專利名稱:具有環(huán)形過濾器的離心機(jī)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及從血漿中分離血液成分,例如纖維蛋白單體的離心裝置,所述的方法包括用一種或多種試劑處理血漿,其中將所述的這些試劑釋放到一個(gè)裝有所述血漿的適宜的反應(yīng)室中,且因此采用新型的離心過濾裝置和方法在該室中從所需的產(chǎn)品中除去這些試劑。
背景技術(shù):
EP-DS 592,242敘述了一些用于一種全新的纖維蛋白密封膠的方法及組合物,其中包括使所需要的部位與包含纖維蛋白單體的組合物接觸,并在接觸的同時(shí)將這種單體轉(zhuǎn)化成纖維蛋白聚合物。“纖維蛋白”這一術(shù)語被規(guī)定為纖維蛋白I、纖維蛋白II、和/或命名符為BB纖維蛋白。
從美國專利申請(qǐng)155,984(序列號(hào))得知還有一種分離血液成分,例如纖維蛋白單體的方法。這種分離含有幾種比重不同成分的液體中各種成分的方法,包括將血液集中在裝置第一室中的一些步驟,該室由基本上是軸對(duì)稱的外壁和內(nèi)壁限定的。借助于裝置圍繞該室對(duì)稱軸的旋轉(zhuǎn)使血液經(jīng)受離心作用,以便在血液的成分之間形成同軸界面。然后在該裝置繼續(xù)離心的過程中,優(yōu)選通過減少第一室容積的方法,使血液的至少一種成分例如血漿轉(zhuǎn)移到該裝置的第二室中。第一室具有基本上是軸對(duì)稱的內(nèi)壁,以確保所有的血液都經(jīng)受進(jìn)行分離所必需的離心旋轉(zhuǎn)。這一內(nèi)壁具有適應(yīng)所需旋轉(zhuǎn)速度的半徑。
在第二室中,借助適宜的酶從血漿中分離出含有非交聯(lián)纖維蛋白聚合物的部分,然后將其重新溶解成纖維蛋白單體,并利用減少第二室的容積使其通過過濾器轉(zhuǎn)移到注射器中。
然而已經(jīng)證明,只采用在上述類型的裝置中過濾的方法,分離血液成分,例如纖維蛋白I,不能得到令人滿意的結(jié)果。這主要是由于很難保證能令人滿意地分離第二室中含有纖維蛋白I的部分,因而在該方法的下一個(gè)步驟中,在接著將流體部分從第二室轉(zhuǎn)移到第一室的過程中,血液中相當(dāng)多的纖維蛋白I損失了。
在早期的纖維蛋白單體法中,也用適宜的酶對(duì)血漿中的纖維蛋白原作上述的處理,在第二室的底部以濃稠的凝膠狀物質(zhì)的形態(tài)生產(chǎn)非交聯(lián)纖維蛋白聚合物。為了提供所需的纖維蛋白單體溶液,需要大量的用于再溶解的緩沖溶液以及伴隨再溶解的強(qiáng)烈攪拌。這樣就產(chǎn)生了幾個(gè)缺點(diǎn)。第一,優(yōu)選的纖維蛋白單體法,例如用作EP 592,242中纖維蛋白密封膠,需要纖維蛋白單體的濃溶液,而為了溶解凝膠狀物質(zhì)需要大量再溶解緩沖溶液或溶劑,所形成的稀溶液不能使用。其次,將凝膠狀物質(zhì)溶解成纖維蛋白單體溶液需要強(qiáng)烈攪拌,這會(huì)造成裝置和纖維蛋白本身的損壞。
一項(xiàng)與其同時(shí)提交的題目為“從血液中分離一種成分例如纖維蛋白I的方法和裝置”的共同未決的專利申請(qǐng)公開了一項(xiàng)發(fā)明,該發(fā)明包括一種在離心過程中從圓筒形室里的血漿部分中分離非交聯(lián)的纖維蛋白聚合物的方法,利用這種方法,非交聯(lián)的纖維蛋白聚合物沉積在該室的外壁上,然后從該室除去余留在其中的流體部分,再通過加入溶劑和離心攪拌作用使留在該室中、基本上沉積在壁上的含有非交聯(lián)纖維蛋白聚合物的部分溶解。
由于用酶處理血漿是在連續(xù)的離心過程中進(jìn)行的,所以作用在所產(chǎn)生的非交聯(lián)纖維蛋白聚合物上的離心力能使其沉積成凝膠薄膜,該薄膜基本上貼在該室周圍的壁上。在離心作用停止時(shí),余下的血漿流體沉積在該室的底部,并可利用任何簡便的方法除去。然后通過向該室中加入適宜的再溶解緩沖溶液和使沉積有凝膠層的室中的緩沖溶液經(jīng)受離心攪拌作用,來制備所需要的纖維蛋白單體溶液。這種方法與現(xiàn)行方法相比具有一些優(yōu)點(diǎn)。首先,利用緩沖溶液再溶解非交聯(lián)的纖維蛋白凝膠是極其有效的,其部分原因是由于相同體積的纖維蛋白凝膠膜比用一些現(xiàn)行方法制備的纖維蛋白凝膠狀物質(zhì)的表面積大。因此可用少量的再溶解緩沖溶液來溶解凝膠以得到所需要的纖維蛋白單體濃溶液。其次,對(duì)沉積有凝膠層的室中的緩沖溶液的離心攪拌是比較緩和的方法,對(duì)設(shè)備或纖維蛋白單體產(chǎn)品不會(huì)造成任何損壞。
這項(xiàng)共同未決的發(fā)明還包括一種優(yōu)選在抗凝血?jiǎng)┐嬖谙聦⒀杭尤胙b置的第一環(huán)形室中的方法,在該裝置中,環(huán)形室是由圍繞公共軸同軸延伸的圓筒形外壁和圓筒形內(nèi)壁以及上壁和下壁限定的,而上壁或下壁是由第一室內(nèi)可移動(dòng)的活塞體構(gòu)成的,所述的方法還包括該裝置圍繞公共軸的離心作用,以便將血液基本分離成細(xì)胞部分和血漿部分,然后在活塞體的作用下,將產(chǎn)生的血漿部分轉(zhuǎn)移到由圓筒外壁限定的第二室中,該壁與所述的公共軸同軸延伸,從而在加入適宜的酶時(shí),能使含有非交聯(lián)的纖維蛋白聚合物的部分在第二室中得到分離。這種方法的特征在于,含有纖維蛋白原的血漿部分在離心過程中經(jīng)受酶的作用,以致使所得到的非交聯(lián)的纖維蛋白聚合物沉積在所述第二室的圓筒形外壁上,然后在活塞體的作用下,將集中在第二室底部的流體部分轉(zhuǎn)移到第一室,該方法的特征還在于,通過加入溶劑和離心攪拌作用使留在第二室中基本上沉積在圓筒形壁上的含有非交聯(lián)的纖維蛋白聚合物的部分溶解。如果需要,然后可以除去酶,并把用這種方法生產(chǎn)的纖維蛋白單體溶液轉(zhuǎn)移到任一所需要的接受容器中。
因此,很容易保持收集溶液的無菌條件。正如現(xiàn)有技術(shù)所述,在纖維蛋白單體再溶解之后,可將其轉(zhuǎn)移到接受容器例如注射器中備有。在轉(zhuǎn)移之前,可用任何簡便的方法將酶除去。
上述共同未決的專利申請(qǐng)還公開了一種利用中心旋轉(zhuǎn)軸周圍的離心作用分離成分的裝置,該裝置包括由圍繞旋轉(zhuǎn)軸同心配置的圓筒外壁和圓筒內(nèi)壁以及上壁和下壁限定的第一環(huán)形室,其中下壁是由在所述第一室內(nèi)可移動(dòng)的活塞體構(gòu)成的,所述裝置還包括一個(gè)通過第一通道與第一室連通的第二室,該室是由圍繞旋轉(zhuǎn)軸同心配置的圓筒外壁和所述的活塞體以及下壁限定的,這里所述的第二室在離心過程中配接位于第一室的下方,而此處所述的裝置還包括將血液加入第一室的血液加入裝置和加入能促進(jìn)分離的組合物的組合物加入裝置以及與至少一個(gè)液體接受容器相連的接受裝置,此處的接受裝置通過第二通道與第二室相通。在優(yōu)選的實(shí)施方案中,活塞桿構(gòu)成第一室的內(nèi)壁。
為實(shí)現(xiàn)根據(jù)共同未決的發(fā)明的方法,本發(fā)明的裝置的特征在于第一通道包括在第一室上壁開孔和第二室下壁開孔之間延伸的至少一個(gè)通道。
因此提供一種比較簡單且與活塞位置無關(guān)的裝置,確保能容易快速地將上述各部分從一個(gè)室轉(zhuǎn)移到另一個(gè)室中,特別是在分離出含纖維蛋白-I的部分之后,能保證容易、快速地將流體部分從第二室轉(zhuǎn)移到第一室中。后一種情況,特別是在離心作用停止時(shí),由于流體自動(dòng)地集中在第二室底部,因而通過活塞的移動(dòng),能很容易地將其轉(zhuǎn)移到第一室中。
根據(jù)共同未決的發(fā)明,特別優(yōu)選所述的至少一個(gè)通道在第一和第二室的圓筒外壁的內(nèi)部延伸,因而該裝置特別簡單且容易制造。
另外,第二室下壁上的通道開孔可以設(shè)置在該室的中央,與下壁形成的凹槽連通。因此,上述的流體部分很容易且迅速地直接被導(dǎo)入該通道的入口孔。另一個(gè)方案,每條通道都可由貫穿活塞體的直管構(gòu)成,而其兩端分別固定在第一室上壁和第二室下壁上,與在相應(yīng)室中終止的各段通道相通。
此外,第一室和第二室可以包括一個(gè)以一種特別簡單的方式由一個(gè)外圓筒和一個(gè)密封裝配在其中的內(nèi)圓筒構(gòu)成的公共圓筒外壁,且在外圓筒和內(nèi)圓筒之間限定了一條軸向延伸的通道,這兩個(gè)圓筒的一端可由端壁終止,端壁上有一個(gè)能使與活塞體連接的活塞桿通過的開孔,所述的活塞體構(gòu)成了第一室的下壁,并將所述的第一室與第二室隔開,且圓筒終止端的通道在這兩個(gè)圓筒的端壁之間延伸,直至緊靠或鄰近活塞桿處的開孔。
在采用這種裝置和方法時(shí),預(yù)先將有利于分離和處理血漿中所需成分的一些適宜的試劑加大第二室中。例如,EP592,242敘述了生物素-抗生物素蛋白捕獲系統(tǒng)可以方便地用于從所需要的溶液中除去類凝血酶。在第二室中需要有生物素類凝血酶存在,以便與血漿中的纖維蛋白原反應(yīng)并使其轉(zhuǎn)化成纖維蛋白單體(纖維蛋白單體立即轉(zhuǎn)化成一種纖維蛋白聚合物)。然后為了使用生物素-抗生物素蛋白系統(tǒng)捕獲生物素化的類凝血酶,在第二室里還必須存在被結(jié)合的例如被束縛在瓊脂糖上的抗生物素蛋白。在使用密閉、自動(dòng)化的離心裝置的情況下,需在血液加工之前將這些試劑裝入該裝置。預(yù)先將生物素化的類凝血酶和抗生物素蛋白瓊脂糖加入同一個(gè)室有些困難,因?yàn)榭股锼氐鞍讓?duì)生物素的高親合力(對(duì)酶的捕獲依賴于高親合力)阻止了足夠量的酶首先與所需要的纖維蛋白原反應(yīng)。
與其同時(shí)提交的題目為“具有環(huán)形過濾器的離心機(jī)”的另一共同未決專利申請(qǐng)敘述了一種裝置,該裝置能很容易地將一種或多種試劑放入反應(yīng)室內(nèi),并能按所要求的順序釋放這些試劑。優(yōu)選將試劑例如酶和酶-捕獲組合物用于前述共同未決的專利申請(qǐng)所述的這類裝置中時(shí),這些試劑能按要求被釋放出來。為了達(dá)到上述目的,根據(jù)本發(fā)明提供了一種裝置,該裝置的特征在于在第二室中配置了一個(gè)密封室,且該密封室包括多個(gè)隔室,以便容納促進(jìn)分離的適宜組合物,該裝置的特征還在于該密封室具有封閉所述隔室的封閉裝置,并在活塞的作用下,使封閉裝置依次打開,釋放隔室里的試劑。
這種密封室能夠以簡單容易的方式加進(jìn)分離纖維蛋白I所必需的物質(zhì),優(yōu)選在密封室中事先裝入這些物質(zhì)。此外,所設(shè)置的這些隔室能按不變的預(yù)定比例分配上述物質(zhì)的數(shù)量。如果在使用類凝血酶后能利用抗生物素蛋白很容易地捕獲類凝血酶,就優(yōu)選將類凝血酶放在與生物素發(fā)生化學(xué)反應(yīng)的一個(gè)隔室里,所以將抗生物素蛋白放在與較大的顆粒狀的瓊脂糖發(fā)生化學(xué)反應(yīng)的第二隔室中。生物素對(duì)抗生物素蛋白的高親合力,為隨后容易通過過濾從纖維蛋白I溶液中除去絡(luò)合的生物素化的類凝血酶/抗生物素蛋白瓊脂糖顆粒提供條件。將這兩種物質(zhì)放在它們相應(yīng)的隔室里,還能在需要時(shí)在活塞的作用下很容易地投放這些物質(zhì)??梢砸匀魏畏奖愕男问嚼鐑龈傻姆勰顟B(tài)使用上述的物質(zhì)或組合物,它們分別為生物素-類凝血酶和抗生物素蛋白-瓊脂糖。
根據(jù)共同未決的試劑釋放系統(tǒng)的發(fā)明,特別優(yōu)選密封室包括一個(gè)同軸安裝在第二室內(nèi)部的中樞,它帶有三個(gè)相互有間距的徑向圓盤,它們構(gòu)成這些隔室的隔板,且具有基本相同的外圓周形狀,還特別優(yōu)選封閉裝置由一個(gè)密封圍繞在徑向圓盤周圍的可移動(dòng)套筒形外殼構(gòu)成。
為了驅(qū)動(dòng)可移動(dòng)的套筒形外殼,根據(jù)本發(fā)明,活塞包括一個(gè)與密封室上的套筒形外殼同時(shí)動(dòng)作的、向下的裙板是有利的,以便使所述的套筒形外殼逐步位移,借此,所述的外殼依次打開,以便釋放密封室內(nèi)所述隔室中的試劑。
根據(jù)共同未決的試劑釋放系統(tǒng)的發(fā)明,可使密封室與通向鄰近的第三室的軸向通道連通配置,至少在密封室套筒形外殼開始移動(dòng)之后其外壁與軸向通道的側(cè)壁密封連接,從而在活塞的作用下使套筒形外殼做最后移動(dòng)并脫離了與最低隔板周邊的配接之后,密封室的最低隔板使液體從第二室自由流入第三室。這種類型的密封室也是簡便型裝置的部件,在分離纖維蛋白I的過程中,它有助于該裝置的后續(xù)操作。
另外,為了制成該裝置的整體部件,根據(jù)本發(fā)明密封室的中樞可包括一個(gè)軸向直通通道,并可固定在位于較低的第三室底部中央向上的凸出部分上,在底部的所述直通通道通過一個(gè)通道系統(tǒng)與第三室的外環(huán)形隔室在液體上相通,并可使中樞的上端與活塞體的軸向通道密封連接,以便與可固定到該軸向通道上的液體接受器連接。
為了從所需的產(chǎn)品液中除去一種或多種試劑,在活塞的作用下,將所產(chǎn)生的含纖維蛋白-I的流體部分通過過濾器加入注射器中。因此纖維蛋白I溶液受壓通過過濾器,而為加速分離所混入的酶和其它物質(zhì)則被過濾器截留。然而在與血樣中纖維蛋白I的存在量相比時(shí),所得纖維蛋白I的產(chǎn)率并不完全令人滿意。
發(fā)明概述因此本發(fā)明的目的是提供一種方法,該方法能夠借助于所涉及的這類裝置得到較高的纖維蛋白I產(chǎn)率。
為了達(dá)到上述目的,根據(jù)本發(fā)明提供了一種方法,該方法的特征在于留在第二室里的液體部分在轉(zhuǎn)移到液體接受容器之前被轉(zhuǎn)移到與其它室同軸配置的第三室中,和該方法的特征還在于在離心過程中使所述第三室中現(xiàn)存的液體通過一個(gè)環(huán)形過濾器,以便進(jìn)入與液體接受容器連通的環(huán)形外隔室。因此,在離心力的作用下可使纖維蛋白I溶液通過過濾器,這顯然比借助活塞進(jìn)行過濾更有效。
本發(fā)明還涉及實(shí)現(xiàn)上述方法的裝置。本發(fā)明的裝置包括第一環(huán)形室,該室是由圍繞旋轉(zhuǎn)軸同心配置的圓筒外壁和圓筒內(nèi)部以及上壁和下壁限定的,其中上壁或下壁是由可在第一室內(nèi)移動(dòng)的活塞體構(gòu)成,所述的裝置還包括通過第一通道與所述的第一室相通的第二室,且第二室是由圍繞旋轉(zhuǎn)軸同心配置的圓筒外壁、所述第一室的底壁以及另外一個(gè)下壁限定的,該裝置的第二室在離心過程中配接在位于第一室之下,而且此處所述的裝置還包括將血液加入第一室的血液加入裝置和加入促進(jìn)分離的組合物的組合物加入裝置以及連接至少一個(gè)液體接受容器的接受裝置,所述的接受裝置通過第二通道與第二室相通。
根據(jù)本發(fā)明的這一裝置的特征在于,第二通道通過一個(gè)與其同軸配置的第三室與第二室相通,且第三室包括一個(gè)通向第二室的通道,第二室可從外面打開,這一裝置的特征還在于第三室包括一個(gè)內(nèi)隔室和一個(gè)外環(huán)形隔室,所述的這二個(gè)隔室通過徑向延伸的環(huán)形通道互相連通,在通道中配備有環(huán)形過濾器,以防止含有曾用于促進(jìn)分離現(xiàn)不需要的成分的液體通過。
根據(jù)本發(fā)明,第二室和第三室之間的通道可與這二個(gè)室同軸配置,并由一個(gè)密封室封閉,該密封室已在前述題目為“離心機(jī)試劑釋放系統(tǒng)”的共同未決的專利申請(qǐng)中公開。該密封室包括一個(gè)同軸安裝在第二室中的中樞,該中樞帶有多個(gè)有間距的徑向圓盤,這些圓盤構(gòu)成密封室內(nèi)多個(gè)隔室的隔板,且具有相同的外圓周形狀,這些隔室的外部由一個(gè)密封的、安裝成可移動(dòng)的套筒形外殼封閉,該外殼的外側(cè)與軸向通道的側(cè)壁密封配接,在活塞的作用下,套筒形外殼做軸向移動(dòng),當(dāng)它脫離了與最低隔板周邊的配接時(shí),構(gòu)成密封室最低隔板的圓盤使液體從第二室自由流入第三室。因此,利用密封室得到一條通入上述過濾器的簡便通道,該密封室已經(jīng)用于加入促進(jìn)第二室中纖維蛋白I的分離所必需的物質(zhì)。
優(yōu)選該密封室由活塞體推動(dòng),活塞體包括一個(gè)與密封室的套筒形外殼同軸且向下延伸的裙板,當(dāng)活塞體被壓下時(shí),該裙板與所述的外殼配接,以便借此在適當(dāng)時(shí)刻依次打開密封室內(nèi)相應(yīng)的隔室,并最后打開液體從第二室進(jìn)入第三室的通道。
為了便于將纖維蛋白I溶液轉(zhuǎn)移到液體接受容器例如注射器中,根據(jù)本發(fā)明的密封室中樞可包括一個(gè)軸向直通通道,且固定在在較低的第三室底部中央向上的凸出部分上,所述的直通道通過一個(gè)通道系統(tǒng)與第三室的外環(huán)形隔室在液體上相通,并可使中樞的上端與活塞體內(nèi)的通道密封連接,以便使其與可固定在該通道中的液體接受容器連接。
最后根據(jù)本發(fā)明,可利用一個(gè)套筒將密封室的中樞固定在第三室底部的凸出部分上,該套筒的兩端分別圍繞中樞和凸出部分,并且該套筒可包括一個(gè)向外伸出的環(huán)形壁,從而使所述的環(huán)形過濾器固定在所述壁表面的外周邊和第二室的底壁之間,利用使套筒向外伸出的壁部配置在與第三室底部相隔一定距離的位置上,構(gòu)成外環(huán)形隔室和軸向延伸通道之間的連接,該通道與中樞的直通道連通,且在凸出部分的外側(cè)和相鄰套筒的內(nèi)側(cè)之間延伸。這使該裝置特別簡單。
本發(fā)明的一些方法涉及分離和離析單一血液成分或含有這種成分的溶液的一些改進(jìn)的工藝。然而本方法適合適用于圓筒形離心機(jī)的任一工藝,在這些工藝中是在離心過程中用一種或多種催化劑或試劑處理初始溶液。能從這種方法中獲益的其它血液處理方法包括但不限于分離任一血液成分,例如富血小板血漿,血小板濃縮物,低溫沉淀纖維蛋白原,血漿中的其它蛋白質(zhì)如凝血酶和fibronectin等的離析。優(yōu)選血液來自單一供體,最優(yōu)選血液來自將對(duì)其提供這種血液成分的同一個(gè)人。
盡管下文就生產(chǎn)纖維蛋白單體溶液來敘述本發(fā)明的一些方法,但本領(lǐng)域的技術(shù)人員會(huì)理解,本發(fā)明的范圍不受此限制。
本文所用的術(shù)語“離心攪拌”是指裝置的轉(zhuǎn)動(dòng),在該裝置中加入再溶解緩沖液,以便從室的外壁上將中間產(chǎn)物再溶解下來,例如非交聯(lián)的纖維蛋白聚合物凝膠。這種轉(zhuǎn)動(dòng)或離心攪拌可包括確保凝膠暴露的所有表面都能受到再溶解溶液作用的離心作用,而且優(yōu)選包括后接按同一方向進(jìn)行停止-啟動(dòng)旋轉(zhuǎn)和/或按相反的方向停止-啟動(dòng)旋轉(zhuǎn)的這種離心作用。典型的離心攪拌包括但不限于在2,000-5,000RPM下,在任何所需時(shí)間內(nèi)重復(fù)正向/反向旋轉(zhuǎn),每次旋轉(zhuǎn)5-30s,優(yōu)選旋轉(zhuǎn)5-10s。在本發(fā)明的這些方法中,優(yōu)選在約3,000RPM下重復(fù)正向/反向旋轉(zhuǎn)1-2min,每次正反旋轉(zhuǎn)各5-10s。如上所述起初為了分散溶劑,在重復(fù)正向/反向旋轉(zhuǎn)之前,可旋轉(zhuǎn)稍長一點(diǎn)時(shí)間例如20s或更長。
本文所用的術(shù)語“纖維蛋白”是指纖維蛋白I、纖維蛋白II或命名符為BB纖維蛋白。
本裝置設(shè)有本文公開的環(huán)形離心過濾系統(tǒng),這為從所需要的產(chǎn)品液中回收一種或多種試劑提供有效而準(zhǔn)確的方法。這對(duì)于在需將二種或多種試劑依次加入反應(yīng)室中,且因此需將其除去的血液分離技術(shù)上所用的密閉配套的自動(dòng)化離心機(jī)是特別重要的。在本文所述用于制備例如用于新型纖維蛋白密封膠的含纖維蛋白單體的溶液的一些優(yōu)選的方法和裝置中,按序先向裝有血漿的室中加入生物素化的類凝血酶,接著加入抗生物素蛋白瓊脂糖,是制備這種溶液的一種非常先進(jìn)的方法。附圖簡述現(xiàn)參照附圖來敘述本發(fā)明的裝置和方法的一些優(yōu)選的實(shí)施方案,其中
圖1是根據(jù)本發(fā)明的裝置的優(yōu)選實(shí)施方案的軸向剖面圖。
圖2說明根據(jù)本發(fā)明的裝置的第二個(gè)實(shí)施方案。
本發(fā)明的裝置是單一的密閉可自動(dòng)化的裝置,它能將全血轉(zhuǎn)化成所需的血液成分,例如纖維蛋白密封膠,優(yōu)選轉(zhuǎn)化成自體(autologous)成分。本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案的描述優(yōu)選將本發(fā)明的環(huán)形離心過濾系統(tǒng)與在上述共同未決的專利申請(qǐng)中所涉及的裝置一起使用,因此在下文中與這種裝置同時(shí)敘述環(huán)形離心過濾系統(tǒng)。然而應(yīng)當(dāng)理解,它可以用在任何需要除去一種或多種試劑的反應(yīng)裝置中。
根據(jù)本發(fā)明,圖1的裝置由基本上是旋轉(zhuǎn)對(duì)稱的部件構(gòu)成的,這意味著可用一種本來已知的簡易方法將該裝置放置在離心設(shè)備中,以便圍繞中心軸1離心。在圖1中,該裝置的優(yōu)選實(shí)施方案包括一個(gè)外容器2和一個(gè)內(nèi)容器3,它們彼此完全吻合地裝配在一起,且除了具有軸向延伸的中間通道4的部分以外,它們之間的每一處都是封閉鄰接的。在內(nèi)容器3上加工的溝槽構(gòu)成通道4。2和3這兩個(gè)容器分別包括它們各自的頂部5和6,它們的頂部限定使活塞桿8通過的中心孔7。這兩個(gè)容器分別包括軸向延伸段9和10,這兩個(gè)延伸段圍繞在孔7的周圍,且在離開這兩個(gè)容器內(nèi)部的方向上緊靠著空心活塞桿8延伸。外容器2沿徑向延伸的短凸緣11與空心活塞桿鄰接,短凸緣上有一個(gè)容納密封環(huán)13的凹槽12。
如圖1所示,通道4在內(nèi)外容器之間是連續(xù)的,從內(nèi)容器和外容器的圓筒外壁起沿著頂部5、6和軸向部分9和10,一直通到就在開孔7中密封環(huán)13下面的開孔。內(nèi)容器3與開孔7鄰接的軸向部分10的尺寸,使空心活塞桿8的周圍有一條狹窄的自由通道通到容器2、3的內(nèi)部。
外容器2包括一個(gè)直徑相同的圓筒部分,參見圖1。沿附圖往下看時(shí),該圓筒部分通過一個(gè)形成截頭錐體內(nèi)表面16的短過渡部分15延伸成一個(gè)直徑稍大的圓筒部分14。內(nèi)容器3終止在外容器2的過渡部分15延伸成直徑較大的圓筒部分14的位置。內(nèi)容器3的下端包括截頭錐體形狀的外表面17,它與外容器2內(nèi)側(cè)截頭錐體表面16的形狀相吻合。就在內(nèi)容器3下端的下面分別裝設(shè)一個(gè)外圓盤19和一個(gè)內(nèi)圓盤20,內(nèi)容器3終止于徑向面18。除了在這兩個(gè)圓盤之間由中心孔22至外容器2內(nèi)側(cè)的軸向平面上的通道21之外,它們彼此之間是緊密鄰接的。此處的通道21通過軸向延伸部分23與外容器2和內(nèi)容器3之間的通道4相通。通道21和軸向通道部分23適合由內(nèi)圓盤20對(duì)著外圓盤19一側(cè)上的凹槽形成。19和20這兩個(gè)圓盤被加工成傾斜狀,以使它們基本上構(gòu)成內(nèi)、外截頭圓錐的表面(見圖1),且因此朝著中心孔22向下傾斜。圖1還示出,內(nèi)圓盤20有徑向面24,它與內(nèi)容器3上相近的徑向面18鄰接。內(nèi)圓盤20的徑向面24上有一個(gè)容納密封環(huán)26的凹槽25。
用一個(gè)在下部封閉外容器的蓋27,將19和20這兩個(gè)圓盤保持在與內(nèi)容器3的徑向面18對(duì)接的位置上。蓋27包括一個(gè)適合與外容器2的內(nèi)側(cè)緊密鄰接的圓筒部分28,并用適當(dāng)?shù)姆绞?,例如采用套?8外側(cè)上的周邊凸緣29和外容器2內(nèi)側(cè)周邊上的相應(yīng)凹槽30之間相接的壓緊作用將其固定到外容器2上。利用外圓盤19外邊緣上的周邊凹槽32中的密封環(huán)31確保密封連接。蓋27還包括一個(gè)相當(dāng)薄的壁32,它適合在圖1所示的位置上構(gòu)成該裝置的下底。壁32基本上沿著與外圓盤19和內(nèi)圓盤20平行的方向延伸,即壁32從套筒28的內(nèi)側(cè)與圓盤19和20的鄰近處起向下延伸至一個(gè)基本上與外容器2的下邊沿33在同一水平面上的部位。為了加強(qiáng)這個(gè)較薄的壁32,按一定間隔裝有起加強(qiáng)作用的徑向加強(qiáng)肋34,圖1中只出現(xiàn)一個(gè)所述的加強(qiáng)肋。加強(qiáng)肋34是成形加工的,其一部分在壁32之外,而另一部分在壁32之內(nèi)(見圖1)。后一部分用圖號(hào)35表示,它被制成能與外圓盤19的底側(cè)鄰接的形狀,從而它有助于將圓盤19和20保持在可靠的位置上。
隔板裝置36夾在外圓盤19和蓋27之間,這個(gè)隔板裝置36包括中心管段37。這個(gè)中心管段安裝在一個(gè)沿軸向向內(nèi)突出的短軸38上,該短軸與蓋27的壁32被加工成形為一體。這個(gè)管段37與從該管向外延伸的圓盤壁39加工成形為一體,使圓盤壁39起初朝向蓋27的壁32稍微向下傾斜,然后有一段沿短軸方向延伸,以便再沿著基本上平行于蓋壁32的方向繼續(xù)延伸。圓盤39終止于徑向伸展的短周緣40,短周緣40靠著蓋27上的加強(qiáng)肋35的臺(tái)肩41。環(huán)形過濾單元42夾在圓盤壁39的外周緣40和外圓盤19的底側(cè)之間。這個(gè)環(huán)形的過濾單元42與在相鄰的外圓盤19外側(cè)上基本上呈徑向的加工成形表面43鄰接。采用這種環(huán)形過濾器的一種裝置和一些方法是一項(xiàng)同時(shí)提交的題為“具有環(huán)形過濾器的離心機(jī)”的共同未決的專利申請(qǐng)的主題。
為了確保隔板裝置36的穩(wěn)定性,還在管段37和圓盤壁39之間配置有編號(hào)44所表示的徑向加強(qiáng)肋。
本發(fā)明的試劑釋放系統(tǒng)包括總編號(hào)45所表示的密封室,它固定在隔板裝置36的管段37與蓋27相反的一端上。該密封室適合選擇性地將試劑釋放到第二室75中。這個(gè)密封室包括一根細(xì)長的管段46,該管段與徑向環(huán)47被加工成形為一體且?guī)в袃蓚€(gè)附加的徑向環(huán)48和49。用壓配合的方法將48和49這兩個(gè)徑向環(huán)固定到它們在固定環(huán)47的相應(yīng)側(cè)。利用圓形臺(tái)肩50和51將松動(dòng)環(huán)48和49分別按它們與固定環(huán)47相應(yīng)的間距配置在管段46上。47、48和49三個(gè)圓盤有完全相同的外徑并帶有一個(gè)沿著它們相應(yīng)的邊緣的圓形套筒52,該套筒被安裝成可移動(dòng)式的。
如附圖所示,下圓盤49與隔板裝置36的管段37的上端鄰接,從而確定了密封室45的軸向位置。該位置還可由當(dāng)密封室的可移動(dòng)的套筒52在軸向上位移時(shí),借助其下端(見附圖)與外圓盤19在中心孔22內(nèi)的最內(nèi)邊緣53達(dá)到密封鄰接來確定。在套筒52的這個(gè)位置上,在圍繞該套筒的內(nèi)圓盤20以內(nèi)的空間與通向外圓盤19和內(nèi)圓盤20之間的通道21的入口孔之間仍然相通。可移動(dòng)套筒52應(yīng)當(dāng)有適當(dāng)?shù)妮S向長度,以致當(dāng)所述套筒52向下做軸向移動(dòng)時(shí),在套筒52的上端(見附圖)脫離固定環(huán)47之前,該套筒52與外圓盤20相連接。套筒52的內(nèi)徑還與隔板裝置36的圓盤壁39的軸向延伸部分的外徑相匹配,以致套筒52朝著蓋27繼續(xù)向下移動(dòng)到脫離外圓盤19時(shí)就與隔板裝置36相連不再移動(dòng)。隔板裝置36軸向部分的長度也與套筒52的軸向長度相適應(yīng),以致所述套筒52處在最低位置時(shí),基本上完全被隔板裝置36所容納。
如附圖所示,空心活塞桿8包括在外容器2和內(nèi)容器3內(nèi)的圓形活塞55,所示活塞55通過密封環(huán)56與內(nèi)容器3的內(nèi)側(cè)密封連接。
在空心活塞桿內(nèi)加工成形一個(gè)陸爾聯(lián)軸器(Luer-Coupling)57,用以容納常規(guī)注射器58以及對(duì)注射器58的內(nèi)容物起活塞作用的活塞59。聯(lián)軸器57基本上被加工成形為通過截頭圓錐部分60與活塞55內(nèi)的中心孔連通的管段。該管段57具有一個(gè)在徑向上朝內(nèi)凸出的縮頸62,用以引導(dǎo)注射器58中的流體從軸向路徑離開,且從而繞過在其下方的密封室45內(nèi)的管段46。后一管段46的長度和其它尺寸以活塞55處在其接近蓋27的最低位置時(shí),它能與活塞桿8內(nèi)的管段57密封連接為準(zhǔn)。為了加強(qiáng)上述的密封連接,管段57內(nèi)側(cè)的直徑朝著接近活塞55的一端逐漸減小。
軸向伸出的裙板63與圍繞所述活塞中心孔61的活塞55構(gòu)成一個(gè)整體。該裙板63被加工成形的直徑和長度,以其能通過活塞55的適當(dāng)移動(dòng),推動(dòng)密封室45的可移動(dòng)套筒52做上述移動(dòng)進(jìn)入所述的位置,即與穿過兩個(gè)圓盤19和20的中心孔22的內(nèi)邊緣53連接,隨后與隔板裝置36連接的位置為準(zhǔn)。
一個(gè)有彈性的帶唇環(huán)形密封裝置64按所示固定在容器2、3頂部內(nèi)側(cè)空心活塞的周圍(見圖1)。這個(gè)帶唇密封裝置64適于防止流體從容器2、3內(nèi)部不按要求流入通道4,但當(dāng)通過活塞55施加一個(gè)力時(shí),它可以使流體通過。
如圖1上部所示,在外容器2和內(nèi)容器3的相應(yīng)開孔66上有一個(gè)撓性管65的接頭。這種接頭已為人們所知,因此沒有詳細(xì)示出,但如果需要,該接頭能使與撓性管的連接中斷。另外,用常規(guī)方法裝設(shè)一個(gè)帶有適宜過濾器的排氣孔,因此既沒有表示出,也不做詳細(xì)說明。
有一條通道69從隔板裝置36和蓋27之間的區(qū)域一直向上通過隔板裝置36的管段37的內(nèi)部以及密封室45的管段46的內(nèi)部。當(dāng)后一管段46與活塞桿8內(nèi)部的管段57聯(lián)結(jié)時(shí),這個(gè)通道69就能使流體從所述的區(qū)域轉(zhuǎn)移到注射器58中。在蓋27的短軸38的最下部設(shè)有通道66,該通道是通過將所述的短軸38加工成具有一個(gè)軸向的平面形成的,所述短軸的橫截面基本上是圓形的。因此,在短軸和管段37內(nèi)側(cè)靠近短軸的部分之間形成一個(gè)空隙。就在短軸38的上面有一個(gè)區(qū)域67,在該處,隔板裝置36的內(nèi)徑稍微縮小。用這種方法就能把一個(gè)小過濾器68放在所述區(qū)域的正上方(見圖1),因此在流體進(jìn)入密封室45的管段46之前必先通過所述的過濾器。
所述的裝置包括第一環(huán)形室70,該室在內(nèi)部是由空心活塞8構(gòu)成的圓筒形內(nèi)壁71限定的,而在外部是由外容器2和內(nèi)容器3構(gòu)成的圓筒形外壁27限定的。若在一般使用的位置上(見圖1),在上部,環(huán)形室70是由外容器2和內(nèi)容器3相應(yīng)的底5和6構(gòu)成的上壁73限定的。在下部環(huán)形室70是由活塞55構(gòu)成的下壁74限定的。第二室75被限定在活塞55以下,在外部,該室是由和第一室70相同的圓筒形外壁72限定的。在下部,第二室75是由外圓盤19和內(nèi)圓盤20形成的第二下壁76限定的。密封室45配置在第二室75內(nèi)部的中央。在所述第二下壁76的下面設(shè)有第三室77,該室是由隔板裝置36和環(huán)形過濾單元42限定的。此外,這個(gè)第三室77通過由外圓盤19和內(nèi)圓盤20中心孔22形成的通道與第二室75相通。最后,在隔板裝置36的下面設(shè)有第四室78,該室在下部由蓋27的壁32,以及蓋27的套筒部分28和外圓盤19的底側(cè)限定的。
如上所述,所述的裝置主要適合于分離血液成分,例如從血液中分離纖維蛋白單體,且為此目的,第二室75,且優(yōu)選密封室46的上室80,事先充滿適宜的酶例如類凝血酶(Batroxobin)。正如從EP-PS592,242所了解的,可以使用任一種類凝血酶。這類酶包括凝血酶本身或具有類似活性的任一種其它物質(zhì),例如蛇毒蛋白制劑(Ancrod)、Acutin、Venyyme、Asperase、Botropase、Crotabase、Flavorxobin、Gabonase和優(yōu)選的類凝血酶。類凝血酶可與生物素發(fā)生化學(xué)結(jié)合,生物素是一種合成的物質(zhì),能使人們以一種已知的常規(guī)方法利用抗生物素蛋白-瓊脂糖組合物中的抗生物素蛋白捕獲類凝血酶。因此,在密封室最下面的室81中有抗生物素蛋白-瓊脂糖存在。在將所述的密封室放置在該裝置中之前,將生物素-類凝血酶組合物和抗生物素蛋白-瓊脂糖組合物裝入密封室45內(nèi)相應(yīng)的室80和81中是比較容易的。
最后,配置注射器58,所述的注射器裝有再溶解溶液,例如用乙酸稀釋乙酸鹽配制的pH-4的緩沖溶液,該注射器適合接受纖維蛋白I。
也可以使用現(xiàn)有技術(shù)中已知的其它緩沖劑。用于再溶解的緩沖劑可以是任一種酸性緩沖溶液,優(yōu)選的緩沖溶液pH為1-5。一些適宜的實(shí)例包括乙酸、琥珀酸、葡糖醛酸、磺基丙氨酸、巴豆酸、衣康酸、戊炔二酸(glutonic acid)、甲酸、天冬氨酸、己二酸以及這些酸的鹽類。琥珀酸、天冬氨酸、己二酸和乙酸鹽類例如乙酸鈉是優(yōu)選的。也可采用離液序列高的(chaotropic)試劑在中性pH下進(jìn)行溶解。適宜的試劑包括尿素、溴化鈉、鹽酸胍、KCNS、碘化鉀和溴化鉀。這類酸性緩沖劑或這類離液序列高的試劑的濃度和體積與EP-PS592,242所述的相同。
在血液加入過程中或就在血液加入之后,將活塞桿8向該裝置的內(nèi)部推進(jìn),以致使密封室45的可移動(dòng)套筒52向下移動(dòng),進(jìn)入通過下壁76到第二室77的直通通道上的密封連接處。因此,同時(shí)打開密封室上室80中的生物素-類凝血酶組合物的通路。
當(dāng)該裝置準(zhǔn)備使用時(shí),用常規(guī)方法通過未示出的一根針和撓性管65把血液樣品加入第一室中,還優(yōu)選用常規(guī)方法往血液樣品中混入抗凝血?jiǎng)?。在通過撓性管65和開孔66將血液加入第一室70內(nèi)部的過程中,用常規(guī)方法從該室排出空氣。在加完血液之后,拆下?lián)闲怨?5,且將開孔66封閉。然后將裝有血液的這個(gè)裝置放在離心機(jī)里,離心機(jī)特別有助于壓緊密封各個(gè)部件。離心機(jī)使該裝置圍繞旋轉(zhuǎn)軸1旋轉(zhuǎn)。由于離心作用,血液在第一室70中分離出血漿部分,這部分血漿徑向澄清在血液其余部分的內(nèi)側(cè),余下的這部分血液含有紅血細(xì)胞和白血細(xì)胞。正如EP-PS592,242所述,根據(jù)需要改變離心的速度和時(shí)間,可使血小板存在于任一部分之中。
當(dāng)血漿和血液其余部分之間的界面達(dá)到穩(wěn)定時(shí),即當(dāng)分離完全時(shí),向外拉活塞桿8及活塞55來減少第一室70的容積。因此,一個(gè)可能存在的內(nèi)部空氣層首先通過通道4和21進(jìn)入第二室75,且活塞55的進(jìn)一步移動(dòng)意味著血漿也進(jìn)入第二室75。當(dāng)全部血漿層被壓入第二室75之后,即在血漿部分和血液其余部分之間的界面達(dá)到第一室70的內(nèi)壁71之后,停止活塞55的移動(dòng)。
在第二室75中,血漿部分與類凝血酶發(fā)生接觸,因而從血漿部分釋放出的纖維蛋白單體立即聚合成非交聯(lián)的纖維蛋白聚合物。這一過程是在該裝置連續(xù)離心時(shí)進(jìn)行的,因而纖維蛋白聚合物能有效地與血漿的其余部分分離,所述的纖維蛋白聚合物是由生物素-類凝血酶組合物的反應(yīng)生成的,且沿著圓筒形外壁72沉積成一層粘稠層。在完成這一分離之后,停止離心,因而通過先將活塞55提起,使空氣從第一室70轉(zhuǎn)移到第二室75,然后壓下所述的活塞55,可以很容易地把余下的比較容易流動(dòng)的血漿部分壓回到第一室70中。在含纖維蛋白聚合物的粘稠層達(dá)到通道21的開口之前,這一轉(zhuǎn)移可能進(jìn)行得相當(dāng)容易、相當(dāng)快。為了防止粘稠層過快地到達(dá)通道21的入口,可任選地采取進(jìn)一步的措施,例如在底76上裝設(shè)一個(gè)向上凸出的齒形環(huán)82(點(diǎn)線所示的)。這種離心/排放步驟可根據(jù)需要進(jìn)行兩次或多次,以便從纖維蛋白聚合物中得到盡可能多的血漿流體。
只要從第二室75中擠出其余部分的血漿,就使密封室45的可移動(dòng)套筒52再向下移動(dòng),以打開最下面的室81的通路。在套筒后一次移動(dòng)的同時(shí)或與其聯(lián)動(dòng),利用主軸的外部作用將注射器58的柱塞49完全壓下,這樣就將pH-4的緩沖劑輸送到第二室75中,這一過程可與離心攪拌同時(shí)進(jìn)行。加入pH-4的緩沖溶液,使纖維蛋白聚合物在其中溶解,而在密封室45下室81中存在的抗生物素蛋白-瓊脂糖組合物,使生物素-類凝血酶組合物以常規(guī)方式被抗生物素蛋白結(jié)合?;钊?5的繼續(xù)移動(dòng)使密封室45上的可移動(dòng)套筒52與隔板裝置36連接并脫離下壁76,因而提供了進(jìn)入第三室77的自由通路。因此,第二室75的內(nèi)容物可以自由向下流進(jìn)第三室77中。優(yōu)選在離心攪拌過程中進(jìn)行再溶解,離心攪拌包括離心以及一系列正向/反向攪動(dòng)的停止/啟動(dòng)。
繼續(xù)離心為能通過環(huán)形過濾單元42截留較大顆粒的瓊脂糖和通過生物素-抗生物素蛋白捕獲系統(tǒng)結(jié)合到瓊脂糖上的類凝血酶,在第三室分離纖維蛋白單體溶液創(chuàng)造條件。當(dāng)纖維蛋白單體溶液由于上述的離心作用已經(jīng)進(jìn)入最下面的第四室78時(shí),停止所示的離心,且在密封室45的管段46的最上段同與注射器58連接的管段47相連時(shí),很容易通過重新撤回活塞59將纖維蛋白-I溶液轉(zhuǎn)移到注射器58中。
在繼續(xù)離心過程中,在從第二室75的血漿部分分離出纖維蛋白聚合物以及利用離心作用在第三室77中分離出纖維蛋白單體溶液的情況下,從上述的血樣中分離纖維蛋白I可以達(dá)到相當(dāng)高的產(chǎn)率。
已參照優(yōu)選的實(shí)施方案敘述了本發(fā)明。然而在不超出本發(fā)明范圍的情況下可做許多改進(jìn)。
圖2說明了這類改進(jìn)的例子,例如所述的圖2說明了本發(fā)明的第二個(gè)實(shí)施方案,它與圖1所示的本發(fā)明的實(shí)施方案多少有些相似。圖2的實(shí)施方案包括由活塞92隔開的第一室90和第二室91,活塞92包括在內(nèi)壁限定第一室的空心活塞桿93。在外部,這兩個(gè)室是由基本上是圓筒形的構(gòu)件94的一部分以及這兩個(gè)室90和91的外圓筒壁95限定的。在上部,第一室90是由上壁85限定的,該上壁又是由頂蓋構(gòu)成的,該頂蓋借助一個(gè)擰進(jìn)所述的圓筒形構(gòu)件94內(nèi)的環(huán)96,固定在該構(gòu)件上。上壁85限定用作空心活塞桿93通路的貫穿孔。在下部,第二室91是由下壁96限定的,該下壁是由圓筒形構(gòu)件94內(nèi)的圓形內(nèi)凸緣構(gòu)成的。圓筒形構(gòu)件94在第二室91的一側(cè)上有截頭圓錐面97,該錐面離開活塞92向第二室91的中心傾斜。下壁96限定了通向第三室99的中央直通通道98。第三室99是由隔板裝置100和環(huán)形過濾單元101限定的,該過濾單元插在下壁96和隔板裝置100之間且通到第四環(huán)形室102。第四室102被限定在用螺紋固定在圓筒形構(gòu)件94上的杯形蓋103內(nèi)。所述的蓋的103通過中間肋103使隔板裝置100位于圓筒形構(gòu)件94內(nèi)部的中央,同時(shí)壓住環(huán)形過濾單元101。
密封室105固定在位于隔板裝置100的中央、向上凸出的短軸104上。密封室105包括帶有盤形環(huán)107、108的管狀部分106,這兩個(gè)盤形環(huán)松動(dòng)地連接在管狀部分上,且借助于所配置的可移動(dòng)套筒,限定用于容納分別由字母BB和AA表示的所述酶的兩個(gè)室。利用在管段106上成形加工的臺(tái)肩以及管狀構(gòu)件106的外徑從下向上逐漸減小的形狀,使這些盤形環(huán)按所需要的間距固定在管段106上。
從第一室90的頂部到第二室91的底部設(shè)置有直通通道115和116。這兩條通道分別是利用它們各自的固定管段117和118形成的,它們平行于該裝置的旋轉(zhuǎn)軸延伸,其兩端被固定在上壁95和下壁96內(nèi)的連接孔上。分別由一些適當(dāng)?shù)目缀凸潭ㄔ谄渲械闹麡?gòu)成這些管段和這些室之間的通道連接。管段117和118穿過它們在活塞92上相應(yīng)的開孔延伸。為了防止泄漏,各處全都裝有密封環(huán)。
聯(lián)接器120固定在活塞92內(nèi)側(cè)的中央,用于空心活塞桿93內(nèi)的注射器121與密封室105的管段106上端的聯(lián)接。聯(lián)接器120帶有一個(gè)伸進(jìn)第二室91且對(duì)密封室105的可移動(dòng)套筒110起作用的裙板122。如圖所示,該套筒110的外徑與向下通入第三室49的直通通道98的直徑相匹配,以使套筒110受下壁96引導(dǎo)并保持在任一位置上,因而也能使其保持在最低的位置上,套筒105處在該位置時(shí),不與密封室內(nèi)最下面的盤形環(huán)109連接,且使流體從第二室91向下流入第三室99。通道123從第四室102開始延伸,并從中心向上穿過隔板裝置100上的短軸104,然后再向上穿過密封室105的管狀構(gòu)件106,從而使流體可以從第四室102進(jìn)入注射器121。
圖2的裝置和圖1的裝置的使用方法完全相同,自然它也設(shè)置有聯(lián)接裝置,用以連接加入血液的撓性管。
所述各裝置成形加工部分的零件很容易用注模法由適宜的塑料制造,因此上述這些裝置也是很便宜的且適合一次性使用。
已參照該裝置優(yōu)選的實(shí)施方案敘述了本發(fā)明。然而,根據(jù)本發(fā)明的方法可以很容易地在實(shí)驗(yàn)室中利用一個(gè)可加蓋密閉的杯子在無菌條件下進(jìn)行。將血漿和酶裝入杯中,先混合然后離心,使非交聯(lián)的纖維蛋白聚合物分離到上述的杯底或杯壁上。在移去余下的血漿部分之后,通過加入溶劑以及利用上述的離心攪拌作用將非交聯(lián)的纖維蛋白聚合物重新溶解。實(shí)施例將140ml全血和20ml硝酸鈉抗凝血?jiǎng)?美國藥典)加入上述裝置的第一室70中。將這種混合物在約6,000RPM下離心2min,以分離血漿和血細(xì)胞。當(dāng)繼續(xù)離心進(jìn)行主分離時(shí),將活塞提起,以便將最里邊的相,即血漿轉(zhuǎn)移進(jìn)第二室75。轉(zhuǎn)移的血漿約60ml。將其用30個(gè)單位的生物素化的類凝血酶處理,生物素化的類凝血酶是通過前述的密封室45的上室80加入第二室75的。血漿和類凝血酶先在低速下,例如在約2,000至3,000RPM下混合,然后在9,000RPM下離心9min。
非交聯(lián)的纖維蛋白聚合物凝膠在圓筒壁上沉積成一薄層,然后停止轉(zhuǎn)動(dòng)。隨后把余下的血漿流體(血清)往回轉(zhuǎn)移到第一室70。此后在9,000RPM下再進(jìn)行兩次1min的離心,以盡可能多地分離出凝膠中的血清。在每次1min離心之后,將多出的血清轉(zhuǎn)移到第一室70中。
然后,用注射器58將3.5ml含有24mM氯化鈣的0.2M乙酸鈉(pH4.0)緩沖溶液加入第三室75中。同時(shí),在約3,000RPM下每次旋轉(zhuǎn)5-10s,重復(fù)進(jìn)行正轉(zhuǎn)/反轉(zhuǎn)離心攪拌2min,以便溶解纖維蛋白聚合物凝膠并制備含纖維蛋白單體的溶液。通過密封室45的下室71將抗生物素蛋白瓊脂糖加入所制備的溶液中。此后再在約3,000RRM下,每次旋轉(zhuǎn)5-10s,重復(fù)進(jìn)行正轉(zhuǎn)/反轉(zhuǎn)離心攪拌5min。產(chǎn)生的溶液含纖維蛋白單體以及抗生物素蛋白-瓊脂糖生物素-類凝血酶絡(luò)合物。
將該溶液轉(zhuǎn)移到第三室77中,并在9,000RPM下通過20μm波雷克斯(Porex)環(huán)形過濾器過濾1min。將產(chǎn)生的纖維蛋白單體溶液收集到前述的注射器58中。
將如此制成的纖維蛋白單體溶液(在這種情況下是纖維蛋白I)與0.75M碳酸鈉/碳酸氫鈉緩沖劑按纖維蛋白I緩沖劑為5∶1的比例同時(shí)施加在需要這種密封劑的部位,它就重新聚合而成纖維蛋白密封劑。
權(quán)利要求
1.一種利用離心作用分離血液成分例如纖維蛋白I的方法,所述的方法包括將混有抗凝血?jiǎng)┑难杭尤胙b置的第一環(huán)形室,在該裝置中,該環(huán)形室是由圍繞公共軸同軸延伸的圓筒形外壁和圓筒形內(nèi)壁以及上壁和下壁限定的,其中上壁或下壁是由可在第一室內(nèi)移動(dòng)的活塞體構(gòu)成,所述的方法還包括該裝置圍繞所述公共軸的離心作用,然后在活塞體的作用下將產(chǎn)生的液體部分轉(zhuǎn)移到由圓筒外壁限定的第二室,該壁與所述的公共軸同軸延伸,因而通過連續(xù)離心并加入促進(jìn)分離的適宜組合物,能使存在于第二室中的液體部分進(jìn)一步分離,并將不能利用的部分返回到第一室中,從而任選在加入溶劑之后,使留在第二室中的這一液體部分通過一個(gè)過濾器轉(zhuǎn)移到液體接受容器中,該方法的特征在于,在將留在第二室的這部分液體轉(zhuǎn)移到液體接受容器之前,先將其轉(zhuǎn)移到與其它室同軸配置的第三室中,其特征還在于使現(xiàn)存于所述第三室中的液體在離心過程中通過一個(gè)環(huán)形過濾器,以便進(jìn)入與液體接受容器連通配結(jié)的環(huán)形外隔室中。
2.一種實(shí)施權(quán)利要求1的方法的裝置,該裝置包括第一環(huán)形室,該室是由圍繞旋轉(zhuǎn)軸同心配置的圓筒外壁和圓筒內(nèi)部以及上壁和下壁限定的,其中上壁或下壁是由可在第一室內(nèi)移動(dòng)的活塞體構(gòu)成,所述的裝置還包括通過第一通道與所述的第一室相通的第二室,且第二室是由圍繞旋轉(zhuǎn)軸同心配置的圓筒外壁、所述第一室的下壁以及另外一個(gè)下壁限定的,該裝置的第二室在離心過程中配接位于第一室之下,而且此處所述的裝置還包括將血液加入第一室的血液加入裝置和加入促進(jìn)分離的組合物的組合物加入裝置以及連接至少一個(gè)液體接受容器的接受裝置,所述的接受裝置通過第二通道與第二室相通,該裝置的特征在于,第二通道通過一個(gè)與其同軸配置的第三室與第二室相通,且第三室包括一個(gè)通向第二室的通道,第二室可從外面打開,這一裝置的特征還在于第三室包括一個(gè)內(nèi)隔室和一個(gè)環(huán)形外隔室,所述的這二個(gè)隔室通過徑向延伸的環(huán)形通道互相連通,在通道中配備有環(huán)形過濾器,以防含有曾用于促進(jìn)分離現(xiàn)需除去的成分的液體通過。
3.權(quán)利要求2的裝置,其特征在于,第二室和第三室之間的通道與這二個(gè)室同軸配置,并由一個(gè)密封室封閉,該密封室包括一個(gè)同軸安裝在第二室中的中樞,該中樞帶有多個(gè)彼此有間距的徑向圓盤,這些圓盤構(gòu)成密封室內(nèi)多個(gè)隔室的隔板,且具有相同的外圓周形狀,其特征還在于這些隔室的外部由一個(gè)密封的、安裝成可移動(dòng)的套筒形外殼封閉,該外殼的外側(cè)在任一位置上都與軸向通道的側(cè)壁密封配接,在活塞的作用下,套筒形外殼做軸向移動(dòng),當(dāng)它脫離了與最低隔板周邊的配接時(shí),構(gòu)成密封室最低隔板的圓盤使液體從第二室自由流入第三室。
4.權(quán)利要求3的裝置,其特征在于,活塞體包括一個(gè)與密封室套筒形外殼同軸且向下延伸的裙板,當(dāng)活塞體被壓下時(shí),該裙板與所述的外殼配接,以便借此在適當(dāng)時(shí)刻依次打開密封室內(nèi)相應(yīng)的隔室,并最后打開液體從第二室進(jìn)入第一室的通道。
5.權(quán)利要求3或4的裝置,其特征在于,密封室的中樞包括一個(gè)軸向直通通道,且固定在在較低的第三室底部中央向上的凸出部分上,所述的直通道通過一個(gè)通道系統(tǒng)與第三室的環(huán)形外隔室在液體上相通,該裝置的特征還在于使中樞的上端與活塞體內(nèi)的通道密封配接,以便使其與可固定在該通道中的液體接受容器連接。
6.權(quán)利要求5的裝置,其特征在于,利用一個(gè)套筒將密封室的中樞固定在第三室底部的凸出部分上,該套筒的兩端分別圍繞中樞和凸出部分,其特征還在于該套筒包括一個(gè)向外伸出的環(huán)形壁,從而使所述的環(huán)形過濾器固定在所述壁表面的外周邊和第二室的底壁之間,利用使套筒向外伸出的壁部配置在與第三室底部相隔一定距離的位置上,構(gòu)成外環(huán)形隔室和軸向延伸通道之間的連接,該通道通到在凸出部分的內(nèi)側(cè)和與其相近的套筒內(nèi)側(cè)之間的中樞直通通道。
全文摘要
一種利用圍繞中心軸的離心作用分離血液成分例如纖維蛋白單體的裝置,該裝置包括由圍繞旋轉(zhuǎn)軸同心配置的圓筒外壁(72)和圓筒內(nèi)壁(71)以及上壁(73)和下壁(74)限定的第一環(huán)形室(70),該室的下壁是由可在第一室內(nèi)移動(dòng)的活塞(55)構(gòu)成的。該裝置還包括位于第一室之下且通過第一通道(4)與所述的第一室相通的第二室(75),并且該室由第一室的另一個(gè)圓筒壁(72)、下壁(74)和另一個(gè)下壁(76)所限定。該裝置還包括一個(gè)配置在第一室內(nèi)的密封室(45),該密封室包括多個(gè)隔室,用于容納有促進(jìn)分離作用的相應(yīng)組合物。
文檔編號(hào)G01N33/49GK1173141SQ95197456
公開日1998年2月11日 申請(qǐng)日期1995年12月1日 優(yōu)先權(quán)日1994年12月2日
發(fā)明者N·E·霍爾姆 申請(qǐng)人:布里斯托爾-邁爾斯斯奎布公司