一種促進(jìn)建蘭種子非共生萌發(fā)的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種促進(jìn)建蘭種子非共生萌發(fā)的方法，通過人工授粉獲得建蘭種子，當(dāng)授粉成功的果實(shí)生長到300~360天時(shí)，將種子播種在萌發(fā)培養(yǎng)基上進(jìn)行萌發(fā)，種子萌發(fā)后形成白色或無色透明的圓型球莖，之后轉(zhuǎn)變?yōu)榫G色根狀莖，培養(yǎng)25~30天時(shí)種子開始萌發(fā)，70天時(shí)萌發(fā)率達(dá)50~75%，從而實(shí)現(xiàn)了本發(fā)明的目的。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)有：種子萌發(fā)率高、萌發(fā)時(shí)間短、根狀莖質(zhì)量好，實(shí)際操作性強(qiáng)，應(yīng)用價(jià)值高等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)提高建蘭種子萌發(fā)效率和加快建蘭種苗生產(chǎn)具有非常積極的意義。
【專利說明】一種促進(jìn)建蘭種子非共生萌發(fā)的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及傳統(tǒng)名貴花卉建蘭種子的萌發(fā)方法，具體涉及一種基于無菌播種技術(shù)的建蘭種子非共生萌發(fā)的方法，具有重要應(yīng)用價(jià)值。
【背景技術(shù)】 [0002]建蘭(Cymbidiu ensifolium)又名四季蘭、夏蕙、劍蕙、秋蘭、劍葉蘭等，為蘭科 (Ocrhidacea)蘭屬(Cymbidium)多年生常綠草本植物,是國蘭中最具代表性的種類之一， 廣泛分布于東南亞各國，國內(nèi)主要分布在福建、臺(tái)灣、云南、四川、安徽、廣西和廣東等省區(qū)， 分布范圍較廣。建蘭花期獨(dú)特，一年能數(shù)次開花且花期較長，是眾多國蘭中唯一能多次開花的品種，建蘭花多、別致，花型、花色都很豐富，且具有非常宜人的香味。研究發(fā)現(xiàn)建蘭葉片能吸附粉塵、吸收苯和甲醛等有毒氣體，被譽(yù)為“環(huán)保衛(wèi)士”。與其他蘭科植物一樣， 由于生境破壞和過度采挖，野生建蘭已瀕臨滅絕，屬于“野生動(dòng)植物瀕危物種國際貿(mào)易公約，，(Convention on International Trade in Endangered species of Wild Fauna and Flora, CITES)附錄I中的保護(hù)對(duì)象而被禁止貿(mào)易。
[0003]建蘭種子非常微小，胚未分化，無胚乳或僅有少量胚乳，自然萌發(fā)率極低，且所需時(shí)間特別長，一般要6-12個(gè)月或更長時(shí)間才能萌發(fā)。而通過生物技術(shù)手段對(duì)蘭科植物種子進(jìn)行非共生萌發(fā)，可有效提高種子的萌發(fā)率和縮短萌發(fā)時(shí)間，有利于種苗生產(chǎn)取得成功，可產(chǎn)生良好的經(jīng)濟(jì)效益。因些，通過生物技術(shù)促進(jìn)建蘭種子非共生萌發(fā)可以有效提高萌發(fā)率并達(dá)到快速生產(chǎn)種苗的目的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種建蘭種子萌發(fā)率高、萌發(fā)時(shí)間短、根狀莖質(zhì)量好的非共生萌發(fā)方法。
[0005]本發(fā)明選擇觀賞價(jià)值高、市場需求量較大、且適應(yīng)性強(qiáng)的建蘭品種為材料，利用無菌播種技術(shù)對(duì)其種子進(jìn)行非共生萌發(fā)研究。通過人工授粉獲得建蘭種子，當(dāng)授粉成功的果實(shí)生長到30(T360天時(shí)，將種子播種在萌發(fā)培養(yǎng)基上進(jìn)行萌發(fā)，種子萌發(fā)后形成白色或無色透明的圓型球莖，之后轉(zhuǎn)變?yōu)榫G色根狀莖，培養(yǎng)25~30天時(shí)種子開始萌發(fā)，60天時(shí)萌發(fā)率達(dá)50~75%，從而實(shí)現(xiàn)了本發(fā)明的目的。
[0006]本發(fā)明一種促進(jìn)建蘭種子非共生萌發(fā)的方法，包括以下具體步驟:
(1)人工授粉:在花朵開放廣2天內(nèi)進(jìn)行自花授粉，將同一植株不同花朵上的花粉相互授粉，同時(shí)去除唇瓣并進(jìn)行套袋處理，防止外來花粉的干擾，5-7天后去除套袋，結(jié)實(shí)率 72.5~85% ；
(2)種子成熟度的選擇:授粉后采集不同生長天數(shù)的種子接種到萌發(fā)培養(yǎng)基上，進(jìn)行萌發(fā)試驗(yàn)，選擇人工授粉后生長300160天，蒴果充分膨大，果皮濃綠的果實(shí)種子為最佳材料；所述種子萌發(fā)培養(yǎng)基含:1/6MS、NAA6.(T10.0 mg L—1、椰子汁150~300 mL、活性炭
1.0~2.0 g L-1、蔗糖 20 g L-1、瓊脂 5.5 g L-1、pH 為 5.2 ;(3)種子播前處理:當(dāng)蒴果發(fā)育到30(T360天時(shí)，整果剪下先用自來水清洗干凈，然后依次用體積分?jǐn)?shù)為7(T75%的酒精溶液浸泡2-3分鐘后，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2%的升汞溶液浸泡消毒15~20分鐘，再用無菌水沖冼4-6次，用無菌濾紙吸干果實(shí)表面的水分，縱向切開果實(shí)，將種子用無菌紗布包好在含有KT 0.r0.3 mg mL' IBA 0.fl mg mL—1的溶液中浸泡 4-6分鐘，再用無菌水洗2-3次；
(4)播種及培養(yǎng):將處理好的種子接種到萌發(fā)培養(yǎng)基上，在溫度3(T32°C的黑暗條件下，培養(yǎng)25~50天時(shí)種子開始膨大形成無色透明或白色的圓型球莖，70天時(shí)萌發(fā)率達(dá) 50~75% ;所述種子萌發(fā)培養(yǎng)基含:1/6MS、NAA6.(Tl0.0 mg L'椰子汁150~300 mL、活性炭 1.0~2.0 g L—1、蔗糖 20 g L'瓊脂 5.5 g L—1、pH 為 5.2。
[0007]步驟(3)中所述種子浸泡溶液優(yōu)選為=KT 0.3 mg mL—1、IBA 0.2 mg mL—1。
[0008]步驟(2)和(4)中所述種子萌發(fā)培養(yǎng)基優(yōu)選為:1/6MS、NAA8.0 mg L_\椰子汁200 mL、活性炭 1.0 g L'鹿糖 20 g L'瓊脂 5.5 g L'pH 為 5.2。
[0009]所述培養(yǎng)基中，NAA為1-萘乙酸。
[0010]采用本方法，建蘭種子萌發(fā)所需時(shí)間為70天左右，萌發(fā)率達(dá)5(T75%。
[0011]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)有:種子萌發(fā)率高、萌發(fā)時(shí)間短、根狀莖質(zhì)量好，實(shí)際操作性強(qiáng)，應(yīng)用價(jià)值高等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)提高建蘭種子萌發(fā)效率和加快建蘭種苗生產(chǎn)具有非常積極的意義。
【具體實(shí)施方式】
[0012]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本
【發(fā)明內(nèi)容】
作進(jìn)一步的說明，但不是對(duì)本發(fā)明的限定。
[0013]實(shí)施例1
建蘭品種寶島仙女種子的非共生萌發(fā)方法:
(1)人工授粉:在花朵開放廣2天內(nèi)進(jìn)行自花授粉，將同一植株不同花朵上的花粉相互授粉，同時(shí)去除唇瓣并進(jìn)行套袋處理，防止外來花粉的干擾，5天后去除套袋，結(jié)實(shí)率 79.5% ；
(2)種子成熟度的選擇:授粉120天開始每30天采集一次果實(shí)進(jìn)行萌發(fā)試驗(yàn)，萌發(fā)培養(yǎng)基為:1/6MS、NAA8.0 mg L'椰子汁 200 mL、活性炭 1.0 g L—1、蔗糖 20 g L—1、瓊脂 5.5 g L' pH為5.2，在溫度25~28°C的黑暗條件下培養(yǎng)，結(jié)果以人工授粉后360天的種子為最佳材料；
(3)種子播前處理:當(dāng)蒴果發(fā)育到360天時(shí)，整果剪下先用自來水清洗干凈，然后依次用體積分?jǐn)?shù)為75%的酒精溶液浸泡2分鐘后，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2%的升汞溶液浸泡消毒20 分鐘，再用無菌水沖冼6次。用無菌濾紙吸干果實(shí)表面的水分，縱向切開果實(shí)，將種子用無菌紗布包好在含有KT 0.3 mg mL' IBA0.2 mg mL—1的溶液中浸泡5分鐘，再用無菌水洗3 次；
(4)播種及培養(yǎng):將處理好的種子接種到萌發(fā)培養(yǎng)基上，在溫度3(T32°C的黑暗條件下，培養(yǎng)25~30天時(shí)種子開始膨大形成無色透明的或白色的圓型球莖，70天時(shí)萌發(fā)率達(dá) 75%;所述種子萌發(fā)培養(yǎng)基含:1/6MS、NAA8.0 mg L_\椰子汁200 mL、活性炭1.0 g L_\蔗糖 20 g !^、瓊脂玨』g L—1、pH 為 5.2。
[0014]實(shí)施例2
建蘭品種荷花素種子的非共生萌發(fā)方法:(1)人工授粉:在花朵開放廣2天內(nèi)進(jìn)行自花授粉，將同一植株不同花朵上的花粉相互授粉，同時(shí)去除唇瓣并進(jìn)行套袋處理，防止外來花粉的干擾，5天后去除套袋，結(jié)實(shí)率85% ；
(2)種子成熟度的選擇:授粉120天開始每30天采集一次果實(shí)進(jìn)行萌發(fā)試驗(yàn)，萌發(fā)培養(yǎng)基為:1/6MS、NAA6.0 mg L'椰子汁 150 mL、活性炭 1.0 g L—1、蔗糖 20 g L—1、瓊脂 5.5 g L' pH為5.2，在溫度25~28°C的黑暗條件下培養(yǎng)，結(jié)果以人工授粉后300天的種子為最佳材料；
(3)種子播前處理:當(dāng)蒴果發(fā)育到300天時(shí)，整果剪下先用自來水清洗干凈，然后依次用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精溶液浸泡2分鐘后，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2%的升汞溶液浸泡消毒15 分鐘，再用無菌水沖冼6次。用無菌濾紙吸干果實(shí)表面的水分，縱向切開果實(shí)，將種子用無菌紗布包好在含有KT 0.2 mg mL'IBA 1.0 mg mL—1的溶液中浸泡5分鐘，再用無菌水洗3 次；
(4)播種及培養(yǎng):將處理好的種子接種到萌發(fā)培養(yǎng)基上，在溫度3(T32°C的黑暗條件下，培養(yǎng)4(T50天時(shí)種子開始膨大形成無色透明的或白色的圓型球莖，70天時(shí)萌發(fā)率達(dá) 50%;所述種子萌發(fā)培養(yǎng)基含:1/6MS、NAA6.0 mg L_\椰子汁150 mL、活性炭1.0 g L_\蔗糖 20 g !^、瓊脂玨』g L—1、pH 為 5.2。
[0015] 實(shí)施例3
建蘭品種七仙女種子的非共生萌發(fā)方法:
(1)人工授粉:在花朵開放廣2天內(nèi)進(jìn)行自花授粉，將同一植株不同花朵上的花粉相互授粉，同時(shí)去除唇瓣并進(jìn)行套袋處理，防止外來花粉的干擾，5天后去除套袋，結(jié)實(shí)率 72.5% ；
(2)種子成熟度的選擇:授粉120天開始每30天采集一次果實(shí)進(jìn)行萌發(fā)試驗(yàn)，萌發(fā)培養(yǎng)基為:1/6MS、NAA10.0 mg L—1、椰子汁 300 mL、活性炭 2.0 g L'蔗糖 20 g L'瓊脂 5.5 g L' pH為5.2，在溫度25~28°C的黑暗條件下培養(yǎng)，結(jié)果以人工授粉后300天的種子為最佳材料；
(3)種子播前處理:當(dāng)蒴果發(fā)育到300天時(shí)，整果剪下先用自來水清洗干凈，然后依次用體積分?jǐn)?shù)為70的酒精溶液浸泡2分鐘后，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2%的升汞溶液浸泡消毒15分鐘，再用無菌水沖冼6次。用無菌濾紙吸干果實(shí)表面的水分，縱向切開果實(shí)，將種子用無菌紗布包好在含有`KT 0.1 mg mL' IBA 0.1 mg mL—1的溶液中浸泡5分鐘，再用無菌水洗3 次；
(4)播種及培養(yǎng):將處理好的種子接種到萌發(fā)培養(yǎng)基上，在溫度3(T32°C的黑暗條件下，培養(yǎng)3(T50天時(shí)種子開始膨大形成無色透明的或白色的圓型球莖，70天時(shí)萌發(fā)率達(dá) 56.7% ;所述種子萌發(fā)培養(yǎng)基含:1/6MS、NAA10.0 mg L_\椰子汁300 mL、活性炭2.0 g L' 鹿糖 20 g L'瓊脂 5.5 g L' pH 為 5.2。
【權(quán)利要求】
1.一種促進(jìn)建蘭種子非共生萌發(fā)的方法，其特征在于包括以下步驟:(1)人工授粉:在花朵開放1-2天內(nèi)進(jìn)行自花授粉，將同一植株不同花朵上的花粉相互授粉，同時(shí)去除唇瓣并進(jìn)行套袋處理，防止外來花粉的干擾，5-7天后去除套袋；(2)種子成熟度的選擇:授粉后采集不同生長天數(shù)的種子接種到萌發(fā)培養(yǎng)基上，進(jìn)行萌發(fā)試驗(yàn)，選擇人工授粉后生長300160天，蒴果充分膨大，果皮濃綠的果實(shí)種子為最佳材料；所述種子萌發(fā)培養(yǎng)基含:1/6MS、NAA6.0-10.0 mg L—1、椰子汁150~300 mL、活性炭 1.0~2.0 g L-1、蔗糖 20 g L-1、瓊脂 5.5 g L-1、pH 為 5.2 ;(3)種子播前處理:當(dāng)蒴果發(fā)育到30(T360天時(shí)，整果剪下先用自來水清洗干凈，然后依次用體積分?jǐn)?shù)為7(T75%的酒精溶液浸泡2-3分鐘后，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2%的升汞溶液浸泡消毒15~20分鐘，再用無菌水沖冼4-6次，用無菌濾紙吸干果實(shí)表面的水分，縱向切開果實(shí)，將種子用無菌紗布包好在含有KT 0.r0.3 mg mL' IBA 0.fl mg mL—1的溶液中浸泡 4-6分鐘，再用無菌水洗2-3次；(4)播種及培養(yǎng):將處理好的種子接種到萌發(fā)培養(yǎng)基上，在溫度3(T32°C的黑暗條件下，培養(yǎng)25~50天時(shí)種子開始膨大形成無色透明或白色的圓型球莖；所述種子萌發(fā)培養(yǎng)基含:1/6MS、NAA6.0~10.0 mg L'椰子汁 150~300 mL、活性炭 1.0~2.0 g I71、蔗糖 20 g L' 瓊脂 5.5 g L'pH 為 5.2。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是:步驟(3)中所述種子播前處理溶液含:KT0.3 mg mL \ IBA 0.2 mg mL 1O
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是:步驟(2)和(4)中所述種子萌發(fā)培養(yǎng)基含: 1/6MS, NAA8.0 mg L—1、椰子汁 200 mL、活性炭 1.0 g L'蔗糖 20 g L'瓊 脂 5.5 g L'pH 為 5.2。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK103548669SQ201310498077
【公開日】2014年2月5日 申請(qǐng)日期:2013年10月22日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月22日
【發(fā)明者】唐鳳鸞, 趙志國, 黃寧珍, 何金祥, 付傳明, 石云平 申請(qǐng)人:廣西壯族自治區(qū)中國科學(xué)院廣西植物研究所