專利名稱：一種富含抗菌肽蠅蛆蛋白粉及其制備方法和飼料添加劑的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明屬于蠅蛆蛋白粉制備領域，一種富含抗菌肽蠅蛆蛋白粉及其制備方法和飼料添加劑。
背景技術(shù)：
隨著現(xiàn)代水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)規(guī)?；图s化的發(fā)展，使用綠色無公害水產(chǎn)飼料添加劑得到了人們的高度重視。20世紀80年代后期，全國一些大城市開始研究和開發(fā)“無公害食品”。各級政府制定了相應的法律、法規(guī)。我國加入WTO以后，各地掀起了“無公害”、“綠色”水產(chǎn)品熱潮。魚粉一直以來是水產(chǎn)飼料中不可缺少的優(yōu)質(zhì)蛋白源，但其使用存在價格高、 使用量大等諸多問題。另外，水產(chǎn)養(yǎng)殖中還存在諸多用藥問題，造成魚體及水體中抗生素、重金屬等的殘留和蓄積，嚴重的影響了我國無公害水產(chǎn)養(yǎng)殖的發(fā)展。因此，尋找一種蛋白來源豐富、質(zhì)量良好，同時可減少或取代抗生素使用的新型綠色飼料添加劑具有很大的實用意義。蠅蛆蛋白是一種重要的蛋白質(zhì)資源且極具開發(fā)潛力。大量的營養(yǎng)分析結(jié)果表明，蠅蛆的蛋白質(zhì)含量豐富，干蛋白質(zhì)含量高達43. 62% 55. 26%，各種氨基酸含量均要高于魚粉，必需氨基酸含量是魚粉的2. 3倍。另外，蠅蛆具有獨特的免疫功能，其體內(nèi)含有一種很強殺菌作用的“抗菌活性肽”，這種活性肽只要萬分之一濃度就足以殺死入侵的病菌。但是這種活性肽在蠅蛆里的含量很低，因此制備得到的蠅蛆蛋白粉中抗菌活性肽的含量也很低。目前對其產(chǎn)品的開發(fā)研究較少，陸婕等人(家蠅蛆抗菌肽提取工藝研究，2007，昆蟲學報)利用加熱-層析發(fā)提取抗菌肽提取得率僅為O. 26%。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服現(xiàn)有技術(shù)中蠅蛆蛋白粉中抗菌肽含量的不足，本發(fā)明所要解決首要技術(shù)問題在于提供一種富含抗菌肽蠅蛆蛋白粉的制備方法。本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問題在于提供一種由上述富含抗菌肽蠅蛆蛋白粉的制備方法制備得到的富含抗菌肽蠅蛆蛋白粉。本發(fā)明所要解決的再一技術(shù)問題在于提供一種飼料添加劑。本發(fā)明所要解決的上述技術(shù)問題通過以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)
一種富含抗菌肽蠅蛆蛋白粉的制備方法，包括如下步驟(1)飼養(yǎng)成蠅，誘集產(chǎn)卵，孵化后，以飼料喂養(yǎng)幼蟲；(2)對幼蟲進行超聲誘導；(3)繼續(xù)飼養(yǎng)12 48小時，收集幼蟲，經(jīng)清洗，消毒處理后，進行組織勻漿搗碎；(4)過濾，濾液經(jīng)(T5°C處理，去除表面脂類成分，干燥后即得；
步驟(2)所述的幼蟲為3齡幼蟲；步驟(2)所述的超聲誘導，其條件為3(Γ40千赫茲，4(Γ60瓦處理f 2分鐘，間隔5 15分鐘，重復處理2 4次。本發(fā)明所述的蠅優(yōu)選為家蠅，其學名為ifesca domestica Linnaeus。作為一種優(yōu)選方案步驟(I)中所述的誘集產(chǎn)卵是通過將交尾后的成蠅，放入集卵杯，在誘集產(chǎn)卵物質(zhì)的作用下進行的；所述的誘集產(chǎn)卵物質(zhì)為麥麩+豬血+0.01重量％氨水。作為一種優(yōu)選方案步驟(I)中所述的飼料為麥麩+豬血+酵母。作為一種優(yōu)選方案步驟(2)中所述的超聲誘導，條件為35千赫茲，50瓦處理I分鐘，間隔10分鐘，重復處理3次。作為一種優(yōu)選方案步驟(3)中所述的飼養(yǎng)時間為24小時。收集幼蟲可利用負趨光性收集。作為一種優(yōu)選方案步驟(4)中所述的過濾為80目紗網(wǎng)過濾；濾液經(jīng)0°C處理。一種由上述制備方法制備得到的富含抗菌肽蠅蛆蛋白粉。
一種飼料添加劑，包含本發(fā)明所述的富含抗菌肽蠅蛆蛋白粉及輔料。所述的輔料優(yōu)選為玉米淀粉。所述的玉米淀粉,其含量為添加劑總重量的5%。本發(fā)明所述的飼料添加劑的制備方法，由如下步驟制備得到將本發(fā)明所述的富含抗菌肽蠅蛆蛋白粉，加入輔料，制粒即得。作為一種優(yōu)選方案一種飼料添加劑的制備方法，由如下步驟制備得到將本發(fā)明所述的富含抗菌肽蠅蛆蛋白粉，加入5重量％的玉米淀粉進行冷制粒，加工成顆粒型添加劑。本發(fā)明所述的飼料添加劑應用水產(chǎn)養(yǎng)殖中?？纱龠M水產(chǎn)品生長，增強水產(chǎn)品抗病能力。本發(fā)明的有益效果(1)本發(fā)明采用特定條件下的超聲刺激方式對幼蟲進行誘導，使得家蠅體內(nèi)小分子抗菌肽類活性成分含量顯著升高；(2)本發(fā)明所使用的超聲誘導方法簡單，適合于富含抗菌肽蛋白粉的規(guī)?；a(chǎn)；(3)飼料中添加15重量％飼料添加劑對凡納濱對蝦、鯽魚等有一定的促生長作用，其肉質(zhì)改善，鮮味氨基酸含量升高，而且對養(yǎng)殖水體不會造成新的污染；(4)體外實驗結(jié)果顯示，本發(fā)明所述的飼料添加劑對熒光假單胞菌、鰻弧菌、豚鼠氣單胞菌、鏈球菌等均具有一定的抑制作用；體內(nèi)實驗結(jié)果表明，對熒光假單胞菌、鰻弧菌等病原微生物引起的魚及蝦體感染具有一定的防治作用。


圖I :富含抗菌肽蠅蛆蛋白粉和飼料添加劑的制備方法工藝流程圖2 :飼料添加劑對水體PH、鹽度、氨氮含量、亞硝酸氮、總堿度的影響圖。
具體實施例方式以下結(jié)合具體實施例來進一步解釋本發(fā)明，但實施例對發(fā)明本身不做任何形式的限定。實施例I富含抗菌肽蠅蛆蛋白粉及飼料添加劑的制備
家蠅來源于廣東省疾病預防與控制中心，并經(jīng)長時間馴化處理。待成蠅交尾后，放入集卵杯(誘集產(chǎn)卵物質(zhì)麥麩+豬血+0.01%氨水)，收集蠅卵，孵化后，轉(zhuǎn)入基礎飼料(麥麩+豬血+酵母)喂養(yǎng)；幼蟲發(fā)育至3齡，進行超聲誘導，條件如下35千赫茲，50瓦處理I分鐘，間隔10分鐘，重復處理3次；繼續(xù)飼養(yǎng)24小時，利用負趨光性收集幼蟲；經(jīng)清洗、消毒處理后，進行組織勻漿搗碎；80目紗網(wǎng)過濾，濾液經(jīng)O攝氏度低溫預處理40分鐘，去除表面脂類成分；噴霧干燥得富含抗菌肽蠅蛆蛋白粉；然后加入適量輔料(玉米淀粉5重量％)進行冷制粒，加工成顆粒型飼料添加劑。將本實施例得到的飼料添加劑進行實施例3飛所示的實驗，結(jié)果見具體實施例。實施例2
將本發(fā)明經(jīng)特定的超聲(35千赫茲，50瓦處理I分鐘，間隔10分鐘，重復處理3次)誘導處理家蠅幼蟲后得到的富含抗菌肽蠅蛆蛋白粉，與不經(jīng)超聲誘導處理步驟得到的蠅蛆蛋白粉，分別經(jīng)葡聚糖凝膠過濾，用BCA法檢測分子量< 30KD的成分，并測定其抑菌活性。結(jié)果顯示經(jīng)誘導處理后，< 30KD的成分占蠅蛆蛋白粉的比例由原來的(不經(jīng)特定超聲誘導幼蟲步驟得到的蠅蛆蛋白粉)(8. 92±0. 13)重量％提升到(21. 33±1. 22)重量％。采用藥敏試紙檢測的方法進行檢驗，發(fā)現(xiàn)分子量< 30KD的成分在濃度為40μ g/ml時對大腸埃 希菌、金黃色葡萄球菌、幽門螺桿菌等有明顯的抗菌作用，抑制率分別為(82. 43 ±2.53) %、(57. 23±3. 21) %、(45. 66±1. 87) %，實驗證明抗菌活性肽(分子量< 30KD的成分)的含量大大提聞。實施例3飼料添加劑對無公害海水養(yǎng)殖凡納濱對蝦生長性能及水質(zhì)的影響 分別以5重量％ (A組)，10重量％ (B組)和15重量％ (C組)的飼料添加劑替代D組
中的魚粉，D組為基礎飼料對照組(含魚粉15重量％)。用上述4種飼料進行了一個為期8周的養(yǎng)殖試驗。試驗期間每天投喂飼料4次。養(yǎng)殖試驗結(jié)束時，分別計算體長、全長和背甲寬等生長性能。實驗組C的體長，全長和背甲寬的增長均大于對照組D，實驗組C的體長，全長和背甲寬的增長均大于實驗組A和B。AB⑶各組對蝦的存活率分別為88. O %，90. 3 %，96. O %和90. 0%，AB組與對照組對蝦的存活率基本一致，而C組與對照組對蝦的存活率具有顯著差異，實驗組顯著高于對照組(P〈O. 05)。這可以說明使用適量飼料添加劑替代魚粉飼養(yǎng)對蝦可以顯著提高對蝦的存活率。實驗組與對照組對蝦生長情況見表I。通過檢測養(yǎng)殖水體的PH、鹽度、氨氮含量、亞硝酸氮、總堿度等，發(fā)現(xiàn)使用飼料添加劑的三個組，水質(zhì)情況同對照組沒有較大的差別，說明使用飼料添加劑不會對水質(zhì)增加污染。具體數(shù)據(jù)見附圖2。
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，粗I -ΙΙΜΜΓIi4 2I I IJiIO ·<Γ21 I iO I IC ^6實施例3飼料添加劑對無公害淡水養(yǎng)殖鯽魚生長性能及水質(zhì)的影響
鯽魚魚苗購自廣東佛山某水產(chǎn)養(yǎng)殖場，選取同一批次、健康魚苗(規(guī)格為50 70g)，進行12周養(yǎng)殖試驗。其中，I組為對照組，投喂基礎飼料(含魚粉)；其余3組為試驗組，分別投喂基礎飼料中含飼料添加劑5重量％、10重量％和15重量％的試驗飼料。通過添加劑對生長的影響效果測定，發(fā)現(xiàn)10重量％添加劑組即具有最高的相對增重率和特定生長率，具有最小的飼料系數(shù)。以添加劑替代飼料中的魚粉進行12周養(yǎng)殖試驗，可顯著提高鯽魚的相對增重率和特定生長率，降低飼料系數(shù)，在一定程度上增強腸和肝胰臟的消化酶活力，提高飼料效率，并在一定程度上提高肌肉的含肉率。此外，該添加劑可顯著提高中性粒細胞殺菌功能，顯著促進活性氧的產(chǎn)生以提高呼吸爆發(fā)能力，并能顯著提高溶菌酶活性、超氧化物歧化酶活性和總抗氧化能力，增強魚體抗病能力。且魚肉中總游離氨基酸及鮮味氨基酸(主要包括天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸和丙氨酸)的含量升高，肉質(zhì)鮮嫩口感好。具體數(shù)據(jù)見表2 6。
權(quán)利要求
1.一種富含抗菌肽蠅蛆蛋白粉的制備方法，其特征在于由包括如下步驟(1)飼養(yǎng)成蠅，誘集產(chǎn)卵，孵化后，以飼料喂養(yǎng)幼蟲；(2)對幼蟲進行超聲誘導；(3)繼續(xù)飼養(yǎng)12 48小時，收集幼蟲，經(jīng)清洗，消毒處理后，進行組織勻漿搗碎；(4)過濾，濾液經(jīng)(T5°C處理，去除表面脂類成分，干燥后即得； 步驟(2)所述的幼蟲為3齡幼蟲；步驟(2)所述的超聲誘導，其條件為3(Γ40千赫茲，4(Γ60瓦處理f 2分鐘，間隔5 15分鐘，重復處理2 4次。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的富含抗菌肽蠅蛆蛋白粉的制備方法，其特征在于步驟(I)中所述的誘集產(chǎn)卵是通過將交尾后的成蠅，放入集卵杯，在誘集產(chǎn)卵物質(zhì)的作用下進行的；所述的誘集產(chǎn)卵物質(zhì)為麥麩+豬血+0. 01重量％氨水。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的富含抗菌肽蠅蛆蛋白粉的制備方法，其特征在于步驟(I)中所述的飼料為麥麩+豬血+酵母。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的富含抗菌肽蠅蛆蛋白粉的制備方法，其特征在于步驟(2)中所述的超聲誘導，條件為35千赫茲，50瓦處理I分鐘，間隔10分鐘，重復處理3次。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的富含抗菌肽蠅蛆蛋白粉的制備方法，其特征在于步驟(3)中所述的飼養(yǎng)時間為24小時。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的富含抗菌肽蠅蛆蛋白粉的制備方法，其特征在于步驟(4)中所述的過濾為80目紗網(wǎng)過濾；濾液經(jīng)0°C處理。
7.由權(quán)利要求I 6任一項所述的富含抗菌肽蠅蛆蛋白粉的制備方法制備得到的富含抗菌肽蠅蛆蛋白粉。
8.—種飼料添加劑，其特征在于包含權(quán)利要求7所述的富含抗菌肽蠅蛆蛋白粉及輔料。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的飼料添加劑，其特征在于所述的輔料為玉米淀粉。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的飼料添加劑，其特征在于所述的玉米淀粉，其含量為飼料添加劑總重量的5%。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種富含抗菌肽蠅蛆蛋白粉及其制備方法和飼料添加劑。所述的富含抗菌肽蠅蛆蛋白粉，由包括如下步驟的方法制備得到(1)飼養(yǎng)成蠅，誘集產(chǎn)卵，孵化后，以飼料喂養(yǎng)幼蟲；(2)對幼蟲進行超聲誘導；(3)繼續(xù)飼養(yǎng)，收集幼蟲，經(jīng)清洗，消毒處理后，進行組織勻漿搗碎；(4)過濾，濾液經(jīng)0~5℃處理，去除表面脂類成分，干燥后即得蛋白粉；蛋白粉經(jīng)加入輔料，制粒即得飼料添加劑。本發(fā)明采用特定條件下的超聲刺激方式對幼蟲進行誘導，使得家蠅體內(nèi)小分子抗菌肽類活性成分含量顯著升高，飼料添加劑對凡納濱對蝦、鯽魚等有一定的促生長、增強抗病作用。
文檔編號A01K67/033GK102894186SQ20121038591
公開日2013年1月30日 申請日期2012年10月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月12日
發(fā)明者朱家勇, 褚夫江, 金小寶, 李小波, 許銀葉, 梅寒芳 申請人:廣東藥學院