對(duì)羥基苯丙氨酸酪氨酸尿液檢測(cè)試劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及對(duì)羥基苯丙氨酸酪氨酸尿液檢測(cè)試劑，本發(fā)明還涉及人體尿液中單羥酚類代謝物的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]癌癥的早期篩查是目前降低癌癥發(fā)病率和死亡率的一個(gè)非常重要的手段。目前常見(jiàn)的檢測(cè)方法包括各種腫瘤標(biāo)志物，紅外線、X光等。腫瘤標(biāo)志物需要到醫(yī)院抽血，需要專門的設(shè)備進(jìn)行檢測(cè)，紅外線和X光也同樣如此。目前的篩查方法都涉及各種儀器設(shè)備，方法復(fù)雜，費(fèi)用高。尿中腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)一直是國(guó)際上研究的熱點(diǎn)，利用尿中腫瘤標(biāo)志物來(lái)篩查早期癌癥已得到科學(xué)研究者和消費(fèi)者的普遍認(rèn)可。
[0003]癌癥篩查試劑需要具有很好的靈敏度和特異性，但是靈敏度和特異性是一對(duì)矛盾，提高靈敏度必降低特異性，人體尿液中的成分非常復(fù)雜，任何生理方面的變化都會(huì)使得尿液中的成分發(fā)生很大的變化，所以癌癥篩查試劑的靈敏度和特異性是本領(lǐng)域的一個(gè)難點(diǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種新的對(duì)羥基苯丙氨酸酪氨酸尿液檢測(cè)試劑，所述檢測(cè)試劑至少由酸性溶液、磷鉬酸和/或磷鉬酸可溶性鹽混合而成，所述酸性溶液至少含有H+、Ni2+、Hg+、N03離子，所述磷鉬酸和/或磷鉬酸可溶性鹽在檢測(cè)試劑中的濃度為 45-900 mmol/Lo
[0005]作為本發(fā)明優(yōu)選的技術(shù)方案之一，所述檢測(cè)試劑中Hg+的濃度與磷鉬酸的濃度比為 1:0.9-2 ο
[0006]作為本發(fā)明優(yōu)選的技術(shù)方案之一，所述檢測(cè)試劑中Hg+的濃度為50-1000mmol/L。
[0007]作為本發(fā)明優(yōu)選的技術(shù)方案之一，所述檢測(cè)試劑中H+的濃度為100-4000mmol/L。
[0008]作為本發(fā)明優(yōu)選的技術(shù)方案之一，所述檢測(cè)試劑中Hg+的濃度與Ni 2+的濃度比為1:1-4。
[0009]作為本發(fā)明優(yōu)選的技術(shù)方案之一，所述檢測(cè)試劑中NO3的濃度為500-3000mmol/
L0
[0010]作為本發(fā)明優(yōu)選的技術(shù)方案之一，所述檢測(cè)試劑還含有濃度為100-200mmol/L的硫酸根離子。
[0011]作為本發(fā)明優(yōu)選的技術(shù)方案之一，所述檢測(cè)試劑還含有濃度為25-500mmol/L的鉬酸根離子。
[0012]單羥酚類代謝物的檢測(cè)方法，包括以下步驟，
-獲取待測(cè)人體尿液；
-將檢測(cè)試劑與待測(cè)人體尿液混合，得到混合液，
所述檢測(cè)試劑為含有H+、Ni2+、Hg+、N03離子的酸性溶液，所述檢測(cè)試劑中Hg +的濃度為50-100mmOl/L，所述檢測(cè)試劑還含有濃度為50-900mmOl/L的磷鉬酸和/或磷鉬酸可溶性鹽；
-判斷混合液的顏色，當(dāng)混合液的顏色為磚紅色或褐色或玫紅色時(shí)，則表示待測(cè)人體尿液含有單羥酚類代謝物，當(dāng)混合液的顏色為白色或淡黃色時(shí)，則表示待測(cè)人體尿液不含有單羥酚類代謝物。
[0013]參考以下詳細(xì)說(shuō)明更易于理解本申請(qǐng)的上述以及其他特征、方面和優(yōu)點(diǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0014]除非另有限定，本文使用的所有技術(shù)以及科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的相同的含義。當(dāng)存在矛盾時(shí)，以本說(shuō)明書(shū)中的定義為準(zhǔn)。
[0015]如本文所用術(shù)語(yǔ)“由…制備”與“包含”同義。本文中所用的術(shù)語(yǔ)“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它變形，意在覆蓋非排它性的包括。例如，包含所列要素的組合物、步驟、方法、制品或裝置不必僅限于那些要素，而是可以包括未明確列出的其它要素或此種組合物、步驟、方法、制品或裝置所固有的要素。
[0016]連接詞“由…組成”排除任何未指出的要素、步驟或組分。如果用于權(quán)利要求中，此短語(yǔ)將使權(quán)利要求為封閉式，使其不包含除那些描述的材料以外的材料，但與其相關(guān)的常規(guī)雜質(zhì)除外。當(dāng)短語(yǔ)“由…組成”出現(xiàn)在權(quán)利要求主體的子句中而不是緊接在主題之后時(shí)，其僅限定在該子句中描述的要素；其它要素并不被排除在作為整體的所述權(quán)利要求之外。
[0017]當(dāng)量、濃度、或者其它值或參數(shù)以范圍、優(yōu)選范圍、或一系列上限優(yōu)選值和下限優(yōu)選值限定的范圍表示時(shí)，這應(yīng)當(dāng)被理解為具體公開(kāi)了由任何范圍上限或優(yōu)選值與任何范圍下限或優(yōu)選值的任一配對(duì)所形成的所有范圍，而不論該范圍是否單獨(dú)公開(kāi)了。例如，當(dāng)公開(kāi)了范圍“I至5”時(shí)，所描述的范圍應(yīng)被解釋為包括范圍“I至4”、“1至3”、“1-2”、“1-2和
4-5”、“1_3和5”等。當(dāng)數(shù)值范圍在本文中被描述時(shí)，除非另外說(shuō)明，否則該范圍意圖包括其端值和在該范圍內(nèi)的所有整數(shù)和分?jǐn)?shù)。
[0018]此外，本發(fā)明要素或組分前的不定冠詞“一種”和“一個(gè)”對(duì)要素或組分的數(shù)量要求(即出現(xiàn)次數(shù))無(wú)限制性。因此“一個(gè)”或“一種”應(yīng)被解讀為包括一個(gè)或至少一個(gè)，并且單數(shù)形式的要素或組分也包括復(fù)數(shù)形式，除非所述數(shù)量明顯旨指單數(shù)形式。
[0019]對(duì)羥基苯丙氨酸酪氨酸尿液檢測(cè)試劑，所述檢測(cè)試劑至少由酸性溶液、磷鉬酸和/或磷鉬酸可溶性鹽混合而成，所述酸性溶液至少含有H+、Ni' Hg\ NO3離子，所述磷鉬酸和/或磷鉬酸可溶性鹽在檢測(cè)試劑中的濃度為45-900 mmol/Lo
[0020]磷鉬酸
本發(fā)明所述的磷鉬酸是指磷酸與三氧化鉬反應(yīng)生成的磷鉬酸和/磷鉬酸可溶性鹽，磷鉬酸是通用的顯色試劑，但是本發(fā)明的磷鉬酸能夠抑制尿液中蛋白質(zhì)或多肽影響，使得檢測(cè)尿液中單羥酚類代謝物更為準(zhǔn)確。雖然其機(jī)理未得到普遍認(rèn)可，但是本發(fā)明的發(fā)明人認(rèn)為:尿液中的多肽或蛋白質(zhì)表面存在大量的負(fù)電荷，會(huì)吸附大量的亞汞離子或鎳離子，使得亞汞離子、鎳離子、硝酸根離子的酸性溶液與單羥酚類代謝物無(wú)法發(fā)生顯色反應(yīng)。磷鉬酸的存在下，使得檢測(cè)尿液中單羥酚類代謝物更為準(zhǔn)確。
[0021]將三氧化鉬加入到反應(yīng)器中，并按(質(zhì)量比)三氧化鉬:水=1:10的比例加入攪拌均勻，再加入85%磷酸(三氧化鉬:磷酸摩爾比為12:1-6:1)，煮沸3-6小時(shí)，反應(yīng)前溶液為乳白色，前期為金黃色，后期為綠色，反應(yīng)進(jìn)行中應(yīng)保持反應(yīng)液平穩(wěn)沸騰并加水保持液面高度，反應(yīng)后期pH值控制在0-1.0左右，再經(jīng)真空抽濾除去濾渣，濾液滴加30%過(guò)氧化氫溶液，使溶液由綠色轉(zhuǎn)變成黃色，然后蒸發(fā)濃縮至溶液溫度為105°C時(shí)，將溶液緩慢冷卻結(jié)晶，最后離心分離制得磷鉬酸晶體。
[0022]從所述檢測(cè)試劑還含有濃度為50-900mmol/L的磷鉬酸和/或磷鉬酸可溶性鹽，由于本發(fā)明的磷鉬酸在檢測(cè)試劑中可能存在不同程度的電離，所以本發(fā)明的磷鉬酸的濃度是以磷鉬酸加入檢測(cè)試劑之前的量為基礎(chǔ)計(jì)算。此外，本發(fā)明的可溶性鹽是指在檢測(cè)試劑的酸性溶液中可溶。
[0023]顯佴試劑
作為單羥酚類代謝物的顯色試劑，本發(fā)明的檢測(cè)試劑為含有H+、Ni2+、Hg+、N03離子的酸性溶液，酸性溶液與單羥酚類代謝物反應(yīng)，得到磚紅色或褐色或玫紅色的反應(yīng)產(chǎn)物，而不存在單羥酚類代謝物時(shí)，則獲得白色或接近黃色或灰白色的反應(yīng)產(chǎn)物。
[0024]作為本發(fā)明一種優(yōu)選的技術(shù)方案，從獲得更為明顯的反應(yīng)產(chǎn)物角度出發(fā)，所述檢測(cè)試劑中H+的濃度為100-4000mmol/L。本發(fā)明中的磷鉬酸雖然在水溶液中會(huì)電離出氫離子，但是為了簡(jiǎn)便地描述本發(fā)明，本發(fā)明中的氫離子的濃度不將磷鉬酸電離出的氫離子計(jì)算在內(nèi)，并將磷鉬酸當(dāng)做不發(fā)生電離的多元酸來(lái)計(jì)算。
[0025]作為本發(fā)明一種優(yōu)選的技術(shù)方案，從獲得更為明顯的反應(yīng)產(chǎn)物角度出發(fā)，所述檢測(cè)試劑中Hg+的濃度為lO-lOOOmmol/L，優(yōu)選地，Hg+的濃度為50-100mmol/L，本發(fā)明的磷鉬酸能夠有效地讓顯色反應(yīng)按照預(yù)計(jì)的方式進(jìn)行，尤其是在亞汞離子濃度低的情況下。所述檢測(cè)試劑中Hg+的濃度與磷鉬酸的濃度比為1:0.9-2ο采用上述的比例可以更有經(jīng)濟(jì)、有效地獲得有效的檢測(cè)效果。
[0026]作為本發(fā)明一種優(yōu)選的技術(shù)方案，從獲得更為明顯的反應(yīng)產(chǎn)物角度出發(fā)，所述檢測(cè)試劑中NO3的濃度為500-14000mmol/L。
[0027]作為本發(fā)明一種優(yōu)選的技術(shù)方案，從獲得更為明顯的反應(yīng)產(chǎn)物角度出發(fā)，所述檢測(cè)試劑中還包括SO42，所述的SO42濃度為50-3000mmol/L。
[0028]鉬酸根離子
作為本發(fā)明一種優(yōu)選的技術(shù)方案，從抑制本發(fā)明中人體尿液中干擾物質(zhì)出發(fā)，所述檢測(cè)試劑還含有鉬酸根離子，所述鉬酸根離子在檢測(cè)試劑中的濃度為25-500mmol/L。鉬酸根離子可以與磷鉬酸起到協(xié)同作用，使得顯色反應(yīng)更加穩(wěn)定。
[0029]其他離子
作為本發(fā)明一種優(yōu)選的技術(shù)方案，從獲得離子平衡角度來(lái)，本發(fā)明的檢測(cè)試劑還可以包含任意的正、負(fù)離子，該正、負(fù)離子只要不與檢測(cè)試劑中的離子或其他成分發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，尤其是不能發(fā)生沉淀反應(yīng)。如可以選擇硫酸根離子等帶有負(fù)電荷的離子，以及鈉離子等帶有正電荷的離子。需要指出的是，本發(fā)明的實(shí)施例中，其他離子可能不會(huì)指出，如無(wú)指出，根據(jù)電離平衡的原理，缺少的正、負(fù)離子是指含有硫酸根離子或鈉離子。所以，本發(fā)明前述的各種離子比例并不受電離平衡的限制，可以是任意的選擇。
[0030]此外，本發(fā)明中的檢測(cè)試劑還會(huì)含有少量的氫氧根離子。
[0031]檢測(cè)方法
人體尿液中單羥酚類代謝物的檢測(cè)方法，包括以下步驟， -獲取待測(cè)人體尿液；
-將檢測(cè)試劑與待測(cè)人體尿液混合，得到混合液，
所述檢測(cè)試劑為含有H+、Ni2+、Hg+、N03離子的酸性溶液，所述檢測(cè)試劑還含有磷鉬酸和/磷鉬酸可溶性鹽，所述磷鉬酸和/磷鉬酸可溶性鹽的在檢測(cè)試劑中的濃度為50-900mmol/L ；
-判斷混合液的顏色，當(dāng)混合液的顏色為磚紅色或褐色或玫紅色時(shí)，則表示待測(cè)人體尿液含有單羥酚類代謝物，當(dāng)混合液的顏色為白色、淡黃色時(shí)，則表示待測(cè)人體尿液不含有單羥酚類代謝物。
[0032]實(shí)施方式:
實(shí)施方式1，對(duì)羥基苯丙氨酸酪氨酸尿液檢測(cè)試劑，所述檢測(cè)試劑至少由酸性溶液、磷鉬酸和/或磷鉬酸可溶性鹽混合而成，所述酸性溶液至少含有H+、Ni' Hg\ NO3離子，所述磷鉬酸和/或磷鉬酸可溶性鹽在檢測(cè)試劑中的濃度為45-900 mmol/Lo