專利名稱：：紫莖澤蘭提取液作為植物源農(nóng)藥的應用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明采用10%-100%甲醇、乙醇、乙酸乙酯、石油醚及氯仿水溶液作為提取溶劑提取出紫莖澤蘭活性成分，通過加工后作為植物源農(nóng)藥即殺蟲劑、殺菌劑、除草劑及殺線蟲劑應用。
背景技術(shù)：
：紫莖澤蘭(五wp"tohww^few卬/wramSpreng)為菊科澤蘭屬多年生草本植物，原產(chǎn)墨西哥，20世紀50年代前后自緬甸和越南傳入我國云南南部，因其生長及繁殖能力極強，已在云南省及其周邊許多地區(qū)蔓延。由于它對生態(tài)環(huán)境的破壞，給農(nóng)林牧副業(yè)帶來了嚴重危害。鑒于紫莖澤蘭已成為我國危害最為嚴重的外來入侵物種之一，各地在加強控制紫莖澤蘭蔓延措施的同時，紛紛展開對其綜合利用的研究，力圖變害為寶。胡覺等'研究了紫莖澤蘭預處理后沼氣連續(xù)發(fā)酵的產(chǎn)氣潛力。楊亞洲2在對紫莖澤蘭化學組成、纖維形態(tài)和表面自由能研究的基礎(chǔ)上，對紫莖澤蘭中密度纖維板的生產(chǎn)工藝參數(shù)和物理力學性能及其影響因素的研究表明，實驗條件下制造的紫莖澤蘭中密度纖維板，經(jīng)適當調(diào)節(jié)工藝條件，某些性能指標均能達到國家標準室內(nèi)型中密度纖維板的要求。田果廷等3利用紫莖澤蘭作為原料栽培田頭燕，同時利用稻草和棉籽殼為原料栽培田頭燕作對照，研究結(jié)果表明，代料熟料栽培田頭燕的培養(yǎng)基配方中，以紫莖澤蘭為主要原料的配方效果最好，生物學效率比對照的稻草培養(yǎng)基平均增產(chǎn)80%以上。孫啟銘4研究了紫莖澤蘭作為野生有機肥料的應用研究。楊永紅等5以紫莖澤蘭為原料，用微生物發(fā)酵的方法生產(chǎn)木糖醇。歐陽華、王厚德采用特殊的微生物發(fā)酵脫毒、甘露聚糖脫毒、無機吸附脫毒、中草藥解毒與保健相結(jié)合德科學方法將紫莖澤蘭開發(fā)為成功的植物蛋白飼料原料，并申請了專利6。而本發(fā)明中我們提取紫莖澤蘭的活性成分作為植物源農(nóng)藥應用。參考文獻1.胡覺，張無敵，尹芳，劉士清，官會林，紫莖澤蘭連續(xù)發(fā)酵產(chǎn)沼氣實驗研究，農(nóng)業(yè)與技術(shù)，2006，26(4)33-362.楊亞洲，紫莖澤蘭制造中密度纖維板的研究，中國人造板，2006，10:13-163.田果廷，徐學忠，楊瓊芬，徐雨然，利用紫莖澤蘭栽培田頭菇的研究，中國食用菌，23(4):13-154.孫啟銘，野生有機肥料資源紫莖澤蘭的利用，農(nóng)業(yè)科技通訊，2002，4:28-295.楊永紅，李國權(quán)，紫莖澤蘭微生物發(fā)酵生產(chǎn)木糖醇的工藝，植物資源與環(huán)境，1999，8(1):61-626.歐陽華，王厚德，紫萍:澤蘭飼料的制備方法，申請(專利)號CN02113759.5,公開(公告)號CN1383731，2002-05-18
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于開發(fā)新的植物源農(nóng)藥，該方法以紫莖澤蘭為起始原料，采用io%-100%甲醇、乙醇、乙酸乙酯、石油醚及氯仿水溶液作為提取溶劑提取出紫莖澤蘭活性成分，通過加工后作為植物源農(nóng)藥即殺蟲劑、殺菌劑、除草劑及殺線蟲劑應用?？梢詫⒆锨o澤蘭毒草為我所用，變害為寶，并且所開的是環(huán)境友好的農(nóng)藥，不會對環(huán)境造成污染。本發(fā)明的目的是通過如下的技術(shù)方案實現(xiàn)的本發(fā)明步驟如下1)將紫莖澤蘭鮮莖葉及干燥莖葉粉碎成粉末；2)將步驟l)中得到的紫莖澤蘭粉末，加入10%—100%的甲醇或乙醇或乙酸乙酯或石油醚或氯仿水溶液，浸泡48h后，過濾除去固體，采用減壓蒸餾回收溶劑后，得到黏稠狀黑色溶液；3)采用真空冷凍干燥裝置將2)中得到的溶液干燥為固體粉末；4)將2)中得到的溶液及3)中得到的固體物質(zhì)分別加工為水制劑該水制劑用已知的方式制備，將紫莖澤蘭提取液與表面活性劑、促滲透劑等組份充分混合均勻，得到紫莖澤蘭水劑。該制劑含紫莖澤蘭提取液70%90%，優(yōu)選為80%90%。另外該組合物還包括5%10%表面活性劑，促滲透劑5%10%。適合的表面活性劑為烷基酚聚氧乙烯醚類，蓖麻油聚氧乙烯醚類，磺酸鹽類等，選自0201B、0203B、0204C、2201、OP系列、農(nóng)乳500號等具有良好乳化性能的非離子、陰離子和混合表面活性劑。促滲透劑為氮酮、月桂醇醚硫酸鈉、木質(zhì)素磺酸鈉、烷基酚聚氧乙烯醚等。然后作為殺蟲劑、殺菌劑、除草劑、殺線蟲劑應用。附件紫莖澤蘭提取物質(zhì)活性測定1、殺蟲活性測定測定試蟲選用難防治的重要農(nóng)業(yè)害蟲為棉鈴蟲、甜菜夜蛾，2齡和4齡幼蟲。分別采用浸液法、浸蟲法進行測定。浸葉法將紫莖澤蘭待用液作為生物活性測定液，設清水為空白對照。將小油菜葉先用清水沖洗，晾干，然后用打孔器打成直徑為15mm的小片，在藥液中浸漬10s，晾干，再將其放于24孔培養(yǎng)盒中,每孔一片小葉片，在每孔接入l頭幼蟲，每個處理20頭，3次重復。24孔培養(yǎng)盒用保鮮膜封口保鮮，加蓋后放入(27i0.5)'C光照培養(yǎng)箱中，2448h后檢查死亡率。死亡判斷標準為用撥針輕觸蟲體，蟲體完全無反應或反應不協(xié)調(diào)者為死亡。浸蟲法將油菜用清水沖洗，晾干，然后用打孔器打成直徑為15mm的小片，直接將其放于24孔培養(yǎng)盒中，每孔一片小葉片。將幼蟲在紫莖澤蘭測定液中浸漬10s，讓其在紙上爬行晾干，再接入24孔培養(yǎng)盒中。其它步驟同浸葉法。驅(qū)避試驗基本同浸葉法，但用指形管代替24孔試驗盒，將浸藥和不浸藥葉片分別放置在一根指形管的兩端，再將1頭試驗用的幼蟲放于指形管中浸藥的葉片上，48h檢查幼蟲所處部位。2、殺菌活性測定供試病原菌為鐮孢霉菌屬(Fz^an'MWsp.)、葡萄孢屬菌(Bo^ytosp.)、尾孢霉菌屬(Oro5porasp.)、梨孢霉屬菌(i>7'cw/ahasp.)，菌種均來源于本實驗室。試驗采用菌絲生長速率測定法。即將紫莖澤蘭提取液浸膏稱量后，用有機溶劑溶解，按l:5000和1:10000的比例，加入到馬鈴薯葡萄糖瓊膠培養(yǎng)基(PDA)中，然后分到3個90mm的培養(yǎng)皿中，用1:5000的溶劑作對照。待培養(yǎng)基凝固后，在培養(yǎng)皿中央處接入直徑為3mm的不同病原菌菌塊，放入(25il)"C的培養(yǎng)箱中，待對照皿的菌絲即將長滿培養(yǎng)皿時，測量各藥劑處理皿的菌絲體直徑。用下式計算抑制率。抑制率(％)=(1-處理皿菌絲平均直徑2/對照皿菌絲平均直徑2)xl003、殺線蟲活性測定稱取紫莖澤蘭提取液的浸膏0.04g，用少量溶劑溶解后，加入20g含根結(jié)線蟲的土壤中，混勻，用相同量的溶劑與土壤混合后作對照，72h后調(diào)查調(diào)查結(jié)果。土樣中的線蟲分離采用直接過篩法即將土樣充分混合均勻，稱取200g放在塑料桶內(nèi)。加水約1000ml左右，用力攪動使土塊分散，沉降10s后，將上面的懸浮液通過20目的篩子倒在第二個小桶內(nèi)。網(wǎng)篩上的殘余物和第一個桶底的泥沙用水洗后棄去。按照上述步驟，順序用IOO、200和325網(wǎng)目篩處理后，3個篩上的殘余物洗在容量約250ml的燒杯中，然后取樣檢査和記數(shù)。4、除草活性測定試驗采用瓊脂水法。即將提取的浸膏準確稱量后，用有機溶劑溶解，然后用1%瓊脂水進行稀釋成不同的濃度梯度，然后分倒入3個90mm的培養(yǎng)皿中，待瓊脂水冷卻后，接入剛萌發(fā)的馬唐和反枝莧，放入(27±1)"培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。96h后調(diào)查試材的根長，將處理的根長與對照根長進行比較，計算抑制率。二、試驗結(jié)果及分析(一)殺蟲活性測定結(jié)果測定結(jié)果見下表。從下面4個表中可看出，紫莖澤蘭提取液對棉鈴蟲、甜菜夜蛾和小菜蛾均有一定的殺蟲活性，特別是浸蟲法處理棉鈴蟲、甜菜夜蛾和小菜蛾，表現(xiàn)出了很高的殺蟲活性。用甲醇和乙酸乙酯提取液比較其對小菜蛾的殺蟲活性，明顯看出紫莖澤蘭的殺蟲活性成分主要在甲醇提取液中。紫莖澤蘭提取液中含有明顯的驅(qū)避物質(zhì)，棉鈴蟲和甜菜夜蛾幼蟲對浸藥葉片的選擇性明顯低于不浸藥葉片。用這兩種重要的農(nóng)業(yè)害蟲測定的初步結(jié)果說明紫莖澤蘭中含有一些重要的殺蟲或驅(qū)避次生物質(zhì)，因此，擬繼續(xù)深入細致的研究，以便為開發(fā)紫莖澤蘭的新的應用途徑提供實驗依據(jù)。表1紫莖澤蘭提取液對棉鈴蟲的殺蟲生物活性<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表4紫蓮澤蘭提取液對小菜蛾的殺蟲生物活性<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表5紫莖澤蘭提取液對棉鈴蟲和甜菜夜蛾的驅(qū)避生物活性2齡幼蟲，<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>(二)殺菌活性測定結(jié)果表6紫莖澤蘭植物提取液對花生褐斑病菌的抑制活性測定<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>接種日期2004.2.16檢查日期2004.2.2125。C培養(yǎng)表7紫莖澤蘭植物提取液對灰霉病菌的抑制活性測定<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表9紫莖澤蘭植物提取液對稻瘟病菌的抑制活性測定<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>接種日期2004.2.16日期2004.2.2225'C培養(yǎng)(三)殺線蟲活性測定結(jié)果表10紫莖澤蘭提取液殺線蟲的效果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>試驗線蟲總數(shù)(20g土)處理時間2004.1.12調(diào)查時間2004丄17(四)除草活性測定結(jié)果表U紫莖澤蘭提取液稀釋10000倍時對供試植物的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>表ll可見，四種提取液對禾本科雜草馬唐均有較高的抑制作用，而正丁醇抑制作用較差。所有提取液對闊葉植物黃瓜基本無抑制作用。權(quán)利要求1.提供的紫莖澤蘭甲醇、乙醇、乙酸乙酯、石油醚及氯仿提取物作為植物源農(nóng)藥，步驟如下1)將紫莖澤蘭鮮莖葉及干燥莖葉粉碎成粉末；2)將步驟1)中得到的紫莖澤蘭粉末，加入體積比分別為10％-100％的甲醇、乙醇、乙酸乙酯、石油醚及氯仿水溶液，浸泡48h后，過濾除去固體，采用減壓蒸餾回收溶劑，得到黏稠狀黑色溶液；3)采用真空冷凍干燥裝置將2)中得到的溶液干燥為固體；4)將2)中得到的溶液及3)中得到的固體物質(zhì)分別加工為水劑型。然后作為殺蟲劑、殺菌劑、除草劑、殺線蟲劑應用。2、如權(quán)利要求1所述的紫莖澤蘭作為植物源農(nóng)藥，其特征在于所述步驟2)中提取紫莖澤蘭中活性成份，采用10%-100%的甲醇水溶液做提取劑。3、如權(quán)利要求1所述的紫莖澤蘭作為植物源農(nóng)藥，其特征在于所述步驟2)中提取紫莖澤蘭中活性成份，采用10%-100%的乙醇水溶液做提取劑。4、如權(quán)利要求1所述的紫莖澤蘭作為植物源農(nóng)藥，其特征在于所述步驟2)中提取紫莖澤蘭中活性成份，采用10%-100%的乙酸乙酯水溶液做提取劑。5、如權(quán)利要求1所述的紫莖澤蘭作為植物源農(nóng)藥，其特征在于所述歩驟2)中提取紫莖澤蘭中活性成份，采用10%-100%的石油醚水溶液做提取劑。6、如權(quán)利要求1所述的紫莖澤蘭作為植物源農(nóng)藥，其特征在于所述歩驟2)中提取紫莖澤蘭中活性成份，采用10%-100%的氯仿水溶液做提取劑。7、如權(quán)利要求1所述的紫莖澤蘭作為植物源農(nóng)藥，其特征在于所述步驟4)中把用各種溶劑提取的紫莖澤蘭提取液及干燥固體加工為水劑，作為殺蟲劑、殺菌劑、除草劑、殺線蟲劑應用。全文摘要本發(fā)明將紫莖澤蘭提取物質(zhì)作為植物源農(nóng)藥應用，該方法采用10％-100％的甲醇、乙醇、乙酸乙酯、石油醚、氯仿水溶液作為提取溶劑提取紫莖澤蘭活性成分，并加工為植物源農(nóng)藥，作為殺蟲劑、殺菌劑、除草劑及殺線蟲劑應用。文檔編號A01N65/00GK101317588SQ20071011049公開日2008年12月10日申請日期2007年6月8日優(yōu)先權(quán)日2007年6月8日發(fā)明者蘭何,曹坳程,王秋霞,郭美霞,陳福良申請人:中國農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所