本發(fā)明涉及一種elisa待檢樣品的稀釋液、其制備方法及其應(yīng)用，屬于生物檢測技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

自然界中許多病原微生物通過黏膜系統(tǒng)侵染機(jī)體，造成機(jī)體感染。免疫球蛋白a是機(jī)體粘膜表面最有特征的防御因素。它和其它防御因素一起(包括細(xì)胞及體液免疫兩方面)共同作用，可防止粘膜感染。iga在正常人血清中的含量僅次于免疫球蛋白g(igg)，占血清免疫球蛋白含量的10～20％。按其免疫功能分為血清型及分泌型兩種，血清型免疫球蛋白a(iga)存在于血清中，其含量占總免疫球蛋白a的85％左右，血清型免疫球蛋白a雖有免疫球蛋白g和免疫球蛋白m的某些功能，但在血清中并不顯示重要的免疫功能；分泌型免疫球蛋白a(siga)存在于分泌液中，如唾液、淚液、初乳、鼻和支氣管分泌液、胃腸液、尿液、汗液等，分泌型免疫球蛋白a是機(jī)體粘膜局部抗感染免疫的主要抗體，故又稱粘膜局部抗體。

通過檢測機(jī)體分泌液中的siga的含量來評(píng)價(jià)黏膜免疫反應(yīng)，但因igg的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于siga，往往對(duì)檢測結(jié)果形成干擾，導(dǎo)致檢測結(jié)果產(chǎn)生誤差。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的第一個(gè)目的在于提供一種elisa待檢樣品的稀釋液，該稀釋液可降低igg的干擾，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的可以通過采取如下技術(shù)方案達(dá)到：一種elisa待檢樣品的稀釋液，包括以下成分：

進(jìn)一步地，elisa待檢樣品的稀釋液包括以下成分：

進(jìn)一步地，elisa待檢樣品的稀釋液包括以下成分：

本發(fā)明的第二個(gè)目的在于提供一種上述elisa待檢樣品的稀釋液的制備方法。

實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的可以通過采取如下技術(shù)方案達(dá)到：將bsa、nan3、硫酸銨、kcl、k2hpo4、nah2po4、nacl、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶溶解于溶劑中，定容后即得，稀釋液保存于4～8℃。

進(jìn)一步地，定容后，稀釋液中bsa的濃度為5-35g/l、nan3的濃度為0.1-0.5g/l、硫酸銨的濃度為3.5-10.5g/l、kcl的濃度為0.11-0.27g/l、k2hpo4的濃度為0.87-1.75g/l、nah2po4的濃度為0.24-0.72g/l、nacl的濃度為0.55-15g/l、胃蛋白酶的濃度為50-300g/l和木瓜蛋白酶的濃度為80-350g/l。

本發(fā)明的第三個(gè)目的在于提供一種采用上述elisa待檢樣品的稀釋液的應(yīng)用。

實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的可以通過采取如下技術(shù)方案達(dá)到：一種elisa待檢樣品的稀釋液的應(yīng)用，先采用如上所述的稀釋液稀釋elisa待檢樣品，然后再將經(jīng)稀釋的樣品進(jìn)行elisa檢測。

進(jìn)一步地，用稀釋液按稀釋度1:40稀釋待檢樣品后，37℃條件下處理2h，然后進(jìn)行elisa檢測。

進(jìn)一步地，所述待檢樣品為動(dòng)物體液和外分泌液。

進(jìn)一步地，所述待檢樣品為乳汁。

進(jìn)一步地，稀釋前，先將乳汁進(jìn)行預(yù)處理；預(yù)處理步驟包括：收集乳汁，在4℃的條件下離心后，棄掉上層脂肪和下層沉淀，取中間層乳清；以滴加的方式往乳清中加入醋酸，使得蛋白被沉于杯底；再于4℃的條件下離心，取上清液。

本發(fā)明的配方設(shè)計(jì)原理如下：

本發(fā)明配方中，硫酸銨和胃蛋白酶、木瓜蛋白酶協(xié)同使用，可促進(jìn)酪蛋白沉淀，igg降解，硫酸銨濃度不宜過高，過高會(huì)促使所有蛋白全部沉淀，包括免疫球蛋白，過低又不能完全降解血清中的酪蛋白，影響檢測結(jié)果。

相比現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果在于：

1、本發(fā)明的elisa待檢樣品的稀釋液可降低igg的干擾，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性；

2、通過先利用稀釋液稀釋elisa待檢樣品，稀釋步驟簡單快捷，不影響檢測進(jìn)度和效率。

具體實(shí)施方式

下面，結(jié)合具體實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步描述：

一種elisa待檢樣品的稀釋液的制備方法，將bsa、nan3、硫酸銨、kcl、k2hpo4、nah2po4、nacl、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶溶解于溶劑中，定容后即得稀釋液；稀釋液的成分為：

用稀釋液按稀釋度1:40稀釋待檢樣品后，37℃條件下處理2h，然后進(jìn)行elisa檢測。

作為優(yōu)選的實(shí)施方式，該稀釋液可以用于對(duì)動(dòng)物體液和外分泌液作為elisa檢測樣品的稀釋液；體液包括但不限于胃腸液、血液；外分泌液包括但不限于唾液、淚液、乳汁、鼻和支氣管分泌液、尿液、汗液。

實(shí)施例1-3

實(shí)施例1-3提供了一種elisa待檢樣品的稀釋液，該成分如表格1所示：

表格1實(shí)施例1-3的稀釋液成分參數(shù)

稀釋液通過具體實(shí)施方式中的制備方法制備得到。

實(shí)施例4

以乳汁作為elisa待檢樣品，并分別以實(shí)施例1-3的稀釋液稀釋乳汁，具體步驟為：

預(yù)處理：收集乳汁，在4℃的條件下，以11000r/min離心25min，重復(fù)離心步驟一次以上，經(jīng)反復(fù)離心后，棄掉上層脂肪和下層沉淀，取中間層乳清；以滴加的方式往乳清中加入濃度0.05-2m醋酸鈉，結(jié)合攪拌，使得蛋白被沉于杯底；再于4℃的條件下以11000r/min離心15min，取上清液；

稀釋：用稀釋液按稀釋度1:40稀釋上清液后，37℃條件下處理2h，然后進(jìn)行elisa檢測。

對(duì)比例1-3

對(duì)比例1以pbs作為稀釋液、對(duì)比例2使用市售常規(guī)試劑盒稀釋液(成分為pbs、穩(wěn)定劑和0.01％防腐劑，生產(chǎn)單位：bionote，批號(hào)：t4410po001)、對(duì)比例3使用生理鹽水作為稀釋液；以實(shí)施例1-3，和對(duì)比例1-3分別以實(shí)施例4的步驟對(duì)檢測樣品進(jìn)行處理；稀釋后檢測其中igg和iga的含量，結(jié)果如表格2所示：

表格2經(jīng)對(duì)比例1-3、實(shí)施例1-3稀釋后的樣品中igg和iga的含量

采用實(shí)施例1-3進(jìn)行稀釋后的樣品中，igg含量明顯降低。

對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，可根據(jù)以上描述的技術(shù)方案以及構(gòu)思，做出其它各種相應(yīng)的改變以及變形，而所有的這些改變以及變形都應(yīng)該屬于本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍之內(nèi)。