利用環(huán)糊精與熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)檢測(cè)食品中赤霉素的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種利用環(huán)糊精與熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)檢測(cè)食品中赤霉素的方法。利用環(huán)糊精的包含作用，使能量轉(zhuǎn)移體系的受體丁基羅丹明B的熒光強(qiáng)度增強(qiáng)，從而建立了一種測(cè)定食品中赤霉素含量的方法。赤霉素的濃度在40~760納克/毫升范圍內(nèi)與熒光猝滅量呈良好的線性關(guān)系，方法檢出限為8.9納克/毫升。本發(fā)明克服了已有技術(shù)在檢測(cè)時(shí)存在靈敏度低、應(yīng)用范圍窄等缺點(diǎn)，提高了靈敏度和選擇性，對(duì)于食品中低濃度赤霉素的檢測(cè)更加方便快速。
【專利說(shuō)明】利用環(huán)糊精與熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)檢測(cè)食品中赤霉素的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種利用環(huán)糊精的包含作用與熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)快速檢測(cè)食品中痕量赤霉素的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]赤霉素是廣泛存在的一類植物激素，主要用于促進(jìn)農(nóng)產(chǎn)品的生長(zhǎng)。赤霉素的種類共有100余種之多，其中以赤霉素GA3最普遍。有研究發(fā)現(xiàn)，赤霉素在人體內(nèi)殘留后代謝不完全，從而引發(fā)疾病，歐美等國(guó)家已對(duì)赤霉素GA3的殘留量制定了相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。目前國(guó)內(nèi)外檢測(cè)赤霉素的方法主要有高效液相色譜法，免疫分析法，電化學(xué)法等。以上方法雖靈敏度較高，但反應(yīng)條件苛刻，儀器昂貴，且操作時(shí)間長(zhǎng)。因此，尋求具有快速，準(zhǔn)確，選擇性較高的檢測(cè)食品中赤霉素的方法具有重要意義。而熒光共振能量轉(zhuǎn)移法作為一種新型熒光檢測(cè)技術(shù)，相比于其他熒光方法，具有更高的靈敏度和選擇性，同時(shí)利用環(huán)糊精特殊的疏水筒狀結(jié)構(gòu)，將能量轉(zhuǎn)移體系的給體與受體緊密包含于分子空腔內(nèi)，有效地增強(qiáng)能量轉(zhuǎn)移的效率。本方法利用其獨(dú)特的檢測(cè)特性，從而建立快速、靈敏、準(zhǔn)確的檢測(cè)赤霉素的新方法。目前國(guó)內(nèi)外應(yīng)用熒光共振能量轉(zhuǎn)移法在赤霉素的檢測(cè)上尚未見(jiàn)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是提供一種方法簡(jiǎn)單，靈敏度高，選擇性好，方便快速的對(duì)食品中痕量赤霉素進(jìn)行檢測(cè)的方法。
[0004]本發(fā)明思路:以核黃素作為熒光能量轉(zhuǎn)移的給體，丁基羅丹明B作為受體，構(gòu)成性能穩(wěn)定的能量轉(zhuǎn)移體系，核黃素將能量傳遞給丁基羅丹明B，使其成為熒光強(qiáng)度更高的超靈敏熒光探針。而環(huán)糊精可以有效地增敏受體丁基羅丹明B的熒光強(qiáng)度，并能夠提高熒光共振能量轉(zhuǎn)移的效率，加入赤霉素后，使丁基羅丹明B的熒光強(qiáng)度猝滅，且其猝滅值與赤霉素的濃度在40-760微克/升范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。從而建立檢測(cè)赤霉素的環(huán)糊精包含能量轉(zhuǎn)移法。
[0005]本發(fā)明具體機(jī)理:由于環(huán)糊精具有特殊的疏水性空腔，并呈筒狀結(jié)構(gòu)，從而可以有效地包含能量轉(zhuǎn)移體系的給體和受體，拉近二者的分子間距，提高能量轉(zhuǎn)移的效率。逐漸向體系中加入赤霉素后，受體丁基羅丹明Β帶有正電荷，與帶有負(fù)電的赤霉素通過(guò)靜電作用相結(jié)合，使熒光有規(guī)律的猝滅。
[0006]具體步驟為:
1、檢測(cè)方法:
在10支10毫升比色管中都分別加入100微升1.0Χ10-5摩爾/升的核黃素溶液、120微升1.0Χ10_4摩爾/升的丁基羅丹明Β溶液、1毫升1.0Χ10_3摩爾/升的β-環(huán)糊精溶液和20微升0.1克/升的聚乙烯醇溶液，再在這10支10毫升比色管中分別加入40-760納克/毫升的赤霉素溶液，分別用pH = 6.6摩爾濃度為0.2摩爾/升的磷酸氫二鈉-摩爾濃度為ο.1摩爾/升的檸檬酸緩沖溶液定容至刻度，反應(yīng)3分鐘后用RF-5301PC熒光光度計(jì)進(jìn)行熒光強(qiáng)度檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)為360納米，激發(fā)和發(fā)射狹縫寬度均為5納米。
[0007]2、工作曲線的繪制:
在10支10毫升比色管中都分別加入100微升1.0X10_5摩爾/升的核黃素溶液、120微升1.0X 10_4摩爾/升的丁基羅丹明B溶液、1毫升1.0X 10_3摩爾/升的β -環(huán)糊精溶液、20微升0.1克/升的聚乙烯醇溶液，再在這10支10毫升比色管中分別加入40-760微克/升的赤霉素溶液，分別用pH = 6.6摩爾濃度為0.2摩爾/升的磷酸氫二鈉-摩爾濃度為0.1摩爾/升的檸檬酸緩沖溶液定容至刻度，充分搖勻后放置反應(yīng)3分鐘，進(jìn)行共振光強(qiáng)度檢測(cè)；赤霉素的濃度c在40-760納克/毫升范圍內(nèi)與熒光猝滅量(Λ IF)呈良好的線性關(guān)系，其線性回歸方程為:Λ IF=0.2503c + 0.7416，線性相關(guān)系數(shù)r = 0.9997。
[0008]本發(fā)明克服了已有技術(shù)在檢測(cè)時(shí)存在反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)、操作繁瑣、選擇性差、儀器昂貴的缺點(diǎn)，更好地提高了靈敏度和選擇性，對(duì)于食品中低濃度赤霉素的檢測(cè)更加準(zhǔn)確方便快速。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0009]圖1為本發(fā)明實(shí)施例在1.0Χ10-7摩爾/升的丁基羅丹明Β，1.2Χ10-4摩爾/升的核黃素，1.ο X 10_4摩爾/升的β -環(huán)糊精，2.0 X 10_4克/升的聚乙烯醇和pH = 6.6的磷酸氫二鈉(0.2摩爾/升)-檸檬酸(0.1摩爾/升)緩沖溶液中，不同濃度的赤霉素對(duì)丁基羅丹明B的熒光猝滅光譜圖。其中a到j(luò)分別為40、120、200、280、360、440、520、600、680、760納克/毫升的赤霉素對(duì)丁基羅丹明B的熒光猝滅光譜圖。
[0010]圖2為本發(fā)明 實(shí)施例赤霉素含量與β -環(huán)糊精包含的能量轉(zhuǎn)移體系中丁基羅丹明Β的熒光猝滅量的關(guān)系圖。
【具體實(shí)施方式】
[0011]實(shí)施例:
1、檢測(cè)方法:
在10支10毫升比色管中都分別加入100微升1.0Χ10_5摩爾/升的核黃素溶液、120微升1.0Χ10_4摩爾/升的丁基羅丹明Β溶液、1毫升1.0Χ10_3摩爾/升的β-環(huán)糊精溶液和20微升0.1克/升的聚乙烯醇溶液，再在這10支10毫升比色管中分別加入40、120、200、280、360、440、520、600、680、760納克/毫升的赤霉素溶液，分別用pH = 6.6的磷酸氫二鈉(0.2摩爾/升)-檸檬酸(0.1摩爾/升)緩沖溶液定容至刻度，反應(yīng)3分鐘后用RF-5301PC熒光光度計(jì)進(jìn)行熒光強(qiáng)度檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)為360納米，激發(fā)和發(fā)射狹縫寬度均為5nm。
[0012]2、工作曲線的繪制:
在10支10毫升比色管中都分別加入100微升1.0X10_5摩爾/升的核黃素溶液、120微升1.0X 10_4摩爾/升的丁基羅丹明B溶液、1毫升1.0X 10_3摩爾/升的β -環(huán)糊精溶液和20微升0.1克/升的聚乙烯醇溶液，再在這10支10毫升比色管中分別加入40、120、200、280、360、440、520、600、680、760納克/毫升的赤霉素溶液，分別用pH = 6.6的磷酸氫二鈉(0.2摩爾/升)-檸檬酸(0.1摩爾/升)緩沖溶液定容至刻度，充分搖勻后放置反應(yīng)3分鐘，進(jìn)行共振光強(qiáng)度檢測(cè)；赤霉素的濃度c在40-760納克/毫升范圍內(nèi)與熒光猝滅量(AIF)呈良好的線性關(guān)系，其線性回歸方程為:AIF=0.2503c + 0.7416，線性相關(guān)系數(shù)r =
0.9997。
[0013]3、食品中赤霉素含量的檢測(cè):
取市售牛奶樣品適量，離心分離15分鐘，將離心下層液用50毫摩/升的磷酸鹽緩沖液稀釋1000倍作為待測(cè)溶液。
[0014]取適量的待測(cè)液按實(shí)驗(yàn)方法操作對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定，同時(shí)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)加入回收試驗(yàn)，結(jié)果如表1所示，其標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD ( 2.4%(n=6)，加標(biāo)回收率在98.3%~103.2%，說(shuō)明方法具有較高的準(zhǔn)確度和較好的精密度。
[0015]ψ 1:樣品測(cè)定和加標(biāo)-收試驗(yàn)數(shù)
【權(quán)利要求】
1.一種利用環(huán)糊精與熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)檢測(cè)食品中赤霉素的方法，其特征在于具體步驟如下:.1、檢測(cè)方法:在10支10毫升比色管中都分別加入100微升1.0X10_5摩爾/升的核黃素溶液、120微升1.0X10_4摩爾/升的丁基羅丹明B溶液、1毫升1.0X10_3摩爾/升的β-環(huán)糊精溶液和20微升0.1克/升的聚乙烯醇溶液，再在這10支10毫升比色管中分別加入40-760納克/毫升的赤霉素溶液，分別用pH = 6.6摩爾濃度為0.2摩爾/升的磷酸氫二鈉-摩爾濃度為0.1摩爾/升的檸檬酸緩沖溶液定容至刻度，反應(yīng)3分鐘后用RF-5301PC熒光光度計(jì)進(jìn)行熒光強(qiáng)度檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)為360納米，激發(fā)和發(fā)射狹縫寬度均為5納米；.2、工作曲線的繪制:在10支10毫升比色管中都分別加入100微升1.0 X10_5摩爾/升的核黃素溶液、120微升1.0X 10_4摩爾/升的丁基羅丹明B溶液、1毫升1.0X 10_3摩爾/升的β -環(huán)糊精溶液、20微升0.1克/升的聚乙烯醇溶液，再在這10支10毫升比色管中分別加入40-760微克/升的赤霉素溶液，分別用pH = 6.6摩爾濃度為0.2摩爾/升的磷酸氫二鈉-摩爾濃度為0.1摩爾/升的檸檬酸緩沖溶液定容至刻度，充分搖勻后放置反應(yīng)3分鐘，進(jìn)行共振光強(qiáng)度檢測(cè)；赤霉素的濃度c在40-760納克/毫升范圍內(nèi)與熒光猝滅量(Λ IF)呈良好的線性關(guān)系，其線性回歸方程為:Λ IF=0.2503c + 0.7416，線性相關(guān)系數(shù)r = 0.9997。
【文檔編號(hào)】G01N21/64GK103743711SQ201410000021
【公開(kāi)日】2014年4月23日 申請(qǐng)日期:2014年1月1日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月1日
【發(fā)明者】陶慧林, 徐銘澤, 張慶軍, 李撰, 劉帥濤, 廖秀芬, 孫超 申請(qǐng)人:桂林理工大學(xué)