本發(fā)明涉及免疫分析
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體地說，是一種檢測(cè)前列腺特異性抗原psa的試劑盒及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：前列腺特異性抗原psa(prostate)是一種含有237個(gè)氨基酸的單肽鏈糖蛋白，分子量約34kda，屬于具有組織特異性的具有糜蛋白酶樣作用的絲氨酸蛋白酶族。psa主要由前列腺的線上皮細(xì)胞產(chǎn)生，在精液中的濃度很高。psa的主要生理作用是分解精液中的膠狀蛋白，有稀釋精液，增加精子運(yùn)動(dòng)能力的作用。最初分泌到前列腺管的psa是一種無活性的酶原(propsa)，酶原在氨基裂解掉7個(gè)氨基酸后具有絲氨酸蛋白酶活性。少量psa可進(jìn)入血循環(huán)，進(jìn)入血循環(huán)的大部分psa迅速與蛋白酶抑制素結(jié)合而失活，主要與α-1抗糜蛋白酶(act)和α-2巨球蛋白結(jié)合(mg)，也有少部分被蛋白水解酶滅活后以游離狀態(tài)存在。游離的psa以及和act結(jié)合的psa(psa-act)通過現(xiàn)有免疫學(xué)方法可以檢測(cè)到。同時(shí)檢測(cè)游離psa和psa-act復(fù)合物即為目前所說的總psa檢測(cè)。與α-2巨球蛋白結(jié)合(mg)的psa由于蛋白的包裹、遮蔽作用使psa特異性表位消失，因此用現(xiàn)有免疫學(xué)方法無法檢測(cè)。血清總psa含量和前列腺疾病密切相關(guān)，良性前列腺增生和惡性的前列腺癌都會(huì)引起總psa升高，游離psa則較少受前列腺癌生長(zhǎng)的影響。psa具有組織特異性，但并無腫瘤特異性，前列腺炎、良性前列腺增生和前列腺癌均可導(dǎo)致psa升高。前列腺癌已超過皮膚癌成為北美男性最常見的癌癥，因癌致死病例數(shù)排第二位。psa在大多數(shù)有臨床癥狀的前列腺癌中都會(huì)升高，因此監(jiān)測(cè)psa含量對(duì)于評(píng)估腫瘤治療效果有重要意義。目前psa的檢測(cè)全部采用免疫學(xué)方法，膠體金試紙條法及化學(xué)發(fā)光法，免疫學(xué)方法靈敏度不高，膠體金試紙條靈敏度不高且需要借助人眼識(shí)別，化學(xué)發(fā)光法成本較高。進(jìn)口單抗由于靈敏度高、精密度高、準(zhǔn)確性好、使用靈活方便等，在市場(chǎng)上占據(jù)領(lǐng)先地位。中國專利201210291449.9公開了一種前列腺特異性抗原檢測(cè)試劑盒，包括抗-fitc抗體包被的固相載體、fitc標(biāo)記的anti-psa抗體、酶標(biāo)記的anti-fpsa抗體、上述酶所作用的化學(xué)發(fā)光底物、以及陰性和陽性對(duì)照液；制備上述試劑盒的方法包括以下步驟：1)以抗-fitc抗體包被的固相載體；2)用fitc標(biāo)記anti-psa抗體，獲得fitc標(biāo)記的anti-psa抗體；3)用酶標(biāo)記anti-fpsa抗體，獲得酶標(biāo)記的anti-fpsa抗體；4)分裝和組裝。中國專利201110235581.3公開了游離前列腺特異性抗原定量測(cè)定試劑盒，包含fpsa磁分離試劑，酶反應(yīng)物，反應(yīng)增強(qiáng)劑，稀釋液，fpsa標(biāo)準(zhǔn)品、fpsa質(zhì)控品，清洗液濃縮液以及底物溶液。然而現(xiàn)有技術(shù)中，關(guān)于本發(fā)明檢測(cè)前列腺特異性抗原psa的試劑盒，目前還未見報(bào)道。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種前列腺特異性抗原定量檢測(cè)試劑盒。本發(fā)明的另一個(gè)目的是，提供如上所述試劑盒的用途。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：一種前列腺特異性抗原定量檢測(cè)試劑盒，包括如下檢測(cè)試劑：(1)psa試劑1號(hào)成分：(2)psa試劑2號(hào)成分：進(jìn)一步，所述試劑盒還包括psa質(zhì)控品，所述psa質(zhì)控品為含psa抗原和小牛血清的磷酸鹽緩沖液，所述psa抗原提取自人精液。進(jìn)一步，所述試劑盒還包括psa校準(zhǔn)品，所述psa校準(zhǔn)品為含psa抗原和小牛血清的磷酸鹽緩沖液，所述psa抗原提取自人精液。進(jìn)一步，所述psa膠體金的標(biāo)記方法如下：(1)用0.1mol/lk2co3或0.1mol/lhcl調(diào)節(jié)金溶膠至ph6.8；(2)于100ml金溶膠中加入滴度為10000，體積為2ml的psa抗體溶液，攪拌2～3分鐘；(3)加入5ml1％peg20000溶液；(4)于10000g離心30分鐘，小心吸去上清液；(5)將沉淀懸浮于20ml含0.2～0.5mg/mlpeg20000的緩沖液中，離心沉淀后，再用同一緩沖液恢復(fù)，濃度以a1cm/540nm＝1.5，以0.5mg/ml疊氮鈉防腐，置4℃保存；(6)包被后的金溶膠也可濃縮后于sephadexg-200柱進(jìn)行凝膠層析分離純化，以含0.1％bsa的緩沖溶液洗脫。進(jìn)一步，所述金溶膠的制備方法如下：(1)膠體金的燒制應(yīng)在24小時(shí)內(nèi)完成；(2)用量筒稱取所需量的水，將其倒入燒杯中，在燒杯上液面處用記號(hào)筆劃線，將水煮至沸騰；(3)將1％的氯金酸溶液按照3:100的比例迅速加入到2的液體中；(4)將1％檸檬酸鈉溶液按4.5:100加入到沸騰的3的液體中，混合均勻，保持沸騰5分鐘至液體呈穩(wěn)定的酒紅色；(5)停止加熱，冷卻至室溫；(6)用水補(bǔ)足至劃線處，將膠體金倒入廣口瓶中，用封口膜密封，得到金溶膠。進(jìn)一步，所述試劑盒的最低檢測(cè)限低于0.1ng/ml，重復(fù)性小于15％，批間差小于15％。進(jìn)一步，將(80±16)ng/ml的樣本倍比稀釋為5種濃度，將每一濃度的樣本重復(fù)檢測(cè)2次，計(jì)算平均值，將結(jié)果平均值和稀釋比例用最小二乘法進(jìn)行直線擬合，線性相關(guān)系數(shù)大于等于0.999。進(jìn)一步，所述試劑盒測(cè)量結(jié)果的測(cè)量偏差在±10％范圍內(nèi)。進(jìn)一步，所述試劑盒與癌胚抗原(cea)和甲胎蛋白(afp)交叉反應(yīng)均小于1‰。為實(shí)現(xiàn)上述第二個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：如上任一所述試劑盒的用途，用于：(1)在前列腺特異性抗原定量檢測(cè)中的應(yīng)用；(2)在制備人前列腺特異性抗原定量檢測(cè)產(chǎn)品中的應(yīng)用；(3)檢測(cè)人前列腺特異性抗原的定量檢測(cè)方法：將目標(biāo)濃度為0、0.5、5、15、50和100ng/ml的前列腺特異性抗原校準(zhǔn)品加入全自動(dòng)生化分析儀，以水為零點(diǎn)，建立工作曲線。操作步驟：計(jì)算方法：計(jì)算校準(zhǔn)液吸光度差值(a2-a1)，并建立校準(zhǔn)液吸光度－濃度工作曲線。計(jì)算樣本的吸光度差值，在工作曲線上讀取對(duì)應(yīng)濃度值。質(zhì)控程序：測(cè)量psa質(zhì)控品，測(cè)試結(jié)果在質(zhì)控范圍內(nèi)方可進(jìn)行標(biāo)本檢測(cè)。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于：1、本發(fā)明采用勻相溶膠顆粒免疫測(cè)定法(膠體金溶液法)將抗體標(biāo)記到膠體金溶液中，通過全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)病人血樣，相比其它方法靈敏度更高，穩(wěn)定性更強(qiáng)，成本極低，完全可以超越國內(nèi)外同等試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)。2、本發(fā)明的試劑盒采用抗原抗體結(jié)合原理，通過膠體金顆粒與抗體結(jié)合將檢測(cè)結(jié)果等比放大，應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行定量檢測(cè)。在檢測(cè)范圍內(nèi)，沉淀強(qiáng)度與樣本中psa濃度成正比，因此通過內(nèi)插法就可以從擬合曲線上讀取待測(cè)樣本的psa濃度。3、本發(fā)明的試劑盒在效期內(nèi)性能穩(wěn)定，最低檢測(cè)限、重復(fù)性、線性、準(zhǔn)確性、批間差、分析特異性符合要求。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施方式，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明記載的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定的范圍。實(shí)施例一、本發(fā)明試劑盒組分前列腺特異性抗原(psa)定量檢測(cè)試劑盒(膠體金法)由以下四種組分構(gòu)成，各組分生產(chǎn)工藝概括如下：(1)psa試劑1號(hào)(psa-r1)成分：(2)psa試劑2號(hào)(psa-r2)成分：抗psa抗體提取自psa雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清液或感染的小鼠腹水。(3)psa質(zhì)控品(psa-qc)：內(nèi)容物為含一定濃度psa抗原和小牛血清的磷酸鹽緩沖液(濃度0.02mol/l，ph＝7.4)，psa抗原提取自人精液。質(zhì)控的標(biāo)稱濃度為4ng/ml和30ng/ml，每批的濃度范圍稍有不同。(4)psa校準(zhǔn)品(psa-std)：含一定濃度psa抗原和小牛血清的磷酸鹽緩沖液(濃度0.02mol/l，ph＝7.4)配制而成，psa抗原提取自人精液。目標(biāo)濃度分別為0、0.5、5、15、50和100ng/ml。本試劑盒校準(zhǔn)品濃度可溯源至thestanfordreferencestandard/who96/670(90％psa-act+10％freepsa)。用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。二、具體使用方法如下：【適用儀器】本試劑盒已在日立7060、olympus400、西門子dimensionxpand全自動(dòng)生化分析儀上驗(yàn)證合格?！緳z驗(yàn)方法】校準(zhǔn)程序：可選擇單點(diǎn)或多點(diǎn)定標(biāo)方式建立工作曲線。單點(diǎn)定標(biāo)：液體校準(zhǔn)液，直接使用。多點(diǎn)定標(biāo)：(對(duì)于自動(dòng)生化儀，定標(biāo)方式選擇nonlinear或log-logit4p法)，將目標(biāo)濃度為0、0.5、5、15、50和100ng/ml的前列腺特異性抗原校準(zhǔn)品加入全自動(dòng)生化分析儀，以水為零點(diǎn)，建立工作曲線。操作步驟：計(jì)算方法：計(jì)算校準(zhǔn)液吸光度差值(a2-a1)，并建立校準(zhǔn)液吸光度－濃度工作曲線。計(jì)算樣本的吸光度差值，在工作曲線上讀取對(duì)應(yīng)濃度值。質(zhì)控程序：測(cè)量psa質(zhì)控品，測(cè)試結(jié)果在質(zhì)控范圍內(nèi)方可進(jìn)行標(biāo)本檢測(cè)。【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】結(jié)果如超過線性范圍，請(qǐng)用生理鹽水將標(biāo)本按1:1稀釋，測(cè)定結(jié)果乘2。試劑儲(chǔ)存：各組分均應(yīng)避免陽光直射。磁分離試劑應(yīng)保持直立，防止磁微粒長(zhǎng)時(shí)間干燥而失活。磁分離試劑、試劑2號(hào)如出現(xiàn)凍結(jié)不可繼續(xù)使用。試劑使用后應(yīng)及時(shí)恢復(fù)到2-8℃，避免長(zhǎng)時(shí)間室溫放置。試劑有效期：未開封試劑盒及各組分于2-8℃保存，有效期為12個(gè)月?！緲颖疽蟆恳韵聵颖窘?jīng)驗(yàn)證符合本試劑盒要求：·血清：取5.0ml靜脈血至玻璃試管中，不加抗凝劑，在室溫中靜置，然后通過離心(3000rpm×5min)分離血清部分。標(biāo)本貯存和處理·血清標(biāo)本于室溫(22℃)條件下放置不應(yīng)超過8h。·血清標(biāo)本于2℃-8℃保存不應(yīng)超過48h，否則應(yīng)-20℃保存?！?20℃保存血清標(biāo)本儲(chǔ)存期小于3個(gè)月，凍融次數(shù)小于3次不影響檢測(cè)結(jié)果應(yīng)避免樣本反復(fù)凍融。已知的干擾物·若樣本中含有下述濃度干擾物質(zhì)時(shí)，不影響檢測(cè)結(jié)果：血紅蛋白<5mg/ml；總膽紅素<0.5umol/ml；脂肪乳<10mg/ml；肝素鈉<100iu/ml?！A性磷酸酶活性高的標(biāo)本(paget病、膽汁阻塞等)檢測(cè)結(jié)果可能不準(zhǔn)確，應(yīng)避免使用。·標(biāo)本如果出現(xiàn)明顯微生物污染不能用于檢測(cè)。·密切接觸嚙齒類動(dòng)物或接受過鼠源單克隆抗體藥物治療的患者，其樣本中可能含有人抗鼠抗體，所得結(jié)果有出現(xiàn)異常的可能性；樣本中含有其它各種異嗜性抗體，也可能導(dǎo)致結(jié)果異常。校準(zhǔn)方法：將psa校準(zhǔn)品a-f作為樣本進(jìn)行檢測(cè)，至少設(shè)兩個(gè)重復(fù)管，同時(shí)至少做單管的psa質(zhì)控。如果擬合相關(guān)系數(shù)>0.9900，同時(shí)psa質(zhì)控測(cè)值在預(yù)定范圍內(nèi)，則認(rèn)為定標(biāo)正確，該標(biāo)準(zhǔn)曲線可以儲(chǔ)存使用。質(zhì)量控制：每個(gè)工作日都需要進(jìn)行質(zhì)量控制，每個(gè)質(zhì)控點(diǎn)必須至少做1管。如果發(fā)現(xiàn)質(zhì)控測(cè)量值不在預(yù)定范圍(參見質(zhì)控單)內(nèi)，則不能進(jìn)行樣本的檢測(cè)。測(cè)定結(jié)果的計(jì)算：推薦利用四參數(shù)邏輯擬合得到校準(zhǔn)品劑量-反應(yīng)曲線的回歸方程，再根據(jù)待測(cè)樣本的相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度可以從回歸曲線上返算出樣本中待測(cè)物的濃度。測(cè)量范圍：測(cè)量范圍為(0.1-100)ng/ml。樣本濃度低于0.1ng/ml時(shí)，報(bào)告為<0.1ng/ml。樣本濃度高于100ng/ml時(shí)報(bào)告為>100ng/ml，若想要了解樣本確切的濃度，可用生理鹽水稀釋樣本(建議稀釋20倍)后再測(cè)定?！緟⒖挤秶?5％的正常男性血清中psa含量不大于4ng/ml。由于地理、人種及年齡等差異，建議各實(shí)驗(yàn)室建立自己的參考值(范圍)。在參考值研究中，由于檢測(cè)結(jié)果不屬于正態(tài)分布，所以用百分位法表示參考值范圍。psa參考值的百分位值為95％?！緳z驗(yàn)結(jié)果的解釋】·本產(chǎn)品的檢測(cè)結(jié)果不是臨床適應(yīng)癥的唯一確認(rèn)指標(biāo)，其臨床意義需結(jié)合其它檢測(cè)指標(biāo)及臨床表現(xiàn)具體分析?！び行┣傲邢倭夹圆∽?，血中psa水平也會(huì)升高。【檢驗(yàn)方法的局限性】·在臨床診斷時(shí)要把本試劑盒的檢測(cè)結(jié)果作為對(duì)其它臨床信息的一種補(bǔ)充。檢測(cè)時(shí)要嚴(yán)格遵守操作程序，對(duì)步驟的任何改動(dòng)都有可能影響結(jié)果?！sa濃度超過1000ng/ml時(shí)有可能出現(xiàn)hook(鉤狀)效應(yīng)?！と魳颖局泻邢率鰸舛雀蓴_物質(zhì)時(shí)，不影響檢測(cè)結(jié)果：血紅蛋白<5mg/ml；總膽紅素<0.5umol/ml；脂肪乳<10mg/ml；肝素鈉<100iu/ml。·堿性磷酸酶活性高的標(biāo)本(paget病、膽汁阻塞等)檢測(cè)結(jié)果可能不準(zhǔn)確，應(yīng)避免使用。·edta或檸檬酸鈉抗凝血漿標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果可能不準(zhǔn)確，應(yīng)避免使用?！咀⒁馐马?xiàng)】·本試劑僅用于體外診斷。請(qǐng)嚴(yán)格按照說明書指示合理儲(chǔ)存和使用試劑，對(duì)步驟的任何改動(dòng)都可能影響結(jié)果。試劑超過效期時(shí)，請(qǐng)停止使用?！げ煌?hào)試劑盒組分不應(yīng)交叉使用?！け驹噭┖械臋z測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，對(duì)疾病的臨床診斷應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其它實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮?！び捎诜椒▽W(xué)或抗體特異性等原因，使用不同生產(chǎn)商的試劑對(duì)同一份樣本進(jìn)行腫瘤標(biāo)記物檢測(cè)可能會(huì)得到不同的檢測(cè)結(jié)果，因此，在腫瘤診斷和監(jiān)測(cè)過程中，用不同試劑檢測(cè)所得結(jié)果不應(yīng)直接相互比較，以免造成錯(cuò)誤的醫(yī)學(xué)解釋；建議實(shí)驗(yàn)室在發(fā)給臨床醫(yī)生的檢測(cè)報(bào)告中注明所用試劑特征。疾病監(jiān)測(cè)中如果改變?cè)噭╊愋?，則應(yīng)進(jìn)行額外的連續(xù)性檢測(cè)并與原有試劑結(jié)果進(jìn)行平行比較以重新確定基線值?！ぴ撛噭┖性谥苽溥^程中所用的血清或血漿原料，雖已經(jīng)通過了hbsag、hiv1/2-ab、hcv-ab等項(xiàng)目的檢測(cè)均為陰性，但截至目前，沒有任何一項(xiàng)檢測(cè)可以確保絕對(duì)安全，故仍應(yīng)將這些組份作為潛在傳染源對(duì)待。應(yīng)根據(jù)《實(shí)驗(yàn)室—生物安全通用要求》所規(guī)定的處理方法實(shí)施。操作時(shí)應(yīng)確保切口、或其皮膚損傷處得到充分的保護(hù)。三、燒制膠體金的操作標(biāo)準(zhǔn)1.操作前確認(rèn)：1.1操作前確認(rèn)所需玻璃儀器內(nèi)表面均不存在任何污點(diǎn)以及瑕疵。1.2生產(chǎn)前確認(rèn)所用水電阻不小于18mω，且存放時(shí)間不超過24小時(shí)。2.生產(chǎn)操作：2.1膠體金的燒制應(yīng)在24小時(shí)內(nèi)完成。2.2用量筒稱取所需量的水，將其倒入燒杯中，在燒杯上液面處用記號(hào)筆劃線，將水煮至沸騰。2.3將1％的氯金酸溶液按照3:100的比例迅速加入到2.2液體中。2.4將1％檸檬酸鈉溶液按4.5:100加入到沸騰的2.3液體中，混合均勻，保持沸騰5分鐘至液體呈穩(wěn)定的酒紅色。2.5停止加熱，冷卻至室溫。2.6用水補(bǔ)足至劃線處。將膠體金倒入廣口瓶中，用封口膜密封，得到金溶膠。四、psa膠體金的標(biāo)記方法：(1)用0.1mol/lk2co3或0.1mol/lhcl調(diào)節(jié)金溶膠至ph6.8。(2)于100ml金溶膠中加入滴度為10000，體積為2ml的psa抗體溶液，攪拌2～3分鐘。(3)加入5ml1％peg20000溶液。(4)于10000g離心30分鐘，小心吸去上清液(切忌傾倒)。(5)將沉淀懸浮于20ml含0.2～0.5mg/mlpeg20000的緩沖液中，離心沉淀后，再用同一緩沖液恢復(fù)，濃度以a1cm/540nm＝1.5，以0.5mg/ml疊氮鈉防腐，置4℃保存。(6)包被后的金溶膠也可濃縮后于sephadexg-200柱進(jìn)行凝膠層析分離純化，以含0.1％bsa的緩沖溶液洗脫。通常用金溶膠洗脫液ph為8.2。以上操作中應(yīng)注意，一切溶液中不應(yīng)含雜質(zhì)微粒，可用高速離心或微孔濾膜預(yù)處理。五、膠體金psa抗體結(jié)合物的質(zhì)量鑒定(1)膠體金顆粒平均直徑的測(cè)量：用支持膜的鎳網(wǎng)(銅網(wǎng)也可)蘸取金標(biāo)蛋白試劑，自然干燥后直接在透射電鏡下觀察?；蛴么姿徕檹?fù)染后觀察。計(jì)算100個(gè)金顆粒的平均直徑。(2)膠體金溶液的od520nm值測(cè)定：膠體金顆粒在波長(zhǎng)510nm～550nm之間出現(xiàn)最大吸收值峰。用0.02mol/lph8.2pbs液(含1％bsa，0.02％nan3)將膠體金蛋白試劑作1:20稀釋，od520＝0.25左右。一般應(yīng)用液的od520應(yīng)為0.2～0.4。(3)金標(biāo)記psa溶液的特異性與敏感性測(cè)定：采用微孔濾膜免疫金銀染色法(mf－igssa)。將可溶性psa抗原吸附于載體上(濾紙、硝酸纖維膜、微孔濾膜)，用膠體金標(biāo)記的psa溶液以直接或間接染色法并經(jīng)銀顯影來檢測(cè)相應(yīng)的psa抗原，或直接通過全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血液中的psa抗原，對(duì)金標(biāo)記psa溶液的特異性和敏感性進(jìn)行鑒定。本試劑盒采用抗原抗體結(jié)合原理，通過膠體金顆粒與抗體結(jié)合將檢測(cè)結(jié)果等比放大，應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行定量檢測(cè)。在檢測(cè)范圍內(nèi)，沉淀強(qiáng)度與樣本中psa濃度成正比，因此通過內(nèi)插法就可以從擬合曲線上讀取待測(cè)樣本的psa濃度。六、質(zhì)量控制及技術(shù)參數(shù)1質(zhì)量控制1.1使用待測(cè)psa試劑進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)，用校準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線，檢測(cè)以下各點(diǎn)：1.2依次計(jì)算準(zhǔn)確性、最低檢測(cè)限、線性和重復(fù)性。2技術(shù)參數(shù)2.1準(zhǔn)確性測(cè)量濃度與瓶標(biāo)濃度偏差在±10％內(nèi)；2.2最低檢測(cè)限≤0.1ng/ml；2.3線性相關(guān)系數(shù)r≥0.992.4重復(fù)性兩樣本cv均<15％；2.5質(zhì)控品各質(zhì)控品測(cè)值均在范圍內(nèi)。七、被測(cè)樣本1.適用樣本適用于血清和肝素抗凝血漿。2.樣本的處理2.1血清取5.0ml靜脈血至玻璃試管中，不加添加劑，在室溫(18-25℃)中靜置，通過離心分離血清部分，貯存。2.2血漿取5.0ml靜脈血至玻璃或塑料試管中，以肝素為抗凝劑，通過離心分離血漿部分，貯存。2.3高濃度樣本若估計(jì)標(biāo)本濃度超出100ng/ml，測(cè)定前需用樣品稀釋液稀釋。3.樣本的儲(chǔ)存血清和血漿樣本2～8℃穩(wěn)定24小時(shí)。若需較長(zhǎng)時(shí)間保存，分裝密封，于-20℃可保存30天，避免反復(fù)凍融。4.已知干擾因素避免使用以下幾種血清或肝素抗凝血漿：嚴(yán)重溶血的樣本、嚴(yán)重高脂血癥樣本、堿性磷酸酶活性高的樣本(paget病，膽汁阻塞等)、嚴(yán)重黃疸癥的樣本。不可使用edta和檸檬酸鈉為抗凝劑的血漿樣本。八、結(jié)果在hitachi7180全自動(dòng)生化分析儀上檢測(cè)性能評(píng)估資料1最低檢測(cè)限1.1實(shí)驗(yàn)要求應(yīng)不大于0.1ng/ml。1.2實(shí)驗(yàn)方法用零濃度校準(zhǔn)品作為樣本進(jìn)行檢測(cè)，重復(fù)測(cè)定20次，得出20次測(cè)量結(jié)果，計(jì)算其平均值(m)和標(biāo)準(zhǔn)差(sd)，得出m+2sd，根據(jù)零濃度校準(zhǔn)品和相鄰校準(zhǔn)品之間的濃度和檢測(cè)值進(jìn)行兩點(diǎn)回歸擬合得出一次方程，將m+2sd的rlu值帶入上述方程中，求出對(duì)應(yīng)的濃度值，即為最低檢測(cè)限。1.3實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)1.4結(jié)論由三批試劑檢測(cè)結(jié)果可見，最低檢測(cè)限實(shí)驗(yàn)結(jié)果均不高于0.1ng/ml。2重復(fù)性2.1實(shí)驗(yàn)要求應(yīng)不大于15％2.2實(shí)驗(yàn)方法用(4±0.8)ng/ml和(30±6)ng/ml的樣本各重復(fù)檢測(cè)10次，計(jì)算10次測(cè)量結(jié)果的平均值m和標(biāo)準(zhǔn)差sd，根據(jù)公式cv＝sd/m×100％得出變異系數(shù)cv。2.3實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)2.4結(jié)論由三批試劑檢測(cè)結(jié)果可見，重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果均不高于15％。3批間差3.1實(shí)驗(yàn)要求應(yīng)不大于15.0％3.2實(shí)驗(yàn)方法用三個(gè)批號(hào)的試劑盒分別檢測(cè)一份濃度在(4±0.8)ng/ml和(30±6)ng/ml范圍內(nèi)的樣本，各重復(fù)10次，計(jì)算30次測(cè)量結(jié)果的平均值m和標(biāo)準(zhǔn)差sd，根據(jù)公式cv＝sd/m×100％得出變異系數(shù)cv。3.3實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)樣本變異系數(shù)4ng/ml6.22％30ng/ml7.49％3.4結(jié)論由檢測(cè)結(jié)果可見，批間差實(shí)驗(yàn)結(jié)果均不高于15％。4線性4.1實(shí)驗(yàn)要求線性范圍：0.1～100ng/ml，在本線性范圍內(nèi)，試劑盒的相關(guān)系數(shù)r應(yīng)≥0.994.2實(shí)驗(yàn)方法將(80±16)ng/ml的樣本倍比稀釋為5種濃度，將每一濃度的樣本重復(fù)檢測(cè)2次，計(jì)算平均值，將結(jié)果平均值和稀釋比例用最小二乘法進(jìn)行直線擬合，并計(jì)算線性相關(guān)系數(shù)r。4.3實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)4.4結(jié)論由三批試劑檢測(cè)結(jié)果可見，線性相關(guān)系數(shù)(r)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均不低于0.99。5準(zhǔn)確性5.1實(shí)驗(yàn)要求用國際標(biāo)準(zhǔn)品或經(jīng)過國際標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)化的企業(yè)校準(zhǔn)品(qb)作為樣本進(jìn)行檢測(cè)，其測(cè)量結(jié)果的相對(duì)偏差應(yīng)在±10％范圍內(nèi)。5.2實(shí)驗(yàn)方法配制濃度約為30ng/ml(允許偏差為±10％)的國際標(biāo)準(zhǔn)品或企業(yè)校準(zhǔn)品(qb)，將其作為樣本按照說明書的步驟進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)量3次后，取結(jié)果平均值記為m，根據(jù)公式：測(cè)量偏差＝(m-理論值)/理論值×100％。5.3實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)5.4結(jié)論由三批試劑檢測(cè)結(jié)果可見，用國際標(biāo)準(zhǔn)品或經(jīng)過國際標(biāo)準(zhǔn)品系列標(biāo)化的企業(yè)校準(zhǔn)品(qb)作為樣本進(jìn)行檢測(cè)，其測(cè)量結(jié)果的相對(duì)偏差在±10％范圍內(nèi)。6特異性6.1實(shí)驗(yàn)要求試劑盒與下表中有關(guān)潛在交叉反應(yīng)物應(yīng)無顯著的交叉反應(yīng)。6.2實(shí)驗(yàn)方法將cea、afp用校準(zhǔn)品稀釋液稀釋到如下表所列濃度作為樣品用試劑盒檢測(cè)該樣品得到檢測(cè)濃度，以測(cè)量濃度與加入濃度的比值表示交叉反應(yīng)的程度。6.3實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)第一批數(shù)據(jù)第二批數(shù)據(jù)第三批數(shù)據(jù)cea干擾度小于1‰小于1‰小于1‰afp干擾度小于1‰小于1‰小于1‰6.4結(jié)論由三批試劑檢測(cè)結(jié)果可見，試劑盒與癌胚抗原(cea)和甲胎蛋白(afp)交叉反應(yīng)均小于1‰7結(jié)論由三批試劑檢測(cè)結(jié)果可見，試劑盒在效期內(nèi)性能穩(wěn)定，最低檢測(cè)限、重復(fù)性、線性、準(zhǔn)確性、批間差、分析特異性符合要求。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明方法的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和補(bǔ)充，這些改進(jìn)和補(bǔ)充也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁12