一種蛇床子素的快速檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種基于快速熱解-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（PY-GC/MS法）快速檢 測(cè)蛇床子素含量的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 蛇床子是中國(guó)長(zhǎng)期以來用于治療男性功能障礙的一種中藥，其提取物中主要有效 成分為蛇床子素。蛇床子素是一種天然香豆素類化合物，化學(xué)名稱為7-甲氧基-8-(3-甲 基-2- 丁烯基）香豆素，是已知的一種具有多種藥理學(xué)和生化活性的天然化合物，具有潛在 治療疾病的作用。天然蛇床子素主要存在于14種傘形科和17種蕓香科植物中，是一類分 布廣泛、藥理作用廣泛和使用廣泛的中藥活性成分。
[0003] 現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，除了傳統(tǒng)的應(yīng)用領(lǐng)域外，蛇床子素還具有抗癌、抗氧化、抗 炎和免疫調(diào)節(jié)等活性。同時(shí)它還具有保護(hù)肝臟和保護(hù)神經(jīng)的作用，也可抑制絕經(jīng)后骨質(zhì)疏 松癥，并改善脂質(zhì)代謝。蛇床子素多種多樣的藥理學(xué)作用使其在新藥開發(fā)中，成為一類非常 有前景的天然先導(dǎo)化合物。此外，已有的含有蛇床子素的制劑應(yīng)用廣泛，包括：婦炎平、復(fù)方 芙蓉泡騰栓、解毒止癢散貼臍、克癬寧洗劑、黃四子土參湯、四子填精膠囊等等。因此，針對(duì) 蛇床子素及其各種制劑開發(fā)一種高效、快速的分析方法是十分必要的。
[0004] 現(xiàn)有對(duì)蛇床子素的分析檢測(cè)主要采用高效液相的方法。受分析儀器的限制，往往 需要對(duì)樣品進(jìn)行較為復(fù)雜的前處理，通過萃取等方法將蛇床子素從藥材或其復(fù)方制劑中分 離，隨后采用HPLC/UPLC/SFCLC等液相色譜方法分析。該分析方法的樣品處理過程復(fù)雜、總 體分析時(shí)間長(zhǎng)。
[0005] 快速熱解-氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（PY-GC/MS)是一種高效的檢測(cè)易揮發(fā)性成 分的技術(shù)，近年來發(fā)展迅速。低溫下的熱解過程是一種非常有效的熱分離手段，通過控制 熱解的溫度和時(shí)間可以實(shí)現(xiàn)低沸點(diǎn)的復(fù)雜混合物的初步的氣-液或氣-固相分離；為氣相 色譜提供一種在線的和實(shí)時(shí)的樣品前處理和初步分離能力。分析檢測(cè)過程中的熱解時(shí)間、 溫度、升溫速率、載氣流速、分流比、離子化溫度等對(duì)分析結(jié)果的影響是很大的。因此，基于 PY-GC/MS技術(shù)的特點(diǎn)，目前亟需提出一種針對(duì)蛇床子素的快速、微量檢測(cè)方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種蛇床子素的快速檢測(cè)方法，并基于此，初步判斷蛇床 子等中藥材及其制劑質(zhì)量的高低。
[0007] 為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案：
[0008] 1)準(zhǔn)確稱取蛇床子或其復(fù)方制劑0. 02~5. OOmg得樣品，將樣品加入熱解杯中；
[0009] 2)采用快速熱解-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對(duì)加入熱解杯中的樣品進(jìn)行測(cè)定； [0010] 3)經(jīng)過步驟2)后，根據(jù)測(cè)定的原始色譜數(shù)據(jù)及質(zhì)譜數(shù)據(jù)，定性樣品中蛇床子素的 色譜峰，并獲得樣品中蛇床子素的相對(duì)含量。
[0011] 所述樣品為塊狀或粉末狀固體。
[0012] 所述熱解的條件為：熱解溫度為180~400°C，熱解時(shí)間為0. 1~2min。
[0013] 所述氣相色譜的工作條件為：載氣為流速0. 1~4. OmL/min的氦氣，分流比為0~ 500 :1，升溫程序?yàn)椋撼跏紲囟葹?0~70°C，并保持O~3min，然后以彡20°C /min升至 300。。。
[0014] 所述質(zhì)譜的工作條件為：采用EI源、正離子檢測(cè)，電子能量為50~85eV，離子源 溫度為215~245°C，單四級(jí)桿溫度為145~185°C，掃描方式為全掃描方式，電子倍增器電 壓為1075~2980V，溶劑延遲為O~6min。
[0015] 所述相對(duì)含量采用面積歸一化方法進(jìn)行計(jì)算。
[0016] 所述蛇床子素的色譜峰的定性采用NIST08軟件自動(dòng)匹配計(jì)算。
[0017] 本發(fā)明的有益效果體現(xiàn)在：
[0018] 1)快速分離?，F(xiàn)有方法是將蛇床子或其制劑通過萃取方法初步分離得到蛇床子素 溶液，過濾處理后，利用液相色譜分析，或薄層層析-光譜聯(lián)用技術(shù)（TLC-SP)等檢測(cè)其有效 成分；該方法的一般分析時(shí)間為4~24小時(shí)。本發(fā)明中通過熱分離方法直接對(duì)蛇床子或其 制劑的低沸點(diǎn)物質(zhì)進(jìn)行初步分離，隨后采用氣相色譜進(jìn)一步分離蛇床子素，大大節(jié)省了分 析時(shí)間，常規(guī)分析時(shí)間為〇. 1~〇. 3小時(shí)，提高了分析效率。
[0019] 2)靈敏度好，所需樣品量少。HPLC檢測(cè)方法受到儀器的限制，一般需要先分離得 到粗品溶液，因此需要的樣品量較大，通常是幾克到幾十克不等；本發(fā)明方法的分析所用樣 品量一般為〇. 02~lmg，提高了分析靈敏度。
[0020] 3)本發(fā)明優(yōu)化了熱解、色譜、質(zhì)譜等檢測(cè)條件，可以快速定性所需的色譜峰，實(shí)現(xiàn) 了快速和準(zhǔn)確檢測(cè)。
【具體實(shí)施方式】
[0021] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
[0022] 本發(fā)明針對(duì)蛇床子素熔沸點(diǎn)相對(duì)較低且易揮發(fā)的特點(diǎn)，采用快速熱解-氣相色譜 /質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（PY-GC/MS)，充分將熱分離和色譜分離相結(jié)合，實(shí)現(xiàn)蛇床子素的快速分離， 隨后采用質(zhì)譜定性和定量檢測(cè)，達(dá)到快速、微量檢測(cè)的目的。
[0023] 實(shí)施例
[0024] 一種基于PY-GC/MS檢測(cè)蛇床子素的方法，以中藥材蛇床子為例，但本發(fā)明的保護(hù) 范圍不局限于該實(shí)施例，具體步驟如下：
[0025] 一、樣品準(zhǔn)備
[0026] 將取得的蛇床子（陜西紫杉科技股份有限公司，西安）準(zhǔn)確稱取 1.0 Omg (±0. 02mg)放入50 μ L的熱解小杯中；
[0027] 二、熱解：
[0028] 熱裂解爐采用 Frontiers 的 PY2020is ;
[0029] ①熱解溫度：240 °C ;
[0030] ②熱解時(shí)間：0· 40min。
[0031] 三、分離、檢測(cè)
[0032] 色譜：
[0033] 氣相色譜采用安捷倫7890A :
[0034] ①分析柱是HP-5MS彈性石英毛細(xì)管柱（30m*0. 25id*0. 25 μ m);
[0035] ②載氣：高純氦氣，流速為1.0 mL/min ;
[0036] ③進(jìn)樣方式為分流進(jìn)樣，分流比為200 :1 ;
[0037] ④進(jìn)樣口溫度為280 °C，傳輸線溫度為290 °C ;
[0038] ⑤程序升溫：初始溫度為60°C，保持2min，然后以15°C /min升至300°C。
[0039] 質(zhì)譜（采用安捷倫5975C):
[0040] ①EI源，正離子檢測(cè)，電子能量為70eV ;
[0041] ②離子源溫度為230°C，單四級(jí)桿溫度為150°C ;
[0042] ③掃描方式為全掃描方式；
[0043] ④電子倍增器電壓為2532V，溶劑延遲為4min。
[0044] 四、數(shù)據(jù)分析及處理
[0045] 色譜圖的保留時(shí)間和積分面積由工作站自動(dòng)完成，利用NIST08譜庫(kù)定性色譜峰。 各揮發(fā)性成分的相對(duì)含量通過面積歸一化法得到。
[0046] 本樣品蛇床子熱解組分中可辨認(rèn)的峰為35個(gè)，成分及其保留時(shí)間列于表1。保留 時(shí)間及峰面積用安捷倫Chemstation計(jì)算，相對(duì)含量用面積歸一化的方法計(jì)算。
[0047] 表1.蛇床子中揮發(fā)性成分的組成和含量U1= 13. 312 :蛇床子素）
[0048]
[0049] LlN 丄UOldbydO A I ^ 4/0 JM
[0050] LlN 丄UOldbydO /\ I ^ 〇/〇 JM
[0051] 五、精密度、重現(xiàn)性及穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
[0052] 1.精密度實(shí)驗(yàn)：以取自同一蛇床子的樣品5份，按照上述方法連續(xù)進(jìn)樣5次，對(duì)相 對(duì)峰面積大于0. 5%的35個(gè)色譜峰進(jìn)行分析，其相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD (相對(duì)標(biāo) 準(zhǔn)偏差）分別在2. 43~4. 75%和2. 76~4. 67%之間，說明本發(fā)明方法精密度良好。
[0053] 2.重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)：取同一批次蛇床子的樣品5份，按照上述方法連續(xù)進(jìn)樣5次。結(jié)果 35個(gè)色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD分別在1. 26~4. 98%和2. 54~4. 59% 之間，說明本發(fā)明方法重現(xiàn)性良好。
[0054] 3.穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：取制備好的樣品1份，分別在0、2、4、8、12、24h進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果35 個(gè)色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD均小于4. 39%，說明本發(fā)明方法在24h內(nèi)測(cè) 定是穩(wěn)定的。
[0055] 中藥材因產(chǎn)地、季節(jié)、炮制方式的不同，其含水量、密度等都有細(xì)微的不同，繼而其 復(fù)方制劑中的含量也有所不同。因此，需要的熱解、分離和分析條件均不相同，據(jù)此得出本 發(fā)明中的條件范圍。
[0056] 本發(fā)明具有操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)限低，實(shí)驗(yàn)重現(xiàn)性好，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)直觀可靠等特點(diǎn)，特別 適用于微量樣品檢測(cè)（樣品量可低至20 μ g)，并可用于對(duì)不同樣品間的質(zhì)量差別進(jìn)行定量 的比較，應(yīng)用性廣，為該類中藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和現(xiàn)代化應(yīng)用提供了一條參考的思路和方法。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種蛇床子素的快速檢測(cè)方法，其特征在于：包括以下步驟： 1) 準(zhǔn)確稱取蛇床子或其復(fù)方制劑0. 02~5. OOmg得樣品，將樣品加入熱解杯中； 2) 采用快速熱解-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對(duì)加入熱解杯中的樣品進(jìn)行測(cè)定； 3) 經(jīng)過步驟2)后，根據(jù)測(cè)定的原始色譜數(shù)據(jù)及質(zhì)譜數(shù)據(jù)，定性樣品中蛇床子素的色譜 峰，并獲得樣品中蛇床子素的相對(duì)含量。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種蛇床子素的快速檢測(cè)方法，其特征在于：所述樣品為塊狀 或粉末狀固體。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種蛇床子素的快速檢測(cè)方法，其特征在于：所述熱解的條件 為：熱解溫度為180~400°C，熱解時(shí)間為0. 1~2min。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種蛇床子素的快速檢測(cè)方法，其特征在于：所述氣相色譜的 工作條件為：載氣為流速〇. 1~4. OmL/min的氦氣，分流比為0~500 :1，升溫程序?yàn)椋撼跏?溫度為40~70°C，并保持0~3min，然后以彡20°C /min升至300°C。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種蛇床子素的快速檢測(cè)方法，其特征在于：所述質(zhì)譜的工作 條件為：采用EI源、正離子檢測(cè)，電子能量為50~85eV，離子源溫度為215~245°C，單四 級(jí)桿溫度為145~185 °C，掃描方式為全掃描方式，電子倍增器電壓為1075~2980V，溶劑 延遲為0~6min。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種蛇床子素的快速檢測(cè)方法，其特征在于：所述相對(duì)含量采 用面積歸一化方法進(jìn)行計(jì)算。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種蛇床子素的快速檢測(cè)方法，其特征在于：所述蛇床子素的 色譜峰的定性采用NIST08軟件自動(dòng)匹配計(jì)算。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種蛇床子素的快速檢測(cè)方法：1)樣品的準(zhǔn)備；2)PY-GC/MS檢測(cè)；3)數(shù)據(jù)分析及定性和定量分析。本發(fā)明選擇PY-GC/MS技術(shù)對(duì)蛇床子素含量進(jìn)行檢測(cè)，是針對(duì)實(shí)際生產(chǎn)、生活中蛇床子等以蛇床子素為主要活性成分的中藥材，因產(chǎn)地、季節(jié)、炮制等不同而品質(zhì)不同的問題，提供一種蛇床子素快速、微量的檢測(cè)方法，進(jìn)而初步判斷此類中藥材的質(zhì)量，本發(fā)明具有操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)限低，實(shí)驗(yàn)重現(xiàn)性好，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)直觀可靠等特點(diǎn)，特別適用于微量樣品檢測(cè)，可用于對(duì)不同產(chǎn)地、品種、批次的蛇床子樣品間的質(zhì)量差別進(jìn)行初步的比較，應(yīng)用性廣。
【IPC分類】G01N30/02
【公開號(hào)】CN105136935
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510598230
【發(fā)明人】龔頻
【申請(qǐng)人】陜西科技大學(xué)
【公開日】2015年12月9日
【申請(qǐng)日】2015年9月18日