一種edta抗原修復液的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及免疫組織化學技術領域，公開了一種EDTA抗原修復液，每1000mL的EDTA抗原修復液中包括：Tris?Base 1.20?1.25g，EDTA 0.35?0.40g，吐溫?20 400?600微升，三乙醇胺或乙二醇或三元醇50?500mL和余量的單蒸水。本發(fā)明的EDTA抗原修復液浸潤、修復效果好，能夠在較少的用量下對組織切片進行修復，修復后組織切片容易染色，染色效果好。并且修復液不易揮發(fā)，能夠配合全自動免疫組化儀使用。
【專利說明】
一種EDTA抗原修復液
技術領域
[0001]本發(fā)明涉及免疫組織化學技術領域，尤其涉及一種EDTA抗原修復液。
【背景技術】
[0002]免疫組織化學技術是近年來病理診斷迅速發(fā)展的檢測技術，作為一種重要的病理輔助診斷方法，在臨床的應用中日益受到重視。隨著全自動免疫組化染色儀的應用推廣，對于染色質量的要求也日益提高。其中，抗原修復在整個免疫組化染色過程中有著極其重要的作用，修復條件的好壞直接決定著最終染色結果的質量。全自動染色儀因為其自身的結構特點，其用于盛放修復液的容器體積較小，不能像手工修復那樣把組織切片完全浸泡在修復液中的條件，并且全自動免疫組化染色儀在抗原修復時需要在較高的溫度(100°C左右)下進行，因此修復液容易揮發(fā)，進一步減少了修復液的體積。因而，如何在全自動免疫組化染色儀上完成正常的抗原修復是全自動免疫組化染色儀必須解決的一個難題。
[0003]但是由于目前全自動免疫組化染色儀國內還不普及，很少有人使用，因此沒有人注意到上述技術問題。目前國外解決上述技術問題的方法通常是控制抗原修復的環(huán)境，如控制大氣壓、環(huán)境溫度等等，這些解決方法條件復雜，很難實際應用。目前還未發(fā)現(xiàn)通過改進抗原修復液來解決上述技術問題的報道。
[0004]目前的抗原修復液有很多品種，如EDTA抗原修復液、檸檬酸抗原修復液以及EDTA-檸檬酸復配抗原修復液等等。申請?zhí)枮?01180024136.0的中國專利公開了一種抗原修復液和抗原修復方法，用于免疫組織和細胞的化學染色過程中的抗原修復。所述抗原修復液為衣康酸、衣康酸酐或檸康酸水溶液。所述抗原修復方法為采用上述抗原修復液對組織切片進行高溫或高溫高壓修復。提供的抗原修復液和抗原修復方法具有染色質量高，可重現(xiàn)性、安全性、穩(wěn)定性好的優(yōu)點。
[0005]上述抗原修復液的溶劑為水，如果應用于全自動免疫組化染色儀上，一方面，該抗原修復液需要在用量大的情況下修復效果才好，無法在較少用量無法將組織切片完全浸漬的情況下完成較好的修復；另一方面，其沸點低，在較高溫度下容易揮發(fā)，容易導致組織切片發(fā)生干化情況，而一旦發(fā)生干化，組織切片的抗原就會變?yōu)椴豢赡孓D的破壞而無法修復。

【發(fā)明內容】

[0006]為了解決上述技術問題，本發(fā)明提供了一種EDTA抗原修復液。本發(fā)明的EDTA抗原修復液浸潤、修復效果好，能夠在較少的用量下對組織切片進行修復，修復后組織切片容易染色，染色效果好。并且修復液不易揮發(fā)，能夠配合全自動免疫組化儀使用。
[0007]本發(fā)明的具體技術方案為:一種EDTA抗原修復液，每100mL的EDTA抗原修復液中包括:Tris-Base I.20-1.25g，EDTA 0.35-0.40g，吐溫-20 400-600微升，三乙醇胺或乙二醇或三元醇50-500mL和余量的單蒸水。
[0008]在本發(fā)明的抗原修復液中，以EDTA作為主要的修復活性成分，并且以三乙醇胺或乙二醇或三元醇與單蒸水作為混合溶劑。其中，三乙醇胺或乙二醇或三元醇的加入，能夠提高抗原修復液的沸點，防止其過度揮發(fā)。并且三乙醇胺或乙二醇或三元醇與其他高點的溶劑相比，其優(yōu)勢是對抗原修復液中的活性成分的影響較小，且與組織切片的親和性較好，毒性低，不會對組織切片的修復造成過多影響，其中三元醇、三乙胺醇的效果優(yōu)于乙二醇。吐溫-20起到乳化作用，能夠提高抗原修復液中各物質的相容性。
[0009]作為優(yōu)選，每100mL的EDTA抗原修復液中包括:Tris-Base 1.2114g，EDTA0.37224g，吐溫-20 500微升，三乙醇胺或乙二醇或三元醇150mL和余量的單蒸水。
[0010]作為優(yōu)選，每100mL的EDTA抗原修復液中包括:Tris-Base 1.2114g，EDTA0.37224g，吐溫-20 500微升，三乙醇胺150mL和余量的單蒸水。
[0011]作為優(yōu)選，每100mL的EDTA抗原修復液中包括:Tris-Base I.20-1.25g，EDTA0.35-0.40g，吐溫-20 400-600微升，三乙醇胺或乙二醇或三元醇50_500mL，海藻提取物0.5-1.5g和余量的單蒸水。
[0012]作為優(yōu)選，每100mL的EDTA抗原修復液中包括:Tris-Base 1.2114g，EDTA0.37224g，吐溫-20 500微升，三乙醇胺或乙二醇或三元醇150mL，海藻提取物Ig和余量的單蒸水。
[0013]作為優(yōu)選，每100mL的EDTA抗原修復液中包括:Tris-Base 1.2114g，EDTA0.37224g，吐溫-20 500微升，三乙醇胺150mL，海藻提取物Ig和余量的單蒸水。
[0014]作為優(yōu)選，所述EDTA抗原修復液的制備方法如下:
按配比稱取Tris-Base和EDTA，用單蒸水溶解Tris-Base和EDTA后，加入配方量的三乙醇胺或乙二醇或三元醇，完全溶解后添加吐溫-20，最后用單蒸水定容至額定容量。
[0015]作為優(yōu)選，所述EDTA抗原修復液的制備方法也可如下:按配比稱取Tris-Base和EDTA，用單蒸水溶解Tris-Base和EDTA后，加入配方量的三乙醇胺或乙二醇或三元醇，完全溶解后添加海藻提取物以及吐溫-20，最后用單蒸水定容至額定容量。
[0016]作為優(yōu)選，所述海藻提取物的制備方法為:將洗凈后的海藻與水按質量比2-4:10混合，并用打漿機制成海藻漿料;將海藻漿料與PH值為3-5的鹽酸溶液按體積比1:1-2混合，得到混合漿料，對混合漿料進行微波輔助提取，提取后過濾除去固態(tài)物得到海藻提取液，對海藻提取液在10-1lOcC，4-8MPa的環(huán)境下熟化滅菌0.5-1.5h，在熟化過程中能夠使部分多糖降解;對熟化滅菌后的海藻提取液進行過濾去除已變性的粗蛋白；將過濾后的海藻提取液PH調節(jié)至中性，最后冷凍干燥后制得海藻提取物。
[0017]為了進一步的優(yōu)化，本發(fā)明的抗原修復液中也加入海藻提取物。本發(fā)明中制得的海藻提取物含有天然的海藻酸鹽以及天然多糖等物質，生物溫和性好，與組織切片親和性好。少量的海藻提取物溶于水中能夠使液體一定的粘度，鎖水效果好，能夠進一步防止抗原修復液中溶劑揮發(fā)。此外，海藻提取物對抗原修復液中的修復活性成分能夠物理結合，海藻提取物與組織切片接觸后，能夠在組織切片表面形成一層薄的黏膜，從而使得與其結合的修復活性成分能夠充分與組織切片接觸，在較少用量抗原修復液的情況下，提高修復效果。但是海藻提取物的用量需要嚴格把控，如果用量過多，會導致抗原修復液粘度過高，流動性太差，且與組織切片結合過度，不易后續(xù)的清洗。
[0018]作為優(yōu)選，所述微波輔助提取的條件為:溫度70-90°C，時間5-10min，微波功率800-1000W，微波頻率2450MHZ。
[0019]作為優(yōu)選，所述三元醇可以為甘油。
[0020]與現(xiàn)有技術對比，本發(fā)明的有益效果是:
本發(fā)明的EDTA抗原修復液浸潤、修復效果好，能夠在較少的用量下對組織切片進行修復。平均每張組織切片所需的修復液只需100-150UL。
[0021]修復后組織切片容易染色，染色效果好。
[0022]并且修復液不易揮發(fā)，能夠配合全自動免疫組化儀使用。
【具體實施方式】
[0023]下面結合實施例對本發(fā)明作進一步的描述。
[0024]實施例1
一種EDTA抗原修復液，每100mL的EDTA抗原修復液中包括:Tris-Base 1.2114g，EDTA0.37224g，吐溫-20 500微升，三乙醇胺150mL和余量的單蒸水。
[0025]制備方法如下:按配比稱取Tris-Base和EDTA，用單蒸水溶解Tris-Base和EDTA后，加入配方量的三乙醇胺，完全溶解后添加吐溫-20，最后用單蒸水定容至額定容量。
[0026]實施例2
一種EDTA抗原修復液，每100mL的EDTA抗原修復液中包括:Tris-Base 1.2114g，EDTA0.37224g，吐溫-20 500微升，乙二醇325mL和余量的單蒸水。
[0027]制備方法如下:按配比稱取Tris-Base和EDTA，用單蒸水溶解Tris-Base和EDTA后，加入配方量的乙二醇，完全溶解后添加吐溫-20，最后用單蒸水定容至額定容量。
[0028]實施例3
一種EDTA抗原修復液，每100mL的EDTA抗原修復液中包括:Tris-Base 1.20g，EDTA
0.35g，吐溫-20 400微升，三乙醇胺50mL和余量的單蒸水。
[0029]實施例4
一種EDTA抗原修復液，每100mL的EDTA抗原修復液中包括:Tris-Base 1.25g，EDTA
0.40g，吐溫-20 600微升，三乙醇胺500mL和余量的單蒸水。
[0030]實施例5
一種EDTA抗原修復液，每100mL的EDTA抗原修復液中包括:Tris-Base 1.2114g，EDTA
0.37224g，吐溫-20 500微升，甘油300mL和余量的單蒸水。
[0031 ] 實施例6
一種EDTA抗原修復液，每100mL的EDTA抗原修復液中包括:Tris-Base 1.2114g，EDTA 0.37224g，吐溫-20 500微升，三乙醇胺150mL，海藻提取物Ig和余量的單蒸水。
[0032]制備方法如下:按配比稱取Tris-Base和EDTA，用單蒸水溶解Tris-Base和EDTA后，加入配方量的三乙醇胺，完全溶解后添加海藻提取物以及吐溫-20，最后用單蒸水定容至額定容量。
[0033]所述海藻提取物的制備方法為:將洗凈后的海藻與水按質量比3:10混合，并用打漿機制成海藻漿料;將海藻漿料與PH值為4的鹽酸溶液按體積比1:1.5混合，得到混合漿料，對混合漿料進行微波輔助提取，其中提取條件為:溫度80 °C，時間7.5min，微波功率900W，微波頻率2450MHZ。提取后過濾除去固態(tài)物得到海藻提取液，對海藻提取液在105°C，6MPa的環(huán)境下熟化滅菌Ih;對熟化滅菌后的海藻提取液進行過濾去除粗蛋白；將過濾后的海藻提取液PH調節(jié)至中性，最后冷凍干燥后制得海藻提取物。
[0034]實施例7
一種EDTA抗原修復液，每100mL的EDTA抗原修復液中包括:每100mL的EDTA抗原修復液中包括:Tris-Base 1.2114g，EDTA 0.37224g，吐溫-20 500微升，三乙醇胺150mL，海藻提取物0.5g和余量的單蒸水。
[0035]所述海藻提取物的制備方法為:將洗凈后的海藻與水按質量比2:10混合，并用打漿機制成海藻漿料;將海藻漿料與PH值為3-5的鹽酸溶液按體積比1:1混合，得到混合漿料，對混合漿料進行微波輔助提取，其中提取條件為:溫度700C，時間1min，微波功率800W，微波頻率2450MHZο提取后過濾除去固態(tài)物得到海藻提取液，對海藻提取液在100 °C，8MPa的環(huán)境下熟化滅菌0.5h;對熟化滅菌后的海藻提取液進行過濾去除粗蛋白；將過濾后的海藻提取液PH調節(jié)至中性，最后冷凍干燥后制得海藻提取物。
[0036]實施例8
每 100mL 的 EDTA 抗原修復液中包括:Tris-Base 1.2114g，EDTA 0.37224g，吐溫-20500微升，三乙醇胺150mL，海藻提取物1.5g和余量的單蒸水。
[0037]所述海藻提取物的制備方法為:將洗凈后的海藻與水按質量比4:10混合，并用打漿機制成海藻漿料;將海藻漿料與PH值為3-5的鹽酸溶液按體積比1: 2混合，得到混合漿料，對混合漿料進行微波輔助提取，其中提取條件為:溫度90 0C，時間5min，微波功率1000W，微波頻率2450MHZο提取后過濾除去固態(tài)物得到海藻提取液，對海藻提取液在110°C，4MPa的環(huán)境下熟化滅菌1.5h;對熟化滅菌后的海藻提取液進行過濾去除粗蛋白；將過濾后的海藻提取液PH調節(jié)至中性，最后冷凍干燥后制得海藻提取物。
[0038]實施例9
一種EDTA抗原修復液，每100mL的EDTA抗原修復液中包括:Tris-Base 1.2114g，EDTA
0.37224g，吐溫-20 500微升，甘油150mL，海藻提取物Ig和余量的單蒸水。
[0039]制備方法如下:按配比稱取Tris-Base和EDTA，用單蒸水溶解Tris-Base和EDTA后，加入配方量的甘油，完全溶解后添加海藻提取物以及吐溫-20，最后用單蒸水定容至額定容量。
[0040]所述海藻提取物的制備方法為:將洗凈后的海藻與水按質量比3:10混合，并用打漿機制成海藻漿料;將海藻漿料與PH值為4的鹽酸溶液按體積比1:1.5混合，得到混合漿料，對混合漿料進行微波輔助提取，其中提取條件為:溫度80 °C，時間7.5min，微波功率900W，微波頻率2450MHZ。提取后過濾除去固態(tài)物得到海藻提取液，對海藻提取液在105°C，6MPa的環(huán)境下熟化滅菌Ih;對熟化滅菌后的海藻提取液進行過濾去除粗蛋白；將過濾后的海藻提取液PH調節(jié)至中性，最后冷凍干燥后制得海藻提取物。本發(fā)明中所用原料、設備，若無特別說明，均為本領域的常用原料、設備;本發(fā)明中所用方法，若無特別說明，均為本領域的常規(guī)方法。
[0041]以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實施例，并非對本發(fā)明作任何限制，凡是根據(jù)本發(fā)明技術實質對以上實施例所作的任何簡單修改、變更以及等效變換，均仍屬于本發(fā)明技術方案的保護范圍。
【主權項】
1.一種EDTA抗原修復液，其特征在于:每100mL的EDTA抗原修復液中包括:Tris_Base1.20-1.25g，EDTA 0.35-0.40g，吐溫-20 400-600微升，三乙醇胺或乙二醇或三元醇50-500mL和余量的單蒸水。2.如權利要求1所述的一種EDTA抗原修復液，其特征在于，每100mL的EDTA抗原修復液中包括= Tris-Base 1.2114g，EDTA 0.37224g，吐溫-20 500微升，三乙醇胺或乙二醇或三元醇150mL和余量的單蒸水。3.如權利要求2所述的一種EDTA抗原修復液，其特征在于，每100mL的EDTA抗原修復液中包括= Tris-Base 1.2114g，EDTA 0.37224g，吐溫-20 500微升，三乙醇胺150mL和余量的單蒸水。4.如權利要求1所述的一種EDTA抗原修復液，其特征在于，每100mL的EDTA抗原修復液中包括= Tris-Base I.20-1.25g，EDTA 0.35-0.40g，吐溫-20 400-600微升，三乙醇胺或乙二醇或三元醇50-500mL，海藻提取物0.5-1.5g和余量的單蒸水。5.如權利要求4所述的一種EDTA抗原修復液，其特征在于，每100mL的EDTA抗原修復液中包括= Tris-Base 1.2114g，EDTA 0.37224g，吐溫-20 500微升，三乙醇胺或乙二醇或三元醇150mL，海藻提取物Ig和余量的單蒸水。6.如權利要求5所述的一種EDTA抗原修復液，其特征在于，每100mL的EDTA抗原修復液中包括= Tris-Base 1.2114g，EDTA 0.37224g，吐溫-20 500微升，三乙醇胺150mL，海藻提取物Ig和余量的單蒸水。7.如權利要求1-3之一所述的一種EDTA抗原修復液，其特征在于制備方法如下:按配比稱取Tris-Base和EDTA，用單蒸水溶解Tris-Base和EDTA后，加入配方量的三乙醇胺或乙二醇或三元醇，完全溶解后添加吐溫-20，最后用單蒸水定容至額定容量。8.如權利要求4-6之一所述的一種EDTA抗原修復液，其特征在于制備方法如下:按配比稱取Tris-Base和EDTA，用單蒸水溶解Tris-Base和EDTA后，加入配方量的三乙醇胺或乙二醇或三元醇，完全溶解后添加海藻提取物以及吐溫-20，最后用單蒸水定容至額定容量。9.如權利要求4-6之一所述的一種EDTA抗原修復液，其特征在于，所述海藻提取物的制備方法為:將洗凈后的海藻與水按質量比2-4:10混合，并用打漿機制成海藻漿料;將海藻漿料與PH值為3-5的鹽酸溶液按體積比1:1-2混合，得到混合漿料，對混合漿料進行微波輔助提取，提取后過濾除去固態(tài)物得到海藻提取液，對海藻提取液在10-1lOtC，4-8MPa的環(huán)境下熟化滅菌0.5-1.5h;對熟化滅菌后的海藻提取液進行過濾去除粗蛋白；將過濾后的海藻提取液PH調節(jié)至中性，最后冷凍干燥后制得海藻提取物。10.如權利要求9所述的一種EDTA抗原修復液，其特征在于，所述微波輔助提取的條件為:溫度70-90°C，時間5-1011^11，微波功率800-1000￥，微波頻率24501!12。
【文檔編號】G01N1/30GK106053172SQ201610385943
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年6月3日
【發(fā)明人】李思勇, 余向東
【申請人】浙江世紀康大醫(yī)療科技股份有限公司