一種Rh血型檢測卡的制作方法
【專利說明】—種Rh血型檢測卡
[0001]
技術(shù)領(lǐng)域
[0002]本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及一種Rh血型檢測卡。
[0003]
【背景技術(shù)】
[0004]Rh系統(tǒng)是一個極為復(fù)雜的血型系統(tǒng)，重要性僅次于ABO系統(tǒng)。其中D抗原是Rh血型抗原系統(tǒng)中最重要的抗原，人紅細(xì)胞膜上存在D抗原，即為RhD陽性，不存在D抗原，即為RhD陰性。除了 D抗原之外，C、c、E、e抗原也是Rh系統(tǒng)中的主要抗原，具有較強的臨床意義。另外，由于不規(guī)則抗體絕大多數(shù)屬于Rh血型系統(tǒng)的抗體，在輸入含有相應(yīng)抗原的血液后，能引起嚴(yán)重的免疫性溶血性輸血反應(yīng)，且IgG性質(zhì)的Rh系統(tǒng)的抗體通過胎盤能力強，從而破壞胎兒具有與抗體對應(yīng)抗原的紅細(xì)胞，引發(fā)嚴(yán)重的新生兒溶血病，因此進行準(zhǔn)確的Rh分型對于減少免疫性溶血性輸血反應(yīng)、對新生兒溶血病進行診斷、預(yù)防和治療具有重要的臨床意義。
[0005]微柱凝膠免疫檢測技術(shù)是20世紀(jì)90年代產(chǎn)生的一種免疫檢測技術(shù)，其基本原理是利用分子篩技術(shù)，離心技術(shù)和特異性免疫反應(yīng)技術(shù)原理，把血型血清學(xué)技術(shù)與凝膠分子篩技術(shù)有機結(jié)合起來，可靈敏地檢測出可能存在的微弱血型抗原抗體反應(yīng)，被認(rèn)為是血型血清學(xué)檢驗的里程碑。
[0006]目前國內(nèi)外已有一些廠家生產(chǎn)Rh血型檢測卡，但是存在以下一些不足:一是采用單一型號的葡聚糖凝膠或聚丙烯葡聚糖凝膠，使得靈敏度與特異性無法兼顧；二是采用生理鹽水或抗體緩沖液溶脹凝膠，使得凝膠無法充分完全溶脹，以及破壞反應(yīng)體系的離子強度；三是對添加不同抗體的凝膠，凝膠洗滌緩沖液完全一致，無法有效保護抗體穩(wěn)定性。
[0007]

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明就是要克服以上不足，提供一種靈敏度高、特異型好、穩(wěn)定性強、保質(zhì)期長的Rh血型檢測卡。
[0009]為達(dá)到上述目的，本發(fā)明通過以下技術(shù)方案進行解決:
一種Rh血型檢測卡包括含有六個微柱的檢測卡，所述六個微柱內(nèi)分別裝有等量的抗D凝膠、抗C凝膠、抗c凝膠、抗E凝膠、抗e凝膠和空白凝膠，其通過以下方法制備而成:
(1)葡聚糖凝膠的溶脹:選用至少兩種交聯(lián)葡聚糖凝膠進行混合，然后加入純化水中進行充分懸浮溶脹，再用純化水洗滌去除破碎顆粒，得到大小均勻、呈完整球形的葡聚糖凝膠顆粒；
(2)制備各抗體稀釋液:
抗D稀釋液:以磷酸鹽緩沖液(PBS)為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA 二鉀鹽)10-15g/L、牛血清白蛋白35-40g/L，稀釋液的pH值為6.6-6.8 ；
抗C稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽15-20g/L、牛血清白蛋白 25-28g/L，pH 值為 6.6-6.8;
抗c稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽12-18g/L、牛血清白蛋白 40-45g/L，pH 值為 6.6-6.8;
抗E稀釋液:以磷酸鹽緩沖液為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽15-25g/L、牛血清白蛋白 20-25g/L，pH 值為 6.6-6.8 ；
抗e稀釋液:以磷酸鹽緩沖液為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽10-15g/L、牛血清白蛋白 25-35g/L，pH 值為 6.6-6.8 ；
空白凝膠洗滌緩沖液:以純化水為溶劑，緩沖液中含有氯化鈉1.75-2.07g/L、磷酸氫二鈉0.185-0.219g/L、磷酸二氫鈉0.203-0.24g/L、甘氨酸18_21g/L ;并調(diào)節(jié)pH值為6.6-6.8 ；
(3)制備各抗體工作液:
取抗D單克隆抗體濃縮液與抗D稀釋液進行混合，使得到的抗D單克隆抗體工作液的效價> 64 ；
取抗C單克隆抗體濃縮液與抗C稀釋液混合，使得到的抗C單克隆抗體工作液的效價^ 16 ；
取抗C單克隆抗體濃縮液與抗C稀釋液混合,使得到的抗C單克隆抗體工作液的效價^ 16 ；
取抗E單克隆抗體濃縮液與抗E稀釋液混合，使得到的抗E單克隆抗體工作液的效價^ 16 ；
取抗e單克隆抗體濃縮液與抗e稀釋液混合,使得到的抗e單克隆抗體工作液的效價^ 16 ；
(4)凝膠洗滌:
取等量的葡聚糖凝膠顆粒分別用等量的抗D稀釋液、抗C稀釋液、抗c稀釋液、抗E稀釋液、抗e稀釋液和空白凝膠洗滌緩沖液進行洗滌至少三次，再加入相對應(yīng)的抗D單克隆抗體工作液、抗C單克隆抗體工作液、抗c單克隆抗體工作液、抗E單克隆抗體工作、抗e單克隆抗體工作液和空白凝膠洗滌緩沖液進行混合，得到抗D凝膠、抗C凝膠、抗c凝膠、抗E凝膠、抗e凝膠和空白凝膠；
(5)分裝:
按照每管24-32微升的量，將抗D凝膠、抗C凝膠、抗c凝膠、抗E凝膠、抗e凝膠和空白凝膠依次加到空白檢測卡的六個微柱中，形成Rh血型檢測卡。
[0010]優(yōu)選方案:所述步驟(I)中交聯(lián)葡聚糖凝膠為交聯(lián)葡聚糖凝膠G-25、交聯(lián)葡聚糖凝膠G-50、交聯(lián)葡聚糖凝膠G-75或交聯(lián)葡聚糖凝膠G-100。
[0011]優(yōu)選方案:所述步驟(I)中交聯(lián)葡聚糖凝膠混合物和純化水的質(zhì)量體積比為1:2-1:3。
[0012]優(yōu)選方案:所述步驟(I)中懸浮溶脹的時間為48-72小時。
[0013]優(yōu)選方案:所述步驟(4)中抗D單克隆抗體工作液與洗滌后的葡聚糖凝膠顆粒、抗C單克隆抗體工作液、抗c單克隆抗體工作液、抗E單克隆抗體工作、抗e單克隆抗體工作液和空白凝膠洗滌緩沖液各抗體工作液與洗滌后凝膠的體積比為1:2-1:3。
[0014]本發(fā)明選擇至少兩種交聯(lián)葡聚糖凝膠用純化水中進行溶脹所得的葡聚糖凝膠顆粒，再用抗D稀釋液、抗C稀釋液、抗c稀釋液、抗E稀釋液、抗e稀釋液和空白凝膠洗滌緩沖液分別對其進行洗滌至少三次，再加入相對應(yīng)的抗D單克隆抗體工作液、抗C單克隆抗體工作液、抗c單克隆抗體工作液、抗E單克隆抗體工作、抗e單克隆抗體工作液和空白凝膠洗滌緩沖液進行混合，得到抗D凝膠、抗C凝膠、抗c凝膠、抗E凝膠、抗e凝膠和空白凝膠。再將它們依次裝入檢測卡中的六個微柱中，形成Rh血型檢測。該檢測卡用來檢測人體紅細(xì)胞Rh血型系統(tǒng)抗原，從而減少免疫性溶血性輸血反應(yīng)、對新生兒溶血病進行診斷、預(yù)防和治療具有重要的臨床意義。
[0015]所以本發(fā)明的優(yōu)點有:
1、本發(fā)明采用不同大小、不同篩分范圍的交聯(lián)葡聚糖凝膠進行混合，有效避免了單一交聯(lián)葡聚糖凝膠的特異性與靈敏度不能兼顧的特點，可實現(xiàn)在保證特異性的同時，仍擁有很高的靈敏度；
2、本發(fā)明采用純化水作為交聯(lián)葡聚糖凝膠的溶脹溶液，可以使凝膠顆粒完全充分溶脹；
3、本發(fā)明用各抗體稀釋液洗滌葡聚糖凝膠顆粒，從而不會破壞抗體的保護液成分，能更有效的保證抗體的穩(wěn)定性；并保證了緩沖液體系的純粹性，不受其他離子的影響，有效保證了體系的離子強度。
[0016]
【具體實施方式】
[0017]實施例一:
一種Rh血型檢測卡包括含有六個微柱的檢測卡，所述六個微柱內(nèi)分別裝有抗D凝膠、抗C凝膠、抗c凝膠、抗E凝膠、抗e凝膠和空白凝膠，其通過以下方法制備而成:
(1)葡聚糖凝膠的溶脹:
選用交聯(lián)葡聚糖凝膠G-25、交聯(lián)葡聚糖凝膠G-50和交聯(lián)葡聚糖凝膠G-75按照質(zhì)量比I:2:1進行混合得葡聚糖凝膠混合物，然后按照葡聚糖凝膠混合物和純化水的質(zhì)量體積比為1:3加入純化水，進行懸浮溶脹48小時后；再用純化水對其洗滌三次，去除破碎顆粒，得到大小均勻、呈完整球形的凝葡聚糖膠顆粒；
(2)抗體稀釋液的配制:
抗D稀釋液:以磷酸鹽緩沖液(PBS)為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA 二鉀鹽)10g/L、牛血清白蛋白40g/L，稀釋液的pH值為6.6-6.8 ；
抗C稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽15g/L、牛血清白蛋白28g/L，pH 值為 6.6-6.8 ；
抗c稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽12g/L、牛血清白蛋白40g/L，pH 值為 6.6-6.8 ；
抗E稀釋液:以磷酸鹽緩沖液為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽25g/L、牛血清白蛋白 20g/L，pH 值為 6.6-6.8 ；
抗e稀釋液:以磷酸鹽緩沖液為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽15g/L、牛血清白蛋白 25g/L，pH 值為 6.6-6.8 ；
空白凝膠洗滌緩沖液:以純化水為溶劑，緩沖液中含有氯化鈉1.75g/L、磷酸氫二鈉0.185g/L、磷酸二氫鈉0.203g/L、甘氨酸18g/L ;并調(diào)節(jié)pH值為6.6-6.8 ；
(3)抗體稀釋:
取抗D單克隆抗體濃縮液與抗D稀釋液進行混合，使得到的抗D單克隆抗體工作液的效價> 64 ；
取抗C單克隆抗體濃縮液與抗C稀釋液混合，使得到的抗C單克隆抗體工作液的效價^ 16 ；
取抗C單克隆抗體濃縮液與抗C稀釋液混合,使得到的抗C單克隆抗體工作液的效價^ 16 ；
取抗E單克隆抗體濃縮液與抗E稀釋液混合，使得到的抗E單克隆抗體工作液的效價^ 16 ；
取抗e單克隆抗體濃縮液與抗e稀釋液混合,使得到的抗e單克隆抗體工作液的效價^ 16 ；
(4)凝膠洗滌:
將步驟(I)中溶脹的葡聚糖凝膠顆粒均分為六等份，其中一份用等量的抗D稀釋液洗滌三次，