉傷"法造模需12周，耗時(shí)較長(zhǎng)，且使用的耗 材"動(dòng)脈球囊"和"壓力泵"價(jià)格昂貴，不利于推廣使用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是要提供一種周期短、可操作性強(qiáng)且成本較為低廉的家兔動(dòng)脈粥樣 硬化模型的造模方法。
[0005] 為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明有如下技術(shù)方案：
[0006] 本發(fā)明的建立家兔動(dòng)脈粥樣硬化模型的方法，包括對(duì)家兔基礎(chǔ)飼料的高脂化加 工，靜脈注射牛血清蛋白，采用血管鞘與測(cè)力計(jì)聯(lián)合使用將家兔動(dòng)脈血管內(nèi)皮損傷，其中， 采用血管鞘與測(cè)力計(jì)聯(lián)合使用將家兔動(dòng)脈血管內(nèi)皮損傷具體包括如下步驟：
[0007] 1)以21G橈動(dòng)脈穿刺針在股動(dòng)脈中下段行穿刺術(shù)；
[0008] 2)穿刺成功后，借助于導(dǎo)絲插入橈動(dòng)脈鞘管達(dá)5cm深；
[0009] 3)之后在耳緣靜脈注射肝素200U/Kg ;
[0010] 4)拔出導(dǎo)絲后，在血鞘管尾部固定一根細(xì)線，細(xì)線另一端接測(cè)力計(jì)，術(shù)者左手手指 并攏按壓內(nèi)有血管鞘的股動(dòng)脈部分，右手握測(cè)力計(jì)向外將血管鞘拉出4cm，左手按壓力量以 測(cè)力計(jì)上顯示10牛頓為度，按以上方法重復(fù)操作3次，以造成血管內(nèi)皮損傷。
[0011] 其中，所述家兔基礎(chǔ)飼料的高脂化加工為在基礎(chǔ)家兔飼料59. 7-75. 9%中分別加 入1-3%膽固醇，8-12%豬油，15-25%蛋黃粉，0. 1-0. 3%丙硫氧嘧啶。
[0012] 其中，所述步驟2)中的鞘管為I. 8kg兔選擇使用4F鞘管，2. Okg選擇使用5F鞘 管，2. 2kg兔選擇使用6F鞘管。
[0013] 其中，所述靜脈注射牛血清蛋白，在造模第1天和第7天，每只家兔從耳靜脈注射 牛血清白蛋，每次劑量均為200-300mg/kg。
[0014] 由于采取了以上技術(shù)方案，本發(fā)明的有益效果：
[0015] 本發(fā)明實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物采用高脂飲食直接導(dǎo)致脂質(zhì)攝入過(guò)多，造成高脂血癥；丙硫氧 嘧啶使家兔甲狀腺功能減退，減慢脂質(zhì)代謝；靜脈注射牛血清白蛋白造成全身性免疫炎性 反應(yīng)，血管鞘拉傷術(shù)直接造成內(nèi)皮損傷，四者在體內(nèi)相互影響形成一種立體的生物效應(yīng)。本 模型在前三者造成全身反應(yīng)的基礎(chǔ)上加以局部血管鞘拉傷使得觀測(cè)部位更加確定，便于取 材。
[0016] 進(jìn)行家兔股動(dòng)脈內(nèi)皮拉傷術(shù)操作中不再使用價(jià)格昂貴的"球囊+壓力泵"，"動(dòng)脈 球囊"價(jià)格為3700余元，"壓力泵"價(jià)格為4800余元，并且球囊導(dǎo)管管壁脆弱易損壞，不宜 多次使用。而"動(dòng)脈血管鞘"價(jià)格為220余元，測(cè)力計(jì)價(jià)格為50余元，且動(dòng)脈血管鞘質(zhì)地堅(jiān) 硬，可消毒后重復(fù)使用，主要耗材費(fèi)用大大降低。
[0017] 造?？倳r(shí)間從12周縮減為7周，節(jié)約了大量的動(dòng)物喂養(yǎng)和管理成本。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0018] 圖1為本發(fā)明實(shí)驗(yàn)組中未經(jīng)動(dòng)脈血管鞘損傷的部位；
[0019] 圖2、圖4為本發(fā)明實(shí)驗(yàn)組中經(jīng)動(dòng)脈血管鞘損傷的部位；
[0020] 圖3為本發(fā)明實(shí)驗(yàn)組動(dòng)脈血管內(nèi)的血栓；
[0021] 圖5為本發(fā)明對(duì)照組正常的動(dòng)脈血管。
[0022] 圖中：1、泡沫細(xì)胞2、血管內(nèi)皮3、鈣化點(diǎn)4、血栓

【具體實(shí)施方式】
[0023] 以下通過(guò)【具體實(shí)施方式】的描述對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，但這并非是對(duì)本發(fā)明的限 制，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的基本思想，可以做出各種修改或改進(jìn)，但是只要不脫離本 發(fā)明的基本思想，均在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
[0024] 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組
[0025] 選用普通級(jí)雄性日本大耳白兔20只，體重2. 0±0. 2kg。隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組10例和 對(duì)照組10例。
[0026] 對(duì)照組雄性日本大耳白兔予普通兔飼料每日每只予150g飼料，喂養(yǎng)7周；實(shí)驗(yàn)組 雄性日本大耳白兔予普通兔飼料及高脂飼料，配方為：2%膽固醇+10%豬油+20%蛋黃粉 +0. 2 %丙硫氧嘧啶+基礎(chǔ)飼料67. 8 %，實(shí)驗(yàn)組每只雄性日本大耳白兔每日上午給予普通基 礎(chǔ)飼料l〇〇g，下午給予高脂飼料50g。
[0027] 實(shí)施例1
[0028] 1、雄性日本大耳白兔稱重、編號(hào)后，除對(duì)照組的雄性日本大耳白兔，其余實(shí)驗(yàn)組雄 性日本大耳白兔在造模第1天和第7天，對(duì)每只雄性日本大耳白兔從耳靜脈注射牛血清蛋 白，每次注射劑量均為250mg/kg。第一天注射完畢后，隨即在全麻下行左側(cè)股動(dòng)脈拉傷術(shù)， 同日開(kāi)始用高脂飼料喂養(yǎng)，直至第七周取材。
[0029] 左側(cè)股動(dòng)脈拉傷術(shù)操作方法：實(shí)驗(yàn)組雄性日本大耳白兔術(shù)前12小時(shí)禁食但無(wú)需 禁水；用3%戊巴比妥鈉（30mg/kg)肌肉注射麻醉后將動(dòng)物固定于手術(shù)臺(tái)；左側(cè)腹股溝周邊 區(qū)域剪毛常規(guī)皮膚消毒，沿股動(dòng)脈走行切開(kāi)皮膚，分離股動(dòng)脈。直視下以21G橈動(dòng)脈穿刺針 在股動(dòng)脈中下段行穿刺術(shù)。穿刺成功后，借助于導(dǎo)絲插入橈動(dòng)脈鞘管達(dá)5cm深，1.8kg兔 選擇使用4F鞘管，隨即在耳緣靜脈注射肝素200U/Kg。拔出導(dǎo)絲后，在血鞘管尾部固定一 根細(xì)線，細(xì)線另一端接測(cè)力計(jì)。術(shù)者左手手指并攏按壓內(nèi)有血管鞘的股動(dòng)脈部分，右手握測(cè) 力計(jì)向外將血管鞘拉出約4cm，左手按壓力量以測(cè)力計(jì)上顯示10牛頓為度。按上法重復(fù)操 作3次，以造成血管內(nèi)皮損傷。操作完成后拔出鞘管，迅速在動(dòng)脈穿刺處撒入云南白藥粉 0. 5g，壓迫止血4-5分鐘。止血后在傷處灑入慶大霉素注射液8萬(wàn)U以防止感染。常規(guī)逐 層縫合手術(shù)切口。術(shù)后連續(xù)3d每日肌注青霉素鈉40萬(wàn)單位抗感染。
[0030] 2、標(biāo)本的收集與處理
[0031] 3、血清的留取與血脂檢測(cè)：分別于實(shí)驗(yàn)開(kāi)始的第一天、第3周、第7周采血。每次 采血前禁食12h，不禁水。將血液標(biāo)本用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清TC、TG、LDC-C。
[0032] 4、病理標(biāo)本的留取及檢測(cè)：于實(shí)驗(yàn)第7周末取材，將所有動(dòng)物固定于手術(shù)臺(tái)，用空 氣栓塞法處死，取出左側(cè)動(dòng)脈血管組織用生理鹽水沖洗后置于10%中性福爾馬林固定，將 病理標(biāo)本以石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡下觀察病理改變。
[0033] 實(shí)施例2
[0034] 穿刺成功后，借助于導(dǎo)絲插入橈動(dòng)脈鞘管達(dá)5cm深，2. Okg兔選擇使用5F鞘管，隨 即在耳緣靜脈注射肝素200U/Kg，其它同實(shí)施例1。
[0035] 實(shí)施例3
[0036] 穿刺成功后，借助于導(dǎo)絲插入橈動(dòng)脈鞘管達(dá)5cm深，2. 2kg兔選擇使用6F鞘管，隨 即在耳緣靜脈注射肝素200U/Kg，其它同實(shí)施例1。
[0037] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
[0038] 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)計(jì)量資料以〇1±Γ)表示，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用X2檢驗(yàn) (SPSS16. 0統(tǒng)計(jì)軟件），差異顯著性水平設(shè)為a = 0. 05。
[0039] 1、生存及死亡情況
[0040] 對(duì)照組動(dòng)物：精神狀態(tài)良好，毛色較白有光澤，目光亮有神，反應(yīng)靈敏，飼喂時(shí)見(jiàn)有 較大反應(yīng)，不斷抓撓食盒。實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物：從3周左右開(kāi)始出現(xiàn)精神欠佳，目光呆滯，活動(dòng)少， 可飲食；5周左右飼喂時(shí)較少有反應(yīng)，喜臥少動(dòng)，飲食有所減少，毛色變暗。四肢末端甲床處 出現(xiàn)潰爛，結(jié)痂，耳內(nèi)側(cè)開(kāi)始出現(xiàn)黃色結(jié)痂，尾部體毛部分脫落；7周時(shí)發(fā)現(xiàn)目光混濁，可見(jiàn) 有脂肪沉積。對(duì)照組10只，無(wú)死亡；實(shí)驗(yàn)組10只，突發(fā)死亡1只，尸檢未發(fā)現(xiàn)異常，原因不 明，其死亡時(shí)間為7周中期。
[0041] 2、血脂水平
[0042] 對(duì)照組在實(shí)驗(yàn)前及第3周和第7周的血脂水平基本接近，無(wú)顯著性差異 (Ρ>0·05)，見(jiàn)表 1。
[0043] 表1對(duì)照組不同時(shí)間血脂水平（！土η = 8, mmol/L)
[0044]

【權(quán)利要求】
1. 建立家兔動(dòng)脈粥樣硬化模型的方法，包括對(duì)家兔基礎(chǔ)飼料的高脂化加工，靜脈注射 牛血清蛋白，其特征在于：還包括采用血管鞘與測(cè)力計(jì)聯(lián)合使用將家兔動(dòng)脈血管內(nèi)皮損傷， 具體包括如下步驟： 1) 以21G橈動(dòng)脈穿刺針在股動(dòng)脈中下段行穿刺術(shù)； 2) 穿刺成功后，借助于導(dǎo)絲插入橈動(dòng)脈鞘管達(dá)5cm深； 3) 之后在耳緣靜脈注射肝素200U/Kg ; 4) 拔出導(dǎo)絲后，在血鞘管尾部固定一根細(xì)線，細(xì)線另一端接測(cè)力計(jì)，術(shù)者左手手指并攏 按壓內(nèi)有血管鞘的股動(dòng)脈部分，右手握測(cè)力計(jì)向外將血管鞘拉出4cm，左手按壓力量以測(cè)力 計(jì)上顯示10牛頓為度，按以上方法重復(fù)操作3次，以造成血管內(nèi)皮損傷。
2. 如權(quán)利要求1所述的建立家兔動(dòng)脈粥樣硬化模型的方法，其特征在于：所述家兔基 礎(chǔ)飼料的高脂化加工為在基礎(chǔ)家兔飼料59. 7-75. 9%中分別加入1-3%膽固醇，8-12%豬 油，15-25%蛋黃粉，0. 1-0. 3%丙硫氧嘧啶。
3. 如權(quán)利要求1所述的建立家兔動(dòng)脈粥樣硬化模型的方法，其特征在于：所述步驟2) 中的鞘管為1. 8kg兔選擇使用4F鞘管，2. 0kg選擇使用5F鞘管，2. 2kg兔選擇使用6F鞘管。
4. 如權(quán)利要求1所述的建立家兔動(dòng)脈粥樣硬化模型的方法，其特征在于：所述靜脈注 射牛血清蛋白，在造模第1天和第7天，每只家兔從耳靜脈注射牛血清白蛋，每次劑量均為 200-300mg/kg〇
【文檔編號(hào)】A61D1/00GK104490885SQ201410697550
【公開(kāi)日】2015年4月8日 申請(qǐng)日期:2014年11月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月26日
【發(fā)明者】喬寅飛, 朱克儉, 肖長(zhǎng)江, 柏正平, 李勇敏, 肖梅英, 翦林宏, 喻正科, 韓育明, 趙啟, 李志 , 顏旭, 譚宇軍, 張婷, 朱筱婧, 楊文麗, 夏相宜 申請(qǐng)人:湖南中醫(yī)藥大學(xué)