專(zhuān)利名稱(chēng)：大白豬優(yōu)質(zhì)高效抗逆性配套系的培育方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于動(dòng)物遺傳育種與繁殖、分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及優(yōu)質(zhì)高效大白 豬抗逆性配套系的培育方法。
背景技術(shù)：
建國(guó)以來(lái)，特別是改革開(kāi)放以來(lái)，外種豬的引進(jìn)、選育和利用工作取得了長(zhǎng)足 進(jìn)步，對(duì)提高全國(guó)生豬出欄率(1980年為62. 1%，2003年為129. 9%)、胴體重(1980年為 57. Ikg, 2003年為76. Wig)、胴體瘦肉率、良種覆蓋率和經(jīng)濟(jì)效益起到了重要作用。綜觀當(dāng) 前國(guó)內(nèi)養(yǎng)豬業(yè)規(guī)模化瘦肉型種豬繁育體系中，洋三元雜種商品肉豬占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)，1998年開(kāi) 始的全國(guó)性種豬遺傳評(píng)估工作和《全國(guó)種豬遺傳評(píng)估方案(試行)》的頒布與實(shí)施，較大型豬 人工授精(Al)中心的開(kāi)始建立，長(zhǎng)白豬、大白豬與雙肌臀豬育種協(xié)作組活動(dòng)的開(kāi)展等，使得 我國(guó)外種豬的生產(chǎn)性能測(cè)定與遺傳評(píng)估工作正朝著規(guī)范化與聯(lián)合、統(tǒng)一的方向穩(wěn)步發(fā)展， 群間遺傳聯(lián)系的建立也開(kāi)始邁出可喜的一步。然而，很明顯，可以說(shuō)我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)具有強(qiáng)大的 肉豬生產(chǎn)系統(tǒng)，也就是常說(shuō)的“我國(guó)是養(yǎng)豬大國(guó)”，但是在“金字塔”繁育體系中頂端核心種 豬資源長(zhǎng)期依賴(lài)進(jìn)口。在很長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)，對(duì)于種豬，我國(guó)都處于“引種一維持一退化一 再引種”的惡性循環(huán)，在加入WTO后，這一狀況更嚴(yán)重。總之，明顯的種豬引進(jìn)依賴(lài)對(duì)我國(guó)養(yǎng) 豬業(yè)的持久發(fā)展十分不利，從國(guó)家的長(zhǎng)遠(yuǎn)利益考慮，此種現(xiàn)象不宜再發(fā)展下去。面對(duì)這一狀 況，迫使我們必須變依賴(lài)進(jìn)口為創(chuàng)造性地進(jìn)行選育，尋求適合我國(guó)國(guó)情、在國(guó)際種豬市場(chǎng)占 有一席之地的特色種豬品系和繁育體系。豬病是養(yǎng)豬生產(chǎn)的大敵。育種實(shí)踐中，單純追求高產(chǎn)通常導(dǎo)致豬的抵抗力降低， 一些原有疾病未根除，又出現(xiàn)了新的疾病，嚴(yán)重制約了養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。疾病可導(dǎo)致畜禽產(chǎn)品 低劣、產(chǎn)量下降，同時(shí)它還嚴(yán)重降低遺傳進(jìn)展，給養(yǎng)豬業(yè)造成的直接經(jīng)濟(jì)損失約占總產(chǎn)值的 12% 15%，因此，做好疾病預(yù)防是發(fā)展養(yǎng)豬業(yè)的前提。防治疾病的傳統(tǒng)方法如改善環(huán)境、 藥物治療和免疫接種等并非對(duì)所有的疾病都有作用而且不能從根本上完全控制和消滅疾 病的發(fā)生和流行。研究發(fā)現(xiàn)，不少豬病的發(fā)病機(jī)制與豬本身的遺傳背景有關(guān)，即豬可能對(duì)一 些疾病存在完全或部分抗性。廣義上講，任何疾病的發(fā)生都是遺傳與環(huán)境因素共同作用的 結(jié)果，幾乎所有疾病都與遺傳有關(guān)。狹義上講，遺傳病是由于生殖細(xì)胞或受精卵中遺傳物質(zhì) 發(fā)生了結(jié)構(gòu)或功能上的變異所致。因此，從長(zhǎng)遠(yuǎn)角度來(lái)看，采用遺傳學(xué)方法從遺傳基礎(chǔ)上提 高豬對(duì)疾病的一般抗性具有治本的功效。而一般抗性是維持豬在不良環(huán)境中生存和生產(chǎn)的 必要條件，因此培育具有一般抗性的豬種成為育種領(lǐng)域的主要課題之一。但是迄今為止，還 沒(méi)有對(duì)豬一般抗病力的評(píng)價(jià)體系，無(wú)法對(duì)個(gè)體的免疫應(yīng)答能力進(jìn)行綜合評(píng)估，這已經(jīng)成為 豬提高一般抗病力的育種實(shí)踐中的瓶頸問(wèn)題，創(chuàng)立豬免疫能力指數(shù)、體外方法及其與實(shí)際 抗病力的關(guān)系等系統(tǒng)研究已成為培育具有一般抗性豬種的當(dāng)務(wù)之急和關(guān)鍵所在。在提高畜禽一般抗病力的育種實(shí)踐中，理論上可以利用免疫應(yīng)答作為抗病力的間 接選擇指標(biāo)(Rothschild，1989)。Biozzi等(1980)利用小鼠的研究證實(shí)了抗體對(duì)綿羊紅細(xì) 胞反應(yīng)的遺傳機(jī)制是中等遺傳，而且選擇某種抗原的體液免疫應(yīng)答可以改善其他抗原的體液免疫應(yīng)答。免疫應(yīng)答的遺傳機(jī)制已在家禽中得到了最廣泛的研究(Lamout，1990)。目前已 對(duì)綿羊紅細(xì)胞免疫應(yīng)答的遺傳機(jī)制進(jìn)行了全面的研究。在豬中，品種間和品種內(nèi)的顯著差 異已得到了用綿羊紅細(xì)胞和DNP-半抗原作為抗原的免疫應(yīng)答試驗(yàn)所證實(shí)，但幾乎沒(méi)有或 沒(méi)有免疫應(yīng)答的非加性(雜種優(yōu)勢(shì))遺傳控制(Meek等，1984)。豬許多免疫性狀的加性遺傳 效應(yīng)也都有報(bào)道，如抗體應(yīng)答，單核細(xì)胞的增生和毒性效應(yīng)，延遲性超過(guò)敏反應(yīng)和白細(xì)胞總 數(shù)和分類(lèi)。很多免疫性狀具有中等到高等(0. 3 0. 8)的遺傳力，即具有較大的遺傳效應(yīng)。 通過(guò)提高抗體和細(xì)胞免疫反應(yīng)的育種方法來(lái)提高對(duì)傳染性疾病總的抗性顯然是可行的，但 是到目前為止還沒(méi)有建立豬免疫應(yīng)答能力的評(píng)價(jià)體系，通過(guò)提高豬免疫應(yīng)答能力來(lái)實(shí)現(xiàn)抗 病育種還處在探索階段。大白豬為我國(guó)主要引進(jìn)的優(yōu)質(zhì)瘦肉型豬種，在商品豬生產(chǎn)中具有舉足輕重的地 位。引進(jìn)豬種的優(yōu)良特性主要是生長(zhǎng)速度快、瘦肉率高，但是也存在抗病力下降等問(wèn)題和 不足，本發(fā)明在大白豬抗大腸桿菌病群體的基礎(chǔ)上，測(cè)定不同發(fā)育時(shí)期干擾素、白介素等細(xì) 胞因子及主要抗體水平等免疫應(yīng)答指標(biāo)，在分析免疫應(yīng)答指標(biāo)及其與生長(zhǎng)發(fā)育關(guān)系的基礎(chǔ) 上，確定免疫應(yīng)答和一般抗病力的評(píng)價(jià)指標(biāo)并納入常規(guī)選種選育體系，篩選有效的一般抗 病力分子標(biāo)記并進(jìn)行育種效率評(píng)估。采用候選基因法選留一般抗病力強(qiáng)的個(gè)體組建配套 系，有望降低氣喘病等呼吸道疾病的發(fā)病率，培育具有抗大腸桿菌病和一般抗病力強(qiáng)、生長(zhǎng) 速度快、瘦肉率高、適于相對(duì)粗放條件下飼養(yǎng)的大白豬專(zhuān)門(mén)化配套系，從根本上為實(shí)現(xiàn)豬健 康高效養(yǎng)殖奠定基礎(chǔ)，取得可觀的社會(huì)效益、經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是建立一種免疫應(yīng)答和一般抗病力的評(píng)價(jià)體系，提供在大白豬中科 學(xué)可行的大白豬抗逆性配套系的培育方法，配套系豬具有抗應(yīng)激、適應(yīng)環(huán)境能力強(qiáng)、抗斷奶 仔豬腹瀉和水腫病、瘦肉率高、肉質(zhì)優(yōu)、飼料報(bào)酬高、產(chǎn)仔數(shù)多的優(yōu)點(diǎn)，該方法還可以為國(guó)內(nèi) 其他豬種的抗病育種提供指導(dǎo)。本發(fā)明所說(shuō)的大白豬優(yōu)質(zhì)高效抗逆型配套系的培育方法，是對(duì)核心群抗F18大腸 桿菌病主效基因FUTl M307基因型鑒定和抗病力驗(yàn)證的基礎(chǔ)上組建基礎(chǔ)群，將免疫學(xué)原理、 分子育種技術(shù)及常規(guī)育種手段相結(jié)合，利用候選基因策略，培育大白豬優(yōu)質(zhì)高效抗逆型配 套系。本發(fā)明包括發(fā)下步驟第一步重點(diǎn)以候選基因策略，綜合考慮初生重、斷奶重和 生長(zhǎng)速度等性狀，組建對(duì)斷奶仔豬腹瀉和水腫病具有抵抗能力的大白豬基礎(chǔ)群。第二步確 定異嗜性粒細(xì)胞/淋巴細(xì)胞(Heterophi 1/Lymphocyte，H/L)值、血紅蛋白(HGB)和白細(xì)胞 計(jì)數(shù)(1180、11^6、11^12、0^-￥、0^-(1作為免疫應(yīng)答和一般抗病力的評(píng)價(jià)指標(biāo)，建立豬免 疫應(yīng)答評(píng)價(jià)體系并確定免疫應(yīng)答指數(shù)，將其納入常規(guī)選種選育體系。第三步在獲得繁殖性 能(ESR)、瘦肉率(ob)(均為目前已經(jīng)加以應(yīng)用的遺傳標(biāo)記)和抗病性狀相關(guān)基因有利基因 型(目前已經(jīng)鎖定了 BPI基因第10外顯子AA基因型)的基礎(chǔ)上，進(jìn)而確定用于有利多基因 聚合的選育群。從而建立針對(duì)一般抗病力、繁殖性能和瘦肉率等性狀的專(zhuān)門(mén)化配套系。其 中專(zhuān)門(mén)化父系基礎(chǔ)群著重從抗病性狀和瘦肉率上進(jìn)行選擇，母系基礎(chǔ)群著重從抗病性能和 繁殖性能上進(jìn)行選擇。第四步分子標(biāo)記育種效率評(píng)估，確定分子綜合選擇指數(shù)，建立MAS 體系，實(shí)現(xiàn)多種有利基因的聚合，為培育優(yōu)質(zhì)的新型配套系提供技術(shù)方法。第五步采用常規(guī)育種技術(shù)并結(jié)合分子標(biāo)記輔助選擇進(jìn)行持續(xù)測(cè)定分析和世代選育提高，配套系豬具有抗 應(yīng)激、適應(yīng)環(huán)境能力強(qiáng)、抗斷奶仔豬腹瀉和水腫病、瘦肉率高、肉質(zhì)優(yōu)、飼料報(bào)酬高、產(chǎn)仔數(shù) 多的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明中所說(shuō)的組建基礎(chǔ)群并將免疫學(xué)原理、分子育種技術(shù)及常規(guī)育種手段相結(jié) 合，具體包括以下步驟
(1)提取待測(cè)樣本的組織DNA，備用；
(2)PCR擴(kuò)增以步驟(1)的DNA為模板，用下述引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，
上游引物為5 ‘ -CCAACGCCTCCGATTCCTGT-3 ‘ (SEQ ID NO :1)，下游引物為 5' -GTGCATGGCAGGCTGGATGA-3‘ (SEQ ID NO 2)；
(3)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用限制性內(nèi)切酶/ ^ /酶切后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳銀染分析，選 留只出現(xiàn)161bp條帶的個(gè)體，結(jié)合常規(guī)選種的標(biāo)準(zhǔn)，綜合考慮初生重、斷奶重和生長(zhǎng)速度等 性狀，組建對(duì)斷奶仔豬腹瀉和水腫病具有抵抗能力的基礎(chǔ)群；
(4)隨機(jī)選取步驟(3)中基礎(chǔ)群個(gè)體，利用仔豬小腸上皮細(xì)胞的黏附試驗(yàn)對(duì)F18大腸桿 菌抗性進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證；
(5)對(duì)步驟(3)的基礎(chǔ)群進(jìn)行免疫應(yīng)答和一般抗病力指標(biāo)的測(cè)定；
(6)以步驟(1)的DNA為模板，用下述引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，
上游引物為5'-CCCAACATGGAGATGCAGTTC -3' (SEQ ID NO 3),下游引物為 5'-CAATGAATCAATGAGCACACC -3' (SEQ ID NO 4)；
(7 )PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用限制性內(nèi)切酶/fe/7 #酶切后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳銀染分析，只出 現(xiàn)445 bp條帶的樣本為選育的核心群進(jìn)行早期選擇和分子選育；
(8)對(duì)步驟(7)中的核心群評(píng)估分子標(biāo)記育種效率，建立MAS育種體系，實(shí)現(xiàn)多種有利 基因的聚合，為培育優(yōu)質(zhì)的新型配套系提供技術(shù)方法；
(9)利用步驟(8)的技術(shù)方法，對(duì)步驟(7)中的核心群進(jìn)行持續(xù)測(cè)定分析和世代選育提 高，不斷穩(wěn)定遺傳性和主要性狀的一致性，逐步實(shí)現(xiàn)既定育種目標(biāo)。每個(gè)世代選留專(zhuān)門(mén)化父 系母豬群體50頭以上，3個(gè)以上家系；專(zhuān)門(mén)化母系母豬群體100頭以上，5個(gè)以上家系；同時(shí) 進(jìn)行父系與母系的配合力測(cè)定與分析，優(yōu)化配套組合；經(jīng)過(guò)4-5個(gè)世代，逐步實(shí)現(xiàn)既定育種 目標(biāo)。育種目標(biāo)為配套系呼吸道等疾病發(fā)病率降低6%以上，經(jīng)產(chǎn)產(chǎn)仔在11頭以上，料 肉比2.9 :1 ；肉質(zhì)優(yōu)良，肌內(nèi)脂肪彡2.5%，無(wú)肉色蒼白、質(zhì)地松軟、切面滲出(PSE)和深色、 硬實(shí)、干燥肉(DFD)，系水力(滴水損失)彡3%，大理石紋評(píng)分2. 8-3.0，肉色評(píng)分3. 0-4.0， 屠宰后45分鐘內(nèi)測(cè)定的酸堿度(PH45)在6. 3-6. 6之間，屠宰后M小時(shí)測(cè)定的酸堿度(PH) 在5. 4-5. 8之間，嫩度彡3.6%。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)
(1)從豬抗逆性入手開(kāi)展抗病育種，提高豬的免疫應(yīng)答能力，可以更有效地解決豬很多 疾病如呼吸道疾病與環(huán)境相互作用的問(wèn)題，從根本上降低諸多疾病的發(fā)病率。(2)本發(fā)明將免疫學(xué)原理、分子育種技術(shù)及常規(guī)育種手段相結(jié)合，利用候選基因策 略，提高大白豬的特殊抗病力和一般抗病力，并且可以為其他品種的抗病育種提供技術(shù)支 持和指導(dǎo)。


圖1為大白豬抗逆性配套系育種基礎(chǔ)群FUT基因M307檢測(cè)結(jié)果 M. pBR322 DNA/BsuRI (Hae III)Marker。圖2為大白豬抗逆性配套系基礎(chǔ)群FUT基因M307的3種基因型大腸桿菌F18抗 性/易感性驗(yàn)證結(jié)果。圖3為大白豬抗逆性配套系基礎(chǔ)群BPI基因第10外顯子的3種基因型檢測(cè)結(jié)果 其中 AA. 2、6、8、11、12，BB. 4,10,AB. 1、3、5、7、10; M 為 pUC19 DNA/ife/ I {Hap II)
markerο
具體實(shí)施例方式1.組建基礎(chǔ)群
利用分子育種技術(shù)以及常規(guī)育種手段，運(yùn)用目前已經(jīng)加以應(yīng)用的遺傳標(biāo)記，針對(duì) 種豬對(duì)氟烷基因(RYR1基因)以及與斷奶仔豬腹瀉和水腫病相關(guān)的基因(FUT1基因)進(jìn)行測(cè) 定，剔除攜帶氟烷基因個(gè)體后，進(jìn)一步根據(jù)FUTl基因檢測(cè)結(jié)果，選擇FUTl基因AA等位基因 (抗性型)個(gè)體進(jìn)行選配(圖1)，并通過(guò)體外黏附試驗(yàn)和體內(nèi)定居試驗(yàn)(即攻毒試驗(yàn))對(duì)后代 進(jìn)行抗F18大腸桿菌感染的驗(yàn)證(圖2)，然后對(duì)抗病個(gè)體進(jìn)行持續(xù)選擇和固定。重點(diǎn)以候選 基因策略，綜合考慮初生重、斷奶重和生長(zhǎng)速度等性狀，組建對(duì)斷奶仔豬腹瀉和水腫病具有 抵抗能力的大白豬基礎(chǔ)群。FUTl基因AA等位基因(抗性型)個(gè)體的篩選是以待測(cè)樣本DNA為模板，用下述弓I 物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，
上游引物為5 ‘ -CCAACGCCTCCGATTCCTGT-3 ‘ (SEQ ID NO :1)，下游引物為 5' -GTGCATGGCAGGCTGGATGA-3‘ (SEQ ID NO 2)；
PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用限制性內(nèi)切酶/ ^ /酶切后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳銀染分析，選留只 出現(xiàn)16 Ibp條帶的個(gè)體。2.確定免疫應(yīng)答和一般抗病力的評(píng)價(jià)指標(biāo)
測(cè)定不同發(fā)育時(shí)期外周血紅、白細(xì)胞總數(shù)等血液常規(guī)指標(biāo)、干擾素、白介素等細(xì)胞因 子及主要抗體水平。對(duì)基礎(chǔ)群中個(gè)體的固有免疫應(yīng)答能力先期進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，在分析免 疫應(yīng)答指標(biāo)及其與生長(zhǎng)發(fā)育和繁殖力等性能關(guān)系的基礎(chǔ)上，確定異嗜性粒細(xì)胞/淋巴細(xì) 胞(Heterophi 1/Lymphocyte，H/L)值、血紅蛋白(HGB)和白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WTBC)、IL6、IL12、 IFN-y ,IFN-α作為免疫應(yīng)答和一般抗病力的評(píng)價(jià)指標(biāo)，建立豬免疫應(yīng)答評(píng)價(jià)體系，將其納 入常規(guī)選種選育體系。3. 一般抗病力性狀、繁殖性能和瘦肉率分子標(biāo)記基因型檢測(cè)
對(duì)斷奶仔豬腹瀉和水腫病具有抵抗能力的大白豬基礎(chǔ)群的繁殖性能(ESR)、瘦肉率 (ob)基因(均為目前已經(jīng)加以應(yīng)用的遺傳標(biāo)記)進(jìn)行檢測(cè)，分析研究個(gè)體ESR基因、ob基 因多態(tài)性基因型與繁殖性能(產(chǎn)仔數(shù)、產(chǎn)活仔數(shù)等)和瘦肉率(背膘厚)的關(guān)系；同時(shí)采用 PCR-SSCP和PCR-RFLP等分析技術(shù)，對(duì)一般抗病力性狀候選基因如TLR4、BPI、SLA-DQA、 SLA-DRA、SLA-DQB、SLA-DRB以及TAP等相關(guān)基因進(jìn)行檢測(cè)，分析研究基因的多態(tài)性，鑒定個(gè) 體基因型并分析相應(yīng)基因型與一般抗病力指標(biāo)的關(guān)系，最終選用遺傳效應(yīng)最為明顯的BPI 基因第10外顯子///7a II AA基因型作為一般抗病力的遺傳標(biāo)記。在獲得繁殖性能(ESR)、瘦肉率(ob)和抗病性狀相關(guān)基因有利基因型的基礎(chǔ)上，進(jìn)而確定用于有利多基因聚合的選 育群。BPI基因第10外顯子II AA基因型遺傳標(biāo)記篩選方法是以待測(cè)樣本 為模板，上游引物為5 ‘ -CCCAACATGGAGATGCAGTTC -3' (SEQ ID NO 3 )，下游引物為: 5' -CAATGAATCAATGAGCACACC -3' (SEQ ID NO :4);進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增；PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物用限制性內(nèi) 切酶/fe/7 #酶切后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳銀染分析，只出現(xiàn)445 bp條帶的樣本為BPI基因 第10外顯子II AA基因型。4. 一般抗病力性狀、繁殖性能和瘦肉率和有利基因分子標(biāo)記聚合
通過(guò)對(duì)BPI基因的檢測(cè)，持續(xù)選留具有抗病基因型AA的個(gè)體(早和$ )，進(jìn)行抗病群體 的培育；
在仔豬出生后(對(duì)公母豬)同時(shí)對(duì)雌激素受體基因(ESR)進(jìn)行早期選擇，提高豬產(chǎn)仔數(shù) 和產(chǎn)活仔數(shù)的選擇效率，降低種豬培育成本；在肉質(zhì)選擇方面，對(duì)ob基因檢測(cè)，以減少屠宰 測(cè)定直接進(jìn)行種豬活體瘦肉率選擇。從而建立針對(duì)一般抗病力、繁殖性能和瘦肉率等性狀 的專(zhuān)門(mén)化配套系。其中專(zhuān)門(mén)化父系基礎(chǔ)群著重從抗病性狀和瘦肉率上進(jìn)行選擇，母系基礎(chǔ) 群著重從抗病性能和繁殖性能上進(jìn)行選擇。5.分子標(biāo)記育種效率評(píng)估
利用最小二乘法分析各基因型值和它們間的互作效應(yīng)，當(dāng)互作效應(yīng)顯著時(shí)，使用 模型A ；當(dāng)互作效應(yīng)不顯著時(shí)，使用模型B。模型A =Y= μ +個(gè)體效應(yīng)+基因型I效應(yīng)+基因 型II效應(yīng)+ +不同基因型間的互作效應(yīng)+品種間效應(yīng)+殘差；模型B :Υ= μ +個(gè)體效應(yīng)+合 并基因型效應(yīng)+品種間效應(yīng)+殘差
利用通徑理論計(jì)算各基因型對(duì)應(yīng)的性狀值及目的性狀值的表型相關(guān)，根據(jù)通徑模 型對(duì)相關(guān)系數(shù)進(jìn)行剖分，以得出各基因型對(duì)目的性狀的直接效應(yīng)和通過(guò)其他基因型對(duì)目的 性狀的間接效應(yīng)，進(jìn)而比較分析各基因型對(duì)目的性狀的決定程度。通徑模型rxn.xlPy. xl+rxn. x2Py. x2+.........· · +Pr xn = rxn. y
6. MAS育種體系的建立
利用有利分子遺傳標(biāo)記和常規(guī)育種值估計(jì)，確定分子綜合選擇指數(shù)(I=MS+EBV，其中 MS代表分子評(píng)分，EBV為估計(jì)育種值)，建立MAS體系，實(shí)現(xiàn)多種有利基因的聚合，為培育優(yōu) 質(zhì)的新型配套系提供技術(shù)方法。采用常規(guī)育種技術(shù)并結(jié)合分子標(biāo)記輔助選擇進(jìn)行持續(xù)測(cè)定 分析和世代選育提高，不斷穩(wěn)定遺傳性和主要性狀的一致性，逐步實(shí)現(xiàn)既定育種目標(biāo)。同 時(shí)進(jìn)行父系與母系的配合力測(cè)定與分析，優(yōu)化配套組合。配套系核心群目前專(zhuān)門(mén)化父系母 豬群體50頭以上，3個(gè)以上家系；專(zhuān)門(mén)化母系母豬群體100頭以上，5個(gè)以上家系；在大白 豬傳統(tǒng)優(yōu)良性狀基礎(chǔ)上(全程料肉比3. 0以下，胴體瘦肉率64%以上)，在項(xiàng)目順利實(shí)施后， 爭(zhēng)取達(dá)到在標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)水平下，配套系呼吸道等疾病發(fā)病率降低6%以上，經(jīng)產(chǎn)產(chǎn)仔在11頭 以上，料肉比2.9 :1 ；肉質(zhì)優(yōu)良，肌內(nèi)脂肪彡2.5%，無(wú)肉色蒼白、質(zhì)地松軟、切面滲出(PSE) 和深色、硬實(shí)、干燥肉(DFD)，系水力(滴水損失)<3%，大理石紋評(píng)分2. 8-3.0，肉色評(píng)分 3. 0-4. 0，屠宰后45分鐘內(nèi)測(cè)定的酸堿度(PH45)在6. 3-6. 6之間，屠宰后24小時(shí)測(cè)定的酸 堿度(PH)在5. 4-5. 8之間，嫩度彡3.6%0
權(quán)利要求
1.一種大白豬優(yōu)質(zhì)高效抗逆型配套系的培育方法，其特征在于對(duì)核心群抗F18大腸 桿菌病主效基因FUTl M307基因型鑒定和抗病力驗(yàn)證的基礎(chǔ)上組建基礎(chǔ)群，將免疫學(xué)原理、 分子育種技術(shù)及常規(guī)育種手段相結(jié)合，利用候選基因策略，培育大白豬優(yōu)質(zhì)高效抗逆型配 套系。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于具體包括以下步驟(1)提取待測(cè)樣本的組織DNA，備用；(2)PCR擴(kuò)增以步驟(1)的DNA為模板，用下述引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，上游引物為5 ‘ -CCAACGCCTCCGATTCCTGT-3 ‘，下游引物為 5 ‘ -GTGCATGGCAGGCTGGATGA-3‘；(3)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用限制性內(nèi)切酶/ ^ I酶切后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳銀染分析，選 留只出現(xiàn)161bp條帶的個(gè)體，結(jié)合常規(guī)選種的標(biāo)準(zhǔn)，綜合考慮初生重、斷奶重和生長(zhǎng)速度等 性狀，組建對(duì)斷奶仔豬腹瀉和水腫病具有抵抗能力的基礎(chǔ)群；(4)隨機(jī)選取步驟(3)中基礎(chǔ)群個(gè)體，利用仔豬小腸上皮細(xì)胞的黏附試驗(yàn)對(duì)F18大腸桿 菌抗性進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證；(5)對(duì)步驟(3)的基礎(chǔ)群進(jìn)行免疫應(yīng)答和一般抗病力指標(biāo)的測(cè)定；(6)以步驟(1)的DNA為模板，用下述引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，上游弓I 物為5'-CCCAACATGGAGATGCAGTTC _3'，下游弓| 物為 5'-CAATGAATCAATGAGCACACC -3'；(7 )PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用限制性內(nèi)切酶/fe/7 #酶切后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳銀染分析，只出 現(xiàn)445 bp條帶的樣本為選育的核心群進(jìn)行早期選擇和分子選育；(8)對(duì)步驟(7)中的核心群評(píng)估分子標(biāo)記育種效率，建立MAS育種體系，實(shí)現(xiàn)多種有利 基因的聚合，為培育優(yōu)質(zhì)的新型配套系提供技術(shù)方法；(9)利用步驟(8)的技術(shù)方法，對(duì)步驟(7)中的核心群進(jìn)行持續(xù)測(cè)定分析和世代選育提 高，不斷穩(wěn)定遺傳性和主要性狀的一致性，逐步實(shí)現(xiàn)既定育種目標(biāo)；每個(gè)世代選留專(zhuān)門(mén)化父 系母豬群體50頭以上，3個(gè)以上家系；專(zhuān)門(mén)化母系母豬群體100頭以上，5個(gè)以上家系；同時(shí) 進(jìn)行父系與母系的配合力測(cè)定與分析，優(yōu)化配套組合；經(jīng)過(guò)4-5個(gè)世代，逐步實(shí)現(xiàn)既定育種 目標(biāo)。
全文摘要
本發(fā)明涉及大白豬優(yōu)質(zhì)高效抗逆性配套系的培育方法，具體是對(duì)核心群抗F18大腸桿菌病主效基因FUT1M307基因型鑒定和抗病力驗(yàn)證的基礎(chǔ)上組建基礎(chǔ)群，將免疫學(xué)原理、分子育種技術(shù)及常規(guī)育種手段相結(jié)合，利用候選基因策略，培育大白豬優(yōu)質(zhì)高效抗逆型配套系。配套系豬具有抗應(yīng)激、適應(yīng)環(huán)境能力強(qiáng)、抗斷奶仔豬腹瀉和水腫病、瘦肉率高、肉質(zhì)優(yōu)、飼料報(bào)酬高、產(chǎn)仔數(shù)多的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A01K67/02GK102084847SQ201010579148
公開(kāi)日2011年6月8日 申請(qǐng)日期2010年12月8日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月8日
發(fā)明者侯小亮, 劉璐, 包文斌, 葉蘭, 吳圣龍, 孫壽永, 曹永忠, 朱國(guó)強(qiáng), 朱璟, 潘章源, 王桂軍, 訾臣, 黃小國(guó) 申請(qǐng)人:揚(yáng)州大學(xué)