N1,n1-二異丙基乙二胺的高效液相色譜分析方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種Ni，Ni-二異丙基乙二胺的高效液相色譜分析方法。 技術(shù)背景
[0002] &，Nf二異丙基乙二胺是一種比較重要的化工原料和優(yōu)良的有機(jī)溶劑，也常用于 有機(jī)合成，是合成鹽酸阿考替胺（Acotiamidehydrochloridetrihydrate)的重要中間體。
[0003]目前檢測&，&-二異丙基乙二胺的分析方法有：酸堿滴定法、色譜法，由于 &-二異丙基乙二胺是有機(jī)胺，采用酸直接滴定法可以測定&，Nf二異丙基乙二胺的含 量，但如果需要測定其他樣品中N^Nf二異丙基乙二胺的殘留，該方法準(zhǔn)確度和靈敏度比 較差；由于&，Nf二異丙基乙二胺的沸點(diǎn)較小，可以采用氣相色譜法測定&-二異丙基 乙二胺的殘留，但樣品中如果存在不溶性物質(zhì)，會(huì)容易吸附樣品，準(zhǔn)確度比較差-二 異丙基乙二胺本身無紫外吸收基團(tuán)，無法采用常規(guī)的液相方法進(jìn)行檢測，如果選用示差檢 測器等不常規(guī)的檢測器，方法重現(xiàn)性差。此外，目前還未有用液相分析的相關(guān)報(bào)道，使分析 人員在方法的選擇上也受到了一定的局限。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于彌補(bǔ)Ni，Ni-二異丙基乙二胺無紫外吸收基團(tuán)，無法采用液相分 析的缺陷，提供一種吸收干擾小、靈敏度高的&-二異丙基乙二胺液相分析方法。
[0005] 為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用技術(shù)方案如下： (1) &，&-二異丙基乙二胺液相分析方法，所述方法包括：（1)配制不同濃度的 &，Nf二異丙基乙二胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別加入過量2,4-二硝基氟苯進(jìn)行衍生化反應(yīng)，反應(yīng)結(jié) 束后對(duì)反應(yīng)液進(jìn)行高效液相色譜分析，以DNB- 二異丙基乙二胺峰面積對(duì)應(yīng)&-二 異丙基乙二胺濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； (2) 將供試品配成溶液，加入過量2,4_二硝基氟苯進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后對(duì)反應(yīng)液進(jìn) 行高效液相色譜分析，根據(jù)DNB-K，&-二異丙基乙二胺的峰面積和步驟（1)中的標(biāo)準(zhǔn)曲線 計(jì)算供試品中的&，Nf二異丙基乙二胺含量。進(jìn)一步地，在測定供試品中&-二異丙基 乙二胺含量之前還進(jìn)行了定量限和檢測限得確定，方法如下：取&-二異丙基乙二胺標(biāo) 準(zhǔn)溶液適量，逐級(jí)稀釋至限度溶液，加入過量2,4-二硝基氟苯進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后對(duì)反 應(yīng)液進(jìn)行液相色譜分析，考察DNB- 二異丙基乙二胺峰的信噪比，確定定量限和檢測 限。
[0006] 進(jìn)一步地，為了驗(yàn)證分析方法的準(zhǔn)確度，還進(jìn)行了回收率的測定，方法如下：取適 量供試品，加入不同濃度的Ni，Nf二異丙基乙二胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，各自加入過量2,4-二硝基氟 苯于進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后對(duì)反應(yīng)液進(jìn)行液相色譜分析，計(jì)算K，Nf二異丙基乙二胺的回 收率。
[0007] 本發(fā)明對(duì)&，Nf二異丙基乙二胺進(jìn)行衍生化，在其氨基上引入二硝基苯基團(tuán)增加 吸收波長，其反應(yīng)原理如下式所示：
進(jìn)一步地，所述高效液相色譜條件為： 色譜柱：C18柱，規(guī)格為4.6X150mm，5.0ym; 檢測波長：360nm; 柱溫：35~45°C; 流速：〇? 8~1. 2ml/min; 進(jìn)樣量：l〇~20y1; 流動(dòng)相：乙腈-0. 05mol/L醋酸鈉溶液，其中乙腈與0. 05mol/L醋酸鈉溶液的比例為 60:40~70:30。
[0008]進(jìn)一步地，所述衍生化反應(yīng)的溫度為45°C~55°C，反應(yīng)時(shí)間為20~40分鐘，pH值為 8~9 〇
[0009] 進(jìn)一步地，所述供試品為阿考替胺、鹽酸阿考替胺或鹽酸阿考替胺片劑。
[0010] 進(jìn)一步地，所述流動(dòng)相中的〇. 〇5mol/L醋酸鈉溶液與乙腈混合之前，先用稀醋酸 調(diào)節(jié)pH至6. 4。
[0011] 進(jìn)一步地，所加入的2,4-二硝基氟苯為1°/『2%的2,4-二硝基氟苯乙腈溶液；衍 生化反應(yīng)具體步驟為：取lml樣品溶液、置5ml棕色量瓶中，加入l~2ml0. 04 ~0. 06mol/L 碳酸鈉溶液和〇. 8~1. 2ml1%~2%的2,4-二硝基氟苯乙腈溶液，于45°C~55°C下反應(yīng)20~40 分鐘，反應(yīng)結(jié)束后，冷卻，用乙腈-水(體積比為50 :50 )定容到刻度，搖勻。
[0012] 本方法的有益效果主要體現(xiàn)在：本發(fā)明方法準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好、靈敏度高，可用于鹽 酸阿考替胺及其片劑生產(chǎn)過程及放置過程中Nl，N1-二異丙基乙二胺的檢測，也可用于其 他樣品中&-二異丙基乙二胺的檢測。
【附圖說明】
[0013] 圖1 :Ni，N「二異丙基乙二胺的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
[0014] 圖2:衍生化后得到的DNB- 二異丙基乙二胺與衍生化試劑的色譜峰。
[0015] 圖3:&，N「二異丙基乙二胺的檢測限HPLC圖。
[0016] 圖4 :Ni，N「二異丙基乙二胺的定量限HPLC圖。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于 此。
[0018] 1、衍生化試劑和稀釋劑的配置： 衍生化試劑：取lml2,4-二硝基氟苯溶于乙腈中配成100ml的溶液，即濃度為1%的 乙腈-水溶液； 稀釋劑：乙腈與水按50:50的體積比混合。
[0019] 2、衍生化反應(yīng)： 取lml樣品溶液、置5ml棕色量瓶中，加入2ml0. 05mol/L碳酸鈉溶液和lml衍生化試 劑（1%的2,4-二硝基氟苯乙腈溶液)，于50°C下反應(yīng)30分鐘，反應(yīng)結(jié)束后，冷卻，用稀釋劑 (體積比50:50的乙腈-水溶液）定容到刻度，搖勻。
[0020] 3、色譜條件： 色譜柱：AgilentSB-C18 (4.6*150mm，5.0ym) 檢測波長：360nm柱溫：40°C 流速：1. 〇ml/min 進(jìn)樣量：10yl 流動(dòng)相：乙腈-0. 05mol/L醋酸鈉溶液(體積比65:35)，其中0. 05mol/L醋酸鈉溶液先 用稀醋酸調(diào)節(jié)pH至6. 4再與已經(jīng)混合。
[0021] 4、本發(fā)明的儀器設(shè)備： 安捷倫1260液相色譜儀及配置的G1314F紫外檢測器以及分析儀器配置的HPLC色譜 工作站。
[0022] 5、本發(fā)明的原材料規(guī)格如下： 乙腈(色譜級(jí)）； 乙酸、乙酸鈉、碳酸鈉、2,4_二硝基氟苯(分析級(jí))。
[0023] 實(shí)施例1外，&-二異丙基乙二胺標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 取&-二異丙基乙二胺約20mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加稀釋劑溶解并稀釋至 刻度，搖勻；精密量取上述溶液lml，置20ml量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度，作為Nl，N1-二 異丙基乙二胺標(biāo)準(zhǔn)貯備液；分別精密量取上述標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液適量，用上述稀釋劑定量稀釋 制成每lml中約含0. 4yg、0. 8yg、4yg、8yg、12yg的線性溶液； 量取上述線性溶液各lml，分別置5ml量瓶中，加0. 05mol/L碳酸鈉溶液2ml，加衍生化 試劑lml，置于50°C水浴中衍生30分鐘，冷卻，再用稀釋劑稀釋至刻度。精密量取衍生化后 的線性溶液各1〇耵，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以DNB-N1，N1-二異丙基乙二胺峰面積 為自變量，以N1，N1-二異丙基乙二胺濃度為應(yīng)變量，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線圖如圖1所示，其線性相 關(guān)系數(shù)r為0.9995,其色譜圖如圖2所示。
[0024] 實(shí)施例2 &-二異丙基乙二胺檢測限和定量限檢測的確定。
[0025] 取&，N「二異丙基乙二胺約20mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加稀釋劑溶解并稀釋 至刻度，搖勻；精密量取上述溶液lml，置20ml量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度，作為&-二 異丙基乙二胺限度貯備液；在量取上述限度貯備液，用稀釋劑逐級(jí)稀釋，得限度溶液，量 取上述限度溶液各lml，分別置5ml量瓶中，加0. 05mol/L碳酸鈉溶液2ml，加衍生化試劑 2, 4-二硝基氟苯乙腈溶液（1%，V/V