一種大型真菌去甲基化育種方法及裝置制造方法
【專利摘要】一種大型真菌去甲基化育種方法及裝置，該裝置有培養(yǎng)皿主體和培養(yǎng)皿蓋，所述培養(yǎng)皿主體包括底盤和側(cè)壁，所述培養(yǎng)皿主體內(nèi)設(shè)有至少一個(gè)與環(huán)形隔板；培養(yǎng)皿主體的中心區(qū)域?yàn)閱渭兣囵B(yǎng)基區(qū)域，加入培養(yǎng)基A；與培養(yǎng)皿主體的中心區(qū)域相鄰的誘變區(qū)域及連續(xù)的其他誘變區(qū)域，加入培養(yǎng)基A和抑制劑B；將待誘變菌株接種于培養(yǎng)皿的單純培養(yǎng)基區(qū)域，在適生長(zhǎng)條件下進(jìn)行倒置培養(yǎng)；中心區(qū)域的待誘變菌株菌絲生長(zhǎng)進(jìn)入鄰近的誘變區(qū)域，抑制劑進(jìn)入生長(zhǎng)菌絲產(chǎn)生作用；獲得誘變菌株。優(yōu)點(diǎn)是：育種裝置結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，使用方便；方法簡(jiǎn)單，誘變和檢測(cè)可以同步進(jìn)行，能快速、高效的對(duì)大型菌株進(jìn)行誘變。
【專利說(shuō)明】一種大型真菌去甲基化育種方法及裝置【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種大型真菌去甲基化育種方法及裝置。
【背景技術(shù)】
[0002]大型真菌(macrofungi)是菌物中形成大型子實(shí)體的一類真菌,泛指廣義上的蘑恭(mushroom)或蕈菌(macrofungi)。大型真菌是菌物中的一個(gè)重要類群,很多種類具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值，是目前菌物中最有開發(fā)應(yīng)用前景的一類。我國(guó)已有上千年的大型真菌栽培歷史，商業(yè)化栽培的大型真菌品種基本上都是經(jīng)人工育種而獲得。對(duì)于生化途徑清晰度菌株，通過(guò)代謝工程策略可以更容易地選擇菌種改良靶點(diǎn)；而對(duì)于生化途徑不清晰的菌株，也可以直接通過(guò)基因組改組、核糖體工程和表觀遺傳修飾等手段進(jìn)行遺傳選育，從而獲得理想表型。
[0003]通過(guò)遺傳選育手段直接阻斷和高表達(dá)表觀遺傳學(xué)靶點(diǎn)能夠有效地確定目的靶點(diǎn)與表型和次級(jí)代謝生物合成之間的關(guān)系，然而，除了少數(shù)模式真菌外，很多的大型真菌都缺乏高效的遺傳操作系統(tǒng)，因此在目前的技術(shù)條件下，很難使用分子遺傳學(xué)手段直接操縱非模式真菌的表觀遺傳。
[0004]隨著研究的深入，一系列的小分子物質(zhì)被篩選出來(lái)特異性地或者半特異性地抑制表觀遺傳修飾酶類，它們?cè)诤芏啻笮驼婢弦灿休^好的效果?？刂票碛^遺傳靶點(diǎn)的小分子能夠影響多種生理過(guò)程，其中包括對(duì)發(fā)育時(shí)序、表型控制和次級(jí)代謝產(chǎn)物生物合成的調(diào)控。在真菌細(xì)胞中，DNA甲基化與去甲基化是受DNA甲基轉(zhuǎn)移酶和DNA去甲基化酶調(diào)控的一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡過(guò)程，利用DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑可激活真菌的沉默基因的表達(dá)，從而改變菌株的表型和次級(jí)代謝產(chǎn)物圖譜。這種方法成本低，誘變率高，能夠同時(shí)進(jìn)行高通量篩選，而且對(duì)菌株的遺傳背景沒(méi)有過(guò)高要求。目前，DNA去甲基化的操作方法是液體搖瓶法，即把菌株與抑制劑在液體搖瓶中共同培養(yǎng)一段時(shí)間后，取出菌絲體在平板培養(yǎng)皿上涂布篩檢，誘變過(guò)程和檢測(cè)過(guò)程割裂成兩步。這種方法不但工作量大、周期長(zhǎng)，最主要無(wú)法實(shí)現(xiàn)誘變與檢測(cè)直接掛鉤，很多已經(jīng)發(fā)生改變的菌絲體由于未在培養(yǎng)皿上涂布導(dǎo)致無(wú)法被檢出，效率比較低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種操作簡(jiǎn)單、誘變和檢測(cè)可同步進(jìn)行、檢出效率高的大型真菌去甲基化育種方法及裝置。
[0006]本發(fā)明的技術(shù)解決方案是:
一種大型真菌去甲基化育種方法，其具體步驟是:
1.1、采用去甲基化育種大型真菌的裝置，有培養(yǎng)皿主體和與該培養(yǎng)皿主體配合使用的培養(yǎng)皿蓋，所述培養(yǎng)皿主體包括底盤和自底盤邊緣向上延伸圍成一圈的側(cè)壁，所述培養(yǎng)皿主體內(nèi)設(shè)有至少一個(gè)與側(cè)壁形成同心環(huán)的環(huán)形隔板將培養(yǎng)皿主體由內(nèi)至外分隔成獨(dú)立的培養(yǎng)區(qū)域；培養(yǎng)皿主體的中心區(qū)域?yàn)閱渭兣囵B(yǎng)基區(qū)域，加入培養(yǎng)基A ;與培養(yǎng)皿主體的中心區(qū)域相鄰的誘變區(qū)域及連續(xù)的其他誘變區(qū)域，加入培養(yǎng)基A和抑制劑B ;所述培養(yǎng)基A為瓊脂培養(yǎng)基，所述抑制劑B為小分子化學(xué)抑制劑，所述小分子化學(xué)抑制劑為核苷類DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑或非核苷類DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑；
1.2、將待誘變菌株接種于培養(yǎng)皿的單純培養(yǎng)基區(qū)域，在適生長(zhǎng)條件下進(jìn)行倒置培養(yǎng)；
1.3、中心區(qū)域的待誘變菌株菌絲生長(zhǎng)進(jìn)入鄰近的誘變區(qū)域，抑制劑進(jìn)入生長(zhǎng)菌絲產(chǎn)生作用；
1.4、獲得誘變菌株。
[0007]所述獨(dú)立誘變區(qū)域還加入指示劑C、輔助劑D中的至少一種，所述指示劑C為酸堿指示劑，在明確目的性誘變育種時(shí)添加，針對(duì)誘變目的物設(shè)計(jì)加入的指示劑成分，以快速直接的實(shí)現(xiàn)該目的，極大減少工作量；所述輔助劑D為菌株細(xì)胞壁通透性增強(qiáng)成分，以增加抑制劑B進(jìn)入待誘變菌株的接觸量，使誘變更快速。
[0008]所述核苷類DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑為5-氮雜胞苷、5-氮_2’ -脫氧胞苷、5_氟脫氧胞苷及脫氧胞苷衍生物中的一種，所述非核苷類DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑為聚苯復(fù)合物、
4-氨基苯酸衍生物中的一種。
[0009]所述待誘變菌株為大型真菌,所述培養(yǎng)基A為馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)、麥粒瓊脂培養(yǎng)基、麥芽酵母蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基(MYPA)、木屑麩皮蔗糖瓊脂培養(yǎng)基(SWSA)中的一種。
[0010]所述指示劑C為酚紅、甲基紅、特異基團(tuán)顯色劑中的至少一種，加入指示劑能夠?qū)崿F(xiàn)誘變與特異性目的物檢測(cè)同步；所述輔助劑D為二甲基亞砜或溶菌酶，輔助通透劑能夠增加菌株與抑制劑的接觸量。
[0011]所述環(huán)形隔板的數(shù)目>2個(gè)，環(huán)形隔板分隔的誘變區(qū)域中抑制劑B濃度由內(nèi)至外遞增，抑制劑濃度不夠未產(chǎn)生誘變，菌絲自由生長(zhǎng)進(jìn)入相鄰更高抑制劑濃度的誘變區(qū)，直至發(fā)生誘變。
[0012]一種大型真菌去甲基化育種裝置，有培養(yǎng)皿主體和與該培養(yǎng)皿主體配合使用的培養(yǎng)皿蓋，所述培養(yǎng)皿主體包括底盤和自底盤邊緣向上延伸圍成一圈的側(cè)壁，其特殊之處在于:所述培養(yǎng)皿主體內(nèi)設(shè)有至少一個(gè)與側(cè)壁形成同心環(huán)的環(huán)形隔板。
[0013]所述環(huán)形隔板的數(shù)目≥2個(gè)，所述環(huán)形隔板高度相等。
[0014]所述環(huán)形隔板的數(shù)目>2個(gè)，所述環(huán)形隔板高度由內(nèi)部環(huán)形隔板到外部環(huán)形隔板呈階梯遞增或遞減，以適用于氣生菌絲旺盛型真菌育種使用，有效控制進(jìn)入更高濃度誘變區(qū)域的菌絲量，增加菌絲在低濃度區(qū)域接觸時(shí)間。
[0015]所述環(huán)形隔板的數(shù)目為2個(gè)，將培養(yǎng)皿主體由內(nèi)至外分隔成獨(dú)立的培養(yǎng)區(qū)1、培養(yǎng)區(qū)I1、培養(yǎng)區(qū)III。
[0016]本發(fā)明的有益效果是:
1、育種方法簡(jiǎn)單，能快速、高效的對(duì)大型菌株進(jìn)行誘變。
[0017]2、誘變和檢測(cè)可以同步進(jìn)行，誘變后菌落形態(tài)變化也可直接檢測(cè)出；使用更少的試劑量，與液體搖瓶法相比，檢出周期短、效率高，省時(shí)省力。
[0018]3、與連續(xù)濃度梯度平板相比，同心環(huán)獨(dú)立區(qū)域增加了特定濃度下菌株的誘變空間，使誘變幾率增大。
[0019]4、育種裝置結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，使用方便，多級(jí)同心環(huán)結(jié)構(gòu)能夠確保誘變的連續(xù)性，一次操作實(shí)現(xiàn)多批次濃度檢出，更加直觀的觀察到每個(gè)培養(yǎng)區(qū)內(nèi)的菌株大小，誘變效率高，節(jié)約誘變時(shí)間。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0020]圖1是本發(fā)明(對(duì)應(yīng)實(shí)施例1)的示意圖；
圖2是圖1中該培養(yǎng)皿主體的結(jié)構(gòu)示意圖；
圖3是本發(fā)明(對(duì)應(yīng)實(shí)施例2)的示意圖；
圖4是圖2中該培養(yǎng)皿主體的結(jié)構(gòu)示意圖；
圖5是本發(fā)明(對(duì)應(yīng)實(shí)施例3)的示意圖；
圖6是圖3中該培養(yǎng)皿主體的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0021]圖中:1-培養(yǎng)皿蓋，2-培養(yǎng)皿主體，201-側(cè)壁，202-底盤，203-環(huán)形隔板，2001-培養(yǎng)區(qū)I，2002-培養(yǎng)區(qū)II，2003-培養(yǎng)區(qū)III。
【具體實(shí)施方式】
[0022]實(shí)施例1
如圖1、圖2所示，該大型真菌去甲基化育種裝置，有培養(yǎng)皿主體2和與該培養(yǎng)皿主體2配合使用的培養(yǎng)皿蓋I，所述培養(yǎng)皿主體2包括底盤202和自底盤202邊緣向上延伸圍成一圈的側(cè)壁201，所述培養(yǎng)皿主體2內(nèi)設(shè)有兩個(gè)與側(cè)壁201形成同心環(huán)的環(huán)形隔板203，將培養(yǎng)皿主體2由內(nèi)至外分隔成獨(dú)立的培養(yǎng)區(qū)I 2001、培養(yǎng)區(qū)II 2002、培養(yǎng)區(qū)III2003，所述環(huán)形隔板203高度由內(nèi)部環(huán)形隔板203到外部環(huán)形隔板203呈階梯遞減，以控制進(jìn)入培養(yǎng)區(qū)III 2003的菌絲量，增加菌絲在培養(yǎng)區(qū)II 2002接觸時(shí)間。
[0023]平燕菌株育種ostreatus):
培養(yǎng)區(qū)I 2001為單純培養(yǎng)基區(qū)域，加入PDA培養(yǎng)基；
培養(yǎng)區(qū)II 2002、培養(yǎng)區(qū)III 2003為誘變區(qū)域，加入經(jīng)0.2 μ m無(wú)菌濾膜過(guò)濾除菌的5-氮雜胞苷溶液和50°C PDA培養(yǎng)基混合物；培養(yǎng)區(qū)II 2002、培養(yǎng)區(qū)III 2003中5-氮雜胞苷終濃度分別為1X10_3M、1X10_2M，培養(yǎng)區(qū)II 2002抑制劑濃度不夠未產(chǎn)生誘變，菌絲自由生長(zhǎng)進(jìn)入相鄰培養(yǎng)區(qū)III 2003中更高抑制劑濃度的誘變區(qū)。
[0024]將待誘變菌株平菇菌株接種于培養(yǎng)皿的培養(yǎng)區(qū)I 2001，28°C避光倒置培養(yǎng)；培養(yǎng)區(qū)I 2001的平菇菌株生長(zhǎng)進(jìn)入鄰近的培養(yǎng)區(qū)II 2002，培養(yǎng)區(qū)II 2002的平菇菌株生長(zhǎng)進(jìn)入鄰近的培養(yǎng)區(qū)III 2003，獲得誘變菌株。采用HPLC法或限制行酶切法確認(rèn)誘變發(fā)生，篩檢生長(zhǎng)速度加快或菌落形態(tài)變厚的菌絲體進(jìn)行出菇培養(yǎng)試驗(yàn)。
[0025]實(shí)施例2
如圖3、圖4所示，該大型真菌去甲基化育種裝置，有培養(yǎng)皿主體2和與該培養(yǎng)皿主體2配合使用的培養(yǎng)皿蓋I，所述培養(yǎng)皿主體2包括底盤202和自底盤202邊緣向上延伸圍成一圈的側(cè)壁201，所述培養(yǎng)皿主體2內(nèi)設(shè)有兩個(gè)與側(cè)壁201形成同心環(huán)的環(huán)形隔板203，將培養(yǎng)皿主體2由內(nèi)至外分隔成獨(dú)立的培養(yǎng)區(qū)I 2001、培養(yǎng)區(qū)II 2002、培養(yǎng)區(qū)III2003，所述環(huán)形隔板203聞度相等。
[0026]香燕菌株育種(Z<9/?ii/w7aedodes):
培養(yǎng)區(qū)I 2001為單純培養(yǎng)基區(qū)域，加入PDA培養(yǎng)基；培養(yǎng)區(qū)II 2002、培養(yǎng)區(qū)III 2003為誘變區(qū)域，加入經(jīng)0.2 μ m無(wú)菌濾膜過(guò)濾除菌的5-氮-2’ -脫氧胞苷和50°C PDA培養(yǎng)基混合物；培養(yǎng)區(qū)II 2002、培養(yǎng)區(qū)III 2003中5-氮-2’ -脫氧胞苷終濃度分別為I X 10_3M、I X 10_2M，培養(yǎng)區(qū)II 2002抑制劑濃度不夠未產(chǎn)生誘變，菌絲自由生長(zhǎng)進(jìn)入相鄰培養(yǎng)區(qū)III 2003中更高抑制劑濃度的誘變區(qū)。
[0027]將待誘變菌株香菇菌株接種于培養(yǎng)皿的培養(yǎng)區(qū)I 2001，26°C避光倒置培養(yǎng)；培養(yǎng)區(qū)I 2001的香菇菌株生長(zhǎng)進(jìn)入鄰近的培養(yǎng)區(qū)II 2002，培養(yǎng)區(qū)II 2002的香菇菌株生長(zhǎng)進(jìn)入鄰近的培養(yǎng)區(qū)III 2003，獲得誘變菌株。采用HPLC法或限制行酶切法確認(rèn)誘變發(fā)生，篩檢粗壯菌絲體進(jìn)行出菇培養(yǎng)試驗(yàn)。
[0028]實(shí)施例3
如圖5、圖6所示，該大型真菌去甲基化育種裝置，有培養(yǎng)皿主體2和與該培養(yǎng)皿主體2配合使用的培養(yǎng)皿蓋I，所述培養(yǎng)皿主體2包括底盤202和自底盤202邊緣向上延伸圍成一圈的側(cè)壁201，所述培養(yǎng)皿主體2內(nèi)設(shè)有一個(gè)與側(cè)壁201形成同心環(huán)的環(huán)形隔板203，將培養(yǎng)皿主體2由內(nèi)至外分隔成獨(dú)立的培養(yǎng)區(qū)I 2001、培養(yǎng)區(qū)II 2002。
[0029]蛹蟲草菌株育種(Cbr辦ce/75.mi Ii tar is):
培養(yǎng)區(qū)I 2001為單純培養(yǎng)基區(qū)域，加入麥粒瓊脂培養(yǎng)基；
培養(yǎng)區(qū)II 2002為誘變區(qū)域，加入培養(yǎng)基A、抑制劑B、指示劑C和輔助劑D ;培養(yǎng)基A為麥粒瓊脂培養(yǎng)基，抑制劑B為5-氮雜胞苷溶液，指示劑C使用酚紅，輔助劑D使用二甲基亞砜，5-氮雜胞苷溶液經(jīng)0.2 μ m無(wú)菌濾膜過(guò)濾除菌，酚紅用量0.025g/L與麥粒瓊脂培養(yǎng)基共滅菌后，降溫至50°C與5-氮雜胞苷混勻，使5-氮雜胞苷溶液濃度為I X 10_3M。將待誘變菌株蛹蟲草菌株接種于培養(yǎng)皿的培養(yǎng)區(qū)I 2001，25°C避光倒置培養(yǎng)；培養(yǎng)區(qū)I 2001的蛹蟲草菌株生長(zhǎng)進(jìn)入鄰近的培養(yǎng)區(qū)II 2002，獲得誘變菌株。采用HPLC法或限制行酶切法確認(rèn)誘變發(fā)生，篩檢變色明顯或速度提升的菌絲體進(jìn)行出菇培養(yǎng)試驗(yàn)。
[0030]實(shí)施例4
杏鮑燕菌株育種(/7Zetfroiw1S eryngii ):
方法及裝置與香菇菌株育種Uentinula edodes)實(shí)施例2相同，培養(yǎng)基替換為MYPA培養(yǎng)基，抑制劑替換為5-氟脫氧胞苷。25°C避光倒置培養(yǎng)。獲得誘變菌株。采用HPLC法或限制行酶切法確認(rèn)誘變發(fā)生，篩檢粗壯菌絲體進(jìn)行出菇培養(yǎng)試驗(yàn)。
[0031]實(shí)施例5
金針燕菌株育種velutiper)..方法及裝置與香菇菌株育種Uentinula edodes)實(shí)施例2相同，培養(yǎng)基替換為SWSA培養(yǎng)基，抑制劑替換為4-氨基苯酸衍生物。23°C避光倒置培養(yǎng)。獲得誘變菌株。采用HPLC法或限制行酶切法確認(rèn)誘變發(fā)生，篩檢粗壯菌絲體進(jìn)行出菇培養(yǎng)試驗(yàn)。
[0032]實(shí)施例6
滑燕菌株育種ia nameko ):
方法及裝置與香菇菌株育種iLentiimla edodes)實(shí)施例2相同，培養(yǎng)基替換為加富PDA培養(yǎng)基，抑制劑替換為5-氮雜胞苷。22°C避光倒置培養(yǎng)。獲得誘變菌株。采用HPLC法或限制行酶切法確認(rèn)誘變發(fā)生，篩檢粗壯菌絲體進(jìn)行出菇培養(yǎng)試驗(yàn)。
【權(quán)利要求】
1.一種大型真菌去甲基化育種方法，其特征是: 具體步驟是: 1.1、采用去甲基化育種大型真菌的裝置，有培養(yǎng)皿主體和與該培養(yǎng)皿主體配合使用的培養(yǎng)皿蓋，所述培養(yǎng)皿主體包括底盤和自底盤邊緣向上延伸圍成一圈的側(cè)壁，所述培養(yǎng)皿主體內(nèi)設(shè)有至少一個(gè)與側(cè)壁形成同心環(huán)的環(huán)形隔板將培養(yǎng)皿主體由內(nèi)至外分隔成獨(dú)立的培養(yǎng)區(qū)域；培養(yǎng)皿主體的中心區(qū)域?yàn)閱渭兣囵B(yǎng)基區(qū)域，加入培養(yǎng)基A ;與培養(yǎng)皿主體的中心區(qū)域相鄰的誘變區(qū)域及連續(xù)的其他誘變區(qū)域，加入培養(yǎng)基A和抑制劑B ;所述培養(yǎng)基A為瓊脂培養(yǎng)基，所述抑制劑B為小分子化學(xué)抑制劑，所述小分子化學(xué)抑制劑為核苷類DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑或非核苷類DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑； 1.2、將待誘變菌株接種于培養(yǎng)皿的單純培養(yǎng)基區(qū)域，在適生長(zhǎng)條件下進(jìn)行倒置培養(yǎng)； 1.3、中心區(qū)域的待誘變菌株菌絲生長(zhǎng)進(jìn)入鄰近的誘變區(qū)域，抑制劑進(jìn)入生長(zhǎng)菌絲產(chǎn)生作用； 1.4、獲得誘變菌株。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大型真菌去甲基化育種方法，其特征是:所述獨(dú)立誘變區(qū)域還加入指示劑C、輔助劑D中的至少一種，所述指示劑C為酸堿指示劑，在明確目的性誘變育種時(shí)添加，針對(duì)誘變目的物設(shè)計(jì)加入的指示劑成分；所述輔助劑D為菌株細(xì)胞壁通透性增強(qiáng)成分。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大型真菌去甲基化育種方法，其特征是:所述核苷類DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑為5-氮雜胞苷、5-氮-2’ -脫氧胞苷、5-氟脫氧胞苷及脫氧胞苷衍生物中的一種，所述非核苷類DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑為聚苯復(fù)合物、4-氨基苯酸衍生物中的一種。.
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大型真菌去甲基化育種方法，其特征是:所述待誘變菌株為大型真菌，所述培養(yǎng)基A為馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基、麥粒瓊脂培養(yǎng)基、麥芽酵母蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基、木屑麩皮蔗糖瓊脂培養(yǎng)基中的一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的大型真菌去甲基化育種方法，其特征是:所述指示劑C為酚紅、甲基紅、特異基團(tuán)顯色劑中的至少一種；所述輔助劑D為二甲基亞砜或溶菌酶。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大型真菌去甲基化育種方法，其特征是:所述環(huán)形隔板的數(shù)目> 2個(gè)，環(huán)形隔板分隔的誘變區(qū)域中抑制劑B濃度由內(nèi)至外遞增，抑制劑濃度不夠未產(chǎn)生誘變，菌絲自由生長(zhǎng)進(jìn)入相鄰更高抑制劑濃度的誘變區(qū)，直至發(fā)生誘變。
7.一種大型真菌去甲基化育種裝置,有培養(yǎng)皿主體和與該培養(yǎng)皿主體配合使用的培養(yǎng)皿蓋，所述培養(yǎng)皿主體包括底盤和自底盤邊緣向上延伸圍成一圈的側(cè)壁，其特征是:所述培養(yǎng)皿主體內(nèi)設(shè)有至少一個(gè)與側(cè)壁形成同心環(huán)的環(huán)形隔板。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的大型真菌去甲基化育種裝置，其特征是:所述環(huán)形隔板的數(shù)目> 2個(gè)，所述環(huán)形隔板高度相等。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的大型真菌去甲基化育種裝置，其特征是:所述環(huán)形隔板的數(shù)目> 2個(gè)，所述環(huán)形隔板高度由內(nèi)部環(huán)形隔板到外部環(huán)形隔板呈階梯遞增或遞減。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的大型真菌去甲基化育種裝置，其特征是:所述環(huán)形隔板的數(shù)目為2個(gè)，將培養(yǎng)皿主體由內(nèi)至外分隔成獨(dú)立的培養(yǎng)區(qū)1、培養(yǎng)區(qū)I1、培養(yǎng)區(qū)III。
【文檔編號(hào)】A01G1/04GK103460993SQ201310377815
【公開日】2013年12月25日 申請(qǐng)日期:2013年8月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月27日
【發(fā)明者】朱巍巍, 李莉, 池景良, 趙新海, 張慶華, 關(guān)艷麗, 鐘麗娟 申請(qǐng)人:遼寧省微生物科學(xué)研究院