黃芪秸稈和芪頭固體復(fù)合培養(yǎng)料及用其生產(chǎn)杏鮑菇的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種黃芪秸稈和芪頭固體復(fù)合培養(yǎng)料及用其生產(chǎn)杏鮑菇的方法，以解決生產(chǎn)杏鮑菇用的原料短缺以及現(xiàn)有方法生產(chǎn)杏鮑菇產(chǎn)量低的問題。該方法包括杏鮑菇菌種純化與復(fù)壯、杏鮑菇液體菌種制備、復(fù)合固體培養(yǎng)料制備及杏鮑菇栽培步驟。本發(fā)明把黃芪秸稈與農(nóng)作物秸稈復(fù)合成適宜杏鮑菇生長的固體復(fù)合培養(yǎng)料，以杏鮑菇液體菌種為栽培種生產(chǎn)杏鮑菇。在保護(hù)環(huán)境的同時(shí)為人們提供優(yōu)質(zhì)的菌類產(chǎn)品，可產(chǎn)生良好的社會(huì)、經(jīng)濟(jì)、生態(tài)效益。有利于食用菌生產(chǎn)企業(yè)調(diào)整產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)，增加新產(chǎn)品，使食用菌產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展。
【專利說明】黃芪秸稈和芪頭固體復(fù)合培養(yǎng)料及用其生產(chǎn)杏鮑菇的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于食用菌生產(chǎn)領(lǐng)域，具體涉及一種黃芪秸桿和芪頭固體復(fù)合培養(yǎng)料及用其生產(chǎn)杏鮑菇的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]杏鮑菇是兼營養(yǎng)價(jià)值、藥用價(jià)值及經(jīng)濟(jì)價(jià)值與一體的優(yōu)質(zhì)食用菌,而生產(chǎn)杏鮑菇用的原料短缺、栽培技術(shù)落后限制了杏鮑菇產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。
[0003]現(xiàn)有技術(shù)公開了利用中藥渣生產(chǎn)食用菌的方法，但中藥渣組成復(fù)雜，藥用成分含量低，栽培效果不理想。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種黃芪秸桿和芪頭固體復(fù)合培養(yǎng)料，以解決生產(chǎn)杏鮑菇用的原料短缺的問題。
[0005]本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種用黃芪秸桿和芪頭固體復(fù)合培養(yǎng)料生產(chǎn)杏鮑菇的方法，以解決現(xiàn)有方法生產(chǎn)杏鮑菇產(chǎn)量低的問題。
[0006]本發(fā)明技術(shù)方案如下:一種黃苗稻桿和苗頭固體復(fù)合培養(yǎng)料，它以黃苗稻桿和苗頭為主料，以玉米秸桿、玉米芯為輔料，按以下重量份原料加水制成，黃芪秸桿和黃芪芪頭25.0份?35.0份、玉米秸桿和玉米芯25.0份?35.0份、棉籽殼15.0份?25.0份、木屑25.0份?35.0份、麥麩10.0份?15.0份、玉米粉2.0份?3.0份、黃豆粉1.0份?3.0份、石膏I份、石灰I份、磷酸氫二鉀0.05份-0.15份、磷酸二氫鉀0.05份-0.15份、硫酸鎂0.05份-0.15份，料水比為1:1.25-1.50，黃芪秸桿和黃芪芪頭的重量比為1:1，玉米秸桿和玉米芯的重量比為1:1。
[0007]用上述黃芪秸桿和芪頭固體復(fù)合培養(yǎng)料生產(chǎn)杏鮑菇的方法，包括下列步驟:A、杏鮑菇菌種純化與復(fù)壯，B、杏鮑菇液體菌種制備，C、杏鮑菇栽培；其中步驟A杏鮑菇菌種純化與復(fù)壯過程如下:
a.杏鮑燕的原生質(zhì)體化與純化:將杏鮑燕O0Zetfroiw1S eryngii )(購買于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物研究所生物技術(shù)室)的雙核菌絲體接種于鋪有玻璃紙環(huán)的加富PDA培養(yǎng)基上，20-28°C培養(yǎng)4-5天；菌絲長滿玻璃紙環(huán)時(shí)，無菌操作將玻璃紙環(huán)連同菌絲體轉(zhuǎn)入4-6ml纖維素酶與蝸牛酶的混合酶液中，在32-36°C溫度、350-450rpm轉(zhuǎn)速的搖床中酶解6-10h ；酶解液用濃度為0.5-0.7摩爾的MgS0.7H2 O溶液稀釋，MgS0.7H2 O溶液的用量為酶解液容積的2倍，過濾；濾液以2400-2600rpm轉(zhuǎn)速離心；取中層液加MgSO4溶液制成凈化原生質(zhì)體懸液；取原生質(zhì)體懸液加入PDA培養(yǎng)液，在細(xì)胞培養(yǎng)瓶中于22-25°C溫度下靜置培養(yǎng)；取經(jīng)過PDA培養(yǎng)液培養(yǎng)46-50h的原生質(zhì)體液體培養(yǎng)液涂附有綜合PDA培養(yǎng)基的平板，22-25°C溫度下培養(yǎng)，培養(yǎng)約8-12天，當(dāng)再生菌落出現(xiàn)時(shí)，隨即轉(zhuǎn)管培養(yǎng)，菌絲長滿試管后進(jìn)行鏡檢；菌絲體無鎖狀聯(lián)合的為單核體X，具有鎖狀聯(lián)合的為雙核體Y，雙核體Y擴(kuò)大培養(yǎng)，保存； b.單核體交配培養(yǎng):將兩個(gè)擬交配的步驟a得到的單核體X相距約0.5cm接種于附有綜合PDA培養(yǎng)基的平板上，25°C黑暗條件下倒置培養(yǎng)5-7d ;當(dāng)兩菌落相交后5_7d，取兩菌落交界處及其外緣的菌絲體，轉(zhuǎn)到附有綜合PDA培養(yǎng)基的平板中培養(yǎng)，菌絲萌發(fā)3d后顯微鏡檢查，挑出具有鎖狀聯(lián)合的雙核菌絲擴(kuò)大培養(yǎng)，保存；
c.出菇試驗(yàn):用步驟a擴(kuò)大培養(yǎng)的雙核體Y和步驟b擴(kuò)大培養(yǎng)的雙核菌絲交配獲得的雙核體新菌株作出菇試驗(yàn)；評價(jià)選優(yōu)，對理想子實(shí)體個(gè)體組織分離，雙核化穩(wěn)定，以生物學(xué)性狀及產(chǎn)量穩(wěn)定的菌種作為生產(chǎn)母種，保存?zhèn)溆?，稱杏鮑菇一級種。
[0008]優(yōu)選的，所述步驟a中纖維素酶與蝸牛酶的混合酶液的質(zhì)量百分比濃度為1.0%。
[0009]優(yōu)選的，所述步驟a中制備凈化原生質(zhì)體懸液取中層液的過程為，取中層液2.0ml加3-5ml的濃度為0.5-0.7摩爾的MgSO4溶液搖勻，離心、洗滌，如此重復(fù)洗滌2次；最后取中層液2.0ml加8.0ml的濃度為0.5-0.7摩爾的MgSO4溶液制成凈化原生質(zhì)體懸液。
[0010]優(yōu)選的，所述步驟a中取原生質(zhì)體懸液靜置培養(yǎng)過程為，取原生質(zhì)體懸液2.0ml加入7-9ml含0.4摩爾蔗糖的PDA培養(yǎng)液培養(yǎng)；然后取原生質(zhì)體液體培養(yǎng)液0.2ml涂附有綜合PDA培養(yǎng)基的平板或者涂含0.4摩爾蔗糖的附有綜合PDA培養(yǎng)基的平板。
[0011]優(yōu)選的，所述步驟B的具體過程如下:
(1)制作二級固體發(fā)酵原種培養(yǎng)基:將顆粒狀木屑和麥麩過篩，選用0.425-0.850mm之間的顆粒為原料；按二級固體發(fā)酵原種培養(yǎng)基的配方混合原料，攪拌均勻，使含水量在60-65%之間；將二級固體發(fā)酵原種培養(yǎng)基裝入750ml的菌種瓶中，壓緊、壓平，每瓶裝濕料約 400_450g 或干料 180_240g,蓋上棉塞，0.13mpa-0.15mpa 壓力下，滅菌 80_100min ；
上述二級固體發(fā)酵原種培養(yǎng)基的重量配比為:木屑35.0份?45.0份、麥麩40.0份?55.0份、玉米粉2.0份?6.0份、黃丑粉1.0份?5.0份，磷酸氫二鉀0.05份-0.15份、磷酸二氫鉀0.05份-0.15份、硫酸鎂0.05份-0.15份；料水比為1: 1.25-1.50 ；
(2)杏鮑菇二級固體發(fā)酵原種的培育:將上述杏鮑菇一級種接種于步驟(I)的杏鮑菇二級固體發(fā)酵原種培養(yǎng)基中，在23-25°C溫度下培養(yǎng)，菌絲長滿后即成；
(3)液體菌種制作:將杏鮑菇液體菌種培養(yǎng)基分裝到三角瓶中(500ml三角瓶中裝杏鮑菇液體菌種培養(yǎng)基300ml，1000ml三角瓶裝中裝杏鮑菇液體菌種培養(yǎng)基600ml);蓋上棉塞，在0.13mpa-0.14mpa壓力下滅菌30min ;待培養(yǎng)基溫度降至30°C以下時(shí),接入步驟(2)得到的杏鮑菇二級固體發(fā)酵原種(500ml三角瓶中接入2接種勺杏鮑菇二級固體發(fā)酵原種，100ml三角瓶中接入4接種勺杏鮑菇二級固體發(fā)酵原種)；接完種的三角瓶在23-28°C溫度，120-180rpm轉(zhuǎn)速下振蕩器振蕩培養(yǎng)3_8天，成為杏鮑菇液體菌種；
上述杏鮑菇液體菌種培養(yǎng)基的重量配比為:麥麩2.0%?5.0%、玉米粉1.0%?
3.0%、黃豆粉1.0%?2.0%、蛋白胨0.10%?0.2%、磷酸氫二鉀0.05%-0.15%、磷酸二氫鉀
0.05%-0.15%、硫酸鎂0.05%-0.10%，余量為水；制作過程為將麥麩、玉米粉、黃豆粉煮汁，過濾，濾液與其余組分的水溶液合并，補(bǔ)足水份成為杏鮑菇液體菌種培養(yǎng)基；
若需要的生產(chǎn)的杏鮑菇液體菌種量較大時(shí)，可以直接用液體菌種培養(yǎng)器(發(fā)酵罐)生產(chǎn)；
按操作規(guī)程在發(fā)酵罐中注入杏鮑菇液體菌種培養(yǎng)基，滅菌，降溫到30°C以下時(shí)接種；
(4)接種:將杏鮑菇二級固體發(fā)酵原種在無菌條件下?lián)v碎，并入盛有800ml無菌水的100ml滅菌三角瓶中，搖勻，在酒精火焰的保護(hù)下，到入發(fā)酵罐中，接種量為100L培養(yǎng)基接二級固體發(fā)酵原種2-5L ；
(5)培養(yǎng):在24-26°C溫度、罐壓0.02-0.04mpa的條件下，培養(yǎng)時(shí)間3_8d，經(jīng)檢驗(yàn)合格后，為杏鮑菇液體菌種。
[0012]優(yōu)選的，所述步驟D的具體過程如下:
(1)菌包冷卻:將權(quán)利要求1的黃芪秸桿和芪頭固體復(fù)合培養(yǎng)料滅菌，將料袋置于潔凈處冷卻；在裝袋滅菌冷卻的全過程中，料袋最好盛放在周轉(zhuǎn)筐內(nèi)，減少搬動(dòng)，降低污染率；
(2)液體菌種接種:當(dāng)料袋溫度冷卻至28°C以下時(shí)，即可置于接種箱或接種室內(nèi)接種；常規(guī)方法消毒，嚴(yán)格按無菌操作接種，直立出菇一頭接種，墻式出菇兩頭接種，細(xì)棒長袋橫臥出菇于袋身同側(cè)打三眼接種；每個(gè)接種點(diǎn)用接種槍移入杏鮑菇液體菌種5.0ml，封口 ；
(3)發(fā)菌管理:接種完畢后，及時(shí)搬入事先清掃消毒的培養(yǎng)室內(nèi)發(fā)菌；發(fā)菌期間的主要工作是控溫、降濕、通風(fēng)、遮光、翻堆和清除雜菌；培養(yǎng)室氣溫應(yīng)控制在20-26°C之間，初期氣溫以25°C為宜；菌袋中的料溫上升后，室溫應(yīng)調(diào)低至20-25°C ;整個(gè)發(fā)菌階段，料溫都不要超過28 V ;料溫過高，輕則產(chǎn)生熱害阻礙發(fā)菌，影響后期產(chǎn)量；重則燒菌，導(dǎo)致栽培失??；
在發(fā)菌階段，培養(yǎng)室應(yīng)遮光，維持黑暗，空氣相對濕度控制在70%以內(nèi)，經(jīng)常通風(fēng)換氣，保持空氣新鮮；每隔10 d翻堆一次，使菌袋發(fā)菌均勻，同時(shí)撿出污染菌袋；為加快菌絲生長，扎繩封口的菌袋應(yīng)在菌絲封面并吃料2 — 3cm后扎眼透氣；氣溫較高時(shí)，應(yīng)注意防蟲；在適宜的環(huán)境條件下，菌絲一般經(jīng)40 d可長滿菌袋；
(4)催蕾:菌絲長滿袋后，繼續(xù)培養(yǎng)10d，積累更多的養(yǎng)分；當(dāng)氣溫下降至10—18 °C時(shí)，就可進(jìn)行催蕾管理；為了使其出菇整齊一致，可先進(jìn)行搔菌處理；具體做法是:用小勺刮去袋口表層老菌種，并使袋口料面變平；搔菌時(shí)間一般在菌絲滿袋后即可進(jìn)行，因搔菌后還需要10 d的菌絲恢復(fù)時(shí)間，菌袋在此期間可進(jìn)一步成熟；
如果袋口或菌袋中部已有原基形成，則不再進(jìn)行搔菌；可以直接進(jìn)入出菇管理；搔菌后要進(jìn)行保濕管理，用塑膜將袋口覆蓋，或用紙將套環(huán)口封住；約過10d，當(dāng)料面重新長出新的白色氣生菌絲時(shí)，即可噴水增濕催蕾；催蕾期間溫度控制在10-18°C之間，低于8°C或高于20°C都難于形成原基,最佳催蕾溫度為10—15°C ；
催蕾期間，空氣濕度應(yīng)維持在90% -95%，增加散射光刺激，加強(qiáng)通風(fēng)，保持空氣新鮮；經(jīng)過3-6d，即可出現(xiàn)白色原基，原基進(jìn)一步分化形成菇蕾；
(5)出菇管理:當(dāng)原基分化形成I一 2 cm小菇蕾時(shí)，應(yīng)及時(shí)開袋進(jìn)行出菇期的管理；開袋過早，原基難于形成或出菇不整齊；開袋過遲，子實(shí)體己在袋內(nèi)長大，會(huì)形成畸形菇，嚴(yán)重時(shí)子實(shí)體會(huì)萎縮腐爛；將袋口塑膜向外翻卷下折至高于料面2— 3 cm，露出小菇蕾；
如果幼菇過密，可適當(dāng)疏蕾，汰劣存優(yōu)；短袋每袋留3—4個(gè)，長袋每穴留1-3朵，以保持菇體形美、個(gè)大，商品率高；出菇階段，必須注意溫度、濕度、光照和通風(fēng)的調(diào)控，才能獲得高產(chǎn)。
[0013]甘肅是我國重要的中藥材原產(chǎn)地和主產(chǎn)地，藥材資源覆蓋區(qū)域廣、資源種類多、種植面積大，產(chǎn)量高，特色優(yōu)勢十分明顯，道地品種優(yōu)勢突出。近年來，不斷加大對中藥材產(chǎn)業(yè)的引導(dǎo)和扶持，全省現(xiàn)有2540種中藥材品種資源，常年人工栽培的品種有350余種，大宗地道藥材有30多種，尤其是甘肅地產(chǎn)的當(dāng)歸、黨參、黃(紅)芪、大黃、甘草等主要產(chǎn)品產(chǎn)量占全國的70%到95%。經(jīng)過近年來的持續(xù)發(fā)展，已初步形成了一定規(guī)模的中藥產(chǎn)業(yè)體系，成為全省醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)的重要組成部分，具有較強(qiáng)發(fā)展優(yōu)勢和廣闊市場前景。種植面積大，產(chǎn)量高。
[0014]中草藥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展積累了大量的秸桿、芪頭等生物質(zhì)原料，隨意堆放，腐爛變質(zhì)、焚燒，造成環(huán)境污染、資源浪費(fèi)等諸多問題。
[0015]黃芪秸桿和芪頭含有一定量的多糖、皂苷、黃酮類等活性成分和大量的粗纖維、粗脂肪、淀粉、粗多糖等營養(yǎng)成分。在黃芪種植區(qū)資源非常豐富，可以替代部分栽培原料栽培杏鮑菇。本發(fā)明把黃芪秸桿與農(nóng)作物秸桿復(fù)合成適宜杏鮑菇生長的固體復(fù)合培養(yǎng)料，以杏鮑菇液體菌種為栽培種生產(chǎn)杏鮑菇。在保護(hù)環(huán)境的同時(shí)為人們提供優(yōu)質(zhì)的菌類產(chǎn)品，可產(chǎn)生良好的社會(huì)、經(jīng)濟(jì)、生態(tài)效益。有利于食用菌生產(chǎn)企業(yè)調(diào)整產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)，增加新產(chǎn)品，使食用菌產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展。
[0016]經(jīng)栽培試驗(yàn)表明本發(fā)明效果如下:1.降低成本:每袋降低成本0.35元。具體核算如下:每袋裝干料1.0斤，含水量64%，濕料2.7斤，成本1.75元。用黃芪地上部分代替20%計(jì)，可節(jié)約0.35元/袋。2.縮短菌絲體培養(yǎng)時(shí)間8-10天:利用杏鮑菇液體菌種栽培菌絲滿袋時(shí)間為30-40天，而固體菌種接種菌絲體滿袋時(shí)間為40-48天。3.提高生物學(xué)效率10%—20%:利用本發(fā)明方法生產(chǎn)杏鮑菇每袋產(chǎn)杏鮑菇子實(shí)體7-8兩，而傳統(tǒng)栽培杏鮑菇每袋產(chǎn)杏鮑菇子實(shí)體5-6兩。4.杏鮑菇風(fēng)味獨(dú)特；用黃芪秸桿、芪頭固體復(fù)合培養(yǎng)料生產(chǎn)的杏鮑菇帶有黃芪的特殊味道，口感更好。

【具體實(shí)施方式】
[0017]下面的實(shí)施例可以進(jìn)一步說明本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
[0018]實(shí)施例1.制備黃芪秸桿和芪頭固體復(fù)合培養(yǎng)料，按照以下重量稱料:
黃芪秸桿和黃芪芪頭35.0kg、玉米秸桿和玉米芯25.0kg、棉籽殼15.0kg、木屑25.0kg、麥麩15.0kg、玉米粉3.0kg、黃豆粉3.0kg、石膏1kg、石灰1kg、磷酸氫二鉀0.15kg、磷酸二氫鉀0.15kg、硫酸鎂0.15kg，料水比為1:1.50，黃芪秸桿和黃芪芪頭的重量比為1:1，玉米秸桿和玉米芯的重量比為1:1。
[0019]制作過程為:將各種原料粉碎，黃芪秸桿、黃芪芪頭、玉米秸桿、玉米芯粉碎成3-5_大??；分別稱重，不溶于水的原料先干拌均勻，再加水充分混合，(如雜木屑、玉米芯等料顆粒較大，先預(yù)濕堆悶，充分吸足水分后再與其他料混合)；將溶于水的原料磷酸二氫鉀、硫酸鎂溶解于水后拌入料中，裝袋滅菌；滅菌時(shí)間要求在0.15 MPa的壓力下滅菌2h，或常壓下100°C維持12 — 14h。
[0020]實(shí)施例2.制備黃芪秸桿和芪頭固體復(fù)合培養(yǎng)料，按照以下重量稱料:
黃芪秸桿和黃芪芪頭25.0kg、玉米秸桿和玉米芯35.0kg、棉籽殼25.0kg、木屑35.0kg、麥麩10.0kg、玉米粉2.0kg、黃豆粉1.0kg、石膏1kg、石灰1kg、磷酸氫二鉀0.05kg、磷酸二氫鉀0.05kg、硫酸鎂0.05kg，料水比為1:1.25，黃芪秸桿和黃芪芪頭的重量比為1:1，玉米秸桿和玉米芯的重量比為1:1。制作過程同實(shí)施例1。
[0021]實(shí)施例3.制備黃芪秸桿和芪頭固體復(fù)合培養(yǎng)料，按照以下重量稱料:
黃芪秸桿和黃芪芪頭30.0kg、玉米秸桿和玉米芯30.0kg、棉籽殼20.0kg、木屑30.0kg、麥麩12.0kg、玉米粉2.5kg、黃豆粉2.0kg、石膏1kg、石灰1kg、磷酸氫二鉀0.10kg、磷酸二氫鉀0.10kg、硫酸鎂0.10kg，料水比為1:1.35，黃芪秸桿和黃芪芪頭的重量比為1:1，玉米秸桿和玉米芯的重量比為1:1。制作過程同實(shí)施例1。
[0022]實(shí)施例4.杏鮑菇一級種的制備過程如下:
a.杏鮑燕的原生質(zhì)體化與純化:將杏鮑燕G0ZetfTOiw1Seryngii)的雙核菌絲體接種于鋪有玻璃紙環(huán)的加富PDA培養(yǎng)基上，20°C培養(yǎng)4天；菌絲長滿玻璃紙環(huán)時(shí)，無菌操作將玻璃紙環(huán)連同菌絲體轉(zhuǎn)入4ml質(zhì)量百分比濃度為1.0%的纖維素酶與蝸牛酶的混合酶液中，在32°C溫度下，350rpm轉(zhuǎn)速的搖床中酶解6h ;酶解液用濃度為0.5摩爾的MgS0.7H2 O溶液稀釋，MgS0.7H2 O溶液的用量為酶解液容積的2倍，然后用孔徑G 3號砂芯濾器過濾；濾液以2400rpm轉(zhuǎn)速離心15min ;取中層液2.0ml,加3ml的濃度為0.5摩爾的MgSO4溶液搖勻，離心、洗滌，如此重復(fù)洗滌2次；最后取中層液2.0ml加8.0ml的濃度為0.5摩爾的MgSO4溶液制成凈化原生質(zhì)體懸液；取原生質(zhì)體懸液2.0ml，加入7ml含0.4摩爾蔗糖的PDA培養(yǎng)液，在細(xì)胞培養(yǎng)瓶中于22°C溫度下靜置培養(yǎng)；取經(jīng)過PDA培養(yǎng)液培養(yǎng)46h的原生質(zhì)體液體培養(yǎng)液0.2ml涂附有綜合PDA培養(yǎng)基的平板或者涂含0.4摩爾蔗糖的附有綜合PDA培養(yǎng)基的平板，22°C溫度下培養(yǎng)，培養(yǎng)約8天，當(dāng)再生菌落出現(xiàn)時(shí)，隨即轉(zhuǎn)管培養(yǎng)，菌絲長滿試管后，進(jìn)行鏡檢，鏡檢過程為取剪成約8X5mm的玻璃紙片，于空皿中滅菌。在無菌操作下用鑷子夾取一片玻璃紙片，在長有菌絲的試管中輕觸菌絲，然后置載片上加水及蓋片鏡檢。菌絲體無鎖狀聯(lián)合的為單核體X，具有鎖狀聯(lián)合的為雙核體Y，雙核體Y擴(kuò)大培養(yǎng)，保存；
b.單核體交配培養(yǎng):將兩個(gè)擬交配的步驟a得到的單核體X相距約0.5cm接種于附有綜合PDA培養(yǎng)基的平板上，25°C黑暗條件下倒置培養(yǎng)5d ;當(dāng)兩菌落相交后5d，取兩菌落交界處及其外緣的菌絲體，轉(zhuǎn)到附有綜合PDA培養(yǎng)基的平板中培養(yǎng)，菌絲萌發(fā)3d后顯微鏡檢查，挑出具有鎖狀聯(lián)合的雙核菌絲擴(kuò)大培養(yǎng)，保存；
c.出菇試驗(yàn):用步驟a擴(kuò)大培養(yǎng)的雙核體Y和步驟b擴(kuò)大培養(yǎng)的雙核菌絲交配獲得的雙核體新菌株作出菇試驗(yàn)；評價(jià)選優(yōu)，對理想子實(shí)體個(gè)體組織分離，雙核化穩(wěn)定，以生物學(xué)性狀及產(chǎn)量穩(wěn)定的菌種作為生產(chǎn)母種，保存?zhèn)溆?，稱杏鮑菇一級種。
[0023]實(shí)施例5.杏鮑菇一級種的制備過程如下:
a.杏鮑燕的原生質(zhì)體化與純化:將杏鮑燕O0Zetfrote1Seryngii)的雙核菌絲體接種于鋪有玻璃紙環(huán)的加富PDA培養(yǎng)基上，28°C培養(yǎng)5天；菌絲長滿玻璃紙環(huán)時(shí)，無菌操作將玻璃紙環(huán)連同菌絲體轉(zhuǎn)入6ml質(zhì)量百分比濃度為1.0%的纖維素酶與蝸牛酶的混合酶液中，在36°C溫度下，450rpm轉(zhuǎn)速的搖床中酶解1h ;酶解液用濃度為0.7摩爾的MgS0.7Η2 O溶液稀釋，MgS0.7Η2 O溶液的用量為酶解液容積的2倍，然后用孔徑G 3號砂芯濾器過濾；濾液以2600rpm轉(zhuǎn)速離心15min ;取中層液2.0ml,加5ml的濃度為0.7摩爾的MgSO4溶液搖勻，離心、洗滌，如此重復(fù)洗滌2次；最后取中層液2.0ml加8.0ml的濃度為0.7摩爾的MgSO4溶液制成凈化原生質(zhì)體懸液；取原生質(zhì)體懸液2.0ml，加入9ml含0.4摩爾蔗糖的PDA培養(yǎng)液，在細(xì)胞培養(yǎng)瓶中于25°C溫度下靜置培養(yǎng)；取經(jīng)過PDA培養(yǎng)液培養(yǎng)50h的原生質(zhì)體液體培養(yǎng)液0.2ml涂附有綜合PDA培養(yǎng)基的平板或者涂含0.4摩爾蔗糖的附有綜合PDA培養(yǎng)基的平板，25°C溫度下培養(yǎng)，培養(yǎng)約12天，當(dāng)再生菌落出現(xiàn)時(shí)，隨即轉(zhuǎn)管培養(yǎng)，菌絲長滿試管后，進(jìn)行鏡檢，鏡檢過程為取剪成約8 X 5mm的玻璃紙片，于空皿中滅菌。在無菌操作下用鑷子夾取一片玻璃紙片，在長有菌絲的試管中輕觸菌絲，然后置載片上加水及蓋片鏡檢。菌絲體無鎖狀聯(lián)合的為單核體X，具有鎖狀聯(lián)合的為雙核體Y，雙核體Y擴(kuò)大培養(yǎng)，保存；
b.單核體交配培養(yǎng):將兩個(gè)擬交配的步驟a得到的單核體X相距約0.5cm接種于附有綜合PDA培養(yǎng)基的平板上，25°C黑暗條件下倒置培養(yǎng)7d;當(dāng)兩菌落相交后7d，取兩菌落交界處及其外緣的菌絲體，轉(zhuǎn)到附有綜合PDA培養(yǎng)基的平板中培養(yǎng)，菌絲萌發(fā)3d后顯微鏡檢查，挑出具有鎖狀聯(lián)合的雙核菌絲擴(kuò)大培養(yǎng)，保存；
c.出菇試驗(yàn):用步驟a擴(kuò)大培養(yǎng)的雙核體Y和步驟b擴(kuò)大培養(yǎng)的雙核菌絲交配獲得的雙核體新菌株作出菇試驗(yàn)；評價(jià)選優(yōu)，對理想子實(shí)體個(gè)體組織分離，雙核化穩(wěn)定，以生物學(xué)性狀及產(chǎn)量穩(wěn)定的菌種作為生產(chǎn)母種，保存?zhèn)溆?，稱杏鮑菇一級種。
[0024]實(shí)施例6.杏鮑菇液體菌種的制備過程如下:
(1)制作二級固體發(fā)酵原種培養(yǎng)基:將顆粒狀木屑和麥麩過篩，選用0.425mm之間的顆粒為原料；按二級固體發(fā)酵原種培養(yǎng)基的配方混合原料，攪拌均勻，使含水量在60%之間；將二級固體發(fā)酵原種培養(yǎng)基裝入750ml的菌種瓶中，壓緊、壓平，每瓶裝濕料約400g或干料180g,蓋上棉塞,0.13mpa壓力下,滅菌80min ；
上述二級固體發(fā)酵原種培養(yǎng)基的重量配比為:木屑35.0kg、麥麩40.0kg、玉米粉
2.0kg、黃豆粉1.0kg,磷酸氫二鉀0.05kg、磷酸二氫鉀0.05kg、硫酸鎂0.05kg ;料水比為1:1.25 ；
(2)杏鮑菇二級固體發(fā)酵原種的培育:將實(shí)施例4制得的杏鮑菇一級種接種于步驟(O的杏鮑菇二級固體發(fā)酵原種培養(yǎng)基中，在23°C溫度下培養(yǎng)，菌絲長滿后即成；
(3)液體菌種制作:將杏鮑菇液體菌種培養(yǎng)基分裝到三角瓶中(500ml三角瓶中裝杏鮑菇液體菌種培養(yǎng)基300ml);蓋上棉塞，在0.13mpa壓力下滅菌30min ;待培養(yǎng)基溫度降至30°C以下時(shí)，接入步驟(2)得到的杏鮑菇二級固體發(fā)酵原種(500ml三角瓶中接入2接種勺杏鮑菇二級固體發(fā)酵原種)；接完種的三角瓶在23°C溫度，120rpm轉(zhuǎn)速下振蕩器振蕩培養(yǎng)3天，成為杏鮑菇液體菌種；
上述杏鮑菇液體菌種培養(yǎng)基的重量配比為:麥麩2.0%、玉米粉1.0%、黃豆粉1.0%、蛋白胨0.10%、磷酸氫二鉀0.05%、磷酸二氫鉀0.05%、硫酸鎂0.05%，余量為水；制作過程為將麥麩、玉米粉、黃豆粉煮汁，過濾，濾液與其余組分的水溶液合并，補(bǔ)足水份成為杏鮑菇液體菌種培養(yǎng)基；
若需要的生產(chǎn)的杏鮑菇液體菌種量較大時(shí)，可以直接用液體菌種培養(yǎng)器(發(fā)酵罐)生產(chǎn)；按操作規(guī)程在發(fā)酵罐中注入杏鮑菇液體菌種培養(yǎng)基，滅菌，降溫到30°C以下時(shí)接種；
(4)接種:將杏鮑菇二級固體發(fā)酵原種在無菌條件下?lián)v碎，并入盛有800ml無菌水的100ml滅菌三角瓶中，搖勻，在酒精火焰的保護(hù)下，到入發(fā)酵罐中，接種量為100L培養(yǎng)基接二級固體發(fā)酵原種2L ；
(5)培養(yǎng):在24°C溫度、罐壓0.02mpa的條件下，培養(yǎng)時(shí)間3d，經(jīng)檢驗(yàn)合格后，為杏鮑菇液體菌種。
[0025]實(shí)施例7.杏鮑菇液體菌種的制備過程如下:
(I)制作二級固體發(fā)酵原種培養(yǎng)基:將顆粒狀木屑和麥麩過篩，選用0.850mm之間的顆粒為原料；按二級固體發(fā)酵原種培養(yǎng)基的配方混合原料，攪拌均勻，使含水量在65%之間；將二級固體發(fā)酵原種培養(yǎng)基裝入750ml的菌種瓶中，壓緊、壓平，每瓶裝濕料約450g或干料240g,蓋上棉塞，0.15mpa壓力下，滅菌10min ；
上述二級固體發(fā)酵原種培養(yǎng)基的重量配比為:木屑45.0kg、麥麩55.0kg、玉米粉
6.0kg、黃豆粉5.0kg,磷酸氫二鉀0.15kg、磷酸二氫鉀0.15kg、硫酸鎂0.15kg ;料水比為1:1.25-1.50 ； (2)杏鮑菇二級固體發(fā)酵原種的培育:將實(shí)施例5制得的杏鮑菇一級種接種于步驟(O的杏鮑菇二級固體發(fā)酵原種培養(yǎng)基中，在25°C溫度下培養(yǎng)，菌絲長滿后即成；
(3)液體菌種制作:將杏鮑菇液體菌種培養(yǎng)基分裝到三角瓶中(100ml三角瓶裝中裝杏鮑菇液體菌種培養(yǎng)基600ml);蓋上棉塞，在0.14mpa壓力下滅菌30min ;待培養(yǎng)基溫度降至30°C以下時(shí)，接入步驟(2)得到的杏鮑菇二級固體發(fā)酵原種(1000ml三角瓶中接入4接種勺杏鮑菇二級固體發(fā)酵原種)；接完種的三角瓶在28°C溫度，ISOrpm轉(zhuǎn)速下振蕩器振蕩培養(yǎng)8天，成為杏鮑菇液體菌種；
上述杏鮑菇液體菌種培養(yǎng)基的重量配比為:麥麩5.0%、玉米粉3.0%、黃豆粉2.0%、蛋白胨0.2%、磷酸氫二鉀0.15%、磷酸二氫鉀0.15%、硫酸鎂0.10%，余量為水；制作過程為將麥麩、玉米粉、黃豆粉煮汁，過濾，濾液與其余組分的水溶液合并，補(bǔ)足水份成為杏鮑菇液體菌種培養(yǎng)基；
(4)接種:將杏鮑菇二級固體發(fā)酵原種在無菌條件下?lián)v碎，并入盛有800ml無菌水的100ml滅菌三角瓶中，搖勻，在酒精火焰的保護(hù)下，到入發(fā)酵罐中，接種量為100L培養(yǎng)基接二級固體發(fā)酵原種5L ；
(5)培養(yǎng):在26°C溫度、罐壓0.04mpa的條件下，培養(yǎng)時(shí)間8d，經(jīng)檢驗(yàn)合格后，為杏鮑菇液體菌種。
[0026]實(shí)施例8.用黃芪秸桿、芪頭固體復(fù)合培養(yǎng)料生產(chǎn)杏鮑菇的方法，具體過程如下:
(1)菌包冷卻:將實(shí)施例3制得的黃芪秸桿和芪頭固體復(fù)合培養(yǎng)料滅菌，將料袋置于潔凈處冷卻；在裝袋滅菌冷卻的全過程中，料袋最好盛放在周轉(zhuǎn)筐內(nèi)，減少搬動(dòng)，降低污染率；
(2)液體菌種接種:當(dāng)料袋溫度冷卻至28°C以下時(shí)，即可置于接種箱或接種室內(nèi)接種；常規(guī)方法消毒，嚴(yán)格按無菌操作接種，直立出菇一頭接種，墻式出菇兩頭接種，細(xì)棒長袋橫臥出菇于袋身同側(cè)打三眼接種；每個(gè)接種點(diǎn)用接種槍移入杏鮑菇液體菌種5.0ml，封口 ；
(3)發(fā)菌管理:接種完畢后，及時(shí)搬入事先清掃消毒的培養(yǎng)室內(nèi)發(fā)菌；發(fā)菌期間的主要工作是控溫、降濕、通風(fēng)、遮光、翻堆和清除雜菌；培養(yǎng)室氣溫應(yīng)控制在25°C ；
在發(fā)菌階段，培養(yǎng)室應(yīng)遮光，維持黑暗，空氣相對濕度控制在70%以內(nèi)，經(jīng)常通風(fēng)換氣，保持空氣新鮮；每隔10 d翻堆一次，使菌袋發(fā)菌均勻，同時(shí)撿出污染菌袋；為加快菌絲生長，扎繩封口的菌袋應(yīng)在菌絲封面并吃料3cm后扎眼透氣；氣溫較高時(shí)，應(yīng)注意防蟲；在適宜的環(huán)境條件下，菌絲一般經(jīng)40d可長滿菌袋；
(4)催蕾:菌絲長滿袋后，繼續(xù)培養(yǎng)10d，積累更多的養(yǎng)分；當(dāng)氣溫下降至18°C時(shí)，就可進(jìn)行催蕾管理；為了使其出菇整齊一致，可先進(jìn)行搔菌處理；具體做法是:用小勺刮去袋口表層老菌種，并使袋口料面變平；搔菌時(shí)間一般在菌絲滿袋后即可進(jìn)行，因搔菌后還需要10d的菌絲恢復(fù)時(shí)間，菌袋在此期間可進(jìn)一步成熟；如果袋口或菌袋中部已有原基形成，則不再進(jìn)行搔菌；可以直接進(jìn)入出菇管理；搔菌后要進(jìn)行保濕管理，用塑膜將袋口覆蓋，或用紙將套環(huán)口封?。患s過10d，當(dāng)料面重新長出新的白色氣生菌絲時(shí)，即可噴水增濕催蕾；催蕾期間溫度控制在18°C ;催蕾期間，空氣濕度應(yīng)維持在95%，增加散射光刺激，加強(qiáng)通風(fēng)，保持空氣新鮮；經(jīng)過6d，即可出現(xiàn)白色原基，原基進(jìn)一步分化形成菇蕾；
(5)出菇管理:當(dāng)原基分化形成I一 2 cm小菇蕾時(shí)，應(yīng)及時(shí)開袋進(jìn)行出菇期的管理；開袋過早，原基難于形成或出菇不整齊；開袋過遲，子實(shí)體己在袋內(nèi)長大，會(huì)形成畸形菇，嚴(yán)重時(shí)子實(shí)體會(huì)萎縮腐爛；將袋口塑膜向外翻卷下折至高于料面2— 3 cm，露出小菇蕾；
如果幼菇過密，可適當(dāng)疏蕾，汰劣存優(yōu)；短袋每袋留3—4個(gè)，長袋每穴留1-3朵，以保持菇體形美、個(gè)大，商品率高；出菇階段，必須注意溫度、濕度、光照和通風(fēng)的調(diào)控，才能獲得高產(chǎn)；
5.1溫度調(diào)控:溫度應(yīng)保持在18°C，在該溫度條件下，子實(shí)體生長發(fā)育正常健壯；不同生態(tài)型的杏鮑菇品種，對溫度的適應(yīng)性也有所不同，實(shí)際栽培時(shí)應(yīng)具體品種具體對待；通常情況下，溫度較高時(shí)子實(shí)體生長快，菇體小，易開傘，不潔白，品質(zhì)差；因此，在子實(shí)體發(fā)育過程中，若氣溫偏高，應(yīng)結(jié)合向地面噴水、夜間通風(fēng)進(jìn)行降溫處理；如氣溫偏低，應(yīng)適當(dāng)關(guān)閉門窗，室外栽培加厚覆蓋物，或采用人工加溫辦法，提高栽培室溫度；
5.2濕度調(diào)節(jié):水分與濕度管理對于子實(shí)體的分化和發(fā)育非常重要；初期空氣相對濕度要保持在90%;當(dāng)菌蓋直徑長至2 - 3 cm后，可適當(dāng)調(diào)低，控制在88%，有利于防止病蟲害發(fā)生；當(dāng)氣溫高，空氣濕度低于80%時(shí)，應(yīng)適當(dāng)噴水降溫增濕，但主要用輕噴、勤噴的辦法往地面和空間噴水；注意盡量不要把水噴到菇體上，以免引起子實(shí)體黃化萎縮，嚴(yán)重時(shí)感染細(xì)菌而腐爛死亡，影響子實(shí)體的產(chǎn)量和質(zhì)量；采收前2— 3 d，為了延長采后的保鮮期，空氣相對濕度控制在85%為宜；當(dāng)一潮菇結(jié)束后，菌袋失水較多，可用注水法和浸水法給菌袋補(bǔ)水；
5.3光照調(diào)節(jié):子實(shí)體發(fā)生和發(fā)育階段均需散射光，光照強(qiáng)度似1000 Ix為宜；光照過弱，易形成無頭菇；光照過強(qiáng)，子實(shí)體易失水干燥，顏色不白，商品性下降；
5.4空氣調(diào)節(jié):子實(shí)體發(fā)育階段要求加大通風(fēng)量，始終保持菇房內(nèi)空氣新鮮；當(dāng)室溫偏高(18°C以上)，濕度偏大時(shí)，更要注意加強(qiáng)通風(fēng)，避免高溫高濕引起子實(shí)體腐爛和病蟲害危害；通風(fēng)應(yīng)與控溫調(diào)濕統(tǒng)一管理，做到既能通風(fēng)良好，又能保持良好的溫度、濕度環(huán)境；
(6)采收與轉(zhuǎn)潮管理:當(dāng)菌蓋平展，孢子尚未彈射，菌蓋直徑與菌柄一致或稍小于菌柄時(shí)，就要及時(shí)采收；第一潮菇采收后，應(yīng)及時(shí)清理料面，停水養(yǎng)菌5d，再調(diào)節(jié)好菇房的溫、濕度和通風(fēng)等條件；相隔14 d，還可采收第二潮菇；杏鮑菇的產(chǎn)量主要集中在第一潮菇，占總產(chǎn)量的70%以上，第二潮菇朵形小，菌柄短，產(chǎn)量低；故工廠化栽培只采收一潮菇；若管理得當(dāng)，袋栽的總生物效率可達(dá)60%;如將采收一潮菇的菌袋再脫袋覆土栽培，可明顯提高二潮燕的產(chǎn)量。
[0027]實(shí)施例9.用黃芪秸桿、芪頭固體復(fù)合培養(yǎng)料生產(chǎn)杏鮑菇的方法，具體過程如下:
(1)菌包冷卻:將實(shí)施例1制得的黃芪秸桿和芪頭固體復(fù)合培養(yǎng)料滅菌，將料袋置于潔凈處冷卻；在裝袋滅菌冷卻的全過程中，料袋最好盛放在周轉(zhuǎn)筐內(nèi)，減少搬動(dòng)，降低污染率；
(2)液體菌種接種:當(dāng)料袋溫度冷卻至28°C以下時(shí)，即可置于接種箱或接種室內(nèi)接種；常規(guī)方法消毒，嚴(yán)格按無菌操作接種，直立出菇一頭接種，墻式出菇兩頭接種，細(xì)棒長袋橫臥出菇于袋身同側(cè)打三眼接種；每個(gè)接種點(diǎn)用接種槍移入杏鮑菇液體菌種5.0ml，封口 ；
(3)發(fā)菌管理:接種完畢后，及時(shí)搬入事先清掃消毒的培養(yǎng)室內(nèi)發(fā)菌；發(fā)菌期間的主要工作是控溫、降濕、通風(fēng)、遮光、翻堆和清除雜菌；培養(yǎng)室氣溫應(yīng)控制在20°C之間，初期氣溫以25°C為宜；菌袋中的料溫上升后，室溫應(yīng)調(diào)低至20°C ;整個(gè)發(fā)菌階段，料溫都不要超過280C ;料溫過高，輕則產(chǎn)生熱害阻礙發(fā)菌，影響后期產(chǎn)量；重則燒菌，導(dǎo)致栽培失?。?br> 在發(fā)菌階段，培養(yǎng)室應(yīng)遮光，維持黑暗，空氣相對濕度控制在70%以內(nèi)，經(jīng)常通風(fēng)換氣，保持空氣新鮮；每隔1d翻堆一次，使菌袋發(fā)菌均勻，同時(shí)撿出污染菌袋；為加快菌絲生長，扎繩封口的菌袋應(yīng)在菌絲封面并吃料2cm后扎眼透氣；氣溫較高時(shí)，應(yīng)注意防蟲；在適宜的環(huán)境條件下，菌絲一般經(jīng)40d可長滿菌袋；
(4)催蕾:菌絲長滿袋后，繼續(xù)培養(yǎng)10d，積累更多的養(yǎng)分；當(dāng)氣溫下降至10°C時(shí)，就可進(jìn)行催蕾管理；為了使其出菇整齊一致，可先進(jìn)行搔菌處理；具體做法是:用小勺刮去袋口表層老菌種，并使袋口料面變平；搔菌時(shí)間一般在菌絲滿袋后即可進(jìn)行，因搔菌后還需要10d的菌絲恢復(fù)時(shí)間，菌袋在此期間可進(jìn)一步成熟；
如果袋口或菌袋中部已有原基形成，則不再進(jìn)行搔菌；可以直接進(jìn)入出菇管理；搔菌后要進(jìn)行保濕管理，用塑膜將袋口覆蓋，或用紙將套環(huán)口封?。患s過10d，當(dāng)料面重新長出新的白色氣生菌絲時(shí)，即可噴水增濕催蕾；催蕾期間溫度控制在10°C ；
催蕾期間，空氣濕度應(yīng)維持在90%，增加散射光刺激，加強(qiáng)通風(fēng)，保持空氣新鮮；經(jīng)過3d，即可出現(xiàn)白色原基，原基進(jìn)一步分化形成菇蕾；
(5)出菇管理:當(dāng)原基分化形成I一 2 cm小菇蕾時(shí)，應(yīng)及時(shí)開袋進(jìn)行出菇期的管理；開袋過早，原基難于形成或出菇不整齊；開袋過遲，子實(shí)體己在袋內(nèi)長大，會(huì)形成畸形菇，嚴(yán)重時(shí)子實(shí)體會(huì)萎縮腐爛；將袋口塑膜向外翻卷下折至高于料面2— 3 cm，露出小菇蕾；如果幼菇過密，可適當(dāng)疏蕾，汰劣存優(yōu)；短袋每袋留3— 4個(gè)，長袋每穴留1-3朵，以保持菇體形美、個(gè)大，商品率高；出菇階段，必須注意溫度、濕度、光照和通風(fēng)的調(diào)控，才能獲得高產(chǎn)；
5.1溫度調(diào)控:溫度應(yīng)保持在15°C，在該溫度條件下，子實(shí)體生長發(fā)育正常健壯；不同生態(tài)型的杏鮑菇品種，對溫度的適應(yīng)性也有所不同，實(shí)際栽培時(shí)應(yīng)具體品種具體對待；通常情況下，溫度較高時(shí)子實(shí)體生長快，菇體小，易開傘，不潔白，品質(zhì)差；因此，在子實(shí)體發(fā)育過程中，若氣溫偏高，應(yīng)結(jié)合向地面噴水、夜間通風(fēng)進(jìn)行降溫處理；如氣溫偏低，應(yīng)適當(dāng)關(guān)閉門窗，室外栽培加厚覆蓋物，或采用人工加溫辦法，提高栽培室溫度；
5.2濕度調(diào)節(jié):水分與濕度管理對于子實(shí)體的分化和發(fā)育非常重要；初期空氣相對濕度要保持在90%;當(dāng)菌蓋直徑長至2 — 3 cm后，可適當(dāng)調(diào)低，控制在85%，有利于防止病蟲害發(fā)生；當(dāng)氣溫高，空氣濕度低于80%時(shí)，應(yīng)適當(dāng)噴水降溫增濕，但主要用輕噴、勤噴的辦法往地面和空間噴水；注意盡量不要把水噴到菇體上，以免引起子實(shí)體黃化萎縮，嚴(yán)重時(shí)感染細(xì)菌而腐爛死亡，影響子實(shí)體的產(chǎn)量和質(zhì)量；采收前2d，為了延長采后的保鮮期，空氣相對濕度控制在85%為宜；當(dāng)一潮菇結(jié)束后，菌袋失水較多，可用注水法和浸水法給菌袋補(bǔ)水；
5.3光照調(diào)節(jié):子實(shí)體發(fā)生和發(fā)育階段均需散射光，光照強(qiáng)度似5001x為宜；光照過弱，易形成無頭菇；光照過強(qiáng)，子實(shí)體易失水干燥，顏色不白，商品性下降；
5.4空氣調(diào)節(jié):子實(shí)體發(fā)育階段要求加大通風(fēng)量，始終保持菇房內(nèi)空氣新鮮；當(dāng)室溫偏高(18°C以上)，濕度偏大時(shí)，更要注意加強(qiáng)通風(fēng)，避免高溫高濕引起子實(shí)體腐爛和病蟲害危害；通風(fēng)應(yīng)與控溫調(diào)濕統(tǒng)一管理，做到既能通風(fēng)良好，又能保持良好的溫度、濕度環(huán)境；
(6)采收與轉(zhuǎn)潮管理:當(dāng)菌蓋平展，孢子尚未彈射，菌蓋直徑與菌柄一致或稍小于菌柄時(shí)，就要及時(shí)采收；第一潮菇采收后，應(yīng)及時(shí)清理料面，停水養(yǎng)菌4d，再調(diào)節(jié)好菇房的溫、濕度和通風(fēng)等條件；相隔14d，還可采收第二潮菇；杏鮑菇的產(chǎn)量主要集中在第一潮菇，占總產(chǎn)量的70%以上，第二潮菇朵形小，菌柄短，產(chǎn)量低；故工廠化栽培只采收一潮菇；若管理得當(dāng)，袋栽的總生物效率可達(dá)50% -60% ;如將采收一潮菇的菌袋再脫袋覆土栽培，可明顯提高二潮菇的產(chǎn)量。
[0028]實(shí)施例10.與實(shí)施例8不同之處在于采用實(shí)施例2制得的黃芪秸桿和芪頭固體復(fù)合培養(yǎng)料生產(chǎn)杏鮑菇。
【權(quán)利要求】
1.一種黃芪秸桿和芪頭固體復(fù)合培養(yǎng)料，其特征在于:它以黃芪秸桿和芪頭為主料，以玉米秸桿、玉米芯為輔料，按以下重量份原料加水制成， 黃芪秸桿和黃芪芪頭25.0份?35.0份、玉米秸桿和玉米芯25.0份?35.0份、棉籽殼15.0份?25.0份、木屑25.0份?35.0份、麥麩10.0份?15.0份、玉米粉2.0份?3.0份、黃豆粉1.0份?3.0份、石膏I份、石灰I份、磷酸氫二鉀0.05份-0.15份、磷酸二氫鉀0.05份-0.15份、硫酸鎂0.05份-0.15份，料水比為1: 1.25-1.50，黃芪秸桿和黃芪芪頭的重量比為1:1，玉米秸桿和玉米芯的重量比為1:1。
2.用權(quán)利要求1所述黃芪秸桿和芪頭固體復(fù)合培養(yǎng)料生產(chǎn)杏鮑菇的方法，其特征在于它包括下列步驟: A、杏鮑菇菌種純化與復(fù)壯， B、杏鮑菇液體菌種制備， C、杏鮑菇栽培； 其中步驟A杏鮑菇菌種純化與復(fù)壯過程如下: a.杏鮑燕的原生質(zhì)體化與純化:將杏鮑燕G0Zetfroiw1Seryngii)的雙核菌絲體接種于鋪有玻璃紙環(huán)的加富PDA培養(yǎng)基上，20-28°C培養(yǎng)4-5天；菌絲長滿玻璃紙環(huán)時(shí)，無菌操作將玻璃紙環(huán)連同菌絲體轉(zhuǎn)入4-6ml纖維素酶與蝸牛酶的混合酶液中，在32-36°C溫度、350-450rpm轉(zhuǎn)速的搖床中酶解6_10h ;酶解液用濃度為0.5-0.7摩爾的MgS0.7H2 O溶液稀釋，MgSOWH2 O溶液的用量為酶解液容積的2倍，過濾；濾液以2400-2600rpm轉(zhuǎn)速離心；取中層液加MgSO4溶液制成凈化原生質(zhì)體懸液；取原生質(zhì)體懸液加入PDA培養(yǎng)液，在細(xì)胞培養(yǎng)瓶中于22-25°C溫度下靜置培養(yǎng)；取經(jīng)過PDA培養(yǎng)液培養(yǎng)46_50h的原生質(zhì)體液體培養(yǎng)液涂附有綜合PDA培養(yǎng)基的平板，22-25°C溫度下培養(yǎng)，培養(yǎng)約8_12天，當(dāng)再生菌落出現(xiàn)時(shí)，隨即轉(zhuǎn)管培養(yǎng)，菌絲長滿試管后進(jìn)行鏡檢；菌絲體無鎖狀聯(lián)合的為單核體X，具有鎖狀聯(lián)合的為雙核體Y，雙核體Y擴(kuò)大培養(yǎng)，保存； b.單核體交配培養(yǎng):將兩個(gè)擬交配的步驟a得到的單核體X相距約0.5cm接種于附有綜合PDA培養(yǎng)基的平板上，25°C黑暗條件下倒置培養(yǎng)5-7d ;當(dāng)兩菌落相交后5_7d，取兩菌落交界處及其外緣的菌絲體，轉(zhuǎn)到附有綜合PDA培養(yǎng)基的平板中培養(yǎng)，菌絲萌發(fā)3d后顯微鏡檢查，挑出具有鎖狀聯(lián)合的雙核菌絲擴(kuò)大培養(yǎng)，保存； c.出菇試驗(yàn):用步驟a擴(kuò)大培養(yǎng)的雙核體Y和步驟b擴(kuò)大培養(yǎng)的雙核菌絲交配獲得的雙核體新菌株作出菇試驗(yàn)；評價(jià)選優(yōu)，對理想子實(shí)體個(gè)體組織分離，雙核化穩(wěn)定，以生物學(xué)性狀及產(chǎn)量穩(wěn)定的菌種作為生產(chǎn)母種，保存?zhèn)溆?，稱杏鮑菇一級種。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用黃芪秸桿、芪頭固體復(fù)合培養(yǎng)料生產(chǎn)杏鮑菇的方法，其特征在于:所述步驟a中纖維素酶與蝸牛酶的混合酶液的質(zhì)量百分比濃度為1.0%。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用黃芪秸桿、芪頭固體復(fù)合培養(yǎng)料生產(chǎn)杏鮑菇的方法，其特征在于:所述步驟a中制備凈化原生質(zhì)體懸液取中層液的過程為，取中層液2.0ml加3_5ml的濃度為0.5-0.7摩爾的MgSO4溶液搖勻，離心、洗滌，如此重復(fù)洗滌2次；最后取中層液2.0ml加8.0ml的濃度為0.5-0.7摩爾的MgSO4溶液制成凈化原生質(zhì)體懸液。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用黃芪秸桿、芪頭固體復(fù)合培養(yǎng)料生產(chǎn)杏鮑菇的方法，其特征在于:所述步驟a中取原生質(zhì)體懸液靜置培養(yǎng)過程為,取原生質(zhì)體懸液2.0ml加入7_9ml含0.4摩爾蔗糖的PDA培養(yǎng)液培養(yǎng)；然后取原生質(zhì)體液體培養(yǎng)液0.2ml涂附有綜合PDA培養(yǎng)基的平板或者涂含0.4摩爾蔗糖的附有綜合PDA培養(yǎng)基的平板。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用黃芪秸桿、芪頭固體復(fù)合培養(yǎng)料生產(chǎn)杏鮑菇的方法，其特征在于所述步驟B的具體過程如下: (1)制作二級固體發(fā)酵原種培養(yǎng)基:將顆粒狀木屑和麥麩過篩，選用0.425-0.850mm之間的顆粒為原料；按二級固體發(fā)酵原種培養(yǎng)基的配方混合原料，攪拌均勻，使含水量在60-65%之間；將二級固體發(fā)酵原種培養(yǎng)基裝入750ml的菌種瓶中，壓緊、壓平，每瓶裝濕料約 400_450g 或干料 180_240g,蓋上棉塞，0.13mpa-0.15mpa 壓力下，滅菌 80_100min ； 上述二級固體發(fā)酵原種培養(yǎng)基的重量配比為:木屑35.0份?45.0份、麥麩40.0份?55.0份、玉米粉2.0份?6.0份、黃丑粉1.0份?5.0份，磷酸氫二鉀0.05份-0.15份、磷酸二氫鉀0.05份-0.15份、硫酸鎂0.05份-0.15份；料水比為1: 1.25-1.50 ； (2)杏鮑菇二級固體發(fā)酵原種的培育:將權(quán)利要求1中的杏鮑菇一級種接種于步驟(O的杏鮑菇二級固體發(fā)酵原種培養(yǎng)基中，在23-25°C溫度下培養(yǎng)，菌絲長滿后即成； (3)液體菌種制作:將杏鮑菇液體菌種培養(yǎng)基分裝到三角瓶中(500ml三角瓶中裝杏鮑菇液體菌種培養(yǎng)基300ml，1000ml三角瓶裝中裝杏鮑菇液體菌種培養(yǎng)基600ml);蓋上棉塞，在0.13mpa-0.14mpa壓力下滅菌30min ;待培養(yǎng)基溫度降至30°C以下時(shí),接入步驟(2)得到的杏鮑菇二級固體發(fā)酵原種(500ml三角瓶中接入2接種勺杏鮑菇二級固體發(fā)酵原種，100ml三角瓶中接入4接種勺杏鮑菇二級固體發(fā)酵原種)；接完種的三角瓶在23-28°C溫度，120-180rpm轉(zhuǎn)速下振蕩器振蕩培養(yǎng)3_8天，成為杏鮑菇液體菌種； 上述杏鮑菇液體菌種培養(yǎng)基的重量配比為:麥麩2.0%?5.0%、玉米粉1.0%?3.0%、黃豆粉1.0%?2.0%、蛋白胨0.10%?0.2%、磷酸氫二鉀0.05%-0.15%、磷酸二氫鉀0.05%-0.15%、硫酸鎂 0.05%-0.10%，余量為水； (4)接種:將杏鮑菇二級固體發(fā)酵原種在無菌條件下?lián)v碎，并入盛有800ml無菌水的100ml滅菌三角瓶中，搖勻，在酒精火焰的保護(hù)下，到入發(fā)酵罐中，接種量為100L培養(yǎng)基接二級固體發(fā)酵原種2-5L ； (5)培養(yǎng):在24-26°C溫度、罐壓0.02-0.04mpa的條件下，培養(yǎng)時(shí)間3_8d，經(jīng)檢驗(yàn)合格后，為杏鮑菇液體菌種。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用黃芪秸桿、芪頭固體復(fù)合培養(yǎng)料生產(chǎn)杏鮑菇的方法，其特征在于:所述步驟D的具體過程如下: (1)菌包冷卻:將權(quán)利要求1的黃芪秸桿和芪頭固體復(fù)合培養(yǎng)料滅菌，將料袋置于潔凈處冷卻；在裝袋滅菌冷卻的全過程中，料袋最好盛放在周轉(zhuǎn)筐內(nèi)，減少搬動(dòng)，降低污染率； (2)液體菌種接種:當(dāng)料袋溫度冷卻至28°C以下時(shí)，即可置于接種箱或接種室內(nèi)接種；常規(guī)方法消毒，嚴(yán)格按無菌操作接種，直立出菇一頭接種，墻式出菇兩頭接種，細(xì)棒長袋橫臥出菇于袋身同側(cè)打三眼接種；每個(gè)接種點(diǎn)用接種槍移入杏鮑菇液體菌種5.0ml，封口 ； (3)發(fā)菌管理:接種完畢后，及時(shí)搬入事先清掃消毒的培養(yǎng)室內(nèi)發(fā)菌；發(fā)菌期間的主要工作是控溫、降濕、通風(fēng)、遮光、翻堆和清除雜菌；培養(yǎng)室氣溫應(yīng)控制在20-26°C之間，初期氣溫以25°C為宜；菌袋中的料溫上升后，室溫應(yīng)調(diào)低至20-25°C ;整個(gè)發(fā)菌階段，料溫都不要超過28 V ;料溫過高，輕則產(chǎn)生熱害阻礙發(fā)菌，影響后期產(chǎn)量；重則燒菌，導(dǎo)致栽培失?。? 在發(fā)菌階段，培養(yǎng)室應(yīng)遮光，維持黑暗，空氣相對濕度控制在70%以內(nèi)，經(jīng)常通風(fēng)換氣，保持空氣新鮮；每隔10 d翻堆一次，使菌袋發(fā)菌均勻，同時(shí)撿出污染菌袋；為加快菌絲生長，扎繩封口的菌袋應(yīng)在菌絲封面并吃料2 — 3cm后扎眼透氣；氣溫較高時(shí)，應(yīng)注意防蟲；在適宜的環(huán)境條件下，菌絲一般經(jīng)40 d可長滿菌袋； (4)催蕾:菌絲長滿袋后，繼續(xù)培養(yǎng)10d，積累更多的養(yǎng)分；當(dāng)氣溫下降至10—18 °C時(shí)，就可進(jìn)行催蕾管理； 為了使其出菇整齊一致，可先進(jìn)行搔菌處理；具體做法是:用小勺刮去袋口表層老菌種，并使袋口料面變平；搔菌時(shí)間一般在菌絲滿袋后即可進(jìn)行，因搔菌后還需要1d的菌絲恢復(fù)時(shí)間，菌袋在此期間可進(jìn)一步成熟； 如果袋口或菌袋中部已有原基形成，則不再進(jìn)行搔菌；可以直接進(jìn)入出菇管理；搔菌后要進(jìn)行保濕管理，用塑膜將袋口覆蓋，或用紙將套環(huán)口封??；約過10d，當(dāng)料面重新長出新的白色氣生菌絲時(shí)，即可噴水增濕催蕾；催蕾期間溫度控制在10-18°C之間，低于8°C或高于20°C都難于形成原基,最佳催蕾溫度為10—15°C ； 催蕾期間，空氣濕度應(yīng)維持在90% -95%，增加散射光刺激，加強(qiáng)通風(fēng)，保持空氣新鮮；經(jīng)過3-6d，即可出現(xiàn)白色原基，原基進(jìn)一步分化形成菇蕾； (5)出菇管理:當(dāng)原基分化形成I一 2 cm小菇蕾時(shí)，應(yīng)及時(shí)開袋進(jìn)行出菇期的管理；開袋過早，原基難于形成或出菇不整齊；開袋過遲，子實(shí)體己在袋內(nèi)長大，會(huì)形成畸形菇，嚴(yán)重時(shí)子實(shí)體會(huì)萎縮腐爛；將袋口塑膜向外翻卷下折至高于料面2— 3 cm，露出小菇蕾；如果幼菇過密，適當(dāng)疏蕾，汰劣存優(yōu)；短袋每袋留3— 4個(gè)，長袋每穴留1-3朵，以保持菇體形美、個(gè)大，商品率高；出菇階段，必須注意溫度、濕度、光照和通風(fēng)的調(diào)控。
【文檔編號】A01G1/04GK104126415SQ201410405340
【公開日】2014年11月5日 申請日期:2014年8月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月18日
【發(fā)明者】路等學(xué), 韓融冰, 趙玉卉, 宋建華, 宋建雲(yún) 申請人:甘肅省科學(xué)院生物研究所