使用磁性標(biāo)記進(jìn)行的肌鈣蛋白i 測(cè)定的制作方法
【專利說(shuō)明】使用磁性標(biāo)記進(jìn)行的肌鈣蛋白I測(cè)定
[0001]本申請(qǐng)是2009年12月15日提交的題為“使用磁性標(biāo)記進(jìn)行的肌鈣蛋白I測(cè)定”的中國(guó)專利申請(qǐng)200980151675.3的分案申請(qǐng)。
技術(shù)領(lǐng)域
[0002]本發(fā)明涉及一種用于測(cè)量樣品中的肌鈣蛋白I的方法、設(shè)備和藥筒。本發(fā)明還涉及在診斷心肌梗死過(guò)程對(duì)這種方法、設(shè)備和藥筒的使用。
【背景技術(shù)】
[0003]在診斷心肌梗死中，測(cè)量血液中的肌鈣蛋白I是重要的步驟。
[0004]對(duì)肌鈣蛋白I的最先進(jìn)的生物分析是基于利用發(fā)光檢測(cè)進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)室高靈敏度的非均相免疫測(cè)定。這涉及從化學(xué)反應(yīng)發(fā)射光，或者發(fā)射標(biāo)記的可視化。使用這種免疫測(cè)定得到Pg/mL量級(jí)的免疫測(cè)定靈敏度。一般地，在針對(duì)高處理量測(cè)量而設(shè)計(jì)的大型自動(dòng)檢測(cè)系統(tǒng)上執(zhí)行這些測(cè)定，并且這些測(cè)定并不適合于由非技術(shù)用戶在中央實(shí)驗(yàn)室以外進(jìn)行快速測(cè)試。
[0005]在現(xiàn)有技術(shù)中已知將磁性標(biāo)記用作檢測(cè)標(biāo)記的免疫測(cè)定。這種測(cè)定實(shí)現(xiàn)磁性致動(dòng)并且減少測(cè)定時(shí)間。在這些測(cè)定中，磁性標(biāo)記由于其的大尺寸而被空間位阻，并且不像分子標(biāo)記(例如，放射性碘、酶標(biāo)記等)那樣容易地與具有分子受體的表面結(jié)合。另外，由于標(biāo)記在測(cè)定期間被磁化，因此標(biāo)記之間接觸的持續(xù)時(shí)間增加，這提高了磁性標(biāo)記不可逆地聚集以及丟失定量信息的概率。當(dāng)使用更大的磁性粒子(>200nm)時(shí)，這可能成為嚴(yán)重的問(wèn)題，因?yàn)楦蟮拇判粤Ｗ痈子谛纬刹豢赡娴娜壕邸?br>
【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于提供用于測(cè)量樣品中的肌鈣蛋白I的靈敏且快速的方法。該目的是通過(guò)用于測(cè)量樣品中的肌鈣蛋白I的方法實(shí)現(xiàn)的，該方法至少包括以下步驟:
[0007]_提供樣品
[0008]-使樣品接觸與磁性標(biāo)記耦合的抗肌鈣蛋白I單克隆抗體
[0009]-使樣品接觸與傳感器表面耦合的抗肌鈣蛋白I多克隆抗體，或者接
[0010]觸與傳感器表面耦合的至少兩種不同的抗肌鈣蛋白I抗體
[0011]-檢測(cè)傳感器表面上的磁性標(biāo)記
[0012]其中，步驟b和c能夠以任意次序執(zhí)行。
[0013]下文中“抗肌鈣蛋白I多克隆抗體”意在包括抗肌鈣蛋白I多克隆抗體和至少兩種不同抗肌鈣蛋白I抗體這兩者。
[0014]“以任意次序”包括使樣品同時(shí)接觸抗肌鈣蛋白I單克隆抗體和多克隆抗體。
[0015]優(yōu)選地，步驟b在步驟c之前。該步驟順序改進(jìn)了測(cè)定結(jié)合，因?yàn)榕c磁性標(biāo)記耦合的抗肌鈣蛋白I單克隆抗體相對(duì)于與傳感器表面耦合的抗肌鈣蛋白I多克隆抗體具有更多的自由度。該實(shí)施例使得測(cè)定時(shí)間減少。
[0016]本發(fā)明提供針對(duì)肌鈣蛋白I的快速免疫測(cè)定試驗(yàn)，其允許利用小的樣品體積在5分鐘內(nèi)進(jìn)行對(duì)肌鈣蛋白I的靈敏檢測(cè)。由于附著到其相應(yīng)表面的一抗和二抗的移動(dòng)性降低導(dǎo)致相對(duì)大尺寸的標(biāo)記與大塊傳感器表面的結(jié)合是具有挑戰(zhàn)性的。
[0017]在溶液中工作良好并且由抗體供應(yīng)商推薦的肌鈣蛋白I的抗體不會(huì)在I步磁性標(biāo)記測(cè)定中產(chǎn)生高信號(hào)。在不希望受到該理論的約束的情況下，造成這一點(diǎn)的原因可能是由于對(duì)于在磁性標(biāo)記測(cè)定中使抗體為進(jìn)行結(jié)合而最優(yōu)地取向而言，需要更嚴(yán)格的條件。
[0018]與供應(yīng)商數(shù)據(jù)表針對(duì)肌鈣蛋白I測(cè)定推薦的抗體耦合相比，與磁性標(biāo)記耦合的抗肌鈣蛋白I單克隆抗體和與傳感器表面耦合的抗肌鈣蛋白I多克隆抗體的組合給出改進(jìn)的結(jié)果。
[0019]在優(yōu)選實(shí)施例中，磁性標(biāo)記是包括無(wú)機(jī)材料，或者諸如聚合物基質(zhì)中的氧化鐵細(xì)粒的無(wú)機(jī)材料和有機(jī)材料的組合的粒子。使用磁性標(biāo)記實(shí)現(xiàn)了磁性致動(dòng)，加速測(cè)定的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)。另外，使用磁性標(biāo)記促進(jìn)了通過(guò)磁場(chǎng)優(yōu)選結(jié)合梯度移除未復(fù)合到傳感器表面的與抗肌鈣蛋白I單克隆抗體結(jié)合或未結(jié)合的任何標(biāo)記。該實(shí)施例不再需要額外的沖洗步驟以識(shí)別針對(duì)背景結(jié)合的特定信號(hào)。
[0020]在優(yōu)選實(shí)施例中，所使用的磁性標(biāo)記具有200至100nm的尺寸。該尺寸范圍下的粒子允許最優(yōu)的測(cè)定條件和檢測(cè)。
[0021]在另一優(yōu)選實(shí)施例中，所使用的抗肌鈣蛋白I多克隆抗體是抗肌鈣蛋白I山羊多克隆抗體。使用山羊多克隆抗體得到優(yōu)化的測(cè)定結(jié)果。
[0022]在另一實(shí)施例中，磁性標(biāo)記以光學(xué)方式進(jìn)行檢測(cè)，優(yōu)選通過(guò)受抑全內(nèi)反射(FTIR)進(jìn)行檢測(cè)。在又一實(shí)施例中，磁性標(biāo)記以磁性方式進(jìn)行檢測(cè)。
[0023]另外地或備選地，設(shè)想能夠基于第二磁性標(biāo)記或第二非磁性標(biāo)記的存在而檢測(cè)磁性標(biāo)記。該第二標(biāo)記能夠直接附著于磁性標(biāo)記，或者間接地通過(guò)分析物結(jié)合到該磁性標(biāo)記。非磁性標(biāo)記能夠經(jīng)由無(wú)機(jī)或有機(jī)成份在磁性標(biāo)記外部附著于磁性標(biāo)記，或者能夠并入到磁性標(biāo)記中。在本發(fā)明背景下，合適的第二標(biāo)記為在體外測(cè)定中典型使用的那些標(biāo)記，例如但不限于發(fā)色基團(tuán)、放射性標(biāo)記、場(chǎng)致發(fā)光標(biāo)記、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記、磷光標(biāo)記、熒光標(biāo)記或反射標(biāo)記。
[0024]本發(fā)明的目的還通過(guò)能夠根據(jù)本發(fā)明的方法測(cè)量肌鈣蛋白I的生物傳感器設(shè)備實(shí)現(xiàn)。
[0025]另外，本發(fā)明的目的通過(guò)在測(cè)定設(shè)備中使用的藥筒實(shí)現(xiàn)，該藥筒包括:
[0026]-與磁性標(biāo)記結(jié)合的抗肌鈣蛋白I單克隆抗體
[0027]-在藥筒內(nèi)與傳感器表面結(jié)合的抗肌鈣蛋白I多克隆抗體
[0028]-樣品入口
[0029]優(yōu)選地，藥筒中的磁性標(biāo)記具有200至100nm的尺寸。
[0030]在藥筒的優(yōu)選實(shí)施例中，抗肌鈣蛋白I多克隆抗體是山羊多克隆抗體。
[0031]本發(fā)明將通過(guò)具體實(shí)施例并參考附圖進(jìn)行描述，但本發(fā)明不限于此。不應(yīng)將權(quán)利要求中的附圖標(biāo)記解釋為限制范圍。所描述的附圖僅為示意性的而非限制性的。在附圖中，出于圖解說(shuō)明的目的，某些元件的尺寸被放大，且并非按照比例繪制。在本說(shuō)明書和權(quán)利要求中使用“包括” 一詞處，不排除其他元件或步驟。當(dāng)指代諸如“一”或“一個(gè)”、“該”的單數(shù)名詞而使用的不定冠詞或定冠詞處，除非另有詳細(xì)說(shuō)明，否則其包括多個(gè)該名詞。
[0032]另外，在說(shuō)明書和權(quán)利要求中的“第一”、“第二”、“第三”等術(shù)詞用于區(qū)分相似元件，而并非必須用于描述順序或時(shí)間次序。將理解的是，在適當(dāng)情況下，如此使用的術(shù)語(yǔ)是可互換的，并且這里描述的本發(fā)明的實(shí)施例能夠以這里描述或圖解說(shuō)明以外的其他順序操作。
[0033]提供以下術(shù)語(yǔ)或定義僅為了輔助理解本發(fā)明。不應(yīng)這些定義解釋為具有比本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解的范圍更小的范圍。
【附圖說(shuō)明】
[0034]圖1為根據(jù)本發(fā)明的測(cè)定的示意性表示；
[0035]圖2為肌鈣蛋白I的劑量響應(yīng)曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0036]本發(fā)明公開了一種用于通過(guò)免疫測(cè)定檢測(cè)肌鈣蛋白I，優(yōu)選為哺乳動(dòng)物肌鈣蛋白I，更優(yōu)選為人類肌鈣蛋白I的方法。
[0037]測(cè)定使用兩種不同的抗體，與磁性標(biāo)記耦合的抗肌鈣蛋白I單克隆抗體以及與傳感器表面耦合的抗肌鈣蛋白I多克隆抗體。圖1示出了根據(jù)本發(fā)明的測(cè)定的示意性設(shè)置。在圖1A中，潛在包括肌鈣蛋白I(I)的樣品接觸與磁性標(biāo)記(3)耦合的抗肌鈣蛋白I單克隆抗體(2)。樣品還接觸與傳感器表面(5)耦合的抗肌鈣蛋白I多克隆抗體(4)?？辜♀}蛋白I單克隆和多克隆抗體被選擇為使得感興趣分析物，即在當(dāng)前情況下的肌鈣蛋白I，能夠同時(shí)結(jié)合到抗