本發(fā)明屬于食品檢測(cè)領(lǐng)域，具體地涉及一種山楂中安賽蜜的殘留量的測(cè)定方法。
背景技術(shù)：
：安賽蜜是一種食品添加劑，是化學(xué)品，類(lèi)似于糖精，易溶于水，增加食品甜味的，沒(méi)有營(yíng)養(yǎng)，口感好，無(wú)熱量，具有在人體內(nèi)不代謝、不吸收（是中老年人、肥胖病人、糖尿病患者理想的甜味劑），對(duì)熱和酸穩(wěn)定性好等特點(diǎn)，是當(dāng)前世界上第四代合成甜味劑。它和其它甜味劑混合使用能產(chǎn)生很強(qiáng)的協(xié)同效應(yīng)，一般濃度下可增加甜度30%~50%。安賽蜜具有強(qiáng)烈甜味，甜度約為蔗糖的130倍，呈味性質(zhì)與糖精相似。高濃度時(shí)有苦味。有研究表明，食用安賽蜜過(guò)量會(huì)對(duì)人體的肝臟和神經(jīng)系統(tǒng)造成危害，特別是對(duì)老人、孕婦、小孩危害更為嚴(yán)重。如果短時(shí)間內(nèi)大量食用，會(huì)引起血小板減少導(dǎo)致急性大出血。因此部分國(guó)家已經(jīng)禁止使用該種添加劑。我國(guó)雖然未禁止此類(lèi)添加劑的使用，但在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)gb2760中明確規(guī)定安賽蜜在各類(lèi)食品中的最大添加限量，并禁止在鮮水果中使用。山楂，核果類(lèi)水果，核質(zhì)硬，果肉薄，味微酸澀，是中國(guó)特有的藥果兼用樹(shù)種，具有降血脂、血壓、強(qiáng)心、抗心律不齊等作用；同時(shí)山楂含山楂酸等多種有機(jī)酸，并含解脂酶，入胃后，能增強(qiáng)酶的作用，促進(jìn)肉食消化，有助于膽固醇轉(zhuǎn)化，所以，山楂也是健脾開(kāi)胃、消食化滯、利膽汁、促進(jìn)胃液分泌、活血化痰的良藥，對(duì)胸膈脾滿(mǎn)、疝氣、血淤、閉經(jīng)等癥有很好的療效。山楂所含的黃酮類(lèi)和維生素c、胡蘿卜素等物質(zhì)能阻斷并減少自由基的生成，能增強(qiáng)機(jī)體的免疫力，有防衰老、抗癌的作用山楂中有平喘化痰、抑制細(xì)菌、治療腹痛腹瀉的成分。因此，山楂深受人們的喜愛(ài)，隨著人們對(duì)健康越來(lái)越重視，對(duì)山楂是否經(jīng)過(guò)安賽蜜處理的問(wèn)題產(chǎn)生了質(zhì)疑。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：有鑒于此，確有必要提供一種山楂中安賽蜜的殘留量的測(cè)定方法，以解決上述問(wèn)題。一種山楂中安賽蜜的殘留量的測(cè)定方法，其包括以下步驟：配制安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)溶液，繪制安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)溶液曲線；將10～15g鮮山楂清洗干凈后去核，得到無(wú)核山楂和山楂核；對(duì)所述無(wú)核山楂進(jìn)行打漿處理，得到山楂漿；將所述山楂核干燥后破碎研磨成粉，獲得山楂核粉；將所述山楂漿和所述山楂核粉混合置于50ml離心管中，并加入10ml純凈水；然后，先超聲提取15～18min，在以1×104～2×104r/min的轉(zhuǎn)速離心分離8～10min，獲得首次上清液和首次沉淀物，并收集全部所述首次上清液；向所述首次沉淀物中加入10ml純凈水并超聲提取8～12min，再離心分離5～7min，收集全部二次上清液；將該二次上清液與所述首次上清液均勻混合，得到山楂上清液；將所述山楂上清液過(guò)0.22μm膜，得到山楂樣品溶液；采用液相色譜-質(zhì)譜法檢測(cè)所述山楂樣品溶液，并將所述山楂樣品溶液的測(cè)定結(jié)果與所述標(biāo)準(zhǔn)溶液曲線進(jìn)行比對(duì)，得到所述山楂樣品溶液中的安賽蜜含量。其中，所述液相色譜-質(zhì)譜法的檢測(cè)條件為：所用色譜柱采用：反相c18色譜柱、直徑2.1mm、柱長(zhǎng)50mm、填料粒徑1.7μm；流動(dòng)相：乙腈-0.02mol/l乙酸銨溶液（10/90，υ/υ）；流速：0.25ml/min；柱溫:40℃；進(jìn)樣量：10μl；液相色譜分析時(shí)間不超過(guò)3min；質(zhì)譜離子源：esi；掃描方式：負(fù)離子模式；毛細(xì)管電壓：3.0kv；離子源溫度：110℃；脫溶劑氣溫度：350℃；脫溶劑氣流量：600l/h；錐孔反吹氣流量：50l/h；錐孔電壓：28v。基于上述，繪制所述安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)溶液曲線的方法為：首先，量取濃度為1mg/ml的安賽蜜原液200μl，并轉(zhuǎn)移至100ml的容量瓶中，用純凈水定容，配制成濃度為2μg/ml的安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；其次，分別量取所述安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.5ml、1ml、2.5ml、5ml、15ml、30ml并轉(zhuǎn)移至六個(gè)100ml的容量瓶中，再分別用純凈水定容，配制成濃度分別為10μg/l、20μg/l、50μg/l、100μg/l、300μg/l、600μg/l的安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)溶液系列；然后，采用色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)器對(duì)上述六個(gè)安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)溶液系列進(jìn)行檢測(cè)，得到安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)溶液的六次平行測(cè)量結(jié)果；最后，以上述六次平行測(cè)量結(jié)果中的目標(biāo)峰的峰面積為縱坐標(biāo)(y)，安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)溶液系列的濃度為橫坐標(biāo)(x)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。在本發(fā)明提供的山楂中安賽蜜的殘留量的測(cè)定方法中，在對(duì)無(wú)核山楂進(jìn)行打漿處理的過(guò)程中，山楂中的纖維受到剪切、揉搓及梳理等作用，并產(chǎn)生細(xì)纖維化團(tuán)聚，而山楂中的安賽蜜及其他成分則由于受到機(jī)械外力而被擠出來(lái)，并部分吸附在纖維上，形成所述山楂漿；在所述山楂漿加入山楂核粉，由于山楂核粉具有粗糙的摩擦面和較大的硬度，在超聲萃取過(guò)程中可以增強(qiáng)因超聲波輻射壓強(qiáng)而產(chǎn)生的機(jī)械振動(dòng)幅度、擾動(dòng)效應(yīng)強(qiáng)度、擊碎強(qiáng)度和攪拌作用等，增大物質(zhì)分子運(yùn)動(dòng)頻率和速度，增加溶劑穿透力，從而山楂中的營(yíng)養(yǎng)成分更加容易進(jìn)入純凈水中，達(dá)到加快萃取速度、縮短萃取時(shí)間、提高萃取效果的目的。另外，由于山楂經(jīng)過(guò)打漿處理，其中的纖維比較難于進(jìn)入山楂樣品溶液中，而且也有利于幫助離心分離產(chǎn)物上清液和沉淀物分離，使得山楂樣品溶液中的各組分含量更加接近鮮山楂中對(duì)應(yīng)組分的真實(shí)含量，從而提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度，能夠更加準(zhǔn)確判斷山楂是否經(jīng)過(guò)安賽蜜處理。具體實(shí)施方式圖1為本發(fā)明實(shí)施例提供的安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)溶液建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。圖2為本發(fā)明實(shí)施例提供的安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖。圖3為本發(fā)明實(shí)施例提供的山楂樣品溶液中的安賽蜜的色譜圖。具體實(shí)施方式下面通過(guò)具體實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步的詳細(xì)描述。本發(fā)明實(shí)施例提供一種山楂中安賽蜜的殘留量的測(cè)定方法，其包括以下步驟：（一）配制安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)溶液，繪制安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)溶液曲線；該步驟（一）具體包括以下分步驟：首先，量取濃度為1mg/ml的安賽蜜原液200μl，并轉(zhuǎn)移至100ml的容量瓶中，用純凈水定容，配制成濃度為2μg/ml的安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。其次，分別量取所述安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.5ml、1ml、2.5ml、5ml、15ml、30ml并轉(zhuǎn)移至六個(gè)100ml的容量瓶中，再分別用純凈水定容，配制成濃度分別為10μg/l、20μg/l、50μg/l、100μg/l、300μg/l、600μg/l的安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)溶液系列。然后，采用色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)器對(duì)上述六個(gè)安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)溶液系列進(jìn)行檢測(cè)，其中，該液相色譜-質(zhì)譜法的檢測(cè)條件為：所用色譜柱采用：反相c18色譜柱、直徑2.1mm、柱長(zhǎng)50mm、填料粒徑1.7μm；流動(dòng)相：乙腈-0.02mol/l乙酸銨溶液（10/90，υ/υ）；流速：0.25ml/min；柱溫:40℃；進(jìn)樣量：10μl；液相色譜分析時(shí)間不超過(guò)3min；梯度洗脫程序見(jiàn)表1。質(zhì)譜離子源：esi；掃描方式：負(fù)離子模式；毛細(xì)管電壓：3.0kv；離子源溫度：110℃；脫溶劑氣溫度：350℃；脫溶劑氣流量：600l/h；錐孔反吹氣流量：50l/h；錐孔電壓：28.0v；母離子(m/z)162.0；子離子(m/z)82.10、78.10；對(duì)應(yīng)的碰撞能量為15.0v、15.0v；定量離子(m/z)82.10。表1梯度洗脫程序上述六個(gè)安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)溶液系列的六次平行測(cè)量結(jié)果如表2所示。安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖如圖2所示。表2安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)溶液系列的測(cè)量結(jié)果濃度（μg/l）102050100300600峰面積471089332210944017132976259911最后，以上述表2中的峰面積為縱坐標(biāo)(y)，安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)溶液系列的濃度為橫坐標(biāo)(x)，建立繪制圖1所示的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)溶液的線性回歸方程：y=433.7x+708.3，相關(guān)系數(shù)平方0.999，線性范圍10～600μg/l，檢出限1.0μg/l。（二）將11.6g鮮山楂清洗干凈后去核，得到無(wú)核山楂和山楂核；對(duì)所述無(wú)核山楂進(jìn)行打漿處理，得到山楂漿；將所述山楂核干燥后破碎研磨成粉，獲得山楂核粉。（三）將所述山楂漿和所述山楂核粉混合置于50ml離心管中，并加入10ml純凈水；然后，先超聲提取15min，在以1.5×104r/min的轉(zhuǎn)速離心分離10min，獲得首次上清液和首次沉淀物，并收集全部所述首次上清液；向所述首次沉淀物中加入10ml純凈水并超聲提取8min，再離心分離7min，收集全部二次上清液；將該二次上清液與所述首次上清液均勻混合，得到山楂上清液；將所述山楂上清液過(guò)0.22μm膜，得到山楂樣品溶液。（四）采用與步驟（一）相同條件的檢測(cè)條件檢測(cè)所述山楂樣品溶液，所述山楂樣品溶液的色譜圖如3所示，從圖3中可以看出在1.52min處有安賽蜜的特征峰，且所述山楂樣品溶液中安賽蜜的峰面積為9903，帶入上述安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)溶液的線性回歸方程中，即可得到山楂樣品中的安賽蜜的濃度為21.20μg/l。由于我國(guó)不允許鮮水果中添加安賽蜜，所以本發(fā)明實(shí)施例提供的鮮山楂的甜味異常，有影響消費(fèi)者身體健康的隱患。本發(fā)明提供的測(cè)定方法的空白加標(biāo)回收率試驗(yàn)按照現(xiàn)有的空白加標(biāo)回收試驗(yàn)方法，制得安賽蜜濃度為50μg/l、200μg/l的加標(biāo)溶液，按照步驟（一）中提供的測(cè)定方法進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果為：濃度為50μg/l的峰面積為23191，計(jì)算得出加標(biāo)回收率為103.7%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4%；濃度為200μg/l的峰面積為89583，計(jì)算得出加標(biāo)回收率為102.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3%。最后應(yīng)當(dāng)說(shuō)明的是：以上實(shí)施例僅用以說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案而非對(duì)其限制；盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說(shuō)明，所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解：依然可以對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式進(jìn)行修改或者對(duì)部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換；而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的精神，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明請(qǐng)求保護(hù)的技術(shù)方案范圍當(dāng)中。當(dāng)前第1頁(yè)12