專利名稱：：使用基因療法治療和預(yù)防神經(jīng)變性疾病的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本文提供治療和/或預(yù)防神經(jīng)變性疾病諸如阿爾茨海默病的組合物和方法。在某些方面，所述組合物和方法涉及過繼細(xì)胞療法和DNA免疫。
背景技術(shù)：
：神經(jīng)炎癥與阿爾茨海默病(AD)病理學(xué)相關(guān)(Chen，K.etal.，281PeptideJ.Biol,Chem.3651-59(2006)和Frenkel，D.etal.，115J，Clin.Irwes.2423-33(2005))。神經(jīng)炎癥涉及大量活化的小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞以及少量T細(xì)胞的積聚，其大部分粘附至毛細(xì)血管后微靜脈(Agadjanyan,M.G.etal.,174J.Immunol.1580-86(2005);Dickson，D.etal.，7Glia75-83(1993);和Fillit，H.etal.,129Neurosci.Lett318-20(1991))。小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞均已顯示產(chǎn)生,淀粉樣蛋白(A釣，其是AD的主要病理學(xué)特征之一。A"本身己顯示充當(dāng)引起許多炎癥組分活化的促炎劑(pro-inflammatoryagent)。伴隨的生物化學(xué)變化包括表征炎癥和自由基攻擊的許多分子的出現(xiàn)或上調(diào)。特別重要的可能是補(bǔ)體蛋白質(zhì)、急性期反應(yīng)物和炎癥細(xì)胞因子。服用非甾體類抗炎藥物的患者患AD的風(fēng)險(xiǎn)低于沒有服用非甾體類抗炎藥的那些患者。這些結(jié)果在尋求AD抗炎療法中引起了增加的興趣(Fillit，H.1991)。發(fā)明概述盡管神經(jīng)變性疾病諸如阿爾茨海默病在傳統(tǒng)上不被認(rèn)為由炎癥或免疫系統(tǒng)介導(dǎo)，但是在某些情況下，免疫系統(tǒng)在變性過程中起重要作用。設(shè)計(jì)為誘導(dǎo)體液免疫應(yīng)答的免疫治療方法先前己開發(fā)用于治療AD。那些研究使得人體試驗(yàn)導(dǎo)致有益的和不利的效果。在動(dòng)物模型中已顯示，設(shè)計(jì)為誘導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答的免疫療法可有益于中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷，盡管取決于誘導(dǎo)的T細(xì)胞應(yīng)答類型，T細(xì)胞可具有或是有益或是有害的作用。這些研究提供開發(fā)基于免疫系統(tǒng)治療神經(jīng)變性疾病的新途徑。適合的免疫系統(tǒng)廣義上可分為兩種應(yīng)答類型細(xì)胞和體液(抗體)應(yīng)答類型。在細(xì)胞應(yīng)答中，三種主要類型或種類的免疫應(yīng)答已被確定在理解炎癥過程調(diào)節(jié)的機(jī)制中起關(guān)鍵作用，例如Thl應(yīng)答(包括例如IFN-力相比于Th2或Th3應(yīng)答(包括例如IL-4、IL-10、IL-13和TGF-卩)。不同種類的T細(xì)胞應(yīng)答對(duì)于開發(fā)阿爾茨海默病的接種策略具有重要的啟示。本文提供的內(nèi)容包括治療和/或預(yù)防神經(jīng)變性疾病諸如阿爾茨海默病的組合物和方法。在某些方面，所述組合物和方法涉及DNA疫苗和過繼細(xì)胞基因療法，以便治療或改善神經(jīng)變性疾病。在某些具體方面，所述組合物和方法涉及編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件諸如Th2或Th3細(xì)胞因子的DNA疫苗。在一個(gè)方面，提供用于治療或改善神經(jīng)變性疾病的方法，其包括施用誘導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答的組合物。在另一個(gè)方面，提供用于治療或改善神經(jīng)變性疾病的方法，其通過施用包含細(xì)胞免疫應(yīng)答元件的組合物而施用誘導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答的組合物來進(jìn)行；優(yōu)選地，細(xì)胞免疫應(yīng)答元件是蛋白質(zhì)、肽、核酸或多核苷酸。在一個(gè)相關(guān)方面，還提供治療或改善神經(jīng)變性疾病的方法，其包括施用兩種或更多種、三種或更多種、四種或更多種、五種或更多種、或六種或更多種細(xì)胞免疫應(yīng)答元件。在另一個(gè)方面，還提供制造用于治療或預(yù)防神經(jīng)變性疾病的組合物的方法，其可以包括制備多核苷酸或其片段，所述多核苷酸或其片段具有轉(zhuǎn)錄連接至編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件基因或其片段的序列的啟動(dòng)子/增強(qiáng)子。在一個(gè)相關(guān)方面，提供制備用于在對(duì)象中表達(dá)細(xì)胞免疫應(yīng)答元件多核苷酸或其片段的組合物的方法，其包括制備多核苷酸，所述多核苷酸具有轉(zhuǎn)錄連接至編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件基因或其片段的序列的啟動(dòng)子/增強(qiáng)子；以及將促進(jìn)轉(zhuǎn)染的物質(zhì)與所述多核苷酸組合。還提供給哺乳動(dòng)物——優(yōu)選人——施用的組合物和方法。在另一個(gè)方面，組合物可以包括藥學(xué)上可接受的載體和包含編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件多肽的序列的多核苷酸。在某些方面，提供試劑盒，其可以包括適于容納給對(duì)象——優(yōu)選人——施用的藥物的容器、包含編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件多肽的序列的多核苷酸、藥學(xué)上可接受的載體以及附至容器的標(biāo)簽或包裝說明書(packageinsert)。在其它方面，提供施用與細(xì)胞免疫應(yīng)答元件多肽或其片段同源的多肽的方法。在某些實(shí)施方式中，提供誘導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答元件的組合物。該方法和組合物可以包括蛋白質(zhì)、核酸或多核苷酸；優(yōu)選地，多核苷酸和/或核酸是DNA或RNA;優(yōu)選地，多核苷酸是環(huán)狀DNA;優(yōu)選地，多核苷酸是質(zhì)粒；優(yōu)選地，多核苷酸包含轉(zhuǎn)錄連接至編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件基因的序列的啟動(dòng)子/增強(qiáng)子；優(yōu)選地，多核苷酸包含復(fù)制起點(diǎn)(ORI);優(yōu)選地，多核苷酸包含多克隆位點(diǎn)(MCS);優(yōu)選地，啟動(dòng)子適于在真核細(xì)胞中表達(dá)；在某些優(yōu)選的實(shí)施方式中，多核苷酸是載體；優(yōu)選是病毒載體，在其它優(yōu)選的實(shí)施方式中，多核苷酸是RNA;優(yōu)選地，多核苷酸是雙鏈RNA;優(yōu)選地，多核苷酸是短干擾RNA(siRNA)，或優(yōu)選地，一種以上減少炎癥的組合物可同時(shí)施用。在某些實(shí)施方式中，單個(gè)細(xì)胞免疫應(yīng)答元件在單個(gè)多核苷酸或質(zhì)粒上；在其它實(shí)施方式中，一種以上的細(xì)胞免疫應(yīng)答元件可以在單個(gè)多核苷酸或質(zhì)粒上。在其它實(shí)施方式中，單個(gè)多核苷酸或質(zhì)粒包括一種或更多種細(xì)胞免疫應(yīng)答元件以及進(jìn)一步包括一種或更多種已知治療或改善神經(jīng)變性疾病影響的多肽或其片段(即，腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)、神經(jīng)生長因子(NGF)、^淀粉樣蛋白、^淀粉樣肽l-42^-淀粉樣蛋白M2)、載脂蛋白E(ApoE)或ApoE-2)。其它實(shí)施方式涉及施用細(xì)胞免疫應(yīng)答元件的蛋白質(zhì)、肽和/或多肽。在其它實(shí)施方式中，提供施用編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件多肽的核酸和/或多核苷酸的方法。組合物可以以這樣的方式制備和施用細(xì)胞免疫應(yīng)答元件多肽表達(dá)于被施用組合物的對(duì)象中。組合物可以包括免疫調(diào)節(jié)基因諸如抗炎細(xì)胞因子、細(xì)胞因子激動(dòng)劑或抗TNF抗體的表達(dá)系統(tǒng)、傳遞系統(tǒng)和編碼序列。優(yōu)選地，該方法和組合物的細(xì)胞免疫應(yīng)答元件增加減少炎癥的基因，優(yōu)選地，增加基因表達(dá)是通過上調(diào)表達(dá)；優(yōu)選地，減少炎癥的基因是Th2細(xì)胞因子；優(yōu)選地，Th2細(xì)胞因子是IL-4、IL-5、IL-IO、IL-13或TGF-^在其它優(yōu)選的實(shí)施方式中，包含細(xì)胞免疫應(yīng)答元件的組合物抑制或削弱增加炎癥的基因，優(yōu)選地，增加炎癥的基因是Thl細(xì)胞因子；優(yōu)選地，削弱基因表達(dá)是通過下調(diào)表達(dá)；優(yōu)選地，Thl細(xì)胞因子優(yōu)選是1L-2、IL-12或TNFct;在某些實(shí)施方式中，組合物通過刺激表達(dá)或產(chǎn)生減少炎癥的基因來影響調(diào)節(jié)，然而在其它實(shí)施方式中，組合物通過抑制增加刺激的基因表達(dá)來影響調(diào)節(jié)，諸如Thl拮抗物。令人驚訝的是，如實(shí)施例3和4所描述，顯示了施用編碼IFN-Y的多核苷酸可以治療和預(yù)防動(dòng)物模型中阿爾茨海默病的影響。盡管IFN-y是Thl細(xì)胞因子，但它作為基因疫苗施用已顯示使神經(jīng)變性疾病的影響減到最小。因此，本文提供包含多核苷酸的組合物和方法作為治療或改善對(duì)象的神經(jīng)變性疾病諸如阿爾茨海默病的方法，所述多核苷酸編碼IFN-y或編碼與IFN-Y同源的多肽，所述對(duì)象優(yōu)選哺乳動(dòng)物，更優(yōu)選人。在某些實(shí)施方式中，細(xì)胞免疫應(yīng)答元件包括編碼自身抗原、減少自身免疫炎癥的細(xì)胞因子、增加自身免疫炎癥的細(xì)胞因子的拮抗物的基因或蛋白質(zhì)或誘導(dǎo)無反應(yīng)性(anergy)的基因或其片段，優(yōu)選地，細(xì)胞免疫應(yīng)答元件是下列物質(zhì)或與下列物質(zhì)同源白細(xì)胞介素(IL)-4、IL-5、IL-IO、IL-13、轉(zhuǎn)化生長因子-P(TGF-灼或干擾素-y(IFN-力或其片段。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，細(xì)胞免疫應(yīng)答元件進(jìn)一步與編碼多肽的核酸或蛋白質(zhì)或其片段一起施用，所述多肽進(jìn)一步治療和/或改善神經(jīng)變性疾病的影響；優(yōu)選地，所述另外的編碼多肽的基因或蛋白質(zhì)是下列物質(zhì)或與下列物質(zhì)同源腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)、神經(jīng)生長因子(NGF)、/-淀粉樣蛋白、^淀粉樣肽l-42(^-淀粉樣蛋白M2)、載脂蛋白E(ApoE)或ApoE-2。在其它優(yōu)選的實(shí)施方式中，誘導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答的組合物和方法包括通過過繼細(xì)胞基因療法傳遞。優(yōu)選地，用于過繼細(xì)胞療法的細(xì)胞類型是自體的或非自體的；優(yōu)選地，用于過繼細(xì)胞基因療法的細(xì)胞類型是T細(xì)胞、抗原呈遞細(xì)胞、成纖維細(xì)胞或干細(xì)胞；優(yōu)選地，用于過繼細(xì)胞基因療法的細(xì)胞類型是樹突細(xì)胞、NIH3T3細(xì)胞、非自體干細(xì)胞諸如來自美國典型培養(yǎng)物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection,ATCC))的細(xì)胞或自體干細(xì)胞。在某些實(shí)施方式中，本文描述的多核苷酸與藥學(xué)上可接受的載體一起給患者施用。在某些實(shí)施方式中，多核苷酸包含真核啟動(dòng)子，真核啟動(dòng)子優(yōu)選在人體中提供表達(dá)。在某些實(shí)施方式中，多核苷酸是復(fù)合有啟動(dòng)子/增強(qiáng)子的質(zhì)粒，所述啟動(dòng)子/增強(qiáng)子轉(zhuǎn)錄連接至編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件的序列。在某些實(shí)施方式中，多核苷酸是病毒載體。在某些實(shí)施方式中，多核苷酸與脂轉(zhuǎn)染試劑一起施用。在某些實(shí)施方式中，方法可以包括施用本文提供的組合物的一種或更多種方法，其選自靜脈內(nèi)、鼻內(nèi)、皮下、通過注射、通過吸入和通過基因槍。在本文提供的方法的某些優(yōu)選的實(shí)施方式中，多核苷酸被施用給哺乳動(dòng)物，所述多核苷酸包含編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件多肽或其片段的序列；更優(yōu)選地，哺乳動(dòng)物是人；優(yōu)選地，包含編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件基因或其片段序列的多核苷酸與促進(jìn)轉(zhuǎn)染的物質(zhì)一起施用；優(yōu)選地，促進(jìn)轉(zhuǎn)染的物質(zhì)包括脂類；優(yōu)選地，多核苷酸在藥學(xué)上可接受的載體中施用；在某些優(yōu)選的實(shí)施方式中，多核苷酸通過病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)施用；優(yōu)選地，多核苷酸通過基因槍施用；優(yōu)選地，多核苷酸通過吸入施用；或者優(yōu)選地，多核苷酸通過注射施用，或者優(yōu)選皮下注射或者優(yōu)選肌肉注射。在某些實(shí)施方式中，組合物包含多核苷酸，多核苷酸包含編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件多肽或其片段的序列；優(yōu)選地，組合物包含藥學(xué)上可接受的載體；優(yōu)選地，組合物包含促進(jìn)轉(zhuǎn)染的物質(zhì)，優(yōu)選地，促進(jìn)轉(zhuǎn)染的物質(zhì)包括脂類；優(yōu)選地，組合物與佐劑一起施用；優(yōu)選地，組合物適于注射入哺乳動(dòng)物，優(yōu)選地，哺乳動(dòng)物是人；優(yōu)選地，組合物適于被哺乳動(dòng)物吸入，優(yōu)選地，哺乳動(dòng)物是人；優(yōu)選地，組合物裝入藥學(xué)上可接受的載體中，優(yōu)選地，藥學(xué)上可接受的載體具有標(biāo)簽，所述標(biāo)簽表明其中的內(nèi)容物和有關(guān)多核苷酸施用的說明；優(yōu)選地，組合物優(yōu)選包括包裝說明書，優(yōu)選地，包裝說明書包括有關(guān)組合物的內(nèi)容物的說明，更優(yōu)選地，包裝說明書包括有關(guān)劑量信息/給藥信息的說明。如本文所用，術(shù)語"抗原"廣義上指使個(gè)體可以對(duì)其產(chǎn)生免疫應(yīng)答的任意組分。本文所用的"抗原"廣義上指包含至少一種涉及免疫應(yīng)答的抗原決定簇的分子。免疫應(yīng)答可以是細(xì)胞介導(dǎo)的或是體液的或兩者兼有。如本領(lǐng)域所周知，抗原可以是自然界的蛋白質(zhì)、自然界的碳水化合物、自然界的脂類、自然界的核酸或這些生物分子的組合。例如，抗原可以包括非天然分子諸如聚合物等等?？乖ㄗ陨砜乖屯鈦砜乖T如由另一個(gè)動(dòng)物產(chǎn)生的抗原或來自感染因子的抗原。感染因子抗原可以是細(xì)菌、病毒、真菌、原生動(dòng)物等等。如本文所用，術(shù)語"自身同源的"用于指從對(duì)象移除細(xì)胞時(shí)，可能改變?cè)摷?xì)胞或保存該細(xì)胞并且將該細(xì)胞再注回對(duì)象。如本文所用，術(shù)語"編碼區(qū)"或"編碼序列"指核酸序列、其互補(bǔ)序列或其部分，其根據(jù)正常的堿基配對(duì)和密碼子使用關(guān)系編碼期望表達(dá)的特定基因產(chǎn)物或其片段。編碼序列包括基因組DNA或未成熟的初級(jí)RNA轉(zhuǎn)錄物中的外顯子，其通過細(xì)胞的生物化學(xué)機(jī)構(gòu)結(jié)合在一起以提供成熟的mRNA。反義鏈?zhǔn)沁@種核酸的互補(bǔ)物，并且可以從反義鏈推導(dǎo)編碼序列。編碼序列的位置與轉(zhuǎn)錄控制元件以及翻譯起始和終止密碼子相關(guān)，以便合適長度的轉(zhuǎn)錄物會(huì)產(chǎn)生并且會(huì)在適當(dāng)?shù)拈喿x框內(nèi)引起翻譯，產(chǎn)生有功能的期望產(chǎn)物。本文所用的術(shù)語"互補(bǔ)物/互補(bǔ)序列"、"互補(bǔ)的"或"互補(bǔ)性"指多核苷酸(即，核苷酸諸如寡核苷酸或目標(biāo)核酸的序列)，其根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的Watson/Crick配對(duì)規(guī)則。使一個(gè)序列的5'端與另一序列的3'端配對(duì)的核酸序列互補(bǔ)處于"反向平行關(guān)聯(lián)"中。例如，序列"5'-A-G-T-3'"與序列"3'-T-C-A-5'"互補(bǔ)。在天然核酸中通常找不到的某些核苷酸可以包括在本文描述的核酸中，它們包括，例如肌苷、7脫氮鳥嘌呤、鎖定核酸(LNA)和肽核酸(PNA)。互補(bǔ)序列還可以是與DNA序列或其互補(bǔ)序列互補(bǔ)的RNA序列，以及還可以是cDNA?；パa(bǔ)性不必是精確的；穩(wěn)定的雙鏈體可以包含錯(cuò)配的堿基對(duì)、簡(jiǎn)并的或未配對(duì)的堿基。核酸
技術(shù)領(lǐng)域：
的技術(shù)人員可以考慮許多變量而經(jīng)驗(yàn)性地確定雙鏈體的穩(wěn)定性，所述變量包括例如，寡核苷酸的長度、寡核苷酸的堿基組成和序列、錯(cuò)配堿基對(duì)的離子強(qiáng)度和發(fā)生率。互補(bǔ)性可以是"部分的"，其中兩個(gè)核酸鏈的僅僅一些核苷酸堿基根據(jù)堿基配對(duì)規(guī)則匹配?；パa(bǔ)性可以是"完全的"或"全部的"，其中兩個(gè)核酸鏈的所有核苷酸堿基根據(jù)堿基配對(duì)規(guī)則匹配。互補(bǔ)性可以不存在，其中兩個(gè)核酸鏈的核苷酸堿基中沒有一個(gè)根據(jù)堿基配對(duì)規(guī)則匹配。核酸鏈之間的互補(bǔ)性程度對(duì)核酸鏈之間的雜交效率和強(qiáng)度有顯著影響。這在擴(kuò)增反應(yīng)以及依賴于核酸之間結(jié)合的檢測(cè)方法中具有特殊的重要性。任一術(shù)語還可以用于指單個(gè)核苷酸，特別是在多核苷酸的情況下，例如，可以指出一個(gè)寡核苷酸中的具體核苷酸與另一個(gè)核酸鏈中的核苷酸的互補(bǔ)性或缺乏互補(bǔ)性，以對(duì)比或比較于該寡核苷酸和該核酸鏈的其余核苷酸之間的互補(bǔ)性。如本文所用，術(shù)語"基本互補(bǔ)"指在嚴(yán)格雜交條件下雜交的兩個(gè)序列。技術(shù)人員將理解，基本互補(bǔ)的序列不需要沿著它們的整個(gè)長度雜交。具體而言，基本互補(bǔ)的序列包含不與目標(biāo)序列雜交的連續(xù)堿基序列，其位于在嚴(yán)格雜交條件下與目標(biāo)序列雜交的連續(xù)堿基序列的3'或5'端。如本文所用，術(shù)語"樹突細(xì)胞"(DC)指抗原呈遞細(xì)胞(APC)，其可源自造血干細(xì)胞。DC可以從許多淋巴和非淋巴組織，以及外周血和骨髓獲得。造血干細(xì)胞諸如人的CD34+細(xì)胞可在體外人工分化為DC。樹突細(xì)胞具有特征性的形態(tài)在各個(gè)方向從樹突細(xì)胞體伸出薄片(層形足板)。幾種表型標(biāo)準(zhǔn)也是典型的，但可以根據(jù)樹突細(xì)胞的來源變化。這些包括高水平的MHC分子和共刺激分子(例如B7-l和B7-2)，粒細(xì)胞、NK細(xì)胞、B細(xì)胞和T細(xì)胞特異性標(biāo)記的缺失。在小鼠中，一些(但不是全部)樹突細(xì)胞表達(dá)33D1(DC，來自脾和派伊爾淋巴集結(jié)，但不來自皮膚或胸腺髓質(zhì))、NLDC145(DC，在皮膚和幾種淋巴樣器官的T依賴性區(qū)域)和CDllC(Cdllc也與巨噬細(xì)胞反應(yīng))。樹突細(xì)胞能夠在體外和體內(nèi)引發(fā)初級(jí)T細(xì)胞應(yīng)答。這些應(yīng)答是抗原特異性的。與外周血白細(xì)胞、脾細(xì)胞、B細(xì)胞和單核細(xì)胞相比，樹突細(xì)胞引導(dǎo)強(qiáng)的混合白細(xì)胞反應(yīng)(MLR)。30如本文所用，術(shù)語"表達(dá)"指由編碼序列編碼的產(chǎn)物的生物生產(chǎn)。在大多數(shù)情況下，DNA序列，包括編碼序列，被轉(zhuǎn)錄形成信使RNA(mRNA)。信使RNA被翻譯以形成具有生物活性的多肽產(chǎn)物。然而，在某些情況下，RNA產(chǎn)物可以具有相關(guān)的活性并且會(huì)因此被認(rèn)為是基因產(chǎn)物。表達(dá)可以包括轉(zhuǎn)錄RNA產(chǎn)物的進(jìn)一步的加工步驟，諸如剪接以去除內(nèi)含子和/或多肽產(chǎn)物的翻譯后加工。如本文所用，涉及免疫耐受的術(shù)語指對(duì)自身抗原無應(yīng)答性的獲得。區(qū)分自身抗原和非自身抗原的能力對(duì)于宿主的保持是必要的。免疫耐受進(jìn)一步描述在Seroogy，C.M.，etal"GeneTherapy,vol7，p.9-13(2000);Costa,G丄.，etal"J.Immunol.，vol.164,p.3581-90(2000);禾口(Werner,H丄.,etal.,NYAcad.Sci.,vol.778,p.xiii畫xviii(1996)中。如本文所用，術(shù)語"細(xì)胞免疫應(yīng)答元件(cellularimmuneresponsedement)"指誘導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答的任意分子。優(yōu)選地，細(xì)胞免疫應(yīng)答是Th2或Th3應(yīng)答。優(yōu)選地，分子是蛋白質(zhì)、肽、多肽、核酸、寡核苷酸或多核苷酸。某些細(xì)胞免疫應(yīng)答元件在本領(lǐng)域是周知的以及包括但不限于可以上調(diào)或產(chǎn)生減少自身免疫炎癥的多肽的分子，其包括但不限于多肽IL-4(即GenBank登錄號(hào)(AccessionNo)M13982;SEQIDNO:12)和IL陽10(即GenBank登錄號(hào)M57627;SEQIDNO:14)和編碼IL-4和IL-10的核酸(即SEQIDNOs:1和3)。細(xì)胞免疫應(yīng)答元件還可以下調(diào)或抑制增加自身免疫炎癥的多肽，其包括但不限于多肽TGF-風(fēng)艮卩GenBank登錄號(hào)M60316;SEQIDNO:16)和編碼TGF-^的核酸(即SEQIDNO:5)。然而，可以理解為其它細(xì)胞免疫應(yīng)答元件包括本領(lǐng)域已知的那些和尚未鑒定的那些。優(yōu)選地，細(xì)胞免疫應(yīng)答元件多肽或其片段具有與本文提供的細(xì)胞免疫應(yīng)答元件的氨基酸序列即SEQIDNOs:12-22同源的氨基酸序列。在某些優(yōu)選的實(shí)施方式中，細(xì)胞免疫應(yīng)答元件的片段具有與本文提供的細(xì)胞免疫應(yīng)答元件即SEQIDNOs:12-22同源的至少25個(gè)氨基酸、更優(yōu)選至少50個(gè)氨基酸、更優(yōu)選至少150個(gè)氨基酸、更優(yōu)選至少200個(gè)氨基酸、更優(yōu)選至少250個(gè)氨基酸、更優(yōu)選至少300個(gè)氨基酸、更優(yōu)選至少400個(gè)氨基酸、更優(yōu)選至少500個(gè)氨基酸、更優(yōu)選至少600個(gè)氨基酸、更優(yōu)選至少700個(gè)氨基酸、更優(yōu)選至少800個(gè)氨基酸。術(shù)語"同源的"在本文中指代氨基酸序列時(shí)是指，所述氨基酸與已知的氨基酸序列(例如SEQIDNOs12-22)具有至少70%、更優(yōu)選75%、更優(yōu)選80%、更優(yōu)選85%、更優(yōu)選90%、更優(yōu)選95%、更優(yōu)選98%或最優(yōu)選100%的同一性。如本文所用，術(shù)語"脂轉(zhuǎn)染試劑"指用于借助脂質(zhì)體將遺傳物質(zhì)摻入細(xì)胞中的物質(zhì)。脂轉(zhuǎn)染試劑的實(shí)例包括lipofectin、lipofectamine、陽離子月旨類禾口中性共月旨類(neutralco-iipids)。如本文所用，術(shù)語"質(zhì)粒"指由遺傳物質(zhì)(即，核酸)組成的構(gòu)建體。它包括遺傳元件，所述元件被排列以便插入的編碼序列可以在真核細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄。盡管質(zhì)?？梢园▉碜圆《竞怂岬男蛄?，但這種病毒序列不引起質(zhì)粒摻入病毒顆粒，并且質(zhì)粒因此是非病毒載體。優(yōu)選地，質(zhì)粒是閉環(huán)核酸。優(yōu)選地，核酸是DNA或RNA。優(yōu)選地，質(zhì)粒可以通過轉(zhuǎn)化被引入細(xì)胞并且可以在細(xì)胞中自主復(fù)制。如本文所用，術(shù)語"藥學(xué)上可接受的"指適于給人體施用的組分。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員理解為為了適于給人體施用，組分必須滿足一定的標(biāo)準(zhǔn)，例如，組分優(yōu)選符合藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范(GLPs);優(yōu)選地，組分符合藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范(GMPs);更優(yōu)選地，組分符合政府法規(guī)諸如美國食品和藥品管理局頒布的那些法規(guī)；優(yōu)選地，組分符合21U.S.C.§301-392。如本文所用，術(shù)語"復(fù)制起點(diǎn)"或"復(fù)制的起點(diǎn)"指為了復(fù)制核酸序列的DNA合成開始之處的核苷酸序列。其通常被稱為ORI位點(diǎn)。環(huán)狀細(xì)菌通常具有單個(gè)ORI位點(diǎn)，而在每個(gè)真核染色體上可以有許多ORI位點(diǎn)。該術(shù)語包括復(fù)制子，如本文所用，其指在DNA復(fù)制期間充當(dāng)自主單位的遺傳元件。在細(xì)菌中，染色體起單個(gè)復(fù)制子的作用，而真核染色體包含數(shù)百個(gè)串聯(lián)的復(fù)制子。術(shù)語"轉(zhuǎn)錄單位"或"表達(dá)盒"指包含至少一個(gè)編碼序列連同指導(dǎo)轉(zhuǎn)錄開始和終止的序列元件的核苷酸序列。然而，轉(zhuǎn)錄單位可以包括另外的序列，其可以包含與轉(zhuǎn)錄后或翻譯后加工有關(guān)的序列。如本文所用，術(shù)語"轉(zhuǎn)錄控制序列"指控制轉(zhuǎn)錄連接的編碼區(qū)的轉(zhuǎn)錄速度的序列。該術(shù)語可以包括元件諸如啟動(dòng)子、操縱子和增強(qiáng)子。優(yōu)選地，轉(zhuǎn)錄控制序列將包括至少一個(gè)啟動(dòng)子序列。如本文所用，術(shù)語"轉(zhuǎn)錄連接的(transcriptionallylinked)"指適于轉(zhuǎn)錄的系統(tǒng)，轉(zhuǎn)錄將在控制序列的指導(dǎo)下開始并且通過轉(zhuǎn)錄連接有該控制序列的序列進(jìn)行。優(yōu)選地，在得到的轉(zhuǎn)錄物中不產(chǎn)生會(huì)改變得到的翻譯產(chǎn)物的突變。例如，"轉(zhuǎn)錄連接的"通常是指被連接的DNA序列是連續(xù)的，并且在分泌前導(dǎo)區(qū)的情況下和閱讀階段是連續(xù)的。然而，增強(qiáng)子不必是連續(xù)的。連接通過在方便的限制性位點(diǎn)進(jìn)行連接而實(shí)現(xiàn)。如果這種位點(diǎn)不存在，則可以依照常規(guī)實(shí)踐使用合成的寡核苷酸銜接頭或連接體。如本文所用，術(shù)語"5'非翻譯區(qū)"或"5'UTR"指位于啟動(dòng)子區(qū)的3'和下游編碼區(qū)的5'的序列。因此，該序列在轉(zhuǎn)錄時(shí)在翻譯起始密碼子的上游(即5')，因此通常不被翻譯成多肽產(chǎn)物的一部分。如本文所用，術(shù)語"3'非翻譯區(qū)/poly(A)信號(hào)"或"3'UTR聚腺苷酸(3'UTRpoly(A))信號(hào)"是位于編碼原料多肽的區(qū)域的下游(g卩，3')的序列。如同5'UTR—樣，該區(qū)域通常被轉(zhuǎn)錄但不被翻譯。為了在真核細(xì)胞中表達(dá)，通常優(yōu)選包括發(fā)出聚腺苷酸尾添加信號(hào)的序列。如同其它合成遺傳元件一樣，合成的3'UTR/聚腺苷酸信號(hào)具有不同于天然發(fā)生的UTR元件的序列。如本文所用，術(shù)語"巨細(xì)胞病毒啟動(dòng)子/增強(qiáng)子序列"指來自巨細(xì)胞病毒的序列，其在真核細(xì)胞中起轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子和上游增強(qiáng)子序列的作用。增強(qiáng)子序列使得轉(zhuǎn)錄從相關(guān)的啟動(dòng)子以更高的頻率發(fā)生。本文描述的質(zhì)?？梢园ㄏ铝幸环N或更多種啟動(dòng)子、5'非翻譯區(qū)(5'UTR)、3'UTR/poly(A)信號(hào)，并且內(nèi)含子可以是合成的序列。在本上下文中，術(shù)語"合成的"指序列不是由該類型的天然發(fā)生遺傳元件的序列直接提供，而是人工制造的序列(即，由個(gè)體通過分子生物學(xué)方法制造的)。盡管這種合成序列的一個(gè)或更多個(gè)部分可以與天然發(fā)生序列的部分相同，但指定遺傳元件上的全部序列不同于該類型的天然發(fā)生遺傳元件。這種合成遺傳元件的使用使該元件的功能特性被適當(dāng)?shù)卦O(shè)計(jì)成期望的功能。如本文所用，包括編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件多肽或其片段的序列的多核苷酸指具有編碼能夠誘導(dǎo)本文所定義的細(xì)胞免疫應(yīng)答的肽或蛋白質(zhì)的核苷酸序列的多核苷酸?？梢岳斫猓谡５膲A基配對(duì)和密碼子使用關(guān)聯(lián)，有許多不同的核苷酸序列可以編碼一個(gè)多肽序列。同樣地，該術(shù)語指會(huì)編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件或其片段的任意核酸序列。在某些優(yōu)選的實(shí)施方式中，包含編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件多肽或其片段的序列的多核苷酸包括編碼與IL-4、IL-5、IL-IO、IL-13或TGF-々或其片段同源的蛋白質(zhì)的核苷酸序列。優(yōu)選地，包含編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件多肽或其片段的序列的多核苷酸包括與編碼多肽IL-4、IL-5、IL-IO、IL-13、TGF--或IFN-y的序列(如SEQIDNOs:1-6中所示)同源的至少50個(gè)核苷酸、更優(yōu)選至少100個(gè)核苷酸、更優(yōu)選至少300個(gè)核苷酸、更優(yōu)選至少600個(gè)核苷酸、更優(yōu)選至少1,000個(gè)核苷酸、更優(yōu)選至少1,500個(gè)核苷酸、更優(yōu)選至少2,000個(gè)核苷酸的連續(xù)片段。術(shù)語"同源的"在本文中指代核苷酸序列時(shí)是指，該核苷酸序列與已知核苷酸序列(例如，如SEQIDNOs:l陽6中提供的編碼IL-4、IL國5、IL陽IO、IL-13、TGF-"和IFN-y的序列)具有至少70%、更優(yōu)選75%、更優(yōu)選80%、更優(yōu)選85%、更優(yōu)選90%、更優(yōu)選95%、更優(yōu)選98%或最優(yōu)選100%的同一性?？梢岳斫?，包括編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件多肽的序列的多核苷酸可以包含另外的核苷酸，所述另外的核苷酸不同于形成編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件的序列的核苷酸。如本文所用，術(shù)語"樣品"或"測(cè)試樣品"指認(rèn)為包含感興趣的核酸的任意液體或固體物質(zhì)。測(cè)試樣品可以從任意生物來源(即，生物樣品)獲得，諸如培養(yǎng)的細(xì)胞或組織樣品或合成產(chǎn)生的，包括化學(xué)合成的模板。如本文所用，術(shù)語"編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答基因的序列或其片段"指編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件基因的任意核酸序列或其片段。細(xì)胞免疫應(yīng)答元件基因指編碼與可以影響炎癥的多肽相應(yīng)的氨基酸序列的多核苷酸。細(xì)胞免疫應(yīng)答元件基因的實(shí)例包括，但不限于IL-4、IL-5、IL-IO、IL-13、TGF-"和IFN-y。優(yōu)選地，本文所描述的細(xì)胞免疫應(yīng)答元件基因編碼具有這樣的氨基酸序列的肽，所述氨基酸序列對(duì)應(yīng)于細(xì)胞免疫應(yīng)答元件多肽或其片段中的任一個(gè)的氨基酸序列，這是基于正常的的堿基配對(duì)和翻譯密碼子使用關(guān)聯(lián)。優(yōu)選地，編碼序列編碼天然細(xì)胞免疫應(yīng)答元件基因的精確的、完整的氨基酸序列。34如本文所用，術(shù)語"轉(zhuǎn)導(dǎo)的"指具有轉(zhuǎn)移至細(xì)胞中的選擇核酸的細(xì)胞。當(dāng)選擇核酸被復(fù)制并且傳至子代細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞被該選擇核酸"穩(wěn)定地轉(zhuǎn)導(dǎo)"。當(dāng)選擇核酸整合進(jìn)細(xì)胞基因組時(shí)，細(xì)胞被該選擇核酸"轉(zhuǎn)化"。如本文所用，術(shù)語"治療"、"處理"或"療法"指治愈性療法、預(yù)防療法和預(yù)防性療法。"預(yù)防性療法"或"預(yù)防療法"的一個(gè)實(shí)例是預(yù)防或減少目標(biāo)病理狀態(tài)或病癥。需要治療的那些對(duì)象包括已經(jīng)患有病癥的那些對(duì)象以及易于患有病癥的那些對(duì)象或要預(yù)防病癥的那些對(duì)象。施用可以是"慢性的/長期"施用，其指以連續(xù)的方式施用藥劑(一種或更多種)，這與急性/短期方式相反，以在延長的時(shí)期內(nèi)維持最初的療效(活性)。施用還可以是"間歇的"施用，其為這樣的治療不是連續(xù)無間斷地進(jìn)行，而是具有周期性質(zhì)。施用還可以與一種或更多種進(jìn)一步的治療劑"聯(lián)合"，包括以任意順序同時(shí)(并行)和連續(xù)的施用。如本文所用，術(shù)語"上調(diào)"指基因的表達(dá)、或編碼一種或更多種蛋白質(zhì)亞單位的RNA或等價(jià)RNA的水平、或一種或更多種蛋白質(zhì)亞單位諸如Th2細(xì)胞因子的活性大于在不存在本文公開的組合物時(shí)觀察到的情況。例如，為了治療、預(yù)防、改善或調(diào)整由基因表達(dá)的缺失或低水平引起或惡化的病理狀態(tài)，可以增加蛋白質(zhì)諸如IL-4的表達(dá)。如本文所用，術(shù)語"抑制"或"下調(diào)"指基因的表達(dá)、或編碼一種或更多種蛋白質(zhì)亞單位的RNA或等價(jià)RNA的水平、或一種或更多種蛋白質(zhì)亞單位諸如Thl細(xì)胞因子的活性小于在不存在核酸分子時(shí)觀察到的情況。在一個(gè)實(shí)施方式中，通過酶核酸分子的抑制或下調(diào)優(yōu)選低于在存在這樣的酶促失活或減弱分子的情況下觀察的水平，所述分子能夠結(jié)合于目標(biāo)RNA上的相同位點(diǎn)，但不能夠剪切該RNA。在另一實(shí)施方式中，采用反義寡核苷酸的抑制或下調(diào)優(yōu)選低于在存在例如具有顛倒序列或具有錯(cuò)配的寡核苷酸的情況下觀察的水平。在另一實(shí)施方式中，本文公開的組合物對(duì)Thl細(xì)胞因子的抑制或下調(diào)在存在組合物的情況下大于不存在組合物的情況。如本文所用，術(shù)語"大約"在定量性術(shù)語中是指加上或減去所示值的10%。根據(jù)下列優(yōu)選實(shí)施方式描述和根據(jù)權(quán)利要求書，本發(fā)明的其它特征和優(yōu)勢(shì)將是顯而易見的。附圖簡(jiǎn)述圖la.在載體對(duì)照(非治療組)APP轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默病小鼠模型中，兩次注射(在6個(gè)月齡和8個(gè)月齡)后，在9個(gè)月齡時(shí)處理的腦組織學(xué)切片。組織學(xué)切片中的箭頭顯示用抗淀粉樣蛋白-A抗體(antiamyloidal-y5antibody)染色(免疫組織化學(xué)特異性染色法)后的淀粉樣蛋白斑(amyloidalplaques)標(biāo)記。圖lb.APP轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默病小鼠模型用IL-10基因疫苗兩次免疫(在6個(gè)和8個(gè)月齡)后，在9個(gè)月齡時(shí)處理的腦組織學(xué)切片。組織學(xué)不顯示用抗淀粉樣蛋白^抗體染色(免疫組織化學(xué)特異性染色法)后的任何淀粉樣蛋白斑標(biāo)記。圖lc.APP轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默病小鼠模型用IL-4基因疫苗兩次免疫(在6個(gè)和8個(gè)月齡)后，在9個(gè)月齡時(shí)處理的腦組織學(xué)切片。組織學(xué)不顯示用抗淀粉樣蛋白^抗體染色(免疫組織化學(xué)特異性染色法:i后的任何淀粉樣蛋白斑標(biāo)記。圖ld.APP轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默病小鼠模型用TGF-y9基因疫苗兩次免疫(在6個(gè)和8個(gè)月齡)后，在9個(gè)月齡時(shí)處理的腦組織學(xué)切片。組織學(xué)不顯示用抗淀粉樣蛋白-y9抗體染色(免疫組織化學(xué)特異性染色法)后的任何淀粉樣蛋白斑標(biāo)記。圖le.APP轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默病小鼠模型用IFN-Y基因疫苗兩次免疫(在6個(gè)和8個(gè)月齡)后，在9個(gè)月齡時(shí)處理的腦組織學(xué)切片。組織學(xué)切片中的箭頭顯示用抗淀粉樣蛋白-"抗體染色(免疫組織化學(xué)特異性染色法)后的淀粉樣蛋白斑標(biāo)記。圖2a和2b.APP轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默病小鼠模型僅用載體(圖2a)或用1L-4、IL-IO、NGF和Apo-E2基因疫苗的混合物(Fig2b)6次免疫(在6、8、10、12、14和16月齡)后，在18個(gè)月齡時(shí)處理的海馬的腦組織學(xué)切片。用抗淀粉樣蛋白-y抗體染色(免疫組織化學(xué)特異性染色法)后，混合物疫苗的組織學(xué)不顯示任何淀粉樣蛋白斑標(biāo)記，這與正常的、未受影響的小鼠一致，而施用載體確實(shí)具有標(biāo)記的淀粉樣蛋白斑。發(fā)明詳述本文提供的內(nèi)容包括治療和/或預(yù)防神經(jīng)變性疾病諸如阿爾茨海默病的組合物和方法。在某些方面，所述組合物和方法涉及DNA疫苗和過繼細(xì)胞基因療法，以治療或改善對(duì)象、優(yōu)選哺乳動(dòng)物、更優(yōu)選人的神經(jīng)變性疾病。在某些方面，所述組合物和方法涉及編碼Th2或Th3細(xì)胞因子的DNA疫苗。組合物可以以這樣的方式制備和施用使編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件的序列在施用組合物的對(duì)象中表達(dá)。這些組合物可以包括表達(dá)系統(tǒng)、傳遞系統(tǒng)、促進(jìn)轉(zhuǎn)染的物質(zhì)和一種或更多種細(xì)胞免疫應(yīng)答元件。變應(yīng)性疾病具有偏向T-輔助型2(Th2)模式和遠(yuǎn)離T-輔助型l(Thl)模式的免疫應(yīng)答。Thl模式的特征是增加水平的使炎癥應(yīng)答持續(xù)存在的分子，諸如IFN-y或IL-2。Th2模式的特征是增加水平的特定白細(xì)胞介素(IL)，諸如IL-4、IL-5、IL-IO、IL-13、CD4+T細(xì)胞，和抗原特異性IgE的產(chǎn)生。IL-4在IgE合成和Th2應(yīng)答的發(fā)展方面是重要的，以及IL-5在嗜酸性粒細(xì)胞存活方面是重要的。免疫療法導(dǎo)致這種不平衡的逆轉(zhuǎn)，Thl細(xì)胞因子、IFN-y和IL-12增加，其進(jìn)而抑制Th2應(yīng)答。同時(shí)，基因接種工作正在萌芽中，對(duì)低親和性IgG受體FCyRIIB的工作也在萌芽中，F(xiàn)CyRIIB在被占用時(shí)抑制在肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞上的IgE介導(dǎo)的應(yīng)答(Daeron，etal.,JClin.Invest.95(2):577-85(1995))。令人驚訝的是，如上所述和實(shí)施例3和4中所示，施用編碼IFN-丫的多核苷酸可以治療和預(yù)防動(dòng)物模型中阿爾茨海默病的影響。盡管IFN-Y是Thl細(xì)胞因子，但它作為基因疫苗施用已顯示使神經(jīng)變性疾病的影響減到最小。因此，本文提供包含編碼IFN-y或編碼與IFN-y同源的多肽的多核苷酸的組合物和方法，作為治療和/或改善對(duì)象的神經(jīng)變性疾病諸如阿爾茨海默病的方法，所述對(duì)象優(yōu)選哺乳動(dòng)物，更優(yōu)選人。在某些實(shí)施方式中，減少炎癥的組合物可以刺激表達(dá)或產(chǎn)生減少炎癥的基因，而在其它實(shí)施方式中，組合物可以通過抑制增加炎癥的基因的表達(dá)諸如拮抗物而影響調(diào)節(jié)。雙鏈RNA、特別是siRNA可用于抑制表達(dá)。RNA可以被導(dǎo)入活細(xì)胞以抑制該細(xì)胞中的目標(biāo)基因表達(dá)。該過程可以離體或在體內(nèi)進(jìn)行。這樣的RNA組合物和使用方法進(jìn)一步描述在例如美國專利第6，506，559號(hào)中。各種方法可以用于將DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞，包括給予裸DNA、與脂質(zhì)體和各種病毒載體復(fù)合的DNA?？梢允褂寐愣嗪塑账嵛镔|(zhì)、方法和傳遞系統(tǒng)，諸如美國專利第6,040,295、5,763,270和5,580,859號(hào)中描述的那些。在多核苷酸不含任何可以起促進(jìn)進(jìn)入細(xì)胞作用的傳遞工具或任何促進(jìn)轉(zhuǎn)染的物質(zhì)，諸如脂質(zhì)體配制物、帶電脂類諸如lipofectin或沉淀劑諸如CaP04的意義上，多核苷酸是裸的。傳遞核酸的載體可以是病毒、非病毒或物理的。參見，例如，Rosenbergetal.,Science,242:1575-1578(1988)和Wolffetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:9011-9014(1989)。用于基因療法的方法和組合物的討論包括Ecketal.,Goodman&Gilman'sThePharmacologicalBasisofTherapeutics,NinthEdition,Hardmanetal.,eds.，McGray-Hill，NewYork,(1996),Chapter5,pp.77-101;Wilson,Clin.Exp.Immunol.107(Suppl.l):31-32(1997);Wiveletal.,Hematology/OncologyClinicsofNorthAmerica,GeneTherapy,S丄.Eck,ed.，12(3):483-501(1998);Romanoetal.,SemCell,18:19-39(2000)和其中引用的參考文獻(xiàn)。美國專利第6,080,728號(hào)也提供許多基因傳遞方法和組合物的討論。傳遞的途徑包括，例如，系統(tǒng)施用和原位施用。周知的病毒傳遞技術(shù)包括使用腺病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、慢病毒、泡沫病毒、單純皰疹病毒和腺相關(guān)病毒載體。病毒載體還可以用于轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞和將多核苷酸導(dǎo)入基因組。在間接的方法中，攜帶遺傳信息的病毒載體用于感染從機(jī)體移去的目標(biāo)細(xì)胞，并且這些細(xì)胞然后被再植入。對(duì)于包封在脂質(zhì)體中的DNA配制物和包封在含有病毒包膜受體蛋白的脂蛋白體中的DNA配制物，已報(bào)道了出生后動(dòng)物中的直接體內(nèi)基因轉(zhuǎn)移(Nicolauetal.，Proc.Natl.Acad.SciUSA80:1068-1072(1983);Kanedaetal.，Science243:375-378(1989);Manninoetal.,Biotechniques6:682-690(1988)。病毒載體可以在體外注入或轉(zhuǎn)導(dǎo)入宿主細(xì)胞，其然后被過繼轉(zhuǎn)移并充當(dāng)傳遞工具，諸如T細(xì)胞(Nakajima，A.，etal.,J.Clin.Invest,vol.17(21),p.1293-1310(200l)和Tuohy,V.K.，etal.，J.Neuroimmunol.,vol.17(2),p.38226-32(2000))、成纖維細(xì)胞(Rabinovich,G.A"etal"J.Exp.Med.,vol.19,p,385-98(1999》、樹突細(xì)胞(DCs)(Kim，S.H.，etal"J.Immunol"vol.166(21)，p.3499-3550(2001)和Morita，Y.,etal.,J.Clin.Invest,vol.17(21)，p.1275-84(2001))和干細(xì)胞(ATCC或自體的)。在某些實(shí)施方式中，病毒載體優(yōu)選是逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。逆轉(zhuǎn)錄病毒載體是基因轉(zhuǎn)移質(zhì)粒，其中異源核酸位于兩個(gè)逆轉(zhuǎn)錄病毒LTRs之間。逆轉(zhuǎn)錄病毒載體通常包含適當(dāng)?shù)陌b信號(hào)，所述包裝信號(hào)能使逆轉(zhuǎn)錄病毒載體或使用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體作為模板轉(zhuǎn)錄的RNA在適當(dāng)?shù)陌b細(xì)胞系中被包裝入病毒的病毒體(參見，例如美國專利第4,650,764號(hào))。本文使用的適合的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體描述在，例如，美國專利5,399,346和5,252.479，以及WIPO公開WO92/07573、WO90/06997,WO89/05345、WO92/05266和W092/14829中，它們提供使用這種逆轉(zhuǎn)錄病毒載體將核酸有效地導(dǎo)入人體細(xì)胞的方法的描述。其它逆轉(zhuǎn)錄病毒載體包括例如，小鼠乳腺腫瘤病毒載體(例如，Shacklefordetal.,ProcNatl.AcadSci.US.A859655-9659(1998))、慢病毒等等。一個(gè)示例性的病毒載體是plentilox-IRES-GFP。過繼細(xì)胞基因療法(AdoptiveCellularGeneTherapy)將核酸導(dǎo)入細(xì)胞的技術(shù)根據(jù)核酸是否被體外轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)細(xì)胞中或是體內(nèi)轉(zhuǎn)移至意圖宿主細(xì)胞中而不同。適于在體外將核酸轉(zhuǎn)移至哺乳動(dòng)物細(xì)胞的技術(shù)包括使用脂質(zhì)體、電穿孔(LuxembourgA.,etal.，ExpertOpinionBiol.Ther.7(11):1647-1664(2007);KesarajuP,etal.,Mol.Ther.14(3):416-422(2006);Luxembourg,etal"Vaccine(24(21):4490-4493(2006))、顯微注射、細(xì)胞融合、DEAE-葡聚糖、磷酸鈣沉淀方法等。優(yōu)選的體內(nèi)基因轉(zhuǎn)移技術(shù)包括用病毒(通常是逆轉(zhuǎn)錄病毒)載體轉(zhuǎn)染和病毒外殼蛋白-脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染(Dzau,etal.,TrendsinBiotechnology11(5):205-10(1993))。適合的載體可以通過本領(lǐng)域周知的任何方法構(gòu)建。參見，例如，Sambrooketal.，MolecularCloning,ALaboratoryManual,SecondEdition,ColdSpringHarborPress(1989)禾口Ausubeletal"eds.，CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWiley&39Sons,N.Y.(19S7和更新資料)。設(shè)計(jì)用于DNA疫苗的載體還適用于傳遞核酸至哺乳動(dòng)物，諸如pVAXl(InvitrogenCarlsbad,CA)。使用陽離子脂質(zhì)體，諸如CD-Chol/DOPE脂質(zhì)體，已普遍被證明是將DNA通過靜脈注射DNA/陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物傳遞至許多組織的適合的工具。參見Caplenetal.，NatureMed"1:39-46(1995);Zhuetal.，Science,261:209-211(1993)。脂質(zhì)體通過與胞膜融合將基因轉(zhuǎn)移至目標(biāo)細(xì)胞。成功應(yīng)用脂質(zhì)體復(fù)合物的實(shí)例包括Lesson-Woodetal.，HumanGeneTherapy,6:395-405(1995)禾口Xuetal.,MolecularGeneticsandMetabolism,63:103-109(1998)的那些。個(gè)體中核酸的直接傳遞可以通過本領(lǐng)域己知的各種方式中的任一種實(shí)現(xiàn)。例如，核酸源可以與靶向損傷組織中的細(xì)胞的試劑組合，諸如細(xì)胞表面膜蛋白或目標(biāo)細(xì)胞的特異性抗體、目標(biāo)細(xì)胞上受體的配體等。使用脂質(zhì)體時(shí)，連接至與胞吞作用有關(guān)的細(xì)胞表面膜蛋白的蛋白質(zhì)可以用于靶向和/或促進(jìn)攝取，例如營養(yǎng)特定細(xì)胞類型的衣殼蛋白其片段、在循環(huán)中經(jīng)歷內(nèi)化的蛋白質(zhì)的抗體、耙向胞內(nèi)定位和提高胞內(nèi)半壽期的蛋白質(zhì)。例如，Wu,etal.,J.Biol.Chem.262(10):4429-32(1987)和Wagner,etal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA87(9):3410-4(1990)描述了受體介導(dǎo)的胞吞作用技術(shù)。對(duì)于基因標(biāo)記和基因治療方案的綜述，參見Anderson,Science256(5058):808-13(1992)。本文提供的方法和組合物還可以應(yīng)用于過繼細(xì)胞基因療法，其使用遺傳改造的免疫細(xì)胞，諸如初級(jí)T細(xì)胞、樹突細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和干細(xì)胞，這些細(xì)胞在離體病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)后能夠在器官特異性自身免疫疾病中遷移至炎癥區(qū)域以便表達(dá)和傳遞免疫調(diào)節(jié)產(chǎn)物和/或治療性基因產(chǎn)物。這些細(xì)胞的離體轉(zhuǎn)導(dǎo)避免將宿主系統(tǒng)地暴露于編碼轉(zhuǎn)基因的載體，并且因此增加這種方法的安全性。使用抗原特異性T細(xì)胞雜交瘤，其表達(dá)抗炎性細(xì)胞因子諸如IL-4、細(xì)胞因子拮抗物諸如IL-12受體拮抗物IL-12p40或抗TNF抗體單鏈可變區(qū)片段(scFv)。所有這些分子抑制疾病的發(fā)展和減少疾病的嚴(yán)重程度。過繼細(xì)胞基因療法的CIA模型是介導(dǎo)抗炎性基因治療的便利的基因穿梭子(shuttle)的例子。另外的研究顯示更難于轉(zhuǎn)導(dǎo)的初級(jí)T細(xì)胞在表達(dá)IL-12p40時(shí)同等地有效，這表明成功的過繼細(xì)胞基因療法可以不依賴于所使用的細(xì)胞類型而應(yīng)用。因此，細(xì)胞諸如骨髓源的樹突細(xì)胞(DCs)可以用于遷移至炎癥區(qū)域。樹突狀家族的細(xì)胞特別適合在兩個(gè)分開的位置行使兩種不同的功能。在周圍組織中，樹突細(xì)胞(DC)充當(dāng)"危險(xiǎn)"抗原的哨兵。DCs將抗原遷移和轉(zhuǎn)運(yùn)至淋巴樣器官，在淋巴樣器官中它們開始激活抗原特異性的T淋巴細(xì)胞。在遷移期間，DCs從抗原捕獲模式變?yōu)門細(xì)胞致敏模式。DCs也影響T細(xì)胞分化的特性，即，Thl/Th2平衡。DCs提供T淋巴細(xì)胞最佳激活所需的抗原信號(hào)和共刺激信號(hào)。DCs和使用方法進(jìn)一步描述在例如美國專利第6,734,014號(hào)中。干細(xì)胞也可以用于過繼細(xì)胞基因療法。人胚胎干(ES)細(xì)胞可以用于本文提供的組合物和方法。ES細(xì)胞是源自胚泡內(nèi)細(xì)胞團(tuán)的培養(yǎng)的細(xì)胞系，其可以在未分化的狀態(tài)下無限地生長，但是也能夠分化為成體的所有細(xì)胞。優(yōu)選地，適用于本文提供的方法和組合物的干細(xì)胞源自對(duì)象自身或以一定方式進(jìn)行改造以便回避免疫應(yīng)答，諸如核移植或體細(xì)胞核移植，其需要用對(duì)象的DNA替代胚胎干細(xì)胞DNA。胚胎干細(xì)胞是最常用的干細(xì)胞，這是由于它能夠分化為成人體內(nèi)所見的大約200種不同的細(xì)胞類型，并且它是已經(jīng)開發(fā)的常規(guī)基因工程方案所針對(duì)的唯一干細(xì)胞類型。離體產(chǎn)生干細(xì)胞的方法在本領(lǐng)域是周知的，包括美國專利第6,326,198、6,261,549、6,093,531、5，935，565、5,670,351、5,670,147、5,646,043、5，437，994號(hào)。用cDNA接種需要相對(duì)很少的注射，并且具有較快的積累(build-up)階段。也可以降低免疫療法不利反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)。據(jù)指出，質(zhì)粒DNA及其基因表達(dá)長時(shí)間持續(xù)(Wolff，etal.,HumMolGenet.1:363-69(1992))，以及據(jù)證明，靈長類和嚙齒類動(dòng)物中的免疫應(yīng)答在DNA接種后持續(xù)一年以上(Donnelly，etal.，JImmunolMeth.176:145-152(1994);和Raz,etal"Pro.Natl.Acad.Sci.91:9519-9523(1994))。質(zhì)粒DNA沒有顯示并入宿主基因組，而是作為附加體保留(Tang,etal.,Nature.356:152-4(1992))。裸DNA和RNA在體內(nèi)被肌細(xì)胞吸收和短暫表達(dá)的發(fā)現(xiàn)在將非病毒載體用于基因傳遞方面引起了增加的興趣。參見Wolffetal.,Science,247,1465-1468(1990);Acsadi,etal.,Nature,352,815-818，(1991)。盡管裸DNA和RNA可以被哺乳動(dòng)物細(xì)胞吸收，但如果該DNA或RNA復(fù)合在脂質(zhì)體中，則可以顯著增加轉(zhuǎn)染的效率(Chen,etal.,GeneTherapy7(19):1698-705(2000))。在體內(nèi)給哺乳動(dòng)物施用多核苷酸，以便細(xì)胞免疫應(yīng)答元件或其片段在哺乳動(dòng)物中表達(dá)，這可以使用哺乳動(dòng)物基因表達(dá)領(lǐng)域中已知的許多方法中的任一個(gè)來實(shí)現(xiàn)。例如，給哺乳動(dòng)物施用可表達(dá)的多核苷酸一一包括表達(dá)系統(tǒng)和傳遞系統(tǒng)_—的方法可以在美國專利第6,875,748、5，763,270、5,580,859、6,040,295和6,034,072號(hào)中找到。本文描述的多核苷酸構(gòu)建體包括編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件或其片段的核苷酸序列。施用多核苷酸以便多核苷酸摻入細(xì)胞并且表達(dá)可檢測(cè)量的預(yù)防或治療有效量的期望的細(xì)胞免疫應(yīng)答元件或其片段。適于本文提供用途的示例性細(xì)胞免疫應(yīng)答元件包括IL-4、IL-5、IL-IO、IL-13、TGF-y9和IFN-y。表達(dá)系統(tǒng)核酸的體內(nèi)非病毒施用已通過多種方法完成。這些包括lipofectin/脂質(zhì)體融合:Proc.Natl.Acad.Sci.84，pp.7413-7417(1993);帶有或不帶有腺病毒增強(qiáng)的多聚賴氨酸縮合HumanGeneTherapy3，pp.147-154(1992);以及核酸向細(xì)胞的轉(zhuǎn)鐵蛋白-轉(zhuǎn)鐵蛋白受體傳遞Proc.Natl.Acad.Sci.87，pp.3410-3414(1990)。由聚丙烯酸組成的特定組合物的使用已在WO94/24983中公開。裸DNA已如WO90/11092中所公開被施用。因此，在一個(gè)方面，提供質(zhì)粒用于表達(dá)細(xì)胞免疫應(yīng)答元件其片段，其包括表達(dá)盒，所述表達(dá)盒也可以稱為轉(zhuǎn)錄單位。當(dāng)質(zhì)粒處于適于基因表達(dá)的環(huán)境中時(shí)，轉(zhuǎn)錄單位因此將表達(dá)包含編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件其片段的序列的多核苷酸。轉(zhuǎn)錄單位包括轉(zhuǎn)錄控制序列，其與編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件的序列轉(zhuǎn)錄連接。轉(zhuǎn)錄控制序列可以包括啟動(dòng)子/增強(qiáng)子序列，諸如巨細(xì)胞病毒(CMV:i啟動(dòng)子/增強(qiáng)子序列。然而，本領(lǐng)域的技術(shù)人員會(huì)知曉，多種其它的適于在真核細(xì)胞中表達(dá)的啟動(dòng)子序列是已知的并且可以類似地用于本文公開的構(gòu)建體中?；虍a(chǎn)物的表達(dá)水平將取決于相關(guān)的啟動(dòng)子和相關(guān)的增強(qiáng)子元件的存在和激活。在某些實(shí)施方式中，編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件基因或其片段的序列可以克隆入表達(dá)質(zhì)粒，所述表達(dá)質(zhì)粒包含用于轉(zhuǎn)錄、翻譯、RNA穩(wěn)定性和復(fù)制的調(diào)節(jié)元件(S卩，包括轉(zhuǎn)錄控制序列)。這些表達(dá)質(zhì)粒在本領(lǐng)域中是周知的，并且本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將能夠以細(xì)胞免疫應(yīng)答元件可以表達(dá)的方式設(shè)計(jì)帶有多核苷酸的合適的表達(dá)構(gòu)建體，所述多核苷酸包括編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件或其片段的序列。有許多包含編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件基因或其片段的序列的多核苷酸可以克隆到其中的適合的表達(dá)質(zhì)粒的實(shí)例，諸如pCI-neo、pUMVC或pcDNA3。容納用于表達(dá)細(xì)胞免疫應(yīng)答元件或其片段的質(zhì)粒的大量細(xì)菌宿主可以被發(fā)酵，以及質(zhì)?？梢员患兓噪S后使用。目前使用質(zhì)粒的人臨床試驗(yàn)利用該方法。RecombinantDNAAdvisoryCommitteeDataManagementReport,HumanGeneTherapy6:535-548(1994)。質(zhì)粒的目的是通常用于人基因治療中，用以將核酸序列有效傳遞至細(xì)胞或哺乳動(dòng)物組織中并在細(xì)胞或哺乳動(dòng)物組織中表達(dá)治療基因(即，細(xì)胞免疫應(yīng)答元件)。具體而言，質(zhì)粒的目的可以是獲得高拷貝數(shù)、避免質(zhì)粒不穩(wěn)定性的潛在原因和提供質(zhì)粒選擇的方法。至于表達(dá)，核酸盒包含用于表達(dá)盒中核酸的必需的元件。表達(dá)包括用質(zhì)粒有效地轉(zhuǎn)錄插入的基因、核酸序列或核酸盒。表達(dá)產(chǎn)物可以是蛋白質(zhì)、多肽或RNA。核酸序列可以包含在核酸盒中。核酸的表達(dá)可以是連續(xù)的或被調(diào)節(jié)的。在最終獲得核酸編碼的產(chǎn)物的表達(dá)的過程中，作為初始步驟的是是實(shí)現(xiàn)細(xì)胞對(duì)核酸的吸收。細(xì)胞對(duì)核酸的吸收取決于許多因素，其中之一是核酸接近細(xì)胞表面的時(shí)間長度。例如，肌肉(im.)施用緩沖液中的質(zhì)粒DNA后，如果按摩肌肉，則觀察到基因表達(dá)的明顯減少，這可能是由于DNA直接或經(jīng)由淋巴管漏出肌肉(HumanGeneTherapy4:151-159,1993)。因此，可期望用這樣的化合物配制核酸，所述化合物會(huì)延遲核酸擴(kuò)散或從期望細(xì)胞吸收核酸的位點(diǎn)被帶走的速度。進(jìn)一步地，這些化合物可適于通過諸如注射的方法施用給生物體，同時(shí)保持或恢復(fù)增加細(xì)胞吸收核酸所需的物理特性。藥物組合物本文提供的組合物可以作為藥物組合物施用，其中化合物與本領(lǐng)域周知的藥學(xué)上可接受的載體一起配制。配制及施用藥物組合物的技術(shù)可以在例如"Remington'sPharmaceuticalSciences，"(18thed.,MackPublishingCo.,Eastern,PA,1990)中找到。因此，化合物可以用于制造藥物?；衔锏乃幬锝M合物可以配制成胃腸外施用的溶液或凍干粉末。這些粉末在使用前通過添加適合的稀釋劑或其它藥學(xué)上可接受的載體可以進(jìn)行重構(gòu)。這些粉末還可以以干燥的形式噴射。液體配制物可以是緩沖的、等張的水溶液。適合的稀釋劑的實(shí)例是標(biāo)準(zhǔn)的等滲鹽水、標(biāo)準(zhǔn)的5%葡萄糖水溶液或緩沖醋酸鈉或醋酸銨溶液。這種配制物特別適于胃腸外施用，但也可以用于口服施用或包含在定量吸入器或噴霧器中進(jìn)行噴射。可期望加入賦形劑諸如聚乙烯吡咯垸酮、明膠、羥基纖維素、阿拉伯樹膠、聚乙二醇、甘露醇、氯化鈉或擰檬酸鈉?？蛇x擇地，含有包含編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件或其片段的序列的多核苷酸的組合物可以制成膠囊、片劑或制備成乳液或糖漿進(jìn)行口服施用?？梢蕴砑铀帉W(xué)上可接受的固體或液體載體，以提高或穩(wěn)定組合物或促進(jìn)組合物的制備。固體載體包括淀粉、乳糖、二水合硫酸鈣、石膏粉、硬脂酸鎂或硬脂酸、滑石、果膠、阿拉伯樹膠、瓊脂或明膠。液體載體包括糖漿、花生油、橄欖油、鹽水和水。對(duì)于體內(nèi)使用的水性組合物，優(yōu)選使用無菌的無熱原水。為了制備適于施用給哺乳動(dòng)物、優(yōu)選人的藥學(xué)上可接受的組合物，這些配制物將包含有效量的多核苷酸連同適合量的水溶液。載體也可以包括持續(xù)釋放材料諸如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯，其單獨(dú)使用或與蠟一起使用。固體載體的量變化，但優(yōu)選會(huì)在每劑量單位約20mg至約1g之間。藥物制備物按照常規(guī)制藥技術(shù)來制備，所述技術(shù)在必要時(shí)對(duì)于片劑而言，包括制粉、混合、粒化和壓縮；或?qū)τ诿髂z硬膠囊形式而言包括制粉、混合和填充。當(dāng)使用液體載體時(shí)，制備物的形式可以是糖漿、酏劑、乳劑或水性或非水性懸浮液。對(duì)于直腸施用，化合物可以結(jié)合有賦形劑諸如可可脂、甘油、明膠或聚乙二醇以及被鑄成栓劑。本文描述的多核苷酸的藥學(xué)上可接受的鹽的施用包含在本文中。這些鹽可以從藥學(xué)上可接受的無毒的堿制備，所述堿包括有機(jī)堿和無機(jī)堿。由無機(jī)堿衍生的鹽包括鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、銨鹽、鈣鹽、鎂鹽等。由藥學(xué)上可接受的有機(jī)無毒堿衍生的鹽包括伯胺鹽、仲胺鹽和叔胺鹽、堿性氨基酸等。對(duì)于藥物鹽的有用的討論，參見S.M.Bergeetal.，JournalofPharmaceuticalSciences66:1-19(1977)。本文還提供的是用于供給哺乳動(dòng)物細(xì)胞免疫應(yīng)答元件多肽的藥物組合物，其可以包括藥物有效量的多核苷酸，所述多核苷酸包括編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件或其片段的序列；以無菌形式裝有載體和多核苷酸的容器；和與容器相關(guān)的工具，以使多核苷酸從容器轉(zhuǎn)移至組織間隙，因此組織的細(xì)胞可以吸收和表達(dá)多核苷酸。允許這種轉(zhuǎn)移的工具包括傳統(tǒng)的隔膜，其可以例如被針穿透?？蛇x擇地，當(dāng)容器是注射器時(shí)，工具可以考慮包含注射器的活塞或連接至注射器的針。容器可以具有至少l、優(yōu)選至少5或10、以及更優(yōu)選至少50或100微克的多核苷酸，以提供一個(gè)或更多的單位劑量。對(duì)于許多應(yīng)用，容器將具有至少500微克或1毫克多核苷酸，以及通常將包含至少50或100毫克多核苷酸。還提供藥物組合物，其可以包括包含編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件或其片段的序列的多核苷酸，并且以藥學(xué)上可接受的施用形式處于容器中，以及與容器相關(guān)的布告，所述布告為規(guī)范藥物制造、使用或銷售的政府機(jī)構(gòu)規(guī)定的形式，所述布告反映出該形式的多核苷酸用于人或獸醫(yī)施用得到該機(jī)構(gòu)的批準(zhǔn)。例如，這種布告可以是得到美國食品藥品管理局批準(zhǔn)的處方藥物標(biāo)簽、或批準(zhǔn)的產(chǎn)品說明書/產(chǎn)品插入物(productinsert)。本文提供的組合物可以作為藥物組合物施用，其中組合物與本領(lǐng)域周知的藥學(xué)上可接受的載體一起配制。配制和施用技術(shù)可在例如"Remington'sPharmaceuticalSciences,，，(18thed,MackPublishingCo,Easton,PA,1990)中找到。因此，組合物可以用于制造藥物?？梢岳斫鉃樗帉W(xué)上可接受的載體、或藥物組合物、或適于施用給哺乳動(dòng)物的任何物質(zhì)應(yīng)依照當(dāng)?shù)匾?guī)章的標(biāo)準(zhǔn)制造和儲(chǔ)存。例如，許多政府擁有規(guī)范制造和處理用于施用給哺乳動(dòng)物和/或人的組合物的各方面的指南或規(guī)定，諸如衛(wèi)生設(shè)施、工序驗(yàn)證設(shè)備(processvalidationequipment)和文件可追溯性、以及人員資格。本文提供的包括藥物組合物或藥學(xué)上可接受的載體的組合物優(yōu)選適于施用給人并且符合當(dāng)?shù)氐囊?guī)章、指南45和/或GMPS(文件)規(guī)章，諸如美國食品和藥品管理局為這一目的制定的那些。用于注射——一個(gè)優(yōu)選的傳遞途徑——的、包括編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件或其片段序列的多核苷酸可以以單位劑量形式制備在安瓿中或制備在多劑量容器中。多核苷酸可以以諸如油性或優(yōu)選水性載體中的懸浮液、溶液或乳液的形式存在?？蛇x擇地，鹽形式的多核苷酸可以呈凍干形式，用以在傳遞時(shí)與適合的載體諸如無菌無熱原水重構(gòu)。液體形式以及待重構(gòu)的凍干形式將包含試劑，優(yōu)選緩沖液，所述試劑的量為適當(dāng)調(diào)節(jié)注射溶液的pH值所需的量。對(duì)于任意胃腸外應(yīng)用，特別是在要靜脈內(nèi)施用配制物時(shí)，應(yīng)控制溶質(zhì)的總濃度，以使制備物等張、低滲或微弱高滲。非離子物質(zhì)諸如糖優(yōu)選用于調(diào)節(jié)張力，以及蔗糖是特別優(yōu)選的。這些形式的任一個(gè)可以進(jìn)一步包含適合的配方劑(formulatoryagents),諸如淀粉或糖、甘油或鹽水。每單位劑量的組合物——不論液體或固體——可以包含從0.1%至99%的多核苷酸物質(zhì)。單位劑量安瓿或多劑量容器——多核苷酸在使用之前被封裝在其中——可以包含嚴(yán)密封閉的容器，其裝入適于其一個(gè)藥學(xué)有效劑量或多個(gè)有效劑量的一定量的多核苷酸或包含多核苷酸的溶液。多核苷酸作為無菌配制物被封裝，以及嚴(yán)密封閉的容器被設(shè)計(jì)以便在使用之前保持配制物的無菌狀態(tài)。其中含有包含編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件或其片段的序列的多核苷酸的容器可以包括附有標(biāo)簽的包裝，并且所述標(biāo)簽可以帶有布告，所述布告是政府機(jī)構(gòu)例如美國食品藥品管理局規(guī)定的形式并且所述布告反映出其中的多核苷酸物質(zhì)用于人類施用的制造、使用或銷售在聯(lián)邦法律下獲得該機(jī)構(gòu)的批準(zhǔn)。聯(lián)邦法律要求藥物組合物在治療人中的應(yīng)用得到聯(lián)邦政府機(jī)構(gòu)的批準(zhǔn)。在美國，其執(zhí)行是美國食品藥品管理局的責(zé)任，其發(fā)布適合的規(guī)章來確保這種批準(zhǔn)，詳見21U.S.C§301-392。42U.S.C.§262提供對(duì)生物材料的規(guī)章，所述生物材料包括由動(dòng)物組織制成的產(chǎn)品。大多數(shù)外國國家要求類似的批準(zhǔn)。國家與國家間的規(guī)章是不同的，但各個(gè)程序?qū)Ρ绢I(lǐng)域技術(shù)人員是周知的并且本文提供的組合物和方法因此優(yōu)選地與其相符合。施用的劑量很大程度上取決于被治療對(duì)象的狀態(tài)和大小以及治療頻率和施用路徑。連續(xù)治療的方案，包括劑量頻率，可以通過最初的應(yīng)答和臨床判斷來指導(dǎo)。優(yōu)選注射入組織間隙的胃腸外路徑，盡管在具體施用例如對(duì)鼻粘膜、咽喉、支氣管組織或肺施用時(shí)可以要求其它胃腸外路徑諸如吸入氣溶膠配制物。同樣地，本文提供的是藥物產(chǎn)品，其可以包括多核苷酸，所述多核苷酸包含編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件或其片段的序列并以溶液形式溶于藥學(xué)上可接受的注射載體，并且適于經(jīng)間隙導(dǎo)入組織而引起組織細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞免疫應(yīng)答元件或其片段，裝入溶液的容器，以及以管理藥物的制造、使用或銷售的政府機(jī)構(gòu)規(guī)定的形式與容器相關(guān)的布告，所述布告反映出所述多核苷酸溶液用于人類施用的制造、使用或銷售得到該機(jī)構(gòu)的批準(zhǔn)。施用在本文公開的任意方法中，優(yōu)選將包含多核苷酸的組合物傳遞給哺乳動(dòng)物，所述多核苷酸包含編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件或其片段的序列。更優(yōu)選地，哺乳動(dòng)物是人。依照本文公開的任意方法的組合物的施用可以依照本領(lǐng)域已知的各種方法中的任一方法完成。例如，美國專利第5,676,954號(hào)公開將復(fù)合有陽離子脂類載體的遺傳物質(zhì)注射入小鼠中。另夕卜，美國專利5,589,466、5,693,622、5,580,859、5，703，055和PCT國際專利申請(qǐng)PCT/US94/06069(WO94/29469)提供將包含裸DNA或DNA陽離子脂類復(fù)合物的組合物傳遞至脊椎動(dòng)物的方法。在某些實(shí)施方式中，含有包含編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件或其片段的序列的多核苷酸的組合物可以胃腸外施用，諸如血管內(nèi)、靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、肌肉、皮下等。組合物可以導(dǎo)入肌肉、皮膚、腦、月市、肝或脾組織。組合物還可以導(dǎo)入血液。施用還可以是口服、經(jīng)鼻、經(jīng)直腸、透皮或經(jīng)氣溶膠吸入。組合物也可以作為丸劑或推注(bolus)或緩慢輸注而施用。包含編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件或其片段的序列的多核苷酸可以傳遞給動(dòng)物體的組織間隙，包括肌肉、皮膚、腦、肺、肝、脾、骨髓、胸腺、心、淋巴、血液、骨、軟骨、胰腺、腎、膽囊、胃、腸、睪丸、卵巢、子宮、直腸、神經(jīng)系統(tǒng)、眼、腺體和結(jié)締組織的組織間隙。組織間隙包括在器官組織的網(wǎng)狀纖維、血管或腔壁內(nèi)的彈性纖維、纖維組織的膠原纖維之間的細(xì)胞間流動(dòng)的粘多糖基質(zhì)，或包蓋肌細(xì)胞的結(jié)締組織中或骨腔隙中相同的基質(zhì)。其類似于被循環(huán)的血槳和淋巴管的淋巴液占用的空間。由于以下討論的原因，優(yōu)選傳遞至肌肉組織的間隙。它們可以通過注射入包含這些細(xì)胞的組織而便利地傳遞。它們優(yōu)選傳遞給并表達(dá)在持久的、分化的不分裂細(xì)胞中，盡管傳遞和表達(dá)可以在未分化或較不完全分化的細(xì)胞中完成，例如，血液干細(xì)胞或皮膚成纖維細(xì)胞。在體內(nèi)，肌細(xì)胞在它們吸收和表達(dá)多核苷酸的能力方面是特別勝任的。這種能力可能是由于肌肉包括多核細(xì)胞、肌漿網(wǎng)和橫管系統(tǒng)的獨(dú)特組織結(jié)構(gòu)。本文提供的多核苷酸可以通過橫管系統(tǒng)進(jìn)入肌肉，橫管系統(tǒng)包含細(xì)胞外液并且延伸深入肌細(xì)胞。多核苷酸也可能進(jìn)入然后恢復(fù)的損傷肌細(xì)胞。肌肉在許多治療應(yīng)用中也有利地用作傳遞和表達(dá)多核苷酸的部位，這是因?yàn)閯?dòng)物具有成比例大的肌肉群，所述肌肉群通過經(jīng)由皮膚直接注射而便利地進(jìn)入；因此，相當(dāng)大劑量的多核苷酸通過多次注射可以沉積在肌肉中，并且重復(fù)注射——以便在長期內(nèi)進(jìn)行延長治療——被容易地完成并且可以安全地實(shí)現(xiàn)而不需專門的技術(shù)或設(shè)備。肌肉組織之外的組織也可以有利地用作注射部位以便產(chǎn)生細(xì)胞免疫應(yīng)答元件。一種這樣的情況是使用多核苷酸提供多肽，所述多肽必需與特定類型的細(xì)胞相關(guān)地存在才有效；例如，與膽固醇平衡相關(guān)的肝細(xì)胞的細(xì)胞表面受體。(Brown和Goldstein,Science232:34-47(1986))。在該應(yīng)用中，以及許多其它應(yīng)用中，諸如在酶或激素是基因產(chǎn)物的應(yīng)用中，為了實(shí)現(xiàn)有價(jià)值的治療效果可以不必達(dá)到高水平的表達(dá)。在某些實(shí)施方式中，包含編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件或其片段的序列的多核苷酸單獨(dú)使用可注射的載體被導(dǎo)入組織。載體優(yōu)選是等張的、低滲的或微弱高滲的，以及具有相對(duì)低的離子強(qiáng)度，諸如蔗糖溶液所提供的。制備物可以進(jìn)一步有利地包含細(xì)胞因子源，其以多肽的形式或作為多核苷酸被摻入脂質(zhì)體。含有包含編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件或其片段的序列的多核苷酸的組合物被配制以包括其它醫(yī)學(xué)上有用的藥物或生物制劑。組合物也可以結(jié)合其它藥物或生物試劑的施用而被施用，所述其它藥物或生物試劑用于本文描述的組合物所涉及的疾病或狀態(tài)(參見例如，美國專利第6,413,955號(hào)，其針對(duì)用于骨質(zhì)疏松癥的活性成分)。含有包含編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件或其片段的序列的多核苷酸的組合物也可以通過"基因槍"導(dǎo)入組織或細(xì)胞。DNA可以涂布在金微粒上，以及通過顆粒轟擊裝置或文獻(xiàn)中描述的"基因槍"皮下傳遞(參見，例如，Tangetal.(1992),Nature356:152-154)，其中金微粒涂布有治療的DNA，然后轟擊入皮膚細(xì)胞。含有包含編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件或其片段的序列的多核苷酸的組合物也可以通過鼻和口服施用導(dǎo)入。低劑量有利于活性抑制，而較高的劑量有利于克隆無反應(yīng)性/克隆缺失。口服和/或鼻抗原誘導(dǎo)T輔助2(Th2)T細(xì)胞，諸如IL-4和IL-10，以及T輔助3(Th3)T細(xì)胞，諸如TGF-Z，加上CD4+CD25+調(diào)節(jié)細(xì)胞和潛在相關(guān)肽T細(xì)胞。因此，口服耐受的誘導(dǎo)可以通過施用IL-4、IL-IO、抗IL-12、TGF-Z、霍亂毒素B亞單位、Flt-3配體和抗CD40配體而增強(qiáng)?？诜虮强乖┯?例如，粘膜耐受)抑制下列動(dòng)物模型自身免疫疾病，包括實(shí)驗(yàn)性的自身免疫腦炎、葡萄膜炎、甲狀腺炎、肌無力、關(guān)節(jié)炎和非肥胖糖尿病(NOD)小鼠的糖尿病，加上非自身免疫疾病，諸如哮喘、動(dòng)脈硬化癥、移植排斥、變態(tài)反應(yīng)(諸如對(duì)二硝基氯苯(DNCB)的接觸易感性和鎳過敏癥)、結(jié)腸炎、中風(fēng)和阿爾茨海默病模型(McGeerP.etal.,42Neurology447-449(1992);OkurayY.，103(25)PNASUSA9619-24(EpubJune12,2006);QuB.etal，244(1-2)J.Neurol.Sci.151-158(2006))。粘膜耐受可以有利于治療神經(jīng)變性疾病諸如阿爾茨海默病，這是由于易于施用、缺乏毒性和抗原特異性作用機(jī)制。粘膜耐受是引人注目的治療神經(jīng)變性疾病的方法，這是因?yàn)槿狈Χ拘?、隨時(shí)間易于施用和抗原特異性作用機(jī)制。成功應(yīng)用口服49耐受治療人疾病將取決于劑量、評(píng)價(jià)免疫學(xué)效果的發(fā)展中的免疫標(biāo)記、路徑(鼻對(duì)口服)、配方、粘膜佐劑、聯(lián)合治療和早期治療。如本文所用，短語"有效量"指足以提供足夠高的濃度以賦予其接受者有益效果的劑量。針對(duì)任意具體對(duì)象的具體治療有效劑量水平將取決于許多因素，包括被治療的病癥、病癥的嚴(yán)重性、具體化合物的活性、施用路徑、化合物的清除率、治療的持續(xù)時(shí)間、與化合物聯(lián)合使用或同時(shí)使用的藥物、對(duì)象的年齡、體重、性別、飲食和一般健康狀況以及在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域和醫(yī)學(xué)科學(xué)中周知的相似因素。在確定"治療有效量"中考慮的各種通常的考慮事項(xiàng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是已知的，并且描述在例如Gihnanetal.，eds.,Goodman禾卩Gilman's:ThePharmacologicalBasesofTherapeutics,8thed,PergamonPress,1990;禾口Remington'sPharmaceuticalSciences,17thed"MackPublishingCo,,Easton,Pa"1990.中。佐劑對(duì)于包含編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件或其片段的序列的多核苷酸向哺乳動(dòng)物系統(tǒng)的傳遞，通常優(yōu)選利用傳遞系統(tǒng)。這種系統(tǒng)可以提供多種益處，顯著提供穩(wěn)定性以保護(hù)DNA的完整，以及有助于細(xì)胞吸收。此外，如通過本文描述的示例性傳遞系統(tǒng)(即，轉(zhuǎn)染試劑)所說明的，配制物的非DNA組分可以有助于免疫系統(tǒng)增強(qiáng)或激活。因此，傳遞系統(tǒng)的組分可以結(jié)合具體的基因產(chǎn)物進(jìn)行選擇，以提高免疫刺激效應(yīng)或使免疫剌激效應(yīng)最小化。對(duì)于某些核苷酸序列，也描述了免疫刺激效應(yīng)。例如，Satoetal.,Science273:352-354(1996)描述了用具有某些含CpG序列的雙鏈DNA接種對(duì)干擾素-Y、干擾素W和白細(xì)胞介素-12產(chǎn)生的效果。轉(zhuǎn)染試劑本文提供的含有包含編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件或其片段的序列的多核苷酸的組合物還可以包括一種或更多種促進(jìn)轉(zhuǎn)染的物質(zhì)，其有助于傳遞多核苷至細(xì)胞內(nèi)部和/或至細(xì)胞中的期望位置。許多此類促進(jìn)轉(zhuǎn)染的物質(zhì)可商業(yè)獲得，例如Lipofectin、Lipofectamme、Lipofcctaminc2000、Optifect、SuperFect。促進(jìn)轉(zhuǎn)染的物質(zhì)的實(shí)例包括但不限于脂類，優(yōu)選陽離子脂類；無機(jī)物質(zhì)諸如磷酸鈣，以及金屬(例如，金或鎢)顆粒(例如，"粉末"型傳遞溶液)；肽，包括陽離子肽，選擇性地傳遞至某些細(xì)胞或胞內(nèi)細(xì)胞器諸如細(xì)胞核或核仁的靶向肽，以及兩親肽，即成螺旋肽或成孔肽；堿性蛋白質(zhì)，諸如組蛋白、去唾液酸蛋白質(zhì)；病毒蛋白(例如仙臺(tái)病毒外殼蛋白)；成孔蛋白；以及聚合物，包括樹枝狀高分子、星形聚合物、"同源的"聚氨基酸(例如，聚賴氨酸、聚精氨酸)、"異源的"聚氨基酸(例如，賴氨酸和甘氨酸的混合物)、共聚物、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和聚乙二醇(PEG)。此外，這些在體內(nèi)促進(jìn)和增強(qiáng)多核苷酸進(jìn)入脊椎動(dòng)物細(xì)胞的輔助劑也可以認(rèn)為是"促進(jìn)轉(zhuǎn)染的物質(zhì)"。Lipofectin促進(jìn)的轉(zhuǎn)染在本領(lǐng)域是周知的，如在例如，美國專利第6,034,072、6,040.295和6，710，035號(hào)中所描述的。本文提供的某些實(shí)施方式的組合物可以包括作為促進(jìn)轉(zhuǎn)染的物質(zhì)的脂類，包括陽離子脂類(例如，DOTMA、DMR1E、DOSPA、DC-Chol、GAP-DLRIE)、堿性脂類(例如，甾醇胺(sterylamine))、中性脂類(例如，膽固醇)、陰離子脂類(例如，磷脂酰絲氨酸)，以及兩性離子脂類(例如，DOPE、DOPC)。優(yōu)選地，陽離子脂類與一種或更多種共脂類混合。為了定義的目的，術(shù)語"共脂類(co-lipidf指可以與陽離子脂類組分結(jié)合的任何疏水物質(zhì)而且包括兩親脂類，諸如磷脂，以及中性脂類，諸如膽固醇。陽離子脂類和共脂類可以以許多方式混合或組合，產(chǎn)生多種非共價(jià)結(jié)合的宏觀結(jié)構(gòu)，包括，例如，脂質(zhì)體、多層囊泡、單層囊泡、膠束和簡(jiǎn)單膜。傳遞還可以通過使用DNA轉(zhuǎn)運(yùn)體進(jìn)行。DNA轉(zhuǎn)運(yùn)體(transporter)指連接到DNA載體并且能夠被表皮細(xì)胞吸收的分子。DNA轉(zhuǎn)運(yùn)體包含能夠非共價(jià)地連接到DNA并且將DNA有效轉(zhuǎn)運(yùn)穿過細(xì)胞膜的分子復(fù)合物。DNA轉(zhuǎn)運(yùn)體系統(tǒng)可以由包含幾個(gè)成分的顆粒組成，所述成分獨(dú)立地并且非共價(jià)地連接到DNA。每個(gè)成分由配體組成，所述配體識(shí)別特異性受體或其它功能基團(tuán)，諸如與連接到DNA的陽離子基團(tuán)復(fù)合的蛋白質(zhì)。可以使用的陽離子的實(shí)例是精胺、精胺衍生物、51組蛋白、陽離子肽和/或聚賴氨酸。第一成分能夠連接到DNA載體和目標(biāo)細(xì)胞上的細(xì)胞表面受體。這些成分的實(shí)例是與去唾液酸糖蛋白受體、葉酸受體、甘露糖-6-磷酸受體或肉堿受體相互作用的有機(jī)化合物。第二成分能夠連接到DNA載體和核膜上的受體。核配體能夠識(shí)別轉(zhuǎn)運(yùn)體系統(tǒng)和將轉(zhuǎn)運(yùn)體系統(tǒng)轉(zhuǎn)運(yùn)穿過核膜。這種配體的一個(gè)實(shí)例是來自SV40大T抗原或組蛋白的核靶向序列。第三成分能夠連接到DNA載體和誘導(dǎo)附加型裂解(episomallysis)的成分。實(shí)例包括失活的病毒顆粒諸如腺病毒、與流感病毒血球凝集素相關(guān)的肽或GALA肽。實(shí)施例ldna疫苗動(dòng)物模型研究包含K670N/M671LAPP雙突變的轉(zhuǎn)基因小鼠(Tg-2576)被用于研究DNA接種和阿爾茨海默病的影響。按照這種研究的制訂方針，小鼠供養(yǎng)在田納西大學(xué)(UniversityofTennessee)的動(dòng)物房設(shè)備中。這些研究得到田納西大學(xué)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)管理委員會(huì)(InstitutionalAnimalCareandUseCommittee)的批準(zhǔn)，符合公共衛(wèi)生局有關(guān)實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物人道關(guān)愛和使用的政策。動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)的結(jié)果提供其它生物體，特別是人的過繼細(xì)胞基因療法的原理依據(jù)(proof-of-principle)。在4禾Q5個(gè)月之間，腦損傷在Tg-2576小鼠中出現(xiàn)。在9至10個(gè)月后，損傷完全發(fā)展。大約4個(gè)月開始的接種顯示對(duì)阿爾茨海默病治療的預(yù)防效果，而5個(gè)月后開始的接種(即，在6個(gè)月開始)顯示對(duì)己經(jīng)發(fā)生阿爾茨海默病的小鼠的治療。4個(gè)月大的小鼠用編碼IL-4、IL-IO、TGF-P、IFN-y的DNA疫苗進(jìn)行治療或施用對(duì)照載體。給予每只小鼠100//g疫苗。小鼠以2個(gè)月間隔被加強(qiáng)免疫2次。雄性和雌性Tg-2576小鼠均使用并且供養(yǎng)至60周齡。然后將小鼠處死并且它們的腦被去除，速凍在液氮中，并在-8(TC下保存。實(shí)施例2記憶力評(píng)價(jià)使用Morris水迷宮航行實(shí)驗(yàn)(水迷宮)評(píng)價(jià)空間學(xué)習(xí)和記憶力。在圓形不透明的水池中訓(xùn)練小鼠學(xué)習(xí)平臺(tái)的定位，以逃脫水。水池放置在容器的中央，所述容器具有任意不同遠(yuǎn)端的空間尾狀物(cue)。用高架的攝像機(jī)對(duì)全部試驗(yàn)錄像。用23。C水充滿水槽(80cm寬，80cm深)。將隱蔽的圓形平臺(tái)(15cm寬)置于水表面下lcm，充當(dāng)動(dòng)物的逃脫平臺(tái)。每個(gè)試驗(yàn)的最大游泳時(shí)間是90秒，然后在平臺(tái)上休息20秒。每個(gè)小鼠訓(xùn)練5天，每天4次試驗(yàn)。對(duì)于每天的訓(xùn)練，4個(gè)開始的點(diǎn)是隨機(jī)的。最后一次試驗(yàn)后30分鐘，在不存在平臺(tái)的情況下，進(jìn)行保持測(cè)驗(yàn)(探索試驗(yàn))。從與目標(biāo)象限相反的位置釋放每個(gè)動(dòng)物并且使其游60秒。再訓(xùn)練后在第7天，將逃脫平臺(tái)移至相反的象限，以及在實(shí)驗(yàn)第8-10天時(shí)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)訓(xùn)練程序。逆轉(zhuǎn)訓(xùn)練的保持測(cè)驗(yàn)也在最后一次獲得試驗(yàn)后30分鐘進(jìn)行。登記每次試驗(yàn)的潛伏期(小鼠到達(dá)平臺(tái)所用的時(shí)間長度)。實(shí)施例3預(yù)防阿爾茨海默病的水迷宮結(jié)果在4個(gè)月齡時(shí)開始接種的8個(gè)月齡的小鼠的水迷宮結(jié)果。<table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table>在4個(gè)月齡時(shí)開始接種的9個(gè)月齡的小鼠的水迷宮結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage54</column></row><table>實(shí)驗(yàn)3:11個(gè)月小鼠的結(jié)果組小鼠鑒別號(hào)潛伏期具有對(duì)照載體的Tg-2576小鼠12分24秒具有混和基因*的Tg-2576小鼠113秒具有TGF-P載體的Tg-2576小鼠11分18秒26秒具有INF-Y載體的Tg-2576小鼠14秒具有IL-4載體的Tg-2576小鼠110秒具有IL-10載體的Tg-2576小鼠12秒27秒"昆和基因包含BDNF、IL-IO、IL-4、ApoE由于在大約4-5個(gè)月齡時(shí)腦損傷形成，所以這些小鼠已經(jīng)發(fā)展成阿爾茨海默病，并且這些結(jié)果顯示通過編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件的DNA疫苗可以治療阿爾茨海默病并且減少或逆轉(zhuǎn)其影響。實(shí)施例5腦組織學(xué)用三溴乙醇(Avertin)麻醉后，通過耳用溫的0.1M磷酸緩沖液(PBS)的溶液灌注小鼠，然后用溫的緩沖1.5%多聚甲醛溶液灌注小鼠2分鐘。然后用包含冷的4%多聚甲醛的第二固定劑灌注25分鐘。將動(dòng)物斷頭，暴露腦和骨并且將整個(gè)頭部浸入10%中性甲醛溶液且儲(chǔ)存過夜。用PBS漂洗后，用乙醇將腦脫水且包埋入石蠟中。使用切片機(jī)連續(xù)收集多組6厚的從額葉起始超向小腦的冠狀切片和裱片(mounted)。所有切片被裱片并用標(biāo)準(zhǔn)的蘇木精和伊紅染色以及用》-淀粉樣蛋白免疫組織化學(xué)染色來檢查損傷或神經(jīng)變性的證據(jù)。用光學(xué)顯微鏡(最終放大倍數(shù)x400的CarlZeissAxioskop2plusHALIOO)檢查所有切片。使用連接到計(jì)算機(jī)的照相機(jī)(leica)獲得切片的數(shù)字圖像。蘇木精和伊紅(H&E)染色方案將包含石蠟切片的載玻片置于載玻片架中(玻璃或金屬)。使用下述試劑使切片脫蠟和再水化二甲苯3x3'(在使用乙醇之前吸去過量的二甲苯)(StatLab#8400,實(shí)驗(yàn)室級(jí)，Anapath牌，Lewisville,TX)100。/。乙醇3x3'95%乙醇1x3'80%乙醇1x3'去離子水1x5'當(dāng)切片在水中時(shí)，用Kimwipe擦拭蘇木精的表面，以去除氧化的顆粒。在加入蘇木精前，從載玻片架吸去過量的水。蘇木精染色包括蘇木精1x3'(PolyScientific#s212A，含有冰醋酸的Harris蘇木精，Bayshore,NY)漂洗，用去離子水自來水lx5'(以使染色顯影)在酸性乙醇(脫色)中蘸8-12次(快速)自來水漂洗2xl'去離子水漂洗1x2'(在此階段可以放置過夜)在加入伊紅前，從載玻片架吸去過量的水。伊紅染色和脫水伊紅1x30秒(對(duì)于較年久批次的伊紅，高達(dá)45秒)(PolyScientific#s176，EosinPhloxine染料，Bayshore，NY)95。/。乙醇3x5'100。/。乙醇3x5'(在加入二甲苯前，吸去過量的乙醇)二甲苯2x15'可以將載玻片放入二甲苯中過夜，以充分清除任何水。使用玻璃棒在載玻片上放一滴Permount(二甲苯基的)(FisherScientific#SP15-100，組織學(xué)封固劑)，小心不要產(chǎn)生氣泡。使蓋玻片成角度并且使其輕輕地落在載玻片上。使Permount在蓋玻片下擴(kuò)散，覆蓋整個(gè)組織。在通風(fēng)櫥中干燥過夜p-淀粉樣蛋白免疫組織化學(xué)染色方案P-淀粉樣蛋白是腦內(nèi)發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞外絲狀蛋白質(zhì)沉積物。它是淀粉樣蛋白核和神經(jīng)斑的主要的蛋白質(zhì)組分并且也作為沉積物在神經(jīng)原纖維纏結(jié)中發(fā)現(xiàn)。在人中，阿爾茨海默病是最常見的老年性癡呆的原因，并且特征是腦內(nèi)的異常的絲狀蛋白沉積物。(3-淀粉樣蛋白沉積物也在路維小體癡呆癥(Lewybodydementia)、唐氏綜合征、淀粉樣變性病(荷蘭型)以及在Guam氏帕金森癡呆復(fù)合癥(GuamParkinson-Dementiacomplex)中檢測(cè)到。除患有阿爾茨海默病的腦組織之外，患有這些疾病的腦組織也被用作陽性對(duì)照。固定步驟福爾馬林固定、石蠟包埋切片。陽性對(duì)照患有阿爾茨海默病、路維小體癡呆癥、唐氏綜合征、淀粉樣變性病(荷蘭型)和Guam氏帕金森癡呆復(fù)合癥的腦組織。溶液和試劑初次抗體小鼠抗卩-淀粉樣蛋白(Clone:6F/3D)(Novocastra,Cat#NCI-B-Amyloid)。最佳稀釋度1:100。物種應(yīng)答性人，小鼠(更多信息參照抗體數(shù)據(jù)表)二次抗體生物素化的馬抗小鼠IgG(H+L)(VectorLaborato兀es,Cat#BA-2000)。最佳稀釋度1:500。檢測(cè)試劑HRP-鏈霉抗生物素蛋白(VetorLaborato兀es，Cat#SA-5004)。最佳稀釋度1:500程序1.石蠟切片置入蒸餾水中。2.抗原決定部位修復(fù)使用甲酸抗原決定部位修復(fù)方法。3.改變2次洗滌緩沖液漂洗切片，每次2分鐘。4.血清封閉用正常的馬血清封閉溶液溫育切片30分鐘，以封閉免疫球蛋白的非特異性結(jié)合。5.初次抗體用在初次抗體稀釋緩沖液中1:100稀釋的馬抗p-淀粉樣蛋白(Novocastra,Cat#NCL-B-Amyloid)室溫下溫育切片1小時(shí)。6.在洗滌緩沖液中漂洗2x2min。7.過氧化物酶封閉在過氧化物酶封閉溶液中溫育切片10分鐘，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性。8.在洗滌緩沖液中漂洗3x2min。579.二次抗體用在二次抗體稀釋緩沖液中稀釋的生物素化馬抗小鼠IgG室溫下溫育切片30分鐘。10.在洗滌緩沖液中漂洗3x2mm。11.檢測(cè)用在HRP-鏈霉抗生物素蛋白稀釋緩沖液中稀釋的HRP-鏈霉抗生物素蛋白室溫下溫育切片30分鐘。12.在洗滌緩沖液中漂洗3x2min。13.色原/底物在DAB過氧化物酶底物溶液中溫育切片5-10分鐘。14.在蒸餾水中短暫漂洗。15.如果期望，用Gill's蘇木精溶液或Mayer's蘇木精溶液復(fù)染。16.在流動(dòng)的自來水中漂洗5分鐘。17.通過95%乙醇脫水2分鐘，通過100%乙醇脫水2x3min。18.在二甲苯中透明2x3min。19.應(yīng)用永久封固劑，加蓋玻片。結(jié)果染色方式陽性染色可以在老年斑中心、斑外圍和擴(kuò)散斑中觀察到。在阿爾茨海默病的一些情況下，染色可以在血管壁和細(xì)胞外神經(jīng)原纖維纏結(jié)中觀察到。注釋1.相關(guān)的方案Tau(Tau-2)(Novocastra)2.對(duì)于某些可含有內(nèi)源性生物素的組織，諸如腎、肝、前列腺、結(jié)腸和消化道，可需要抗生物素/生物素封閉來阻斷內(nèi)源性生物素活性。對(duì)于冷凍切片，在之前在液氮中冷卻的異戊烷中快速冷凍新鮮組織，在低溫模式中包埋入OCT化合物中。切下4-8pm恒冷箱切片并且裱在superfrostplus載玻片上。在-8(TC下儲(chǔ)存載玻片直至需要時(shí)。在染色前，室溫下風(fēng)干載玻片30分鐘并在冰冷的丙酮中固定5分鐘。再風(fēng)干30分鐘。然后從第3步起進(jìn)行常規(guī)的免疫染色。實(shí)施例6預(yù)防阿爾茨海默病的水迷宮結(jié)果在6、8、10、12和14個(gè)月齡時(shí)接種的16個(gè)月齡小鼠的水迷宮結(jié)果。<table>tableseeoriginaldocumentpage59</column></row><table>在6、8、10和12個(gè)月齡時(shí)接種的13個(gè)月齡小鼠的水迷宮結(jié)果。<table>tableseeoriginaldocumentpage59</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage60</column></row><table>為是在本發(fā)明的范圍內(nèi)。本文提供的材料、方法和實(shí)例代表了優(yōu)選實(shí)施方式，是示例性的，并不意欲是對(duì)本發(fā)明范圍的限制。本文已經(jīng)寬泛地和一般性地描述了本發(fā)明。落入該一般公開內(nèi)容的每一較窄的種類和亞類也形成本發(fā)明的一部分。這包括發(fā)明的這樣的概括性描述，其帶有附加條件或從該類中除去任何主題的負(fù)限定，不論刪除的物質(zhì)是否在本文中被具體陳述。此外，當(dāng)本發(fā)明的特征或者方面針對(duì)馬庫什組(Markushgroups)進(jìn)行描述時(shí)，本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)意識(shí)到，本發(fā)明因此也針對(duì)該馬庫什組成員中的任何單獨(dú)成員或成員亞組進(jìn)行描述。本文提到的所有公開、專利申請(qǐng)、專利和其它參考文獻(xiàn)通過引用它們?nèi)勘幻鞔_并入，達(dá)到與每個(gè)通過單獨(dú)引用被并入相同的程度。在沖突的情況下，以本說明書——包括定義——為準(zhǔn)。其它實(shí)施方式在所附權(quán)利要求書中列出。序列表(SEQIDListing)SE(5IDNO:lIL-4核苷酸序列GenBank登錄號(hào)M139821gatcgttagcttctcctgataaactaattgcctcacattgtcactgcaaatcgacaccta61ttaatgggtctcacctcccaactgcttccccctctgttcttcctgctagcatgtgccggc121aactttgtccgtgcgatatcaccttacaggaactttgaac181agcctcacagtctgtgcaccgagttgsccgctttgctgcc241tccaagaacacaactgagaaiggaaaccttctgcagggctgcgactgtgctccggcagttc301tacagccacccactcgctgcctgggtgcgsctgcacagcagttccacagg361cacaagcagctgatccgattcctgaaacggctcgscaggaacctctggggcctggcgggc421ttgaattcctgtcctgtgaagga_a_gcca_aLCcagagtacgttggaaaacttcttggaaLagg481ctaaagacgagctga^t3ttttaatttatg541agtttttgatagctttattttttaagtatttatatatttataactcatca601atctSEQIDNO:2IL-5核苷酸序列GenBank登錄號(hào)BC0662821caaacgcagaacgtttcagagccatgaggatgcttctgcatttgagtttgctagctcttg61gagctgcctacgtgtatgccatccccacagaaattcccacaagtgcattggtgaaagaga121ccttggcactgctttctactcatcgaactctgctgatagccaatgagactctgaggattc181ctgttcctgtacataaaLaatcaccaactgtgcactgaagasatctttcagggaataggca241cactggagagtcasiactgtgcaagggggtactgtggaaagsctattcaaaasicttgtcct301ta^taa^gaaa_ta_ca_ttga_cggccaia_a_a_aiaa_a_a_￡Lgtgtggaigaa^g3La^gaicgga_ga_gta_a_361accaLattcctagactacctgcaagagtttcttggtgtaatgaaicaccgagtggataatag421a_a_a_gttga_gaLctaaactggttgttgcagccSEQIDNO:3IL-10核苷酸序列GenBank登錄號(hào)M576271acagacttgcatgeacagetcagcactgctctgttgcctg61gtcctcctgaggccagcccaggecagggeacccagtctgagsLaicagctgc121acccacttcccaggcaacctgectaacatgcttcgagatctecgagatgecttcagcaLga181gtgaagactttctttcaaatga^ggatcagctggscaLScttgttgttaaaggagtccttg241ctggaggactttaagggttacctgggttgccaagecttgtctgagatgatccagttttac301ctggaggsggtgatgccccaagctgagaaLCcaagacccagacatcaaggcgcatgtgsac361tccctgggggagaacctgaiagaccctcaggctgaggctacggcgctgtcatcgatttctt421ccctgtgaaaa_ca_agagea_a_ggccgtggagatgcctttaataagctccaa481gagaaaggcstctacaaagccatgaigtgagtttgacatcttca_tca_a_cta_catagaagee541tsca_tga_ca_a_aaactgagacstcagggtggcgactctatagactctagga601cataaattagaggtctccaaaateggatetggggctctgggatagctgacccagcccctt661gagaaaccttattgtacctctcttaitagaLatatttattacctctgatacctca_a_ccccca_721tttctstttatttactgagcttctctgtgaacgaitttagaa^ga^gecca781ttttttcaatatttatt3ttttcacctgtttttaagctgtttccatagggtgacacacta841tggtatttgagtgttttaagataaattaitaagttacataaiggga_gga_a_￡Laiaaaatgttct901ttggggsgccaa^cagaagcttccattccaagcctgaccacgctttctagctgttgagctg961ttttccctgacctccctctaatttatcttgtctctgggcttggggcttcctaactgetae1021a_a_a_ta_ctcttaccagggagcccctttgatgattaattcaccttccagtgt1081ctcggsgggattcccctaiacctcattccccaaccacttcattcttgaaagctgtggccag1141cttgttatttataacaacctaaatttggttetaggcegggcgcggtggctcacgcctgta1201atcccagcactttgggsggctgaggcgggtggatcacttgaggtcaggsgttcctaacca1261gcctggtcaaccccgtctctccgggcstgg1321tggcgcgcacctgtaatcccagctacttgggaggctgaggcaagagaattgcttgaaccc1381agttgcagtgagetgatateatgcccctgtactccagcctgggtgacags1441gcaiagactcttggttctaatagaactcagt1501tttaactagaatttattcaattcctctgggaatgttacattgtttgtctgtcttcatagc1561agattttaattttgaataaataaatgtatcttattcacatcSEQIDNO:4IL-13核苷酸序列GenBank登錄號(hào)L06801lttcggcatccgctcctcaatcctctcctgttggcsctgggcctcatggcgcttttgttga61ccacggtcattgctctcacttgccttggcggctttgcctccccaggccctgtgcctccct121ctacagccctcagggaigctcattgaggagctggtcaacatcagaaggctc181cgctctgcaatggcagcatggtaitggaLgcatcaacctgacagctggcatgtactgtgcag241ccctggaatccctgatcaacgtgtcaggctgeagtgecatcgagaagaicccagaggatgc301tgagcggattctgcccgcacaaggtctcaigctgggcagttttccagcttgcatgtccgag361cgaggtggcccagtttgtaaaggacctgetcttacattta421ttcgcgagggaeggttcaactgaaacttcgaaagcatcattatttgeagaga^ca^gg3cct481gttgeagattcatttttctttctgatgtcaaLsa^tgtcttgggtsggegg541gaaggagggttagggaggggtaia_a_a_ttccttagcttagacctcagcctgtgctgcccgtc601ttcagcctagccgacctcagccttccccttgccca^gggctcagcctggtgggcctcctct661gtccagggccctgagcteggtggacccagggatgacatgtCCCt3C3CCCctcccctgcc721ctagagcacactgtagcattacagtgggtgccccccttgccagacatgtggtgggsceigg781gacccacttcacacacaggcaactgaggcs841cttatttattattgtgtgttatttaaaitga901gactgtggctgctggcactt961cagtggaccccaggagtccctggtaataaig1021gggtcctggggcctcggagcctcatccgag1081tcctgtctgccagccaigcagccagctctca1141atttaaatattaaatatgttagcaa^gagt1201gggaggggacattgaLacaagttgtttcatt1261ggtgacsgatgacagcagctcaggcacacttcttcttggtgtgtgtttgtcaccgttggggattggggaagttcagagactcagggccccagcactaaagtactgtgtacagaiattctgctacctcactggcagggtcaiggaiga^ggggcagaiaiceigccgcgccaacgag仁aatttattgtttttcctcgttaatatatagaagggtaccttgaacactgggactaitcaaactgaaigccagaaLaitaaagttSEQIDN0:5TGF-p核苷酸序列GenBank登錄號(hào)M603161gtgaccgagcggcgcggacggccgcctgcc61gagcccggagcccgggtagcgcgtagagcc121gcggcgccgcacagcttcgtggcgctctgg181gccgacttcagcctggacaacgaggtgcac241caggsgcggcgggagatgcaigcgcgagatc301cgcccgcacctccsgggcaagcacaactcg361gccatggcggtggsggagggcggcgggccc421gccgtcttcagtacccagggcccccctctg481gacgccgaicatggtcstgagcttcgtcaac541ccacgctaccaccatcgagagttccggttt601gtcacggcagccgaattccggatctacaag661acgttccggatcagcgtttatcaggtgctc721ttcctgctcgacagccgtaccctctgggcc781gcaaccactgggtggtcaat841gtggsgscgctggstgggca901gggccccagaacaagcagcccttcatggtg961cgcagcatccggtccacggg1021a^ccaggaaLgccctgcggatggccaacgtg1081gcctgtaagaagcaicgagctgtatgtcagc1141atcgcgcctgasggctacgccgcctactac1201tcctacatga3cgccaccMccacgccatc1261gaaacggtgcccaagccctgctgtgcgccc1321ttcgatgsc3gctccaacgtcatcctgaag1381ggctgccactagctcctccgagaattcaga1441cattgctcccctctgccacctggggcggtgcgggcccgggcgcg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:10ApoE核苷酸序列GenBank登錄號(hào)BC0035571ggacgtccttccccaggagccgactggccaatcacaggcaggaagatgaaggttctgtgg61gctgcgttgctggtcacattcctggcaggatgccaggccaa_ggtggagcssgcggtggag121acagagccggagcccgagctgcgccagcagaccgagtggcagsLgcggccagcgctgggaa181ctggcactgggtcgcttttgggattacctgcgctgggtgcagacactgtctgagcaggtg241caggaggagctgctcagctcccaggtcacccaggaaictgagggcgctgatggacgagacc301atgaaggag仁tgaaggcctacaaatcggaactggaggaacaactgaccccggtggcggag361gagacgcgggcacggctgtccaggcggcgcaggcccggctgggcgcggac421aitggaggacgtgtgcggccgcctggtgcsgtaccgcggcgaggtgcaggccatgctcggc481cagagcaccgsggagctgcgggtgcgcctcgcctcccacctgcgcaagctgcgtaagcgg541ctcctccgcgstgccgatgacctgcagaagcgcctggcagtgtaccaggccggggcccgc601gsgggcgccgagcgcggcctcagcgccatccgcgagcgcctggggcccct661ggccgcgtgcgggccgccactgtgggctccctggccggccagccgctacaggagcgggcc721caggcctggggcgagcggctgcgcgcgcggatggaggagatgggcagccggacccgcgac781cgcctggacggcaggtggcggaggtgcgcgccaagctggaggagcaggcc841cagca_ga_ta_cgcctgcaggccgaggccttccaggcccgcctcaagagctggttcgagccc901ctggtggaagacatgcagcgccagtgggccgggctggtgga_ga_a_ggtgca_ggctgccgtg%1ggcaccagcgccgcccctgtgcccagcgacaatcactgaacgccgaaigcctgcagccatg1021cgaccccacgccaccccgtgcctcctgcctccgcgcagcctgcagcgggagaccctgtcc1081ccgccccagccgtcctcctggggtggaccctagtttaataaagattcaccaagtttcacgll斗lcaissaiassss33￡i33333ai3aa33333a133satasa^sasaisaieisacSEQIDNO:11ApoE-2核苷酸序列1atgaaggttctgtgggctgcgttgctggt(:acattcctggcaggatgccaggccaaggtg61gsgcaagcgggccggagcccgagctgcgccagcagaccgagtggcagagc121ggccagcgctgggssctggcactgggtcgcttttgggattacctgcgctgggtgca_ga_ca181ctgtctgagcggagctgctcagctcccaggtcacccaggaactgaigggcg241ctgatggacgggagttgaaggcctacaaatcggasctggagg6ia_ca_a>ctg301atccccggtggcggaggaigaLCgcgggcacggctgtccaaggagctgcaggcggcgcaggcc361cggctgggcgcggacatggaggacgtgtgcggccgcctggtgca^gteiccgcggcgaggtg421caggccatgctcggccagagcaccgaggagctgcgggtgcgcctcgcctcccacctgcgc481aagctgtgtaagcggctcctccgcgatgccgatgacctgcagaagtgcctggcagtgtac541caggccggggcccgcgsgggcgccgagcgcggcctcagcgccatccgcgagcgcctgggg601cccctggtggaacagggccgcgtgcgggccgccactgtgggctccctggccggccagccg"1ctacaggagcgggcccsggcctggggcgsgcggctgcgcgcgcggatggsgg3g3tgggc721agccggacccgcgaccgcctggacgsggtggcgcgccaag781ctggaggagcaggcccagcagatacgcctgcaggccgaggccttccaggcccgcctcaag841agctggttcgagcccctggtcagcgccagtgggccgggct901gtgcaggctgccgtgggcaccagcgccgcccctgtgcccagcgacaatcactgaSEQIDNO:12IL-4肽編碼序列GenBank登錄號(hào)M13982MGLTSQIjIjPPIjFFI^ACAGNFVHGHKCDITLQEIIKTIjNSIiTEQKTLCTEIjTVTDIFAASKNTTEKETFCRAATVLRQFYSHHEKDTRCLiGATAQQFHRHKQIjIRFIjKRIjDRNIjWGIiAG:LNSCPVKEANGSTIjENFLERIjKTIMREKYSKCSSSEQIDNO:13IL-5肽編碼序列GenBank登錄號(hào)BC066282MRMIjIjHLSIjLALiGAAYVYAIPTEIPTSALVKETLiAIiLSTHRTLIjIANETIjRIPVPVHKNHQIjCTEEIFQGIGTIjESQTVQGGTVERIjFKNLSIjIKKYIDGQKKKCGEERRRVNQFIjDYIjQEFIjGVMNTEWIiesSEQIDNO:14IL-IO肽編碼序列GenBank登錄號(hào)M57627MHSSALIjCC:LVLjLTGVRASPGQGTQSENSCTHFPGNIjPNMIjRDIjRDAFSRVKTFFQMKDQLDNIjIjIjKESLIjEDFKGYIjGCQALSEMIQFYIjEEVMPQAENQDPDIKAHVNSIiGENIjIOXRIiRIiRRCHRFLPCENKSKAVEQVKNAFNKLjQEKGIYKAMSEFDIFINYIEAYMTMKIRNSEQIDNO:15IL-13肽編碼序列GenBank登錄號(hào)L06801MAIjIjIjTTVIAIjTCIjGGFASPGPVPPSTAIjREIilEEIjVNITQNQKaplcngsmvwsinltagmycaaleslinvsgcsaiektgrmlsgfcphkvsaggfsslhvrdtk工evagfvkd:lIj:lhIjKK1jFregrfnSE(3IDNO:16TGF-y5肽編碼序列GenBank登錄號(hào)M60316mhvrslraaaphsfvalwaplfllrsaladfsldnevhssfihrRIjRSQERREMQREIIiSIIjGIjPHRPRPHIiQGKHNSAPMFMIJDIiYNAMAVEEGGGPGGQGSK工PEGEAVTAAEFR工YKDY工RERFDNETFRISVYQVIjQEHIjGRESD:LF:LIjDSRTIjWAseegw!jVfditatsnhwvvnprhn:lgLjQIjSvetIjDGQs工npk:lag:ligrhgpqnkqpfmvaffkatevhfrsirstgskqrsqnrsktpknqea:lrmanvaensssdqrqackkhekpccaptq:lnaisv:lyfddssnv工IjKkyrnmvvracgchSEGIDNO:17IFN-y核苷酸序列GenBank登錄號(hào)AAH70256YSVTDIiNVQRKAIHEL工QVMAELSPAAKTGKRKRSQM!LFRGRRASQSEQIDNO:18BDNF肽編碼序列GenBank登錄號(hào)M37762mttIjF:ltmv工syfgcmkaapmkeanirgiqgg:laypgvrthgtIjESVNGPKAGSRGIjTSIjADTFEHVIEEIjIjDEDQKVRPNEENNKDADrjYTSRVMIiSSQVPLieppliiifliieeyknyijdaanmsmrvrrhsdparrgelsvcds工sewvtaadkktavdmstmdskkrigwrfir工dtscvct:ltikrgrSEQIDNO:19NGF肽編碼序列GenBank登錄號(hào)AAV38538aSEQIDNO:20/-淀粉樣蛋白肽編碼序列GenBank登錄號(hào)BC004369MIjPGKAIjIjIjIjAAWTARAIjEVPTDGNAGIjIjAEPQIAMFCGRIjNMHMNVQNGKWDSDPSGTKTC工DTKEG工LQYCQEVYPEIjQITNVVEANQPVTIQNWCKRGRKQCKTHPHFVIPYRCLjVGEFVSDAIjIjVPDKCKFLHQERMDVCETHIjHWHTVAKETCSEKSTNLHDYGMLLPCG工DKFRGVEFVCCPLAEESDNVDSADAEEDDSDVWWGGADTDYADGSEDKVVEVAEEEEVAEVEEEEADDDEDDEDGDEVEEEAEEPYEEATERTTSIATTTTTTTESVEEWREKWYKEVHSGQARWIjMIjSEQIDNO:21ApoE肽編碼序列GenBank登錄號(hào)BC003557MKVLWAALL/VTFLAGCQAKVEQAVETEPEPELjRQQTEWQSGQRWEIjALGRFWDYLjRWVQTIjSEQVQEELjIjSSQVTQEIjRAIjMDETMKELiKAYKSELjEEQIjTPVAEETRARLSKELjQAAQARLGADMEDVCGRIjVQYRGEVQAJyiljGQSTEELiRVRiLASHIjRKLRKRI^RDADDL^KRLAVYQAGAREGAERGLSAIRERLGPIjVEGGRVRAATVGSKAGQPLQERAQAWGERLRARMEEMGSRTRDRLDEVKEQVAEVRAKLEEQAQQIRLQAEAFQARLKSWFEPLVEDMQRQWAGLVEKVQAAVGTSAAPVPSDNHSEQIDNO:22ApoE-2肽編碼序列MKVLWAALLVTFLAGCQAKVEQAVETEPEPELRQQTEWQSGQRWELjALGRFWDYIjRWVQTLSEQVQEELjLjSSQVTQELjRAIjiyiDETMKELjKAYKSELjEEQLTPVAEETRARLSKELQAAQARLGADMEDVCGRLVQYRGEVQAMLGQSTEELRVRLASHLRKLRKRLLRDADDLQKRLAVYGAGAREGAERGLSAIRERIjGPLVEQGRVRAATVGSLAGQPLQERAQAWGER:LRARMEEMGSRTRDRLjDEVKEQVAEVRAKIjEEQAQQ工R:LQAEAFQARLKSWFEPLVEDMQRQWAGLVEKVQAAVGTSAAPVPSDNH權(quán)利要求1.治療或改善神經(jīng)變性疾病的方法，所述方法包括施用包含誘導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答的核酸的組合物。2.權(quán)利要求l所述的方法，其中所述細(xì)胞免疫應(yīng)答是Th2應(yīng)答。3.權(quán)利要求l所述的方法，其中所述細(xì)胞免疫應(yīng)答是Th3應(yīng)答。4.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述核酸編碼細(xì)胞因子。5.權(quán)利要求4所述的方法，其中所述細(xì)胞因子是Th2細(xì)胞因子。6.權(quán)利要求4所述的方法，其中所述細(xì)胞因子是Th3細(xì)胞因子。7.權(quán)利要求4所述的方法，其中所述細(xì)胞因子是IL-4或其片段。8.權(quán)利要求4所述的方法，其中所述細(xì)胞因子是IL-5或其片段。9.權(quán)利要求4所述的方法，其中所述細(xì)胞因子是IL-10或其片段。10，權(quán)利要求4所述的方法，其中所述細(xì)胞因子是IL-13或其片段。11.權(quán)利要求4所述的方法，其中所述細(xì)胞因子是TGF-"或其片段。12.權(quán)利要求4所述的方法，其中所述細(xì)胞因子是IFN-Y或其片段。13.權(quán)利要求7-12所述的方法，其中所述組合物進(jìn)一步包含編碼,淀粉樣蛋白的核酸。14.權(quán)利要求7-12所述的方法，其中所述組合物進(jìn)一步包含編碼A淀粉樣蛋白的氨基酸1-42的核酸。15.權(quán)利要求7-12所述的方法，ApoE的核酸。16.權(quán)利要求7-12所述的方法，ApoE-2的核酸。17.權(quán)利要求7-12所述的方法，神經(jīng)生長因子(NGF)的核酸。18.權(quán)利要求7-12所述的方法，腦源神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)的核酸。其中所述組合物進(jìn)一步包含編碼其中所述組合物進(jìn)一步包含編碼其中所述組合物進(jìn)一步包含編碼其中所述組合物進(jìn)一步包含編碼19.治療或改善神經(jīng)變性疾病的方法，所述方法包括施用包含核酸的組合物，所述核酸編碼選自IL-4、IL-5、IL-IO、IL-13、TGF-^和IFN-y或其片段的多肽。20.治療或改善神經(jīng)變性疾病的方法，所述方法包括施用包含核酸的組合物，所述核酸編碼選自IL-4、IL-5、IL-IO、IL-13、TGF-"和IFN-丫或其片段的一種或更多種多肽。21.治療或改善神經(jīng)變性疾病的方法，所述方法包括施用包含核酸的組合物，所述核酸編碼選自IL-4、IL-5、IL-IO、IL-13、TGF-"和IFN-y或其片段的兩種或更多種多肽。22.治療或改善神經(jīng)變性疾病的方法，所述方法包括施用包含核酸的組合物，所述核酸編碼選自IL-4、IL-5、IL-IO、IL-13、TGF-"和IFN-y或其片段的三種或更多種多肽。23.治療或改善神經(jīng)變性疾病的方法，所述方法包括施用包含核酸的組合物，所述核酸編碼選自IL-4、IL-5、IL-IO、IL-13、TGF--和IFN-y或其片段的四種或更多種多肽。24.治療或改善神經(jīng)變性疾病的方法，所述方法包括施用包含核酸的組合物，所述核酸編碼選自IL-4、IL-5、IL-IO、IL-13、TGF--和IFN-y或其片段的五種或更多種多肽。25.治療或改善神經(jīng)變性疾病的方法，所述方法包括施用包含核酸的組合物，所述核酸編碼IL-4、IL-5、IL-IO、IL-13、TGF--和IFN-y。26.權(quán)利要求19-25所述的方法，其中所述方法進(jìn)一步包括施用編碼多肽的核酸，所述多肽選自NGF、/-淀粉樣蛋白、,淀粉樣蛋白M2、ApoE和ApoE-2或其片段。27.權(quán)利要求19-25所述的方法，其中所述方法進(jìn)一步包括施用編碼選自NGF、BDNF、y9-淀粉樣蛋白、y5-淀粉樣蛋白M2、ApoE和ApoE-2或其片段的一種或更多種多肽的核酸。28.權(quán)利要求19-25所述的方法，其中所述方法進(jìn)一步包括施用編碼選自NGF、BDNF、,淀粉樣蛋白、^淀粉樣蛋白M2、ApoE和ApoE-2或其片段的兩種或更多種多肽的核酸。29.權(quán)利要求19-25所述的方法，其中所述方法進(jìn)一步包括施用編碼選自NGF、BDNF、y5-淀粉樣蛋白、,淀粉樣蛋白M2、ApoE和ApoE-2或其片段的三種或更多種多肽的核酸。30.權(quán)利要求19-25所述的方法，其中所述方法進(jìn)一步包括施用編碼選自NGF、BDNF、々-淀粉樣蛋白、y9-淀粉樣蛋白M2、ApoE和ApoE-2或其片段的四種或更多種多肽的核酸。31.權(quán)利要求19-25所述的方法，其中所述方法進(jìn)一步包括施用編碼選自NGF、BDNF、y9-淀粉樣蛋白、y5-淀粉樣蛋白M2、ApoE和ApoE-2或其片段的五種或更多種多肽的核酸。32.權(quán)利要求19-25所述的方法，其中所述方法進(jìn)一步包括施用編碼NGF、BDNF、^淀粉樣蛋白、y5-淀粉樣蛋白M2、ApoE和ApoE-2的核酸。33.權(quán)利要求1-31所述的方法，其中所述核酸是質(zhì)粒。34.權(quán)利要求33所述的方法，其中每個(gè)編碼多肽的核酸在相同的質(zhì)粒上。35.權(quán)利要求33所述的方法，其中核酸在相同的質(zhì)粒上編碼一種或更多種多肽。36.權(quán)利要求33所述的方法，其中每個(gè)編碼多肽的核酸在不同的質(zhì)粒上。37.權(quán)利要求1-31所述的方法，其中所述核酸包括多核苷酸。38.權(quán)利要求1-31所述的方法，其中所述核酸基本上由DNA組成。39.權(quán)利要求1-31所述的方法，其中所述核酸基本上由RNA組成。40.權(quán)利要求1-31所述的方法，其中所述核酸包括反義核酸。41.權(quán)利要求1-31所述的方法，其中所述核酸基本上由siRNA組成。42.權(quán)利要求1-31所述的方法，其中所述核酸被施用給哺乳動(dòng)物。43.權(quán)利要求42所述的方法，其中所述哺乳動(dòng)物是人。44.權(quán)利要求1-43所述的方法，其中所述施用包括選自靜脈注射、肌肉注射、腹膜內(nèi)注射、皮下注射和電穿孔的一種或更多種方法。45.權(quán)利要求1-43所述的方法，其中所述施用包括選自注射、吸入和基因槍的一種或更多種方法。46.權(quán)利要求37所述的方法，其中所述多核苷酸包括環(huán)狀DNA，所述環(huán)狀DNA包含復(fù)制起點(diǎn)(ORI)、啟動(dòng)子和多克隆位點(diǎn)(MCS)。47.權(quán)利要求37所述的方法，其中所述多核苷酸是質(zhì)粒，所述質(zhì)粒包含轉(zhuǎn)錄連接至編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件基因的序列的啟動(dòng)子/增強(qiáng)子。48.權(quán)利要求47所述的方法，其中所述啟動(dòng)子適于在真核細(xì)胞中表達(dá)。49.權(quán)利要求1-48所述的方法，其中所述核酸與促進(jìn)轉(zhuǎn)染的物質(zhì)一起施用。50.權(quán)利要求49所述的方法，其中所述促進(jìn)轉(zhuǎn)染的物質(zhì)是脂類。51.權(quán)利要求37所述的方法，其中所述多核苷酸通過過繼細(xì)胞基因療法傳遞。52.權(quán)利要求51所述的方法，其中所述過繼基因細(xì)胞基因療法包括施用能夠?qū)⒑怂岚蚁騻鬟f至炎癥位點(diǎn)的細(xì)胞。53.權(quán)利要求52所述的方法，其中所述細(xì)胞選自T細(xì)胞、抗原呈遞細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和干細(xì)胞。54.權(quán)利要求53所述的方法，其中所述T細(xì)胞是CD4+。55.權(quán)利要求53所述的方法，其中所述抗原呈遞細(xì)胞是樹突細(xì)胞。56.權(quán)利要求53所述的方法，其中所述成纖維細(xì)胞是NIH3T3。57.權(quán)利要求53所述的方法，其中所述干細(xì)胞是ATCC干細(xì)胞。58.權(quán)利要求53所述的方法，其中所述干細(xì)胞是自體干細(xì)胞。59.權(quán)利要求37所述的方法，其中所述多核苷酸通過逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)入所述細(xì)胞。60.權(quán)利要求l-59所述的方法，其中所述核酸是病毒載體。61.權(quán)利要求60所述的方法，其中所述病毒載體是pUMCV。62.權(quán)利要求l-59所述的方法，其中所述核酸是逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。63.權(quán)利要求62所述的方法，其中所述逆轉(zhuǎn)錄病毒載體是pGCy。64.權(quán)利要求60所述的方法，其中所述病毒載體是慢病毒載體。65.權(quán)利要求64所述的方法，其中所述慢病毒載體是pLentilox-IRES-GFP。66.權(quán)利要求64所述的方法，其中所述慢病毒載體基本上由pLentilox-IRES-GFP組成。67.權(quán)利要求1-66所述的方法，其中所述組合物增加減少炎癥的基因的表達(dá)。68.權(quán)利要求1-66所述的方法，其中所述組合物抑制或削弱增加炎癥的基因的表達(dá)。69.權(quán)利要求1-66所述的方法，其中所述組合物抑制或削弱增加炎癥的基因的表達(dá)，以及其中所述基因編碼Thl細(xì)胞因子或其部分。70.權(quán)利要求1-66所述的方法，其中所述組合物抑制或削弱增加炎癥的基因的表達(dá)，其中所述基因編碼Thl細(xì)胞因子或其部分，以及其中所述Thl細(xì)胞因子選自IL-2、IL-12和TNFa。71.權(quán)利要求l-66所述的方法，其中所述核酸包含編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件基因或其片段的序列。72.權(quán)利要求1-66所述的方法，其中所述核酸包含編碼兩種或更多種細(xì)胞免疫應(yīng)答元件多肽或其片段的序列。73.權(quán)利要求1-66所述的方法，其中所述核酸包含編碼選自下列的一種或更多種多肽的序列自身抗原、減少自身免疫炎癥的細(xì)胞因子、增加自身免疫炎癥的細(xì)胞因子的拮抗物、和誘導(dǎo)無反應(yīng)性的多肽或其片段。74.權(quán)利要求l-66所述的方法，其中所述核酸包含編碼選自下列的一種或更多種多肽的序列IL-4、IL-5、IL-IO、IL-13、TGF-"、IFN^、NGF、BDNF、f淀粉樣蛋白、,淀粉樣蛋白M2、ApoE和ApoE-2或其片段。75.權(quán)利要求1-66所述的方法，其中所述核酸包含編碼一種或更多種多肽的序列，其中所述一種或更多種多肽與選自下列的多肽同源:IL-4、IL-5、IL-IO、IL-13、TGF-"、IFN-y、NGF、"-淀粉樣蛋白、"畫淀粉樣蛋白M2、ApoE和ApoE-2或其片段。76.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述核酸包含編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件多肽或其片段的序列。77.權(quán)利要求76所述的方法，其中所述核酸包含多核苷酸。78.權(quán)利要求76所述的方法，其中所述核酸基本上由DNA組成。79.權(quán)利要求76所述的方法，其中所述核酸被施用給哺乳動(dòng)物。80.權(quán)利要求79所述的方法，其中所述哺乳動(dòng)物是人。81.權(quán)利要求76-80所述的方法，其中所述施用包括選自基本上由下列組成的集合的一種或更多種方法靜脈注射、肌肉注射、腹膜內(nèi)注射、皮下注射和電穿孔。82.權(quán)利要求76-80所述的方法，其中所述施用包括選自注射、吸入和基因槍的一種或更多種方法。83.權(quán)利要求76-80所述的方法，其中所述核酸包含環(huán)狀DNA，所述環(huán)狀DNA包含復(fù)制起點(diǎn)(ORI)、啟動(dòng)子和多克隆位點(diǎn)(MCS)。84.權(quán)利要求76-80所述的方法，其中所述核酸是質(zhì)粒，所述質(zhì)粒包含轉(zhuǎn)錄連接至編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件基因的序列的啟動(dòng)子/增強(qiáng)子。85.權(quán)利要求84所述的方法，其中所述啟動(dòng)子適于在真核細(xì)胞中表達(dá)。86.權(quán)利要求76-85所述的方法，其中所述核酸與促進(jìn)轉(zhuǎn)染的物質(zhì)一起施用。87.權(quán)利要求86所述的方法，其中所述促進(jìn)轉(zhuǎn)染的物質(zhì)是脂類。88.權(quán)利要求76-80所述的方法，其中所述核酸通過過繼細(xì)胞基因療法傳遞。89.權(quán)利要求88所述的方法，其中所述過繼細(xì)胞基因療法包括施用能夠?qū)⒑怂岚邢騻鬟f至炎癥位點(diǎn)的細(xì)胞。90.權(quán)利要求89所述的方法，其中所述細(xì)胞選自T細(xì)胞、抗原呈遞細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和干細(xì)胞。91.權(quán)利要求90所述的方法，其中所述T細(xì)胞是CD4+。92.權(quán)利要求90所述的方法，其中所述抗原呈遞細(xì)胞是樹突細(xì)胞。93.權(quán)利要求90所述的方法，其中所述成纖維細(xì)胞是NIH3T3。94.權(quán)利要求90所述的方法，其中所述干細(xì)胞是ATCC干細(xì)胞。95.權(quán)利要求90所述的方法，其中所述干細(xì)胞是自體干細(xì)胞。96.權(quán)利要求88所述的方法，其中所述核酸通過逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)入所述細(xì)胞。97.權(quán)利要求76所述的方法，其中所述核酸是病毒載體。98.權(quán)利要求97所述的方法，其中所述病毒載體是pUMCV。99.權(quán)利要求76所述的方法，其中所述核酸是逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。100.權(quán)利要求99所述的方法，其中所述逆轉(zhuǎn)錄病毒載體是pGCy。101.權(quán)利要求97所述的方法，其中所述病毒載體是慢病毒載體。102.權(quán)利要求101所述的方法，其中所述慢病毒載體是pLentilox-IRES-GFP。103.權(quán)利要求101所述的方法，其中所述慢病毒載體基本上由pLentilox-IRES-GFP組成。104.權(quán)利要求77-103所述的方法，其中所述組合物增加減少炎癥的基因的表達(dá)。105.權(quán)利要求77-103所述的方法，其中所述組合物增加減少炎癥的基因的表達(dá)，以及其中所述基因編碼Th2細(xì)胞因子或其部分。106.權(quán)利要求77-103所述的方法，其中所述組合物增加減少炎癥的基因的表達(dá)，其中所述基因編碼Th2細(xì)胞因子或其部分，以及其中所述Th2細(xì)胞因子選自IL-4、IL-5、IL-10和IL-13。107.權(quán)利要求77-103所述的方法，其中所述組合物抑制或削弱增加炎癥的基因的表達(dá)。108.權(quán)利要求77-103所述的方法，其中所述組合物抑制或削弱增加炎癥的基因的表達(dá)，以及其中所述基因編碼Thl細(xì)胞因子或其部分。109.權(quán)利要求77-103所述的方法，其中所述組合物抑制或削弱增加炎癥的基因的表達(dá)，其中所述基因編碼Thl細(xì)胞因子或其部分，以及其中所述Thl細(xì)胞因子選自IL-2、IL-12和TNFa。110.權(quán)利要求77-103所述的方法，其中所述核酸包含編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件基因或其片段的序列。111.權(quán)利要求77-103所述的方法，其中所述核酸包含編碼兩種或更多種細(xì)胞免疫應(yīng)答元件多肽或其片段的序列。112.權(quán)利要求77-103所述的方法，其中所述核酸包含編碼選自下列的一種或更多種多肽的序列自身抗原、減少自身免疫炎癥的細(xì)胞因子、增加自身免疫炎癥的細(xì)胞因子的拮抗物、和誘導(dǎo)無反應(yīng)性的多肽或其片段。113.權(quán)利要求76-103所述的方法，其中所述細(xì)胞免疫應(yīng)答元件包含編碼選自下列的一種或更多種多肽的序列IL-4、IL-5、IL-IO、IL-13、TGF-y9、IFN-y、NGF、BDNF、^-淀粉樣蛋白、/-淀粉樣蛋白l42、ApoE和ApoE-2或其片段。114.權(quán)利要求1-113所述的方法，其中所述組合物是FDA批準(zhǔn)的。115.組合物，其包含多核苷酸和藥學(xué)上可接受的載體，所述多核苷酸包含編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件多肽的序列。116.權(quán)利要求115所述的組合物，其中所述多核苷酸基本上由DNA組成。117.權(quán)利要求115所述的組合物，其中所述多核苷酸施用給哺乳動(dòng)物。118.權(quán)利要求117所述的組合物，其中所述哺乳動(dòng)物是人。119.權(quán)利要求115所述的組合物，其中所述組合物通過選自基本上由下列組成的集合的一種或更多種方法施用靜脈注射、肌肉注射、腹膜內(nèi)注射、皮下注射和電穿孔。120.權(quán)利要求115所述的組合物，其中所述組合物通過選自注射、吸入和基因槍的一種或更多種方法施用。121.權(quán)利要求115所述的組合物，其中所述多核苷酸包含環(huán)狀DNA，所述環(huán)狀DNA包含復(fù)制起點(diǎn)(ORI)、啟動(dòng)子和多克隆位點(diǎn)(MCS)。122.權(quán)利要求115所述的組合物，其中所述多核苷酸是質(zhì)粒，所述質(zhì)粒包含轉(zhuǎn)錄連接至編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件基因的所述序列的啟動(dòng)子/增強(qiáng)子。123.權(quán)利要求122所述的組合物，其中所述啟動(dòng)子適于在真核細(xì)胞中表達(dá)。124.權(quán)利要求115所述的組合物，其中所述多核苷酸與促進(jìn)轉(zhuǎn)染的物質(zhì)一起施用。125.權(quán)利要求124所述的組合物，其中所述促進(jìn)轉(zhuǎn)染的物質(zhì)是脂類。126.權(quán)利要求115所述的組合物，其中所述核酸通過過繼細(xì)胞基因療法傳遞。127.權(quán)利要求126所述的組合物，其中所述過繼細(xì)胞基因療法包括施用能夠?qū)⒑怂岚邢騻鬟f至炎癥位點(diǎn)的細(xì)胞。128.權(quán)利要求127所述的組合物，其中所述細(xì)胞選自T細(xì)胞、抗原呈遞細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和干細(xì)胞。129.權(quán)利要求128所述的組合物，其中所述T細(xì)胞是CD4+。130.權(quán)利要求128所述的組合物，其中所述抗原呈遞細(xì)胞是樹突細(xì)胞。131.權(quán)利要求128所述的組合物，其中所述成纖維細(xì)胞是NIH3T3。132.權(quán)利要求128所述的組合物，其中所述干細(xì)胞是ATCC干細(xì)胞。133.權(quán)利要求128所述的組合物，其中所述干細(xì)胞是自體干細(xì)胞。134.權(quán)利要求127所述的組合物，其中所述多核苷酸通過逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)入所述細(xì)胞。135.權(quán)利要求115所述的組合物，其中所述細(xì)胞免疫應(yīng)答元件基因被傳遞至炎癥位點(diǎn)。136.權(quán)利要求115所述的組合物，其中所述多核苷酸是病毒載體。137.權(quán)利要求136所述的組合物，其中所述病毒載體是pUMCV。138.權(quán)利要求116所述的組合物，其中所述多核苷酸是逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。139.權(quán)利要求138所述的組合物，其中所述逆轉(zhuǎn)錄病毒載體是pGCy。140.權(quán)利要求136所述的組合物，其中所述病毒載體是慢病毒載體。141.權(quán)利要求140所述的組合物，其中所述慢病毒載體是pLentilox-IRES-GFP。142.權(quán)利要求140所述的組合物，其中所述慢病毒載體基本上由pLentilox-IRES-GFP組成。143.權(quán)利要求115-142所述的組合物，其中所述組合物增加減少炎癥的基因的表達(dá)。144.權(quán)利要求115-142所述的組合物，其中所述組合物增加減少炎癥的基因的表達(dá)，以及其中所述基因編碼Th2細(xì)胞因子或其部分。145.權(quán)利要求115-142所述的組合物，其中所述組合物增加減少炎癥的基因的表達(dá)，其中所述基因編碼Th2細(xì)胞因子或其部分，以及其中所述Th2細(xì)胞因子選自IL-4、IL-5、IL-10和IL-13。146.權(quán)利要求115-142所述的組合物，其中所述組合物抑制或削弱增加炎癥的基因的表達(dá)。147.權(quán)利要求115-142所述的組合物，其中所述組合物抑制或削弱增加炎癥的基因的表達(dá)，以及其中所述基因編碼Thl細(xì)胞因子或其部分。148.權(quán)利要求115-142所述的組合物，其中所述組合物抑制或削弱增加炎癥的基因的表達(dá)，其中所述基因編碼Thl細(xì)胞因子或其部分，以及其中所述Thl細(xì)胞因子選自IL-2、IL-12和TNFa。149.權(quán)利要求115-142所述的組合物，其中所述組合物進(jìn)一步包含編碼一種或更多種細(xì)胞免疫應(yīng)答元件基因或其片段的序列。150.權(quán)利要求115-142所述的組合物，其中所述組合物進(jìn)一步包含編碼兩種或更多種細(xì)胞免疫應(yīng)答元件基因或其片段的序列。151.權(quán)利要求115-142所述的組合物，其中所述多核苷酸包含編碼選自下列的一種或更多種多肽的序列IL-4、IL畫5、IL-IO、IL畫13、TGF-y5、IFN-y、NGF、BDNF、^-淀粉樣蛋白、々-淀粉樣蛋白M2、ApoE和ApoE-2或其片段。152.權(quán)利要求115-142所述的組合物，其中所述組合物進(jìn)一步包含多核苷酸，所述多核苷酸包含編碼一種或更多種多肽的序列，其中所述一種或更多種多肽與選自下列的多肽同源IL-4、IL-5、IL-IO、IL-13、TGF-p、IFN-y、NGF、BDNF、y5-淀粉樣蛋白、y-淀粉樣蛋白m2、ApoE和ApoE-2或其片段。153.權(quán)利要求115-142所述的組合物，其中所述多核苷酸是FDA批準(zhǔn)的。154.權(quán)利要求115-142所述的組合物，其中所述多核苷酸治療或預(yù)防人的神經(jīng)變性疾病。155.權(quán)利要求154所述的組合物，其中所述神經(jīng)變性疾病是阿爾茨海默病。156.權(quán)利要求115-155所述的組合物，其中所述組合物是DNA疫苗。157.權(quán)利要求115-156所述的組合物，其中所述組合物是FDA批準(zhǔn)的。158.制造治療或預(yù)防神經(jīng)變性疾病組合物的方法，所述方法包括制備包含啟動(dòng)子/增強(qiáng)子的多核苷酸，所述啟動(dòng)子/增強(qiáng)子轉(zhuǎn)錄連接至編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件多肽或其片段的序列。159.權(quán)利要求158所述的方法，其中所述多核苷酸基本上由DNA組成。160.權(quán)利要求158所述的方法，其中所述多核苷酸被施用給哺乳動(dòng)物。161.權(quán)利要求160所述的方法，其中所述哺乳動(dòng)物是人。162.權(quán)利要求158-161所述的方法，其中所述施用包括選自基本上由下列組成的集合的一種或更多種方法靜脈注射、肌肉注射、腹膜內(nèi)注射、皮下注射和電穿孔。163.權(quán)利要求158-161所述的方法，其中所述施用包括選自注射、吸入和基因槍的一種或更多種方法。164.權(quán)利要求158-161所述的方法，其中所述多核苷酸包含環(huán)狀DNA，所述環(huán)狀DNA包含復(fù)制起點(diǎn)(ORI)、啟動(dòng)子和多克隆位點(diǎn)(MCS)。165.權(quán)利要求158-161所述的方法，其中所述多核苷酸是質(zhì)粒，所述質(zhì)粒包含轉(zhuǎn)錄連接至編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件基因的所述序列的啟動(dòng)子/增強(qiáng)子。166.權(quán)利要求165所述的方法，其中所述啟動(dòng)子適于在真核細(xì)胞中表達(dá)。167.權(quán)利要求158-166所述的方法，其中所述多核苷酸與促進(jìn)轉(zhuǎn)染的物質(zhì)一起施用。168.權(quán)利要求167所述的方法，其中所述促進(jìn)轉(zhuǎn)染的物質(zhì)是脂類。169.權(quán)利要求158所述的方法，其中所述多核苷酸通過過繼細(xì)胞基因療法傳遞。170.權(quán)利要求169所述的方法，其中所述過繼細(xì)胞基因療法包括施用能夠?qū)⒑怂岚邢騻鬟f至炎癥位點(diǎn)的細(xì)胞。171.權(quán)利要求170所述的方法，其中所述細(xì)胞選自T細(xì)胞、抗原呈遞細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和干細(xì)胞。172.權(quán)利要求171所述的方法，其中所述T細(xì)胞是CD4+。173.權(quán)利要求171所述的方法，其中所述抗原呈遞細(xì)胞是樹突細(xì)胞。174.權(quán)利要求171所述的方法，其中所述成纖維細(xì)胞是NIH3T3。175.權(quán)利要求171所述的方法，其中所述干細(xì)胞是ATCC干細(xì)胞。176.權(quán)利要求171所述的方法，其中所述干細(xì)胞是自體干細(xì)胞。177.權(quán)利要求169所述的方法，其中所述多核苷酸通過逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)入所述細(xì)胞。178.權(quán)利要求158所述的方法，其中所述細(xì)胞免疫應(yīng)答元件基因被傳遞至炎癥位點(diǎn)。179.權(quán)利要求158所述的方法，其中所述多核苷酸是病毒載體。180.權(quán)利要求179所述的方法，其中所述病毒載體是pUMCV。181.權(quán)利要求158所述的方法，其中所述核酸是逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。182.權(quán)利要求181所述的方法，其中所述逆轉(zhuǎn)錄病毒載體是pGCy。183.權(quán)利要求179所述的方法，其中所述病毒載體是慢病毒載體。184.權(quán)利要求183所述的方法，其中所述慢病毒載體是pLentilox-IRES-GFP。185.權(quán)利要求183所述的方法，其中所述慢病毒載體基本上由pLentilox-IRES-GFP組成。186.權(quán)利要求159-185所述的方法，其中所述組合物增加減少炎癥的基因的表達(dá)。187.權(quán)利要求159-185所述的方法，其中所述組合物增加減少炎癥的基因的表達(dá)，以及其中所述基因編碼Th2細(xì)胞因子或其部分。188.權(quán)利要求159-185所述的方法，其中所述組合物增加減少炎癥的基因的表達(dá)，其中所述基因編碼Th2細(xì)胞因子或其部分，以及其中所述Th2細(xì)胞因子選自IL-4、IL-5、IL匿10和IL-13。189.權(quán)利要求159-185所述的方法，其中所述組合物抑制或削弱增加炎癥的基因的表達(dá)。190.權(quán)利要求159-185所述的方法，其中所述組合物抑制或削弱增加炎癥的基因的表達(dá)，以及其中所述基因編碼Thl細(xì)胞因子或其部分。191.權(quán)利要求159-185所述的方法，其中所述組合物抑制或削弱增加炎癥的基因的表達(dá)，其中所述基因編碼Thl細(xì)胞因子或其部分，以及其中所述Thl細(xì)胞因子選自IL-2、IL-12和TNFa。192.權(quán)利要求159-185所述的方法，其中所述多核苷酸包含編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件基因或其片段的序列。193.權(quán)利要求159-185所述的方法，其中所述多核苷酸包含編碼兩種或更多種細(xì)胞免疫應(yīng)答元件多肽或其片段的序列。194.權(quán)利要求159-185所述的方法，其中所述多核苷酸包含編碼選自下列的一種或更多種多肽的序列自身抗原、減少自身免疫炎癥的細(xì)胞因子、增加自身免疫炎癥的細(xì)胞因子的拮抗物、和誘導(dǎo)無反應(yīng)性的多肽或其片段。195.權(quán)利要求159-185所述的方法，其中所述多核苷酸包含編碼選自下列的一種或更多種多肽的序列IL-4、IL-5、IL-IO、IL-13、TGF-P、IFN-y、NGF、BDNF、,淀粉樣蛋白、,淀粉樣蛋白M2、ApoE和ApoE-2或其片段。196.權(quán)利要求159-185所述的方法，其中所述多核苷酸包含編碼一種或更多種多肽的序列，其中所述一種或更多種多肽與選自下列的多肽同源IL-IL畫5、IL-IO、IL-13、TGF-"、IFN-y、NGF、BDNF、A淀粉樣蛋白、^淀粉樣蛋白M2、ApoE和ApoE-2或其片段。197.制備在對(duì)象中表達(dá)細(xì)胞免疫應(yīng)答元件基因或其片段的組合物的方法，所述方法包括制備包含啟動(dòng)子/增強(qiáng)子多核苷酸，所述啟動(dòng)子/增強(qiáng)子轉(zhuǎn)錄連接至編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件基因或其片段的序列；制備促進(jìn)轉(zhuǎn)染的物質(zhì)；以及將所述促進(jìn)轉(zhuǎn)染的物質(zhì)與所述多核苷酸結(jié)合。198.檢測(cè)個(gè)體中對(duì)細(xì)胞免疫應(yīng)答元件的敏感性的方法，所述方法包括施用包含編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件多肽或其片段的序列的多核苷酸給所述個(gè)體，以及檢測(cè)炎癥應(yīng)答的存在或不存在。199.治療或預(yù)防對(duì)象的神經(jīng)變性疾病的方法，所述方法包括施用給所述對(duì)象兩種或更多種細(xì)胞免疫應(yīng)答元件核酸或其片段。200.權(quán)利要求199所述的方法，其中所述兩種或更多種細(xì)胞免疫應(yīng)答元件核酸或其片段在不同的多核苷酸上。.201.權(quán)利要求199所述的方法，其中所述兩種或更多種細(xì)胞免疫應(yīng)答元件核酸或其片段在相同的多核苷酸上。202.治療或改善神經(jīng)變性疾病的方法，所述方法包括施用包含選自下列的一種或更多種多肽的組合物IL-4、IL-5、IL-IO、IL-13、TGF-P、IFN-y、NGF、,淀粉樣蛋白、--淀粉樣蛋白M2、ApoE和ApoE-2或其片段。203.權(quán)利要求202所述的方法，其中所述多肽被施用給哺乳動(dòng)物。204.權(quán)利要求203所述的方法，其中所述哺乳動(dòng)物是人。205.權(quán)利要求202所述的方法，其中所述施用包括選自下列的一種或更多種方法靜脈注射、肌肉注射、腹膜內(nèi)注射、皮下注射和電穿孔。206.權(quán)利要求202所述的方法，其中所述施用包括選自注射、吸入和基因槍的一種或更多種方法。207.權(quán)利要求202所述的方法，其中所述細(xì)胞免疫應(yīng)答元件基因被傳遞至炎癥位點(diǎn)。208.權(quán)利要求202-207所述的方法，其中所述組合物增加減少炎癥的基因的表達(dá)。209.權(quán)利要求202-207所述的方法，其中所述組合物增加減少炎癥的基因的表達(dá)，以及其中所述基因編碼Th2細(xì)胞因子或其部分。210.權(quán)利要求202-207所述的方法，其中所述組合物增加減少炎癥的基因的表達(dá)，其中所述基因編碼Th2細(xì)胞因子或其部分，以及其中所述Th2細(xì)胞因子選自IL-4、IL-5、IL-10和IL-13。211.權(quán)利要求202-207所述的方法，其中所述組合物抑制或削弱增加炎癥的基因的表達(dá)。212.權(quán)利要求202-207所述的方法，其中所述組合物抑制或削弱增加炎癥的基因的表達(dá)，以及其中所述基因編碼Thl細(xì)胞因子或其部分。213.權(quán)利要求202-207所述的方法，其中所述組合物抑制或削弱增加炎癥的基因的表達(dá)，其中所述基因編碼Thl細(xì)胞因子或其部分，以及其中所述Thl細(xì)胞因子選自IL-2、IL-12和TNFa。214.治療或改善神經(jīng)變性疾病方法，所述方法包括施用包含一種或更多種細(xì)胞免疫應(yīng)答元件多肽的組合物，所述細(xì)胞免疫應(yīng)答元件多肽與選自下列的多肽同源IL-4、IL-5、IL-IO、IL-13、TGF-/、IFN-y、NGF、^淀粉樣蛋白、y5-淀粉樣蛋白！42、ApoE和ApoE-2或其片段。215.權(quán)利要求214所述的方法，其中所述多肽被施用給哺乳動(dòng)物。216.權(quán)利要求215所述的方法，其中所述哺乳動(dòng)物是人。217.權(quán)利要求214所述的方法，其中所述施用包括選自基本上由下列組成的集合的一種或更多種方法靜脈注射、肌肉注射、腹膜內(nèi)注射、皮下注射和電穿孔。218.權(quán)利要求214所述的方法，其中所述施用包括選自注射、吸入和基因槍的一種或更多種方法。219.權(quán)利要求214所述的方法，其中所述組合物與促進(jìn)轉(zhuǎn)染的物質(zhì)一起施用。220.權(quán)利要求219所述的方法，其中所述促進(jìn)轉(zhuǎn)染的物質(zhì)是脂類。221.權(quán)利要求214-220所述的方法，其中所述組合物增加減少炎癥的基因的表達(dá)。222.權(quán)利要求214-220所述的方法，其中所述組合物增加減少炎癥的基因的表達(dá)，以及其中所述基因編碼Th2細(xì)胞因子或其部分。223.權(quán)利要求214-220所述的方法，其中所述組合物增加減少炎癥的基因的表達(dá)，其中所述基因編碼Th2細(xì)胞因子或其部分，以及其中所述Th2細(xì)胞因子選自IL-4、IL-5、IL-10和IL-13。224.權(quán)利要求214-220所述的方法，其中所述組合物抑制或削弱增加炎癥的基因的表達(dá)。225.權(quán)利要求214-220所述的方法，其中所述組合物抑制或削弱增加炎癥的基因的表達(dá)，以及其中所述基因編碼Thl細(xì)胞因子或其部分。全文摘要本文提供治療和/或預(yù)防神經(jīng)變性疾病諸如阿爾茨海默病的組合物和方法。在具體方面，本文施用的組合物編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件。組合物可以以這樣的方式制備和施用編碼細(xì)胞免疫應(yīng)答元件的序列在施用組合物的對(duì)象中表達(dá)。組合物包括表達(dá)系統(tǒng)、傳遞系統(tǒng)和某些細(xì)胞免疫應(yīng)答元件基因。文檔編號(hào)A01N43/04GK101652063SQ200880010918公開日2010年2月17日申請(qǐng)日期2008年2月4日優(yōu)先權(quán)日2007年2月6日發(fā)明者T·J·楊申請(qǐng)人:T·J·楊