本發(fā)明屬于環(huán)境安全監(jiān)測(cè)領(lǐng)域，具體涉及對(duì)砷離子濃度進(jìn)行比色法檢測(cè)用的核酸序列。

背景技術(shù)：

砷離子是一種重金屬離子，砷對(duì)于動(dòng)植物有強(qiáng)烈的毒害作用，由于砷在土壤、水和農(nóng)作物中的污染量不斷增加，已成為一種常見的環(huán)境毒物，引起全球的廣泛關(guān)注。對(duì)于重金屬的檢測(cè)，當(dāng)前已經(jīng)發(fā)展了多種檢測(cè)手段，如原子吸收光譜法、熒光法、電化學(xué)法、生物傳感器法等方法。目前砷的檢測(cè)方法有化學(xué)法與儀器法，化學(xué)法包括砷斑法、銀鹽法，由于化學(xué)法方法繁瑣、靈敏度不高，不適應(yīng)現(xiàn)代發(fā)展的需要；儀器法雖有較高的準(zhǔn)確性，但其所需儀器昂貴，且需要專業(yè)人員的操作，很難滿足現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)的需要。

使用核酸序列技術(shù)對(duì)砷離子濃度進(jìn)行快速檢測(cè)是一種很好的方法。由于核酸序列具有廣泛的應(yīng)用特性，所以得到廣泛的關(guān)注，但由于適配體的selex篩選方法太過(guò)復(fù)雜，文獻(xiàn)中報(bào)道的高質(zhì)量的核酸序列數(shù)量也是有限的。

尤其在當(dāng)前砷適配體的研究中，適配體種類單一，且該適配體堿基數(shù)目多達(dá)100堿基，核苷酸鏈較長(zhǎng)，合成成本較高。盡管該適配體與砷離子的結(jié)合能力較強(qiáng)，但實(shí)驗(yàn)是使用的試劑和條件比較苛刻，使用成本較高。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明就是為了解決上述的問題的，目的在于提供一種新型的砷適配體核酸序列及檢測(cè)砷離子的應(yīng)用，以克服現(xiàn)有的利用適配體檢測(cè)砷離子使用的試劑和操作條件單一的不足。

一種新型的砷適配體核酸序列，其特征在于核酸序列為acagaacaaccaacgtcgctccgggtacttcttc。

本發(fā)明提供的砷適配體核酸序列，還可以具有這樣的特征，其特征在于核酸序列為5’-acagaacaaccaacgtcgctccgggtacttcttc-3’。

本發(fā)明提供的砷適配體核酸序列，還可以具有這樣的特征，其特征在于：其中，所述核酸序列由人工合成得到。

本發(fā)明還提供具有上述技術(shù)特征的新型的砷適配體核酸序列在檢測(cè)砷離子中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供的新型的砷適配體核酸序列在檢測(cè)砷離子中的應(yīng)用，還可以具有這樣的特征，其特征在于：其中，檢測(cè)砷離子的方法為比色法，溶劑為水。

本發(fā)明提供的新型的砷適配體核酸序列在檢測(cè)砷離子中的應(yīng)用，還可以具有這樣的特征，其特征在于：其中，所述比色法采用的光為可見光。

本發(fā)明提供的新型的砷適配體核酸序列在檢測(cè)砷離子中的應(yīng)用，還可以具有這樣的特征，其特征在于：其中，所述可見光的波長(zhǎng)為650nm或520nm。

本發(fā)明提供的新型的砷適配體核酸序列在檢測(cè)砷離子中的應(yīng)用，還可以具有這樣的特征，其特征在于：其中，所述砷離子為水溶液中的正三價(jià)砷離子，其濃度為0.01-1.00mmol/l。

發(fā)明作用與效果

根據(jù)本發(fā)明所提供的新型的砷適配體核酸序列，由于使用的核酸序列比較短，合成簡(jiǎn)單，成本低，而且輔助試劑：納米金、氯化鈉也是比較容易獲得的，另外檢測(cè)砷離子時(shí)使用的方法是比色法，通過(guò)成本較低的分光光度計(jì)就可以測(cè)量，儀器成本和試劑成本都比ars-3適配體檢測(cè)體系低，更適合于快速檢測(cè)。

附圖說(shuō)明

圖1為所述核酸適配體檢測(cè)體系檢測(cè)不同濃度砷離子反應(yīng)所得到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果照片；

圖2為所述核酸適配體檢測(cè)體系檢測(cè)不同濃度砷離子反應(yīng)所得到的可見光吸收光譜；

圖3為砷離子濃度-吸光度比值的標(biāo)準(zhǔn)曲線；以及

圖4為所述核酸適配體對(duì)三價(jià)砷離子的選擇性實(shí)驗(yàn)結(jié)果，cu²⁺,cd²⁺和as³⁺的濃度均為0.1mmol/l。

具體實(shí)施方式

為了使本發(fā)明實(shí)現(xiàn)的技術(shù)手段、創(chuàng)作特征、達(dá)成目的與功效易于明白了解，以下實(shí)施例結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的新型的砷適配體核酸序列的具體應(yīng)用實(shí)例作具體闡述。

實(shí)施例

本實(shí)施例所用的的核酸序列是使用已知的經(jīng)典方法亞磷酰胺三酯法進(jìn)行化學(xué)合成的。其序列如下所示：

acagaacaaccaacgtcgctccgggtacttcttc

1、納米金的制備

利用檸檬酸鈉還原法合成納米金，取50ml1mmol/l的四氯金酸溶液倒入雙頸瓶中，放入油浴鍋中加熱，經(jīng)400r/min磁力攪拌，當(dāng)觀察到冷凝管中的冷凝水開始回流時(shí)，快速添加5ml的檸檬酸鈉，此時(shí)溶液顏色迅速發(fā)生變化，由淡黃色到無(wú)色，再到棕黑色，最后變?yōu)榫萍t色。持續(xù)加熱回流5min，撤去熱源，但繼續(xù)攪拌，使反應(yīng)體系自然冷卻至室溫，得到納米金aunps。

2、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液的制備

稱取不同質(zhì)量的氯化鈉用雙蒸水配成不同濃度的氯化鈉溶液(0、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9mol/l)；生物合成的標(biāo)準(zhǔn)100μmol/ldna核酸序列用雙蒸水稀釋成各種不同濃度適配體溶液(0、0.1、0.3、0.5、1μmol/l)；稱取不同質(zhì)量的亞砷酸鈉用雙蒸水配成所需濃度的亞砷酸鈉溶液(0、0.01、0.05、0.1、0.5、1mmol/l)。

3、鹽濃度的優(yōu)化步驟

50μlaunps加入100μl雙蒸水，室溫放置5min，加入10μl不同濃度氯化鈉(0、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9mol/l)，使得溶液總體積為160μl，混勻放置5min，觀察顏色變化穩(wěn)定的氯化鈉濃度，最終得到最適鹽濃度為0.7mol/l。

4、核苷酸溶液濃度的優(yōu)化步驟

50μlaunps加入50μl不同濃度的核酸適配體溶液，室溫放置5min，再加入50μl雙蒸水，10μl0.7m的氯化鈉溶液，使得溶液總體積為160μl，混勻后室溫放置5min。觀察溶液的顏色變化并得到最適的核苷酸溶液濃度為0.5μmol/l。

5、砷離子的檢測(cè)步驟

50μlaunps加入50μl最適濃度的核苷酸溶液，室溫放置5min，在其中加入50μl不同濃度(0.01、0.05、0.1、0.5、1mmol/l)的亞砷酸鈉溶液，放置5min，最后加入10μl0.7mol/l的氯化鈉溶液，使得溶液總體積為160μl，混勻后室溫放置5min，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行拍照，見圖1；并使用紫外可見光分光光度計(jì)測(cè)量其可見光吸收光譜，如圖2。計(jì)算650nm、520nm兩個(gè)波長(zhǎng)的透光度的比值a650/a520，得到砷離子濃度-吸光度比值標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖3所示。

然后，將50μlaunps加入50μl最適濃度核苷酸溶液，室溫放置5min，在其中加入50μl未知濃度的亞砷酸鈉溶液(在0.1-0.6mmol/l范圍內(nèi))，放置5min，最后加入10μl0.7m的氯化鈉溶液，使得溶液總體積為160μl，混勻后室溫放置5min，使用紫外可見光分光光度計(jì)測(cè)量特定兩個(gè)波長(zhǎng)的透光度的比值，本實(shí)施例中吸光度比值測(cè)定的波長(zhǎng)為650nm、520nm，吸光度比值為a650/a520。

根據(jù)未知濃度的亞砷酸鈉的a650/a520值在砷離子濃度-吸光度比值標(biāo)準(zhǔn)曲線中對(duì)應(yīng)得到樣品中砷的濃度值。

6、特異性分析

將0.1mmol/l的銅離子、鎘離子和砷離子，分別加入上述核酸適配體檢測(cè)體系，重復(fù)上述檢測(cè)步驟，得到檢測(cè)結(jié)果如圖4所示。結(jié)果顯示，在同等濃度條件下，本檢測(cè)體系僅對(duì)砷離子有明顯顏色變化；說(shuō)明本實(shí)施例所提供的新型砷適配體對(duì)三價(jià)砷離子有良好的特異性檢測(cè)能力。

實(shí)施例的作用和有益效果

根據(jù)本實(shí)施例所提供的新型的砷適配體核酸序列，由于使用的核酸序列比較短，合成簡(jiǎn)單，成本低，而且輔助試劑：納米金、氯化鈉也是比較容易獲得的，另外檢測(cè)砷離子時(shí)使用的方法是比色法，通過(guò)成本較低的分光光度計(jì)就可以測(cè)量，儀器成本和試劑成本都比現(xiàn)有的ars-3適配體檢測(cè)體系低，更適合于快速檢測(cè)。

本實(shí)施例中，砷離子為水溶液中的正三價(jià)砷離子(亞砷酸鈉)，其濃度為為0.01-1.00mmol/l。