一種羊肉快速檢測卡的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實用新型涉及一種羊肉快速檢測卡，是一種快速檢測羊肉的檢測器具，屬于肉類檢測技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]羊肉營養(yǎng)豐富，肉質(zhì)鮮美，為全世界普遍的肉品之一。在中國更是大受歡迎，成為百姓羊肉肉質(zhì)與牛肉相似，但肉味較濃。羊肉較豬肉的肉質(zhì)要細嫩，較豬肉和牛肉的脂肪、膽固醇含量少。它既能御風(fēng)寒，又可補身體，對一般風(fēng)寒咳嗽、慢性氣管炎、虛寒哮喘、腎虧陽瘺、腹部冷痛、體虛怕冷、腰膝酸軟、面黃肌瘦、氣血兩虧、病后或產(chǎn)后身體虛虧等一切虛狀均有治療和補益效果，最適宜于冬季食用，故被稱為冬令補品，深受人們歡迎。
[0003]由于羊肉市場廣闊，羊肉造假案時有發(fā)生。俗話說“掛羊頭賣狗肉”，而今掛羊頭賣鴨肉、馬肉、豬肉、狐貍?cè)?、鼠肉、雞肉等“羊肉造假”問題屢見不鮮，買到手里的羊肉到底是什么肉，相信不少人會產(chǎn)生這種疑問，但是從表面上又看不出來。目前都是采用基因檢測，對實驗儀器設(shè)備要求高，方法操作復(fù)雜，對操作人員的專業(yè)知識要求高，只能在專業(yè)實驗室內(nèi)進行，費時費力。因此研發(fā)一種準確可靠又快速方便的檢測羊肉的檢測器具是非常必要的。
[0004]雖然也有公開不需要特殊設(shè)備進行肉類鑒定的方法，但都是基于基因檢測技術(shù)，例如:
[0005]對比文件CN102534035A公開了一種快速鑒別牛羊肉的試劑盒，試劑盒由I組具有高特異性的引物、2X等溫反應(yīng)緩沖液、BstDNA聚合酶和染料共同組成，是利用LAMP技術(shù)和動物線粒體DNA相結(jié)合對牛羊肉進行鑒定的方法。
[0006]對比文件CN102337328A公開了一種鑒別豬、牛、羊肉及其制品的方法，通過PCR技術(shù)和凝膠電泳技術(shù)，利用一對檢測引物鑒別生鮮豬牛羊的線粒體DNA，從而將豬、牛、山羊、綿羊區(qū)分開來。
[0007]由于，羊肉中必定含有一定量的羊血，而羊血中的紅細胞的90%由血紅蛋白組成。一般，血紅蛋白(Hb)由珠蛋白和亞鐵血紅素結(jié)合而成，而每種動物的血紅蛋白有同源性，但也存在差異，因此每種動物的血紅蛋白具有一些獨特的抗原性。基于不同來源的動物血中的血紅蛋白的抗原性差異，可建立特異的免疫學(xué)檢測方法進行檢測和鑒定。根據(jù)肉類中血紅蛋白的不同，可進行肉類的區(qū)分。
[0008]本實用新型擬提供一種基于羊血紅蛋白免疫學(xué)的檢測器具，采取免疫學(xué)競爭法的原理，結(jié)合膠體金(或乳膠顆粒)標記技術(shù)和免疫層析法設(shè)計的一種快速檢測試劑，能快速特異地檢測肉類樣品中的羊血紅蛋白，從而判定肉類樣品是否為羊肉。根據(jù)檢測卡樣品檢測線(T)和質(zhì)控線(C)的有無顯色來判定樣品中是否為羊肉。反應(yīng)是利用羊血紅蛋白而建立的一種檢測方法，具有特異快速等優(yōu)點。同時檢測卡操作簡單快速，無需特殊的儀器設(shè)備，適合現(xiàn)場操作。由于樣本量需要少、簡便快速，適用于大量樣本的篩查。結(jié)果準確，靈敏度高，準確率大?！緦嵱眯滦蛢?nèi)容】
[0009]本實用新型的目的在于提供一種能快速檢測羊肉的檢測器具，直接應(yīng)用免疫學(xué)方法進行檢測并確定肉類樣品中是否為羊肉，克服了現(xiàn)有基因檢測的操作繁瑣等缺點，建立基于免疫學(xué)特異性的檢測方法。
[0010]為解決本實用新型的技術(shù)問題，所采用的技術(shù)方案如下:
[0011]—種羊肉快速檢測卡包括在長條扁平薄殼狀的檢測卡外殼和設(shè)置在外殼中的測試條；所述檢測卡外殼表面有檢測窗孔和加樣孔；所述測試條是多層結(jié)構(gòu)的窄條薄片，由支承背板上通過不干膠在其上依次粘貼樣品墊、膠體金膜、硝酸纖維素膜、和吸水膜所組成；所述支承背板中部疊置粘貼硝酸纖維素膜，所述支承背板一端疊置粘貼吸水膜，另一端疊置粘貼樣品墊，所述吸水膜內(nèi)端與所述樣品墊內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜搭接，在所述樣品墊與硝酸纖維素膜的搭接部，兩者之間夾置粘貼一段膠體金膜；所述膠體金膜為含抗羊血紅蛋白抗體膠體金標記的玻璃纖維膜；所述硝酸纖維素膜上依次設(shè)有一條檢測帶和一條質(zhì)控帶，所述檢測帶為含抗羊血紅蛋白單克隆抗體的檢測帶；所述質(zhì)控帶為含抗鼠抗體的質(zhì)控帶；所述測試條置入檢測卡外殼內(nèi)，所述樣品墊正對加樣孔，所述硝酸纖維素膜正對檢測窗孔。
[0012]所述膠體金膜也可以為乳膠顆粒膜，所述乳膠顆粒膜為含抗羊血紅蛋白抗體乳膠顆粒標記的玻璃纖維膜。
[0013]優(yōu)選地，所述檢測卡外殼由殼蓋與殼座兩半聯(lián)接構(gòu)成，所述檢測窗孔和加樣孔開設(shè)在所述檢測卡外殼殼蓋上。
[0014]優(yōu)選地，所述長條扁平薄殼狀的檢測卡外殼由長70mm，寬20mm，厚5mm，薄殼壁厚Imm的工程塑料制成。
[0015]優(yōu)選地，所述測試條⑵片長60mm，片寬4mm，厚度2.5mm。
[0016]優(yōu)選地，所述支承背板(21)，為聚氯乙稀塑料薄片，厚約0.5_，長60_，寬4_。
[0017]優(yōu)選地，所述樣品墊(22)為吸水玻璃纖維膜，厚0.5-0.8mm，長20mm，寬4臟。
[0018]優(yōu)選地，所述膠體金膜(23)厚0.5-0.8mm,長5mm，寬4mm。
[0019]優(yōu)選地，所述硝酸纖維素膜(24)厚0.5mm，長20_25mm，寬4mm ;所述檢測帶(241)和質(zhì)控帶(242)在所述硝酸纖維素膜(24)上橫向間隔開排列。
[0020]優(yōu)選地，所述吸水膜(25)為吸水紙，厚0.5-0.8mm，長16_20mm，寬4臟。
[0021]優(yōu)選地，所述膠體金膜(23)、樣品墊(22)及吸水膜(25)與所述硝酸纖維素膜
(24)的搭接長度為1-2_。
[0022]采用上述羊肉快速檢測卡快速檢測羊肉的檢測方法，是應(yīng)用免疫學(xué)的方法直接檢測肉類樣品中羊血紅蛋白的含量，具體處理方法如下:
[0023]①提取樣品液:稱取1.0g切碎的肉類樣品，置于含有3ml反應(yīng)液的5ml反應(yīng)管中，混合均勻，室溫下反應(yīng)5分鐘，得到待檢測的樣品液，供羊肉檢測用；
[0024]所述反應(yīng)液的配方為:NH4C18.29g，NaHCO3 1.00g，Na2EDTA 37.2mg,蒸餾水1000ml ；
[0025]②檢測卡檢測:先將待檢測的樣品液從所述加樣孔中滴注入所述羊肉快速檢測卡的樣品墊上，由于虹吸作用原理，帶動待檢測的樣品液及膠體金膜所含的抗羊血紅蛋白抗體膠體金標記物一起向所述硝酸纖維素膜擴散，5-10分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。
[0026]③檢測結(jié)果對比:檢測卡的主要反應(yīng)是免疫學(xué)的抗原和抗體反應(yīng)，若待檢肉類樣品為羊肉時，在所述加樣孔中加入樣品液后，樣品液中的羊血紅蛋白即與所述膠體金膜內(nèi)用膠體金標記的抗羊血紅蛋白抗體發(fā)生反應(yīng)，并往所述硝酸纖維素膜迀移，在迀移過程中，再與所述檢測帶內(nèi)含有的抗羊血紅蛋白單克隆抗體反應(yīng)，形成抗體-抗原-抗體的夾心復(fù)合物，從而所述檢測帶顯棕紅色；同時，游離的或結(jié)合的膠體金標記的抗羊血紅蛋白抗體移動到所述質(zhì)控帶并與其中的抗鼠抗體反應(yīng)，形成棕紅色條帶，從而顯色；主要反應(yīng)的結(jié)果有以下3種情況:
[0027]a、當所述檢測帶和所述質(zhì)控帶同時顯現(xiàn)棕紅色印跡帶，表示檢測結(jié)果為陽性，說明被檢測樣品是羊肉；
[0028]b、當所述檢測帶不顯示顏色，只有所述質(zhì)控帶顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陰性，說明被檢測樣品不是羊肉；
[0029]C、當所述檢測帶和所述質(zhì)控帶均不顯色，則表明檢測試條已失效。
[0030]本實用新型的有益效果:本實用新型能快速、特異地檢測肉類樣品中的羊血紅蛋白，從而判定肉類樣品是否為羊肉；本實用新型易于制備且節(jié)省檢測費用，使用方便，檢測快速，靈敏度高，結(jié)果準確。
【附圖說明】
[0031]為了更清楚地說明本實用新型實施例的技術(shù)方案，下面將對實施例中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本實用新型的一些實施例，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。
[0032]圖1為本實用新型羊肉快速檢測卡外殼及測試條在外殼內(nèi)的安置示意圖；
[0033]圖2為本實用新型的羊肉快速檢測卡的測試條結(jié)構(gòu)示意圖；
[0034]圖3為本實用新型的羊肉快速檢測卡的測試條的硝酸纖維素膜上顯示印跡示意圖；
[0035]附圖標注說明:
[0036]1、外殼；11、檢測窗孔；12、加樣孔；
[0037]2、測試條；21、支承背板；22、樣品墊；23、膠體金膜(或乳膠顆粒膜)；24、硝酸纖維素膜；25、吸水膜；241、檢測帶；242、質(zhì)控帶。
【具體實施方式】
[0038]以下面結(jié)合附圖以及具體實施例對本實用新型作進一步描述:
[0039]檢測卡實施例1
[0040]一種羊肉快速檢測卡，如圖1所示，它是在檢測卡外殼I中設(shè)置測試條2，檢測卡外殼I為長條扁平薄殼狀外殼，長70mm，寬20mm，厚5mm，薄殼壁厚1mm，由工程塑料制成。檢測卡外殼I由殼蓋與殼座兩半聯(lián)接構(gòu)成，在檢測卡外殼I殼蓋上有檢測窗孔11和加樣孔12。測試條2放置在檢測卡外殼I的殼座內(nèi)。
[0041]如圖2所示，測試條2是多層結(jié)構(gòu)的窄條薄片，片長約60mm，片寬約4mm，厚度約2.5mm。測試條2為多層結(jié)構(gòu)，底層是支承背板21，為聚氯乙烯塑料薄片，厚約0.5mm，長60mm，寬4mm ;支承背板21中部疊置粘貼硝酸纖維素膜24，硝酸纖維素膜24厚0.5mm，長20-25mm，寬4mm。如圖3所示，硝酸纖維素膜24上有二條間隔開的橫向顯示印跡帶，二條