專利名稱：植物脫毒快速克隆法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物育苗技術(shù)，特別涉及植物脫毒快速克隆方法。
背景技術(shù)：
傳統(tǒng)的育苗方法主要采取嫁接、扦插、分株、壓條、實播等。其繁殖周期長、繁殖系數(shù)低，不能脫去病毒，不能滿足現(xiàn)代農(nóng)業(yè)的發(fā)展需要。隨著人們對植物生理、生物化學(xué)研究的深入，開始尋求新的育苗方式，如采取熱處理、藥物處理脫去病毒，和用植物的莖、葉、芽等細胞組織進行誘導(dǎo)培養(yǎng)苗木，做了大量工作，取得了可喜的成果，但仍不盡人意，脫毒率不高，不能獲得無病毒苗，營養(yǎng)基與植物間的適應(yīng)性不夠協(xié)調(diào)，繁殖系數(shù)低，不能滿足工廠化生產(chǎn)的需要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種植物脫毒快速克隆方法，該方法可完全脫掉植物的病毒，所用的營養(yǎng)基完全適于各種植物的各部位細胞組織的生長增殖，能達到植物快速克隆的目的。
實現(xiàn)本發(fā)明目的的植物脫毒快速克隆方法的步驟是1、取植物的生長點、莖、葉、花粉、花藥、種籽、芽、根，先用70-75％的酒精處理10-30秒鐘，再用0.1-1％的氯化汞處理2-12分鐘；2、在超凈工作臺或接種箱內(nèi)，將繁殖材料切成長2-8mm的小段，芽剝?nèi)[片，接入已滅菌的營養(yǎng)素加激素的培養(yǎng)基內(nèi)，接種后放進24±3℃的培養(yǎng)室培養(yǎng)出植株；3、再利用第2步培養(yǎng)出的植株的生長點進行重復(fù)誘導(dǎo)，若用植物的莖、葉、芽、種籽誘導(dǎo)的植株用其生長點重復(fù)誘導(dǎo)二次即二元脫毒后，再利用莖、葉、芽組織進行增殖擴繁；4、擴繁達到要求數(shù)量時，將其轉(zhuǎn)入壯苗生根的培養(yǎng)基上，待壯苗生根后，轉(zhuǎn)入用珍珠巖、沙、基石配成的營養(yǎng)土上練苗。
上面所述的培養(yǎng)基的營養(yǎng)素的重量比(份數(shù))是硝酸鉀KNO31800硫酸鎂MgSO4·7H2O360磷酸二氫鉀KH2PO4160 碘化鉀KI0.8硼酸H3BO36.2 硫酸錳MnSO4·4H2O22二氯化鈣CaCl2·4H2O 400 硫酸鋅ZnSO4·7H2O8氯化鈷CoCl2·6H2O0.025 硫酸銅CuSO4·5H2O0.25硫酸亞鐵FeSO4·7H2O 27 乙二胺四乙酸二鈉Na2EDTA 37硝酸銨NH4NO31600肌醇(環(huán)已六酸)C6H12O6·2H2O 100鹽酸硫胺素(維生素B1)CnH17ClNaOS·HCl 0.1甘氨酸NH2CH2COOH 2 鉬酸鈉Na2MoO4·2H2O0.25鹽酸吡哆醇(維生素B6)C8H11O3N·HCl 0.5煙酸(維生素B3或維生素PP)NC5H4COOH 0.5蔗糖 20000-40000 瓊脂 4000-10000PH值5.6-5.8。
所述的培養(yǎng)基中的激素用于植物克隆中誘導(dǎo)、增殖的配方重量比(份數(shù))是BA(芐基腺嘌呤)C12H11N50.2-5NAA(奈乙酸)C2H10NO20.05-6或IBA(吲哚丁酸)C12H13NO20.1-52.4-D(-2氯苯乙酸) 0-0.8或KT(糖基腺嘌呤)C1OH9N5O 0-0.8。
上述激素配方為植物克隆中誘導(dǎo)、增殖的配方，克隆壯苗、生根的培養(yǎng)只用基本營養(yǎng)素，不用激素即可。
本發(fā)明的優(yōu)點1、克隆出的種苗脫毒徹底，不帶有任何病毒、類病毒、細菌、真菌，苗木生長速度快，提高生長速度30％以上，提高產(chǎn)量30％。
2、種苗繁殖速度快，繁殖系數(shù)高，便于工廠化生產(chǎn)，不受時間、季節(jié)的限制，一年四季均可生產(chǎn)，苗木質(zhì)量好，成本低。
3、便于瀕危、珍稀植物的挽救，利于名、特、優(yōu)品種的快繁推廣，有利于農(nóng)產(chǎn)品升級，提高競爭能力。
4、可保證品種的優(yōu)良性和純正性，不退化。
具體實施例方式
實施例12000年3月8日采于廣東柑桔黃龍病疫區(qū)帶黃龍病柑桔枝條，3月11日將生長點頂端的細胞組織接入本發(fā)明前述配方的培養(yǎng)基，3月17日生長點明顯增大，有愈傷組織出現(xiàn)，3月24日出現(xiàn)綠點，4月13日獲得最高2cm的葉叢苗，4月14日利用該植株生長點重復(fù)誘導(dǎo)，其它部分丟棄，32天獲得12株1.2-2.3cm的柑桔苗，將1株作抗體檢測和病菌培養(yǎng)，均未出現(xiàn)病菌，其它苗木進行增殖擴繁，9月上旬獲得柑桔苗5萬多株，9月8日從中隨便抽出6株進行抗體檢測和病菌培養(yǎng)，均未出現(xiàn)病毒、類病毒、細菌、真菌存在。
實施例2湖南省邵陽市白塔區(qū)種植百合，因連續(xù)種植，病毒嚴重，單產(chǎn)下降。2000年6月26日該區(qū)送來百合球莖做試驗。28日將其球莖接入本發(fā)明的培養(yǎng)基，7月23日獲得18株1.2-3.1cm高的苗，24日將生長點和其它部位的細胞組織分別接入培養(yǎng)基，8月20日生長點育出249株，其它部育出612株，8月21日前將249株的生長點和612株中的280株分別接入營養(yǎng)基，其它部分丟棄，9月19日249株生長點獲得4126株，將其中3株作抗體檢測和病菌培養(yǎng)，未發(fā)現(xiàn)任何病毒、病菌。280株生長點育出5011株，對兩種苗進行練苗，10月6日取回邵陽同未處理對照分別種植到同一田塊，2001年7月采收，脫毒一次比對照增產(chǎn)29.6％，脫毒二次的比對照增產(chǎn)40.2％。
實施例32001年5月30日，北京市輿泰物業(yè)管理公司送來的82枝15-20cm長的白楊樹嫩枝條，要求快速克隆，不必徹底脫毒，5月31日將82個枝條的生長點接入前述的營養(yǎng)基，7月3日獲632株進行增殖擴繁，9月26日獲得189524株，在不到5個月時間增殖擴繁2000倍以上。
權(quán)利要求
1.一種植物脫毒快速克隆方法其特征在于步驟是(1)取植物的生長點、莖、葉、花粉、花藥、種籽、芽、根，先用70-75％的酒精處理10-30秒鐘，再用0.1-1％的氯化汞處理2-12分鐘，(2)在超凈工作臺或接種箱內(nèi)，將繁殖材料切成長2-8mm的小段，芽剝?nèi)[片，接入已滅菌的營養(yǎng)素加激素的培養(yǎng)基內(nèi)，接種后放進24±3℃的培養(yǎng)室培養(yǎng)出植株，(3)再利用第(2)步培養(yǎng)出的植株的生長點進行重復(fù)誘導(dǎo)，若用植物的莖、葉、芽誘導(dǎo)的植株用其生長點重復(fù)誘導(dǎo)二次即二元脫毒后，再利用莖、葉、芽組織進行增殖擴繁，(4)擴繁達到要求數(shù)量時，將其轉(zhuǎn)入壯苗生根的培養(yǎng)基上，待壯苗生根后，轉(zhuǎn)入用珍珠巖、沙、基石配成的營養(yǎng)土上練苗。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的培養(yǎng)基的營養(yǎng)素的重量比(份數(shù))是硝酸鉀KNO31800硫酸鎂MgSO4·7H2O 360磷酸二氫鉀KH2PO4160 碘化鉀KI 0.8硼酸H3BO36.2 硫酸錳MnSO4·4H2O 22二氯化鈣CaCl2·4H2O 400 硫酸鋅ZnSO4·7H2O 8氯化鈷CoCl2·6H2O0.025 硫酸銅CuSO4·5H2O 0.25硫酸亞鐵FeSO4·7H2O 27 乙二胺四乙酸二鈉Na2EDTA 37硝酸銨NH4NO31600肌醇(環(huán)已六酸)C6H12O6·2H2O 100鹽酸硫胺素(維生素B1)CnH17ClNaOS·HCl0.1甘氨酸NH2CH2COOH 2鉬酸鈉Na2MoO4·2H2O 0.25鹽酸吡哆醇(維生素B6)C8H11O3N·HCl 0.5煙酸(維生素B3或維生素PP)NC5H4COOH 0.5蔗糖 20000-40000 瓊脂 4000-10000PH值5.6-5.8。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的培養(yǎng)基中的激素用于植物克隆中誘導(dǎo)增殖的配方重量比(份數(shù))是BA(芐基腺嘌呤)C12H11N50.2-5NAA(奈乙酸)C2H10NO20.05-6或IBA(吲哚丁酸)C12H13NO20.1-52.4-D(-2氯苯乙酸) 0-0.8或KT(糖基腺嘌呤)C1OH9N5O0-0.8。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種植物脫毒快速克隆方法。該方法利用植物生長點或植物的莖、葉、芽、花粉的部分組織，在無菌系統(tǒng)內(nèi)通過化學(xué)藥物、營養(yǎng)基、激素誘導(dǎo)，培養(yǎng)出與母體生理特征完全一致的植株，再利用該植株的生長點進行重復(fù)誘導(dǎo)，若用植物的莖、葉、芽、種籽誘導(dǎo)的植株必須用其生長點重復(fù)誘導(dǎo)二次后，再利用莖、葉等組織進行增殖擴繁。一年內(nèi)一個生長點頂端細胞可培養(yǎng)出6000－8000萬與母體生理特征完全一致，且不帶任何病毒、類病毒、細菌、真菌的植株，苗木生長速度快，提高生長速度30％以上，提高產(chǎn)量30％。
文檔編號A01H4/00GK1413449SQ0113358
公開日2003年4月30日 申請日期2001年10月26日 優(yōu)先權(quán)日2001年10月26日
發(fā)明者金國敬 申請人:金國敬