專利名稱:人參皂苷－Rd藥物及其制劑的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是一種人參皂苷-Rd藥物及其制劑的質(zhì)量控制方法，包含了人參皂苷-Rd原料及其制劑的質(zhì)量控制，屬于藥物質(zhì)量控制的技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
人參、三七含有多種成份，包括揮發(fā)油、脂肪酸、糖類、蛋白質(zhì)、生物堿、甾體、黃酮及皂甙等。研究人員在中醫(yī)“活血化瘀”的理論指導(dǎo)下，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)研究，發(fā)現(xiàn)人參、三七的皂甙是它們的有效成分，總皂甙能在不降低心輸出量和心搏指數(shù)情況下，使心肌耗能和耗氧減少；對抗多種動物模型的心律失常；抗心肌缺血/再灌注損傷；抗血小板聚集以及擴(kuò)張血管等作用?？傇磉熬哂谢钛鏊幩哂械乃幚碜饔?。三七總皂甙已被制成注射液(商品名為血塞通，血栓通等)或片劑用來治療與氣血瘀滯相關(guān)的疾病，如視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞、腦缺血、腦卒中、腦血管病后遺癥及偏頭痛等。人參皂甙-Rd是從人參、三七總皂甙中分離提取出來的單體，作用靶點(diǎn)與三七總皂甙相同，即能特異性地阻斷受體操縱Ca2+通道。人參皂甙-Rd同樣具有三七總皂甙那樣的活血化瘀特性，血瘀證相關(guān)的包括腦出血腦梗塞等腦血管疾病的中風(fēng)證具有較好的治療效果。然而，在已有技術(shù)中，中國藥典2005版一部人參、三七項(xiàng)下收載的含量測定方法只是提供了測定人參總皂苷、三七總皂苷的質(zhì)量控制方法，從人參總皂苷、三七總皂苷中分離純化的用于治療瘀血阻絡(luò)所致口眼歪斜、言語不利、半身不遂、舌質(zhì)瘀黯、脈澀等癥、也可用于治療急性腦血管疾病引起腦組織缺血/再灌注損傷、壞死，見以上證候者的單體人參皂苷Rd以及使用該物質(zhì)制備而成的制劑，還沒有質(zhì)量控制的方法，從而使得人參皂苷Rd藥物及其制劑的質(zhì)量控制尤為重要，必須有科學(xué)的質(zhì)量控制方法，才能確保人參皂苷Rd藥物及其制劑的正常生產(chǎn)，保證用藥的安全性，能夠更好的指導(dǎo)生產(chǎn)，使生產(chǎn)工藝控制更加嚴(yán)格、合理。本發(fā)明人進(jìn)行了該方法的研究，提供了人參皂苷-Rd藥物及其制劑的質(zhì)量控制方法。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種人參皂苷Rd藥物及其制劑的質(zhì)量控制方法，這種方法向相關(guān)的生產(chǎn)、檢測機(jī)構(gòu)提供了檢測的指標(biāo)、檢測的手段、技術(shù)方法等等；以便更好的控制該藥物及其制劑的質(zhì)量，保證用藥的安全性，能夠更好的指導(dǎo)生產(chǎn)，使生產(chǎn)工藝控制更加嚴(yán)格合理，使消費(fèi)者能全面認(rèn)識產(chǎn)品質(zhì)量。
本發(fā)明是這樣構(gòu)成的人參皂昔-Rd藥物及其制劑的質(zhì)量控制方法，主要包括性狀、鑒別、檢查、指紋圖譜、含量測定等項(xiàng)目，它是用人參皂苷-Rd對照品作為人參皂苷-Rd藥物及其制劑的質(zhì)量控制的檢測指標(biāo)。具體的說，本發(fā)明是用人參皂苷-Rd作為人參皂苷-Rd藥物及其制劑的鑒別、指紋圖譜、含量測定檢測指標(biāo)。
本發(fā)明所述的人參皂苷-Rd藥物及其制劑的外觀性狀在不外加色素的情況下，人參皂苷-Rd藥物為白色或微黃色粉末；制成的液體制劑為無色至微黃色的澄明液體；制成的固體制劑為白色或淡黃色至棕黃色。
本發(fā)明所述的人參皂苷-Rd藥物及其制劑的鑒別方法采用薄層色譜法，樣品前處理包括直接取樣、以溶媒溶解或提取后濃縮再溶解的方法制成供試品溶液，供試品溶液一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點(diǎn)樣量為0.1～30μl之間的任一體積，以人參皂苷-Rd作為對照品，展開劑可以為氯仿、丙酮、甲酸、水、甲醇、二氯甲烷、醋酸乙酯、冰醋酸、正丁醇中的一種或一種以上按照一定比例配制而成，檢視方法可以是在可見光下、紫外光下直接檢視或噴以顯色劑顯色的方法。
本發(fā)明所述的人參皂苷-Rd藥物及其制劑的檢查包括酸堿度、蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、重金屬、砷鹽、草酸鹽、樹脂、鉀離子、微生物、熱原的檢查等全部項(xiàng)目，具體檢測方法與現(xiàn)行版中國藥典附錄收載的方法相同，鉀離子、重金屬、砷鹽的檢測方法還包括以微波消解法處理樣品，進(jìn)而采用原子吸收分光光度法、火焰光度法、電極法、滴定法、等離子發(fā)射光譜或電感藕合等離子質(zhì)譜法進(jìn)行測定的方法；藥品中的技術(shù)要求為(1)pH值在5.5～8.5之間，(2)重金屬不超過百萬分之十，(3)砷鹽不超過百萬分之二。
本發(fā)明所述的人參皂苷-Rd藥物及其制劑的有關(guān)物質(zhì)的檢查樣品前處理包括直接取樣、以溶媒溶解或提取后濃縮再溶解的方法，制成供試品溶液，取1～10％供試品溶液制成與供試品相同體積的溶液，作為對照品，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點(diǎn)樣量為0.1～30μl之間的任一體積，展開劑可以為氯仿、丙酮、甲酸、水、甲醇、二氯甲烷、醋酸乙酯、冰醋酸、正丁醇中的一種或一種以上按照一定比例配制而成，檢視方法可以是在可見光下、紫外光下直接檢視或噴以顯色劑顯色的方法，供試品溶液產(chǎn)生的斑點(diǎn)與對照品溶液產(chǎn)生的斑點(diǎn)比較，顏色不得更深。
本發(fā)明所述的人參皂苷-Rd藥物及其制劑的指紋圖譜檢查，采用高效液相色譜法，樣品前處理包括直接取樣、以溶媒溶解或提取后濃縮再溶解的方法，制成供試品溶液，使用C8～C18類型填料的色譜柱，以乙睛、水、甲醇、磷酸中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長在200～354nm范圍內(nèi)，注入高效液相色譜儀中，記錄色譜峰，以人參皂苷-Rd對照品作為特征指紋峰，且扣除溶劑峰，以峰面積值歸一化法測得除主峰以外的其它雜質(zhì)峰不得過10.0％。
本發(fā)明所述的人參皂苷-Rd藥物及其制劑的含量測定方法采用高效液相色譜法，樣品前處理包括直接取樣、以溶媒溶解或提取后濃縮再溶解的方法，制成供試品溶液，使用C8～C18類型填料的色譜柱，以乙睛、水、甲醇、磷酸中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，以人參皂苷-Rd作為對照品，檢測波長在200～354nm范圍內(nèi)，注入高效液相色譜儀中，記錄色譜峰，測定，計(jì)算，即得。具體的方法是樣品前處理包括直接取樣、以溶媒溶解提取后濃縮再溶解的方法，制成供試品溶液，使用C18類型填料的色譜柱，以甲醇、水在常規(guī)合適比例條件下為流動相，以人參皂苷-Rd作為對照品，檢測波長在203nm，注入高效液相色譜儀中，記錄色譜峰，測定，計(jì)算，即得。
本發(fā)明中所述的用于溶解或提取人參皂苷-Rd藥物的溶媒包括但不限于水、乙腈、甲醇、乙醇、丙二醇、二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、甲苯、苯、丙酮中的一種或一種以上的混合物。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的質(zhì)量控制方法能更好的控制人參皂苷Rd藥物及其制劑的產(chǎn)品質(zhì)量，保證用藥的安全性，使用本發(fā)明后，能夠保證藥物制成品的質(zhì)量，從生產(chǎn)開始、原料質(zhì)量控制，到每一個(gè)生產(chǎn)過程的工藝步驟均必須嚴(yán)格按照工藝規(guī)程執(zhí)行，否則產(chǎn)品就有可能不滿足質(zhì)量要求；我們在進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)采用本發(fā)明就會要求人參皂苷Rd的含量必須達(dá)到90％以上，否則制成品會出現(xiàn)不合格的情況；這樣更有利于指導(dǎo)生產(chǎn)，使工藝控制更加嚴(yán)格合理，讓消費(fèi)者全面認(rèn)識產(chǎn)品品質(zhì)、放心使用這類藥品。本發(fā)明選取的檢測指標(biāo)是產(chǎn)品的有效活性成分，對控制藥品質(zhì)量是十分必要的，作為含量控制的指標(biāo)很理想。本申請人在研究中發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rd由于紫外檢測末端吸收時(shí)靈敏度低，噪音影響大，且有干擾峰，很難使用，因此，本發(fā)明人經(jīng)過以不同比例的甲醇-水、乙腈-水溶液為流動相進(jìn)行試驗(yàn)，最終在甲醇-水在常規(guī)合適比例條件下為流動相條件下；同時(shí)，根據(jù)人參皂甙Rd紫外吸收光譜，選擇203nm為檢測波長，此條件下人參皂甙Rd與其他成分能達(dá)到基線分離，理論板數(shù)按人參皂甙Rd峰計(jì)算可達(dá)1500～3000，與樣品中雜質(zhì)的分離度能達(dá)到5以上，結(jié)果顯示，在203nm人參皂苷Rd藥物的色譜峰型較好，得到的指紋圖譜能夠很好的檢測產(chǎn)品質(zhì)量。所以本發(fā)明選定了一系列的方法作為控制、檢測產(chǎn)品質(zhì)量的技術(shù)手段，使實(shí)施人參皂苷Rd藥物及其制劑的生產(chǎn)技術(shù)有了保障，得到的制劑更加可靠，達(dá)到了發(fā)明的目的。
為證明利用本發(fā)明提供的質(zhì)量控制方法能更好的控制人參皂苷Rd藥物及其制劑的產(chǎn)品質(zhì)量，得到的藥物具有有效的效果，申請人進(jìn)行了一系列實(shí)驗(yàn)；實(shí)驗(yàn)例1高效液相色譜指紋圖譜的研究1、流動相的選擇研究過程中分別考察了(1)甲醇-水、(2)乙睛-水，結(jié)果顯示流動相以甲醇-水(75∶25)峰形較好，出峰完全且分布均勻，故而最終被選用。
2、檢測波長的確定研究中根據(jù)人參皂甙Rd紫外吸收光譜，203nm處為人參皂苷Rd最大吸收峰，最終選用203nm作為檢測波長。
3、人參皂苷Rd對照品、原料和注射劑高效液相色譜圖譜(見附圖1、2)
結(jié)果顯示，人參皂苷Rd對照品、原料和成品注射劑三者間保留時(shí)間、峰形完全相同，有良好的相關(guān)性，本申請人研究的人參皂苷Rd指紋圖譜能很好的控制產(chǎn)品質(zhì)量。
實(shí)驗(yàn)例2含量測定方法學(xué)研究(一)儀器與試藥高效液相色譜儀島津LC-6A輸液泵、CR-3A數(shù)據(jù)處理機(jī)、SPD-6A紫外可見檢測器。
甲醇色譜純，水重蒸水人參皂甙Rd對照品自制；純度測定1.TLCS法λS＝530nm，λR＝700nm，點(diǎn)樣100μg未檢出雜質(zhì)峰。
2.HPLC法測定條件按照含量測定的方法，進(jìn)樣40μg，峰面積歸一化法測得純度＝99.67％，RSD＝0.18％；進(jìn)樣100μg，測得純度＝98.92％，RSD＝0.11％。
(二)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜柱Nucleosil-ODS，5um，4.6mm×150mm，(或4.6mm×250mm)；流動相甲醇-水(75∶25)；檢測波長根據(jù)人參皂甙Rd紫外吸收光譜，選擇203nm為檢測波長；柱溫室溫；流量0.8ml/min；此條件下人參皂甙Rd與其他成分能達(dá)到基線分離，理論板數(shù)按人參皂甙Rd峰計(jì)算可達(dá)1500～3000，與樣品中雜質(zhì)的分離度能達(dá)到5以上，因此正文規(guī)定理論板數(shù)應(yīng)不低于1500，分離度不低于1.5。
(三)線性關(guān)系的考察精密吸取人參皂甙Rd對照品溶液(C＝0.025mg/ml)0.5、1、2、5、7.5、10ul進(jìn)樣，按上述色譜條件測定峰面積積分值，結(jié)果見表1
表1
以進(jìn)樣量W(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，得回歸方程A＝-29072.2+280833.6W，r＝0.99988，直線范圍1.01～20.25μg。
(四)精密度試驗(yàn)精密吸取對照品溶液適量，連續(xù)進(jìn)樣5次，測得人參皂甙Rd峰面積分值，計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD＜1.5％，結(jié)果見表2。
表2
(五)穩(wěn)定性試驗(yàn)同一對照品溶液按上述條件間隔進(jìn)樣測定，峰面積分值RSD＝2.10％，結(jié)果見表3。
表3
(六)重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取本品10mg，共5份，分別于10ml量瓶中，以甲醇溶解制成供試品溶液，同時(shí)精密稱取對照品10mg，同法制成對照品溶液，各取10ul進(jìn)樣，測定，計(jì)算結(jié)果如表4表4
(七)回收率試驗(yàn)采用加樣回收法。取已測得含量的樣品6份，分別加入人參皂甙Rd對照品溶液適量，按正文所述方法、條件操作，以下式計(jì)算回收率，結(jié)果見表5
表5
(八)樣品測定取本品三批，分別按正文所述方法、條件操作，以外標(biāo)準(zhǔn)法計(jì)算含量，結(jié)果表6表6
具體的實(shí)施方式本發(fā)明的實(shí)施例1人參皂苷-Rd藥物的質(zhì)量控制方法，主要包括性狀、鑒別、檢查、指紋圖譜、含量測定等項(xiàng)目。
1、性狀本品為白色或微黃色粉末；無臭。
2、鑒別取本品適量，加甲醇制成每1mg/1ml的溶液，作為供試品溶液。另取人參皂甙Rd對照品適量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，以正丁醇-醋酸乙酯-水(4∶1∶5)15℃以下放置分層的上層液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，于110℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)。
3、檢查(1)人參皂苷-Rd藥物的檢查包括酸堿度、干燥失重、熾灼殘?jiān)?、蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、重金屬、砷鹽、草酸鹽、樹脂、鉀離子、熱原的檢查等全部項(xiàng)目，具體檢測方法按照2005版藥典附錄收載的方法相同，藥品中的技術(shù)要求為(1)水份不得過4.0，(2)重金屬不超過百萬分之十，(3)砷鹽不超過百萬分之二。
(2)有關(guān)物質(zhì)①稱取本品適量，加甲醇溶解制成每1ml含10mg的溶液，作為供試品溶液；精密吸取0.1ml，加甲醇稀釋成2ml，作為對照溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以正丁醇-氯仿-甲醇-水(4∶2∶1∶2)15℃以下放置分層的下層液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，于110℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，主要雜質(zhì)斑點(diǎn)與對照溶液比較，不得更深。
②按[含量測定]項(xiàng)下操作，吸取有關(guān)物質(zhì)檢查①項(xiàng)下的供試品溶液5ul，注入液相色譜儀，記錄色譜峰，以人參皂苷-Rd對照品作為特征指紋峰，扣除溶劑峰，以峰面積值歸一化法測得除主峰以外的其它雜質(zhì)峰不超過10.0％。
4、含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附VID)試驗(yàn)。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-水(75∶25)為流動相，檢測波長為203nm；理論塔板數(shù)以人參皂甙Rd峰計(jì)算應(yīng)不低于1500，人參皂甙Rd色譜峰與雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合規(guī)定。
供試品溶液的制備精密稱取本品適量，以甲醇溶解，制成每1ml含1mg的溶液，搖勻，用0.45um微孔濾膜濾過，濾液作為供試品溶液。
對照品溶液的制備精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥48小時(shí)的人參皂甙Rd對照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。
測定法分別精密吸取上述兩種溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，計(jì)算，即得。
本發(fā)明的實(shí)施例2人參皂苷-Rd注射劑的質(zhì)量控制方法，主要包括性狀、鑒別、檢查、指紋圖譜、含量測定等項(xiàng)目。
1、性狀本品為無色或微黃色的澄清液體。
2、鑒別取本品1ml，水浴蒸干，殘留物以甲醇10ml溶解，上清液作為供試品溶液。另取人參皂甙Rd對照品適量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液5ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，以正丁醇-醋酸乙酯-水(4∶1∶5)15℃以下放置分層的上層液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，于110℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)。
3、檢查(1)人參皂苷-Rd注射劑的檢查包括酸堿度、蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、重金屬、砷鹽、草酸鹽、樹脂、鉀離子、無菌、熱原的檢查等全部項(xiàng)目，具體檢測方法按照2005版藥典附錄收載的方法相同，鉀離子、重金屬、砷鹽的檢測方法還包括以微波消解法處理樣品，進(jìn)而采用原子吸收分光光度法、火焰光度法、電極法、滴定法、等離子發(fā)射光譜或電感藕合等離子質(zhì)譜法進(jìn)行測定的方法；藥品中的技術(shù)要求為(1)pH值在5.5～8.5之間，(2)重金屬不超過百萬分之十，(3)砷鹽不超過百萬分之二。
(2)有關(guān)物質(zhì)①精密量取本品1ml，水浴蒸干，殘留物精密加入甲醇1ml，使溶解，離心，上清液作為供試品溶液；精密吸取該溶液0.1ml，加甲醇稀釋成2ml，作為對照溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以正丁醇-氯仿-甲醇-水(4∶2∶1∶2)15℃以下放置分層的下層液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，于110℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，主要雜質(zhì)斑點(diǎn)與對照溶液比較，不得更深。
②按[含量測定]項(xiàng)下操作，吸取有關(guān)物質(zhì)檢查①項(xiàng)下的供試品溶液5ul，注入液相色譜儀，記錄色譜峰，以人參皂苷-Rd對照品作為特征指紋峰，扣除溶劑峰，以峰面積值歸一化法測得除主峰以外的其它雜質(zhì)峰不得過10.0％。
4、含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005版一部附錄VID)試驗(yàn)。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-水(75∶25)為流動相，檢測波長為203nm；理論塔板數(shù)以人參皂甙Rd峰計(jì)算，應(yīng)不低于1500，人參皂甙Rd色譜峰與雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合規(guī)定。
供試品溶液的制備精密吸取本品1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45um微孔濾膜濾過，濾液作為供試品的溶液。
對照品溶液的制備精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥48小時(shí)的人參皂甙Rd對照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。
測定法分別精密吸取上述兩種溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，計(jì)算，即得。
本發(fā)明的實(shí)施例3人參皂苷-Rd滴丸的質(zhì)量控制方法，主要包括性狀、鑒別、檢查、指紋圖譜、含量測定等項(xiàng)目。
1、性狀本品為白色或淡黃色至棕黃色的球形或類球形制劑。
2、鑒別取本品1粒，加甲醇溶解，濾過，濾液水浴蒸干，殘留物以甲醇10ml溶解，上清液作為供試品溶液。另取人參皂甙Rd對照品適量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液5ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，以正丁醇-醋酸乙酯-水(4∶1∶5)15℃以下放置分層的上層液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，于110℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)。
3、檢查(1)人參皂苷-Rd滴丸的檢查包括重量差異、溶散時(shí)限、微生物限度的檢查等全部項(xiàng)目，具體檢測方法按照2005版藥典附錄收載的方法相同；藥品中的技術(shù)要求為(1)重量差異為±12％，(2)溶散時(shí)限為≥30分鐘。
(2)有關(guān)物質(zhì)①精密稱取本品50mg，加甲醇溶解，濾過，濾液水浴蒸干，殘留物精密加入甲醇1ml，使溶解，離心，上清液作為供試品溶液；精密吸取該溶液0.1ml，加甲醇稀釋成2ml，作為對照溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以正丁醇-氯仿-甲醇-水(4∶2∶1∶2)15℃以下放置分層的下層液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，于110℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，主要雜質(zhì)斑點(diǎn)與對照溶液比較，不得更深。
②按[含量測定]項(xiàng)下操作，吸取有關(guān)物質(zhì)檢查①項(xiàng)下的供試品溶液5ul，注入液相色譜儀，記錄色譜峰，以人參皂苷-Rd對照品作為特征指紋峰，扣除溶劑峰，以峰面積值歸一化法測得除主峰以外的其它雜質(zhì)峰不得過10.0％。
4、含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005版一部附錄VID)試驗(yàn)。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-水(75∶25)為流動相，檢測波長為203nm；理論塔板數(shù)以人參皂甙Rd峰計(jì)算，應(yīng)不低于1500，人參皂甙Rd色譜峰與雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合規(guī)定。
供試品溶液的制備精密稱取本品50mg(1粒)，置10ml量瓶中，加甲醇適量，加熱使溶解，冷卻至室溫，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45um微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品的溶液。
對照品溶液的制備精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥48小時(shí)的人參皂甙Rd對照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。
測定法分別精密吸取上述兩種溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，計(jì)算，即得。
圖1、圖2是原料及制劑HPLC圖圖1、2中1-空白對照 2-對照品 3-原料 4-制劑
權(quán)利要求
1.一種人參皂苷-Rd藥物及其制劑的質(zhì)量控制方法，主要包括性狀、鑒別、檢查、指紋圖譜、含量測定等項(xiàng)目，其特征在于它是將人參皂苷-Rd對照品作為人參皂苷-Rd藥物及其制劑的質(zhì)量控制的檢測指標(biāo)。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的人參皂苷-Rd藥物及其制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于將人參皂苷-Rd作為人參皂苷-Rd藥物及其制劑的鑒別方法、指紋圖譜、含量測定的檢測指標(biāo)。
3.根據(jù)權(quán)利要求
1或2所述的人參皂苷-Rd藥物及其制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于性狀為人參皂苷-Rd藥物為白色或微黃色粉末；人參皂苷-Rd藥物制劑中的液體制劑為無色至微黃色的澄明液體；固體制劑為白色或淡黃色至棕黃色。
4.根據(jù)權(quán)利要求
1或2所述的人參皂苷-Rd藥物及其制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于人參皂苷-Rd鑒別方法采用薄層色譜法，樣品前處理包括直接取樣、以溶媒溶解或提取后濃縮再溶解的方法制成供試品溶液，供試品溶液一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點(diǎn)樣量為0.1～30μl之間的任一體積，以人參皂苷-Rd作為對照品，展開劑可以為氯仿、丙酮、甲酸、水、甲醇、二氯甲烷、醋酸乙酯、冰醋酸、正丁醇中的一種或一種以上按照一定比例配制而成，檢視方法可以是在可見光下、紫外光下直接檢視或噴以顯色劑顯色的方法。
5.根據(jù)權(quán)利要求
1或2所述的人參皂苷-Rd藥物及其制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于人參皂苷-Rd藥物及其制劑的檢查包括酸堿度、蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、重金屬、砷鹽、草酸鹽、樹脂、鉀離子、熱原、微生物和各種制劑檢查項(xiàng)目的檢查等全部項(xiàng)目，具體檢測方法與現(xiàn)行版中國藥典附錄收載的方法相同，鉀離子、重金屬、砷鹽的檢測方法還包括以微波消解法處理樣品，進(jìn)而采用原子吸收分光光度法、火焰光度法、電極法、滴定法、等離子發(fā)射光譜或電感藕合等離子質(zhì)譜法進(jìn)行測定的方法；人參皂苷Rd藥物及其注射劑中的技術(shù)要求為(1)pH值在5.5～8.5之間，(2)重金屬不超過百萬分之十，(3)砷鹽不超過百萬分之二。
6.根據(jù)權(quán)利要求
1或2所述的人參皂苷-Rd藥物及其制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于藥物人參皂苷-Rd及其制劑有關(guān)物質(zhì)的檢查樣品前處理包括直接取樣、以溶媒溶解或提取后濃縮再溶解的方法，制成供試品溶液，取1～10％供試品溶液制成與供試品相同體積的溶液，作為對照品，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點(diǎn)樣量為0.1～30μl之間的任一體積，展開劑可以為氯仿、丙酮、甲酸、水、甲醇、二氯甲烷、醋酸乙酯、冰醋酸、正丁醇中的一種或一種以上按照一定比例配制而成，檢視方法可以是在可見光下、紫外光下直接檢視或噴以顯色劑顯色的方法，供試品溶液產(chǎn)生的斑點(diǎn)與對照品溶液產(chǎn)生的斑點(diǎn)比較，顏色不得更深。
7.根據(jù)權(quán)利要求
1或2所述的人參皂苷-Rd藥物及其制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于人參皂苷-Rd指紋圖譜檢查，采用高效液相色譜法，樣品前處理包括直接取樣、以溶媒溶解或提取后濃縮再溶解的方法，制成供試品溶液，使用C8～C18類型填料的色譜柱，以乙睛、水、甲醇、磷酸中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長在200～350nm范圍內(nèi)，注入高效液相色譜儀中，記錄色譜峰，以人參皂苷-Rd對照品作為特征指紋峰，且扣除溶劑峰，以峰面積值歸一化法測得除主峰以外的其它雜質(zhì)峰不得過10.0％。
8.根據(jù)權(quán)利要求
1或2所述的人參皂苷-Rd藥物及其制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于人參皂苷-Rd的含量測定方法采用高效液相色譜法，樣品前處理包括直接取樣、以溶媒溶解或提取后濃縮再溶解的方法，制成供試品溶液，使用C8～C18類型填料的色譜柱，以乙睛、水、甲醇、磷酸中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，以人參皂苷-Rd作為對照品，檢測波長在200～350nm范圍內(nèi)，注入高效液相色譜儀中，記錄色譜峰，測定，計(jì)算，即得。
9.根據(jù)權(quán)利要求
8所述的人參皂苷-Rd藥物及其制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于人參皂苷-Rd的含量測定以高效液相色譜法測定，樣品前處理包括直接取樣、以溶媒溶解提取后濃縮再溶解的方法，制成供試品溶液，使用C18類型填料的色譜柱，以甲醇、水在常規(guī)合適比例條件下為流動相，以人參皂苷-Rd作為對照品，檢測波長在203nm，注入高效液相色譜儀中，記錄色譜峰，測定，計(jì)算，即得。
10.根據(jù)權(quán)利要求
4～9所述的人參皂苷-Rd藥物及其制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于溶媒包括但不限于水、乙腈、甲醇、乙醇、丙二醇、二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、甲苯、苯、丙酮中的一種或一種以上的混合物。
專利摘要
本發(fā)明提供了一種人參皂苷－Rd藥物及其制劑的質(zhì)量控制方法，主要包括性狀、鑒別、檢查、指紋圖譜、含量測定等項(xiàng)目，本發(fā)明提供的質(zhì)量控制方法，通過外觀性狀的識別、色譜法鑒別以及酸堿度、蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、重金屬、砷鹽、草酸鹽、樹脂、鉀離子、熱原、微生物的檢查以及指紋圖譜和人參皂苷－Rd含量的測定等；以便更好的控制人參皂苷－Rd藥物及其制劑的質(zhì)量，保證用藥的安全性，能夠更好的指導(dǎo)生產(chǎn)，使生產(chǎn)工藝控制更加嚴(yán)格、合理。
文檔編號G01N30/00GK1996012SQ200610051231
公開日2007年7月11日 申請日期2006年9月26日
發(fā)明者張觀福 申請人:貴州信邦遠(yuǎn)東藥業(yè)有限公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan