一種鐵皮石斛的薄層鑒別方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種鐵皮石斛的薄層鑒別方法，屬于中藥材質(zhì)量控制技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]鐵皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)是一種珍稀名貴的中藥材，其滋陰效果被歷代醫(yī)家所推崇，被尊為“中華九大仙草”之首，具有滋陰清熱、益胃生精的功效，在我國(guó)已經(jīng)有2000多年的藥用歷史?！吨腥A人民共和國(guó)藥典》(2010年版一部)規(guī)定鐵皮石斛為蘭科植物鐵皮石斛Dendrobium officinale Kimura et Migo的干燥莖。由于野生資源極度有限，栽培鐵皮石斛投入成本高，鐵皮石斛及其加工品鐵皮楓斗價(jià)格昂貴，因此市場(chǎng)上出現(xiàn)了多種其他石斛屬藥材混為鐵皮石斛使用。目前最常見(jiàn)的有紫皮石斛(Dendrobiumdevonianum Paxt.)等。這給鐵皮石斛市場(chǎng)帶來(lái)了極大的用藥安全隱患。
[0003]鐵皮石斛的偽品與正品的性狀十分相似，性狀鑒別真?zhèn)坞y度大，需要豐富的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)積累。2010年版《中華人民共和國(guó)藥典》(一部)鐵皮石斛項(xiàng)下記載了以鐵皮石斛對(duì)照藥材為參照的薄層鑒別項(xiàng)，其具體內(nèi)容是:取本品粉末lg，加甲醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?5ml使溶解，用石油醚(60?90°C)洗滌2次，每次20ml，棄去石油醚液，水液用乙酸乙酯洗滌2次，每次20ml，棄去洗液，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液。另取鐵皮石斛對(duì)照藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2?5 μ 1，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，使成條狀，以乙醇-丁酮-乙酰丙酮-水(15:15:5:85)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，烘干，噴以三氯化鋁試液，在105°C烘約3分鐘，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)【圖1】(注:A:對(duì)照藥材1-3:鐵皮石斛)。但是，該薄層鑒別方法缺乏專(zhuān)屬性的指標(biāo)性成分，且樣品制備方法較為復(fù)雜，在應(yīng)用時(shí)具有一定的局限性。
[0004]石斛屬植物種類(lèi)豐富，化學(xué)成分結(jié)構(gòu)類(lèi)型多樣，主要含有聯(lián)芐類(lèi)、菲類(lèi)、黃酮類(lèi)、生物堿類(lèi)、多糖類(lèi)等。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]針對(duì)以上的問(wèn)題，本發(fā)明旨在提供一種專(zhuān)屬性強(qiáng)且操作簡(jiǎn)便的鐵皮石斛及其藥材的薄層鑒別方法。
[0006]本發(fā)明所述的鐵皮石斛及其藥材的薄層鑒別方法是以夏佛塔苷(schaftoside)、佛來(lái)心苷(v1lanthin)、異佛來(lái)心苷(isov1lanthin)、鐵皮石斛對(duì)照藥材為對(duì)照,采用薄層色譜法進(jìn)行定性鑒別和分析。
[0007]本發(fā)明所述的鐵皮石斛及其藥材的薄層鑒別方法由以下步驟組成:以夏佛塔苷、佛來(lái)心苷、異佛來(lái)心苷、鐵皮石斛對(duì)照藥材為對(duì)照，采用薄層色譜法進(jìn)行定性鑒別，包括以下步驟:
[0008]a、供試品溶液和對(duì)照藥材溶液的制備:取本品粉末lg，加甲醇45?55ml，超聲處理25?35分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?5?20ml使溶解，用乙酸乙酯洗滌2次，每次25?35ml，棄去洗液，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20?25ml，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液。另取對(duì)照藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液。
[0009]b、對(duì)照品溶液制備:取夏佛塔苷(Schaftoside)、佛來(lái)心苷(V1lanthin)、異佛來(lái)心苷(Isov1lanthin)對(duì)照品，分別加甲醇制成每Iml含有0.1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。
[0010]C、薄層色譜法鑒別:取上述供試品溶液3-7 μ 1、對(duì)照藥材溶液3-7 μ 1，對(duì)照品溶液Ιμ?，分別點(diǎn)于同一高效硅膠G薄層板(HSGF254)上，使成條狀，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5?4:4?3:0.8?1.2:0.8?1.2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，烘干，噴以三氯化鋁試液，在105°C烘2?3分鐘，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
[0011]其中步驟a與b沒(méi)有先后順序。
[0012]鐵皮石斛及其藥材薄層色譜鑒別研究
[0013]供試品溶液的制備:考察了提取溶劑，如甲醇、90%甲醇、80%甲醇、95%乙醇和無(wú)水乙醇，表明甲醇提取較好?？疾炝颂崛》椒ǎ绯曁幚?15分鐘、30分鐘、45分鐘)、回流(I小時(shí)、2小時(shí)、3小時(shí))，發(fā)現(xiàn)超聲處理30分鐘處理較好。
[0014]考察了甲醇提取后直接點(diǎn)樣、甲醇提取后乙酸乙酯萃取再點(diǎn)樣和石油醚、乙酸乙酯兩步萃取后點(diǎn)樣，表明甲醇提取后直接點(diǎn)樣雖操作簡(jiǎn)便并能達(dá)到鑒別效果，但所含雜質(zhì)較多，對(duì)背景干擾大，且樣品穩(wěn)定性較差。而直接用乙酸乙酯萃取除雜，不僅能達(dá)到良好的分離效果且樣品的穩(wěn)定性較好。本發(fā)明與藥典方法比較，省去了石油醚(60?90°C )洗滌的步驟，簡(jiǎn)化了樣品制備方法。
[0015]對(duì)照藥材:鐵皮石斛對(duì)照藥材購(gòu)于浙江省食品藥品檢驗(yàn)所。
[0016]對(duì)照品:夏佛塔苷購(gòu)于成都曼思特生物科技有限公司，批號(hào)為MMST-13022701。佛來(lái)心苷和異佛來(lái)心苷為我們從鐵皮石斛莖中提取分離得到，結(jié)構(gòu)經(jīng)過(guò)光譜法和色譜法鑒定并與文獻(xiàn)比對(duì)，純度彡98%。
[0017]本領(lǐng)域技術(shù)人員知道，就薄層色譜而言，化學(xué)物質(zhì)、固定相和展開(kāi)劑是相互作用的，不同的化學(xué)成分物質(zhì)群需要發(fā)現(xiàn)合適的固定相和展開(kāi)劑分離鑒定。與本發(fā)明不同的是，2010年版《中華人民共和國(guó)藥典》(一部)鐵皮石斛項(xiàng)使用聚酰胺薄膜作為固定相，展開(kāi)劑是乙醇-丁酮-乙酰丙酮-水(15:15:5:85)，該條件對(duì)鐵皮石斛的分離效果和重復(fù)性較差，與本發(fā)明的固定相和展開(kāi)劑完全不相同。另外，藥典鐵皮石斛含量項(xiàng)檢測(cè)的是多糖和甘露糖，而不是本發(fā)明所涉及鐵皮石斛的黃酮類(lèi)成分，這從另一個(gè)層面表明本發(fā)明首次以黃酮類(lèi)成分為對(duì)照對(duì)鐵皮石斛進(jìn)行薄層定性鑒別具有創(chuàng)造性。為此，本發(fā)明研究了適合鐵皮石斛黃酮類(lèi)成分薄層色譜分離的特定的固定相和展開(kāi)劑?？疾炝瞬煌谋影澹鐕?guó)產(chǎn)預(yù)制板(煙臺(tái)市芝罘黃務(wù)硅膠開(kāi)發(fā)試驗(yàn)廠、煙臺(tái)市化學(xué)工業(yè)研究所)和進(jìn)口預(yù)制板(德國(guó)MN、德國(guó)Merck公司)，均能檢測(cè)到。為達(dá)到較好的重現(xiàn)性、分離度，選用性價(jià)比較好的國(guó)產(chǎn)高效硅膠預(yù)制板HSGF254 (煙臺(tái)市芝罘黃務(wù)硅膠開(kāi)發(fā)試驗(yàn)廠)。
[0018]點(diǎn)樣和展開(kāi):點(diǎn)樣量，對(duì)照品溶液試用了 I μ 1，供試品溶液考察了 1、3、5、7、9、11 μ I。展開(kāi)劑考察了多種不同的溶劑系統(tǒng)，氯仿-甲醇-水-冰醋酸、甲苯-乙酸乙酯-甲酸、乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水、乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水等系統(tǒng)。薄層板在具展開(kāi)劑的展開(kāi)缸中，考察了預(yù)飽和15分鐘、30分鐘和45分鐘。上行展開(kāi)，展距6-7cm。表明樣品點(diǎn)樣量3-7 μ 1，展開(kāi)劑選用乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5-4:4-3:0.8-1.2:0.8-1.2)系統(tǒng)，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(4:3:1:1)系統(tǒng)為最佳。預(yù)飽和15分鐘時(shí)，斑點(diǎn)的分離度、比移值㈨值)均較好。
[0019]顯色:夏佛塔苷、佛來(lái)心苷、異佛來(lái)心苷均為黃酮苷類(lèi)化合物，噴以三氯化鋁試液，以電吹風(fēng)吹或在105°C的烘箱顯色適當(dāng)，在紫外燈光(366nm)下觀察，供試品色譜中，與對(duì)照品及對(duì)照藥材相應(yīng)位置處顯示相同顏色的斑點(diǎn)。
[0020]溫度和濕度影響:考察了不同的溫度條件(4°C、35°C )，相對(duì)濕度條件(32%、47%、58%、65%、72%、88% )，表明溫度和影響不大，相對(duì)濕度條件在32%?72%的環(huán)境較理想。
[0021]采用以上技術(shù)方案，與現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)及參考文獻(xiàn)中鐵皮石斛及其藥材薄層鑒別方法相t匕，本發(fā)明所述的鐵皮石斛及其藥材的薄層鑒別方法不僅準(zhǔn)確性高，而且專(zhuān)屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好、分離度好、操作簡(jiǎn)便、成本低廉、所用試劑毒性低、用量少，提升了現(xiàn)有鐵皮石斛及其藥材的薄層鑒別方法。
【附圖說(shuō)明】
[0022]
[0023]圖1鐵皮石斛薄層色譜圖(依據(jù)中國(guó)藥典2010版一部方法)
[0024]圖2不同展開(kāi)劑考察
[0025]圖3不同薄層板考察
[0026]圖4不同溫度考察
[0027]圖5不同濕度考察
[0028]圖6不同點(diǎn)樣量考察
[0029]圖7不同產(chǎn)地鐵皮石斛薄層色譜圖
[0030]圖8不同產(chǎn)地鐵皮石斛和紫皮石斛薄層色譜圖
[0031]圖9不同基源石斛薄層色譜圖
【具體實(shí)施方式】
[0032]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)、完整地說(shuō)明。
[0033]實(shí)施例1:
[0034]取本品粉末lg，加甲醇50ml,超聲處理30分鐘，濾過(guò),濾液蒸干,殘洛加水15ml使溶解，用乙酸乙酯洗滌2次，每次30ml，棄去洗液，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液。另取對(duì)照藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液。取夏佛塔苷、佛來(lái)心苷、異佛來(lái)心苷對(duì)照品，分別加甲醇制成每Iml含有0.1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。按照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VIB)試驗(yàn)。用全自動(dòng)點(diǎn)樣儀(Automatic TLC Sampler-4)帶狀點(diǎn)樣,分別取供試品溶液5 μ 1、對(duì)照藥材溶液5 μ 1，對(duì)照品溶液I μ I，點(diǎn)于同一國(guó)產(chǎn)高效HSGF254硅膠薄層板上。以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(4:3:1:1)為展開(kāi)劑，上行展開(kāi)至7cm，取出，揮干溶劑。將薄層板均勻噴以1%三氯化鋁試液，放入105°C的烘箱中加熱3分鐘，置于紫外光燈(366nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)，即為鐵皮石斛及其藥材。
[0035]實(shí)施例2:
[0036]取本品粉末lg，加甲醇50ml，超聲處理30分鐘，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液。另取對(duì)照藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液。取夏佛塔苷、佛來(lái)心苷、異佛來(lái)心苷對(duì)照品，分別加甲醇制成每Iml含有0.1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。按照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)。用點(diǎn)樣毛細(xì)管分別取供試品溶液3 μ 1、對(duì)照藥材溶液3 μ I和對(duì)照品溶液I μ 1，點(diǎn)于同一 MN高效HSGF254硅膠薄層板上。以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(4:3:1:1)為展開(kāi)劑，上行展開(kāi)至6cm，取出，揮干溶劑。將薄層板均勻噴以I %三氯化鋁試液，放入105°C的烘箱中加熱3分鐘，置于紫外光燈(366nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)，即為鐵皮石斛。
[0037]實(shí)